聚多曲霉的形态描述与菌株培养及实验内容！

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聚多曲霉，又名喜多式曲霉，属于散囊菌目发菌科曲霉属的一种真菌。可生长在土壤、粪、酒曲、食品、望远镜筒内壁及各种材料的基物上。主要用于酿造白酒和产脂肪酶。

一、菌种简介

平台编号：Bio-84653

规格：冻干粉

拉丁属名：Aspergillus Sydowii

中文名称：聚多曲霉

拉丁名称：Aspergillus sydowii

来源历史：←山东食品发酵工业研究设计院

收藏时间：2017/5/22

原始编号：BJ-MJ-3

原产国：中国

资源归类编码：15151913102

模式菌株：非模式菌株

主要用途：研究

特征特性：菌丝有隔，孢梗茎细长，分生孢子头呈球状，向外散射。孢子呈圆形；菌落中间白周围发红，产色素，反面呈暗红色。

具体用途：酿造白酒，产脂肪酶。

生物危害程度：四类

培养基编号：CM0015

培养基名称：查氏琼脂(Czapek's Agar)

培养基成分：蔗糖 30.0g，NaNO3 3.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 1.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.0～6.5。

培养温度：28℃

需氧类型：好氧

分离基物：白酒大曲曲块

采集地：山东省淄博市高青县

保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享

提供形式：冻干物

用途：酿造白酒，产脂肪酶。

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、形态描述

菌落在查氏琼脂上25℃7天直径约22mm， 10-12天25-40mm，质地为丝绒状至絮状，致密；颜色呈灰蓝色至暗蓝色，初期稍淡，老后渐深，近于暗蓝灰绿色（Dark Bluish Gray Green,R.XLII）。

白屈菜绿至蒿绿（Celandine Green-→ Artemesia Green,R.XLVII）或板瓦橄榄色（Slate Olive,R.XLVII），间或有淡褐色区域；有辐射形沟纹；通常具大量渗出液，褐色至暗褐色：无气味或具轻微霉味；菌落反面呈淡褐或暗褐色至酱色，近于栗色（Maroon,R.I）或酱红色（Bay,R.II），色素扩散于基质中。分生孢子头球形至辐射形，一般直径为52-125μm，小分生孢子头似青霉状，呈疏松柱形或散乱；分生孢子梗直接生于基质或生于气生菌丝，孢梗茎长度自几十微米至500μm，一般140-210μm，直径（3.5-）4-8μm，壁较厚，光滑；顶囊较小，近球形或稍呈椭圆形，直径8-15（-20）μm，几乎全部表面可育；产孢结构双层：梗基（4.2-）6-7（-10.4）μm×2-3.5（-4）μm，瓶梗（4.2-）6-8（-10）μm×2-3μm，有的小分生孢子头仅分生孢梗茎顶端稍膨大后生出产孢细胞，有时还可见气生菌丝上直接生有瓶梗；分生孢子为球形或近球形，直径2.5-3.5（-5）μm，壁明显粗糙，具小刺。

菌落在查氏酵母膏琼脂上25℃7天直径15-30mm，10-14无可达40mm；质地丝绒状至厚絮状；边缘白色，2-3mm，内部暗蓝绿色，近于深蓝灰绿（Deep Bluish Gray Green,R.XLII）或暗俄罗斯绿至暗蓝灰绿（Dark Russian Green--Dark Bluish Gray Green,R.XLII）；有时具较稀的辐射状沟纹；渗出液深褐色，出现于中央的沟纹部分；菌落反面褐色至深褐色，色素稍扩散于基质。

三、培养方法

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。

6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

四、实验内容

1、称量→溶化→调ph→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

五、保存方法

1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。

2、悬液保存法：

①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。

②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。

3、载体保存法：土壤保存法；砂土保存法；硅胶保存法；磁珠保存法；麸皮保存法；纸片(滤纸)保存法。

4、常用的冷冻保存法：

①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。

②干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。

③液氮保存法(-196℃)：是适用范围最广的微生物保存法。

六、注意事项

1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用 0.1-0.2ml 的培养液或无菌水溶解，接种在 2 支斜面上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面或平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；

2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；

3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；

4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；

5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。

七、单层冻干管打管说明书

1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。

2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；

3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说，菌种稳定后才能用于您的后续实验。暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。冻干管打开后需一次用完，不能留存。打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

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