土壤酸性转化酶（S-AI）活性检测试剂盒 可见分光光度法

土壤酸性转化酶（S-AI）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前取 1 瓶加入 15 mL 试剂一充分溶解备用，用不完的试剂 2-8℃保存 2 周；

2、 标准品：10 mg 无水葡萄糖。临用前加入 1 mL 试剂一充分溶解，制备 10 mg/mL 葡萄糖标准溶液待用，2-8℃保存两周。

产品说明：

S-AI 在 pH 为 4.5~5.0（酸性）条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。S-AI 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在 540nm 有特征光吸收，在一定范围内 540nm 光吸收增加速率与 S- AI 活性成正比。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、恒温培养箱/水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水、30-50目筛、甲苯（不允许快递）。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可参考文献）

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30~50 目筛。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、 标准液的稀释：将10mg/mL葡萄糖标准液用试剂一稀释至0.2、0.15、0.1、0.08、0.06mg/mL的葡萄糖标准液备用。

3、 标准液稀释表

4、 样本测定：

三、S-AI 活性计算

注意事项：

1、如果加入试剂三，煮沸 10min 后有混浊物出现，建议离心除去沉淀（10000rpm，2min），取上清测定吸光度；

2、如果吸光值大于 1，可以将上清液再进行稀释；若吸光值较小，可以减少上清液稀释倍数。两种操作均要注意改变公式中的稀释倍数。

实验实例：

1、 取两管 0.1g 林土，即为测定管和对照管，按照测定步骤操作，记为 A 测定管、A 对照管。计算 ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.425-0.054=0.371，标准曲线：y=6.0331x-0.3103，x=0.113，计算酶活得：

S-AI（U/g 土样）=19.2×x÷W=19.2×0.113÷0.1=21.696 U/g 土样。

2、 取两管 0.1g 林土，即为测定管和对照管，按照测定步骤操作，记为 A 测定管、A 对照管。计算 ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.410-0.055=0.355，标准曲线：y=6.0331x-0.3103，x=0.110，计算酶活得：

S-AI（U/g 土样）=19.2×x÷W=19.2×0.110÷0.1=21.12 U/g 土样。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！