丙酮酸(PA)含量检测试剂盒 可见分光光度法

丙酮酸（PA）含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

规格：50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎（冰浴，功率20%或200W，

超声3s，间隔10s，重复30次），静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。

3、血清（浆）样本：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议取0.1mL血清（浆）加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。

二、测定步骤

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。

2、标准品的准备：将标准品用蒸馏水稀释至25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125、0.39、0μg/mL。

3、取300μL标准品或样本+100μL试剂一于1.5mL EP管中，混匀，静置2min，加入500μL试剂二，混匀，于520nm波长处测定吸光值A。

三、丙酮酸含量计算

1、根据标准品浓度和测定值建立标准曲线；x为丙酮酸钠含量（μg/mL），y为吸光值。

2、按照血清（浆）体积计算

丙酮酸含量（μg/mL）= (x×V1)÷[V1÷(V2+V3)×V3]=11x

3、按照样本蛋白浓度计算

丙酮酸含量（μg/mg prot）=(x×V1)÷(V1×Cpr)=x÷Cpr

4、按照样本质量计算

丙酮酸含量（μg/g 质量）=(x×V1)÷(W×V1÷V2）=x÷W

5、按照细菌或细胞数量计算

丙酮酸含量（μg/10⁴ cell）=(x×V1)÷（500×V1÷V2）=x÷500

V1：加入反应体系中样本体积，0.3mL；V2：加入提取液体积，1mL；V3：加入血清（浆）体积，0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。

注意事项：

如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！