脉络膜黑色素瘤的临床表现与鉴别诊断及检查治疗！ 一、知识背景 脉络膜黑色素瘤是一种常见的眼内恶性肿瘤，多见于40～60岁，与性别或眼别无关，可以发生于脉络膜的任何部位，但常见于眼的后极部。 临床上其生长有二种方式： ①局限性：在巩膜与脉络膜之玻璃膜间局限性生长，呈扁平椭圆形。因受巩膜和玻璃膜的限制，生长较慢，如穿破玻璃膜，则在视网膜下腔内迅速扩大，形成基底大，颈细头园的蘑茹状肿瘤。 ②弥漫性：特点是广泛弥漫性浸润，瘤细胞循血管及淋巴管鞘浸润，并沿脉络膜平面扩展，所以病程较局限性者长，发展慢。眼底除有不规则色素散布外，余无显著的高起。 二、病因 具体病因未明。可能与种族、家族及内分泌因素等有关。其他因素包括阳光照射，某些病毒感染，接触某些致癌化学物质等可能与本病发病有关。 三、临床表现 脉络膜黑色素瘤如位于眼底周边部，早期常无自觉症状。如位于后极部，患者早期常主诉视力减退，视野缺损，视物变形，眼前黑影，色觉改变，持续性远视屈光度数增加等。肿瘤增大并继发视网膜脱离时可出现严重视力下降。眼底检查可见脉络膜实性隆起，色泽多为棕褐色，表面可有出血，肿瘤周边视网膜可以发生渗出性脱离。肿瘤坏死时，可合并有虹膜睫状体炎、前房假性积脓、前房色素沉积、前房积血等。巨噬细胞吞噬肿瘤细胞、色素颗粒或坏死残渣等，游离到前房可以导致眼压升高，也可因虹膜新生血管而致眼压升高，引起新生血管性青光眼。 四、检查 1、荧光素眼底血管造影术（FFA） 综合分析造影早期、动静脉期和晚期整个过程，注意与脉络膜血管瘤、脉络膜转移癌相鉴别。 2、超声探查 可检出肿瘤实体性声像图。当屈光间质混浊检眼镜无法检查时，或伴有严重的视网膜脱离，肿瘤被其掩盖时，则更有价值。 3、CT及MRI扫描 CT扫描可见眼环局限性增厚，向球内或球外突出。MRI扫描不仅可以显示脉络膜实性占位样改变，同时对诊断脉络膜黑色素瘤具有一定的定性价值。 4、全身体检 因脉络膜黑色素瘤最易经血液循环向肝脏转移，肝脏超声探查和肝脏闪烁扫描可以检查有无肿瘤转移。同样，胸部X线摄片或CT扫描等，也有助于发现转移性病变。 五、诊断 根据典型的临床表现、检查，以及病理组织学检查结果，诊断本病并不困难。 病理组织学改变：脉络膜黑色素瘤是由不同形态的细胞及细胞质和核组成，其所含黑色素程度不一，有些无色素，有些全黑，有些呈灰色或棕色，多数血管丰富，有些血管较粗，但管壁很薄。因此，在大的肿瘤内，常可见出血及坏死。 六、鉴别诊断 在临床上常与某些形态相似的眼底病相混淆，应注意鉴别诊断。 1、脉络膜黑色素细胞瘤 脉络膜黑色素细胞瘤是一种良性肿瘤，眼底改变与脉络膜黑色素瘤相似，但脉络膜黑色素细胞瘤相对发展较慢，不会对患者生命产生影响。 2、脉络膜出血和视网膜色素上皮层下出血 本病眼底像有时与脉络膜黑色素瘤相似。荧光素眼底血管造影术（FFA）在鉴别诊断上极为重要。出血灶处脉络膜荧光被遮蔽而呈境界清楚的无荧光区，动脉及静脉期也只能见到视网膜动静脉爬行于无荧光区表面，与本病多湖状荧光斑及肿瘤面有新生血管渗漏不同。另外，脉络膜出血和视网膜色素上皮层下出血经过止血及促进出血吸收药物治疗，瘤体可以变小、消失；随着病程进展，瘤体也可随着出血吸收而变小或消失。 3、脉络膜血管瘤 也可与本病相似的色素，其表面也有新生血管，血管瘤周围脉络膜和视网膜血管扩张迂曲，有时与本病很难区别。但血管瘤大多与面部皮肤或口唇、硬腭处血管瘤同时存在；孤立性脉络膜血管瘤比较少见，除FFA后期有血窦状荧光外，病程晚期X光摄片往往可见钙化点，与本病有异。 4、渗出性年龄相关性黄斑变性 当发生视网膜下大片出血形成血肿时，极易与本病混淆。在两者荧光造影不能充分确定时，CT扫描及超声波检查有助于鉴别。 5、脉络膜转移癌 脉络膜转移癌一般沿脉络膜水平方向蔓延，很少呈局限隆起，与本病相反；转移癌起病急，且发展迅速。本病则在突破Bruch膜前生长缓慢。另外，如能发现原发病灶（如乳腺癌，肺癌等）是鉴别诊断上最有力的根据。 七、治疗 目前脉络膜黑色素瘤通常采用综合治疗方案进行处理。对于瘤体较小，视功能尚好，患者强烈要求保持眼球者，可以采用激光、局部敷贴放疗或局部切除肿瘤等；如果瘤体较大，视功能破坏严重，或者患者强烈要求摘除眼球者，可以行眼球摘除联合眼台植入手术。如果肿瘤细胞已经从眼内转移至眶内者，可以行眶内容剜除术。手术后根据情况，可以给予免疫治疗等。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                       阳极还原地杆菌的性质与用途及生产工艺！ 阳极还原地杆菌是Geobacter属的微生物，原产地为美国。革兰氏阴性杆菌。主要用途为分类学研究，具体用途为模式菌株。 一、菌种简介平台编号：Bio-091531 规格：冻干物 拉丁属名：Geobacter Anodireducens 中文译名：阳极还原地杆菌拉丁学名：Geobacter anodireducens原始编号：SD-1菌株来源：←哈尔滨工业大学保藏人：孙丹直接来源国家：美国保藏时间：4/26/2013其他保藏编号：=KCTC 4672生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株培养温度：30℃培养基：1055    其他培养条件：厌氧培养分离源：生物电化学系统阳极生物膜采集地点：宾夕法尼亚州采集国家：美国提供形式：培养物用途：模式菌株注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    小鼠卵巢颗粒细胞永生化的培养操作规程！ 一、产品信息平台编号：Bio-132564 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：永生化细胞 细胞名称：小鼠卵巢颗粒细胞永生化用途：（免疫荧光鉴定） 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述卵巢是雌性动物的生殖器官。卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。它的外表有一层上皮组织，其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质。皮质位于卵巢的周围部分，主要由卵泡和结缔组织构成；髓质位于中央，由疏松结缔组织构成，其中有许多血管、淋巴管和神经。卵巢是分泌雌激素的主要器官。卵巢分泌的雌激素主要是雌二醇。卵巢中颗粒细胞是合成雌激素的场所。其产生过程是使雄烯二酮转变成雌激素：内膜细胞在LH的作用下，使胆固醇转变为雄烯二酮；颗粒细胞在FSH的作用，发育过程中产生芳香化酶，它使雄烯二酮转变成雌激素。形成的雌激素分泌到卵泡液和血液中。该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。注意事项：收到细胞后第一次传代建议1：2传代，充液培养基是维持培养基，不能用来培养细胞。 三、细胞特性1)组织来源于实验动物的正常卵巢组织。2)细胞鉴定：卵泡刺激素受体(FSHR)免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：不规则细胞，贴壁培养。 四、推荐培养基我们推荐使用原代卵巢颗粒细胞培养体系作为体外培养原代卵巢颗粒细胞的培养基。名称 体积 浓度 保存条件 原代卵巢颗粒细胞基础培养基 500ml 1× 4℃、避光 原代卵巢颗粒细胞培养添加剂 5ml 100× -20℃、避光 胎牛血清（FBS） 50ml 终浓度10% -20℃、避光 双抗（青霉素/链霉素，P/S） 5ml 100× -20℃、避光  五、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 六、产品使用（1）本产品仅能用于科研（2）本产品未通过直接用于活体动物和人的审核（3）本产品未通过用于活体诊断的审核  七、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：注意：客户收到细胞后按照下面的要求操作：培养瓶里面的培养液是不含药物的。待细胞长到 70-80%的汇合度时，去掉培养液，加入含 16ug/ml 药物的培养液，放入培养箱，这段时间可能会有小部分细胞悬浮起来，但是不要紧，通过换液可以去掉，下面的细胞待长满就可以消化传瓶了，这时可以一直用含药培养液来消化培养细胞，一两代之后可以将药物浓度提高到 20ug/ml，含药培养液用于细胞培养都没问题的，冻存的时候就不要在冻存液里面加药物了。1）准备RPMI-1640培养基；优质胎牛血清，10%；添加20ug/ml 5-FLU；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   极小阿托波氏菌的特点与优势及微生物培养方法！ 一、菌种简介平台编号：Bio-80079 规格：Freeze-Dried 拉丁属名：Atopobium Parvulum 菌株名称：极小阿托波氏菌用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Atopobium parvulum (Weinberg et al.) Collins and Wallbanks 拉丁名(ATCC® 33793™) 统一编号Deposited As Streptococcus parvulus (Weinberg et al.) Cato emend. Olsen et al.Strain Designations 菌种别名 VPI 0546 [1246, NCFB 2896]Biosafety Level 生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedPreceptrol® noGenome Sequenced Strain YesType Strain 模式菌种 yes Ref, Ref, Ref, RefComments 注释 Emended description Genome sequencing strain (DOE)Medium 培养基 ATCC® Medium 1758: Modified chopped meat mediumGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度 : 37.0℃Atmosphere 需氧情况 : AnaerobicName of Depositor 寄存人 EP CatoChain of Custody 来源国家 ATCC References 参考文献 Cato EP. Transfer of Peptostreptococcus parvulus (Weinberg, Ntivelle, and Prevot 1937) Smith 1957 to the genus Streptococcus: Streptococcus parvulus (Weinberg, Nativelle, and Prevot 1937) comb. nov., nom. rev., emend.. Int. J. Syst. Bacteriol. 33: 82-84, 1983.Collins MD, et al. Taxonomic studies on a psychrophilic Clostridium from vacuum-packed beef: description of Clostridium estertheticum sp. nov.. FEMS Microbiol. Lett. 75: 235-240, 1992. PubMed: 1383083Olsen I, et al. Lactobacillus uli sp. nov. and Lactobacillus rimae sp. nov. from the human gingival crevice and emended descriptions of Lactobacillus minutus and Streptococcus parvulus. Int. J. Syst. Bacteriol. 41: 261-266, 1991. PubMed: 1854640 Validation list no. 44. Int. J. Syst. Bacteriol. 43: 188-189, 1993.Skerman VB, et al. Approved lists of bacterial names. Int J Syst Bacteriol 30: 225-420, 1980.type strain Cato EP. Transfer of Peptostreptococcus parvulus (Weinberg, Ntivelle, and Prevot 1937) Smith 1957 to the genus Streptococcus: Streptococcus parvulus (Weinberg, Nativelle, and Prevot 1937) comb. nov., nom. rev., emend.. Int. J. Syst. Bacteriol. 33: 82-84, 1983.Collins MD, et al. Taxonomic studies on a psychrophilic Clostridium from vacuum-packed beef: description of Clostridium estertheticum sp. nov.. FEMS Microbiol. Lett. 75: 235-240, 1992. PubMed: 1383083Validation list no. 44. Int. J. Syst. Bacteriol. 43: 188-189, 1993. Skerman VB, et al. Approved lists of bacterial names. Int J Syst Bacteriol 30: 225-420, 1980.Cross ReferencesNucleotide (GenBank) : ABTD01000000 Atopobium parvulum DSM 20469, whole genome shotgun sequencing project. 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                 你知道微生物实验室内审员的通用要求有哪些吗？ 实验室内审员的通用要求 1、职业素养通用要求 内部审核员应具备必要的职业素养，包括： （1）有道德、即公正、可靠、忠诚、诚信和谨慎； （2）思想开明、即愿专虑不同意见或观点； （3）善于交往，灵活地与人交往； （4）善于观察，主动她认识周边环境和活动： （5）有感知力，即能了解和理解处境； （6）适应力强，容易适应不同处境， （7）坚定不移，对实现目标坚持不懈； （8）明断，能够根据逻辑推理和分析及时得出结论； （9）自立，能够在同其他人有效交往中独立工作并发挥作用； （10）坚韧不拔，能够采取负责任的及合理的行动，即使这些行动可能是非常规的和有时可能导致分歧或冲突； （11）与时俱进，愿意学习，并力争获得更好的审核结果； （12）文化敏感，善于观察和尊重受审核方的文化； （13）协同力，有效地与其他人互动，包括审核组成员和受审核方人员。 2、知识和技能通用要求 内部审核员的通用知识和技能，包括： a）审核原则、程序和方法： 这方面的知识和技能使审核员将适用的原则、程序和方法应用于审核并保证审核实施的一致性和系统性。审核员应能够： （1）运用审核原则、程序和方法； （2）对工作进行有效地策划和组织；按商定的时间表进行审核； （3）优先关注重要问题； （4）通过有效的面谈、倾听、观察和对文件、记录和数据的评审来收集信息； （5）理解并考虑专家的意见； （6）理解审核中运用抽样技术的适宜性及其后果； （7）验证所收集信息的相关性和准确性； （8）确认审核证据的充分性和适宜性，以支持审核发现和审核结论； （9）评定影响审核发现和审核结论的可靠性的因素； （10）使用工作文件以记录审核活动； （11）将审核发现形成文件，并编制适宜的审核报告； （12）维护信息、数据、文件和记录的保密性和安全性； （13）理解与审核有关的各类风险。 b）管理体系和引用文件： 这方面的知识和技能使审核员能理解审核范围并运用审核准则，应包括： （1）管理体系标准或用作审核准则的其他文件； （2）运用受审核方和其他组织的管理体系标准； （3）管理体系各组成部分之间的相互作用； （4）了解引用文件的层次关系； （5）引用文件在审核不同的情况下的运用。 c）组织概况： 这方面的知识和技能使审核员能理解受审核方的结构、业务和管理实践，应包括： （1）组织的类型、治理、规模、结构、职能和相互关系； （2）通用的业务和管理概念，过程和相关术语，包括策划、人员管理等； （3）受审核方的习惯，通用做法等。 d）适用的法律法规要求、合同要求和适用于受审核方的其他要求： 这方面的知识和技能使审核员能了解适用于组织的法律法规和合同要求，并在此环境下开展工作。与法律责任或受审核方活动和产品有关的知识和技能包括： （1）法律、法规及其主管机构； （2）基本的法律术语； （3）合约及责任。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   HCT-15细胞专用培养基的培养操作及其应用！ 一、背景 HCT-15细胞专用培养基可保持HCT-15细胞的生长状态。培养基中已包含HCT-15细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于HCT-15细胞的体外培养。 二、细胞培养操作 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为类； 1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2、4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 用于水蜡树果实提取物对结肠癌HCT-15细胞的增殖、千移及凋亡诱导因子AIF表达的影响研究： 通过体外实验研究水蜡树果实提取物（Fruit of Ligustrum Obtusifolium Extract,FLOE）对结肠癌HCT-15细胞的增殖、迁移及凋亡诱导因子（Apoptosisi Iducing Fctor,AIF）表达的影响,探讨其可能的作用机制,为中药在结肠癌治疗中的研发及AIF应用于结肠癌治疗提供更多的理论依据。 方法：体外培养结肠癌细胞株HCT-15,取对数期细胞用于实验。将FLOE用不完全培养基RPMI-1640稀释成不同浓度:0μg/ml（对照组）、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml组,并用RPMI-1640不完全培养基稀释75%酒精（20μg/ml）,设置阴性对照。 采用普通光学显微镜观察在不同浓度药物分别处理24h、48h、72h、96h后细胞形态学变化,并在显微镜下计算贴壁细胞数量。采用MTS法检测不同浓度药物分别处理24h、48h、72h、96h后,对HCT-15细胞存活率的影响。采用集落实验检测不同浓度FLOE对结肠癌HCT-15细胞生存能力的影响;划痕实验检测在不同浓度药物处理后,对HCT-15细胞迁移能力的影响。 采用Western bolt法检测在不同浓度药物作用48h后,对HC15细胞凋亡相关蛋白及AIF表达的影响。结果:随着FLOE药物浓度的增高及作用时间的延长,HCT-15细胞伸展变差、细胞间隙增大、空泡化、细胞漂浮,细胞计数发现贴壁细胞也随之减少。MTS结果表明与对照组相比FLOE处理后的细胞存活率降低（P 划痕实验结果表明与对照组相比FLOE处理后的细胞划痕区域相对宽度较宽（P 结论：水蜡树果实提取物能抑制HCT-15细胞增殖及迁移,且呈浓度及时间依赖性。其机制可能通过下调抗凋亡蛋白的表达及上调凋亡诱导因子AIF的表达实现。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                      羊原代脂肪干细胞的使用方法与注意事项！ 一、细胞简介平台编号：Bio-54104 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 细胞名称：羊原代脂肪干细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述根据不同来源及分化阶段，干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞胚胎干细胞具有分化为多种不同组织的能力，但在伦理上存在争议。成体干细胞因其来源广泛、增殖能力强等特点，现已成为组织工程学研究的首选种子细胞。其中，脂肪干细胞作为组织工程修复的种子细胞，因其具有来源丰富、取材容易、增殖能力强等优点，正受到越来越多的关注。脂肪干细胞形态类似成纤维细胞，具有较强的增殖能力。在一定的诱导条件下，可分化为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、上皮细胞等，具有多向分化潜能。 三、细胞特性1)组织来源于实验动物的正常脂肪组织。2)细胞鉴定：CD44免疫荧光染色为阳性，CD45免疫荧光染色为阴性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。推荐培养基我们推荐使用原代间充质干细胞培养体系作为体外培养原代脂肪干细胞的培养基。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。5、客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术售后服务电话，我们随时给予解答。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   临床细菌检验前与检验中及检验后的质量管理！ 临床细菌学检验在检验医学中具有特殊的位置，主要表现在它的高风险性（如脑脊液培养结果正确与否直接关系到患者的生死）、高干扰性（如标本采集、运送等过程中的诸多因素都会干扰检出率和正确率）、高技术性和高严谨性（准确表达、报告和解释结果直接影响治疗的成败）。因此，细菌培养和药敏试验等属于高度复杂的试验范畴。     由于致病菌的多样性和变异性，临床细菌学始终是一门知识更新和发展较快的学科。为此，从事临床细菌检验的医师和技师必须具有较好的业务素质和敬业精神，要勤于学习和探索，要有严谨求实的作风和对新事物的敏感性，这是高质量完成细菌检验任务的首要条件。     细菌检验的全面质量管理是一个连续的质量管理过程，包括从患者准备，申请单书写，标本采集、标识、保存、运送、处理和检验，结果分析和报告，直至医师的理解和应用（诊治）。为了有效地对这一过程进行全面质量管理，本文从检验前、检验中和检验后三个方面提出相关要求。 一、检验前的质量管理  （一）检验项目的申请     细菌检验项目的申请要有针对性和合理性。临床医师应在熟悉人体各部位正常菌群以及常见致病菌的基础上，结合感染患者的症状、体征，科学地提出检验申请。对于有感染迹象者（WBC增高，中性粒细胞升高，CRP>20mg/L等），应尽快申请做细菌培养与药敏试验，并力争在使用抗菌药物之前送检标本，以便及时获得致病菌的有关资料和药敏结果，正确选用抗菌药。对于低临床价值的细菌标本，如口腔和肠内容物、直肠周围脓肿、褥疮、多毛的脓肿、恶露、呕吐物、Foley导管尖等，由于易受正常菌群的污染，细菌培养价值较低，一般不做细菌培养；必须申请细菌培养时，其结果应结合临床分析。由于细菌检验的特殊性，细菌检验申请单必须提供临床信息，特别应说明患者是否使用过抗菌药以及使用过何种抗菌药，以便于实验室有的放矢地抵消抗菌药的作用，提高细菌培养阳性率。 （二）检验标本的采集、保存、运送和验收   1、患者的准备   主要包括两个方面：一是做好采集部位的清洁和消毒工作，防止正常菌群的污染；二是耐心细致地交待患者，使其主动配合以便采集到有价值的标本。      2、标本采集   标本正确采集十分重要，其目的是千方百计捕捉病原菌并保持其活性，以提高检出率，同时又要尽可能避免非病原菌的污染和干扰。为此，要根据各种感染性疾病和目标病原菌的不同特点，正确合理地确定采样部位、时机和次数。要选用恰当的采样器材并严格按规范操作。一般来讲，采样量多一些有利于病原菌的检出，但应以不影响患者健康和便于操作为前提，因此采样量要恰当。      3、标本保存与送检   盛标本的容器应无菌、不漏和便于密封。要根据目标病原菌的特点决定是否使用保菌液、运送液或增菌液，以及选择何种保菌液、运送液或增菌液。标本采集后应尽可能立即送检。如不能及时送检，要根据目标病原菌的特点确定保存条件（如温度等），在规定的时间内送到实验室。       4、验收和登记   标本的验收和登记要有专人负责。验收的内容主要包括：采样时间与送检时间（注意时间间距）以及送检条件是否符合保存致病菌活力的要求；盛标本容器是否有溢漏和污染；申请单是否填写完整；标本标识是否与申请单一致和唯一等。对不合格的标本要拒收，并向送检医护人员说明拒收原因，告知正确送检的要求，嘱其重新采集和送检标本。以上各项均与细菌检验的质量密切相关，检验科（细菌室）应与临床科室通过共同研讨，认真制定有关的要求和标准操作程序，并严格执行。 www.labdd.com 二、检验中质量管理 （一）致病菌分离鉴定     1、标本（细菌）的接种、分离和鉴定   根据标本和检验目的的不同接种不同的培养基。对阳性培养要分离纯化，然后进行分群和种属鉴定。整个操作过程要按标准操作程序（SOP）进行，不得随意更改操作程序，对于疑难菌株，要查阅文献、组织会诊，不能草率作出结论。     2、检验过程的记录和结果报告   检验过程中所见现象和发现的问题，均应如实地记录，以便于分析实验结果，作出正确结论和发出可信的报告，亦可作为今后总结和改进工作的依据。所发报告内容要登记，以便查询；如原（初步）报告有误或不完善，应发纠正报告。 （二）药敏试验质控       药敏试验应严格按最新发布的NCCLS所规定的培养基、操作方法、药敏纸片和判定标准进行。为了监控试验过程的质量，必须做好药敏质控。 1、常用的药敏质控标准菌株         NCCLS从美国菌种收集中心（ATCC）选择推荐了一些菌株作为质控标准株（见表1）。 2、质控株的保存   尽管质控标准株比其他一些菌株药敏结果是相对稳定的，但反复多次的传代不可避免地会造成菌株的变异。为防止变异，必须将标准株冻干保存。每月从冻干株中复苏1次，种入大豆胰酶消化肉汤中（厌氧菌可用GAM肉汤等）作为工作株。工作株可存于4℃～8℃，并于每周转种1次。通常工作株转种4～5次后即须弃去。在质控中，如发现工作株结果有疑问，应予以更换。反复传代亦易使其敏感性变异，特别是铜绿假单胞菌（ATCC 27853），将会丢失对脲基青霉素的敏感性。如无冻干条件时，可将质控株置入：①含10～15%甘油的大豆胰酶消化肉汤，或②脱纤维羊（或兔）血，或③脱脂奶，或④含50%小牛血清的肉汤，存于-20℃以下环境中（最好－60℃以下），亦可防止变异。   3、药敏质控方法   质控株应每天随临床分离株一道进行药敏试验，质控株的药敏结果如果在质控允许范围内（参见最新CLSI文件），说明实验条件符合要求，结果可信；若药敏结果在质控允许范围外，则实验中可能存在差错。由于质控允许范围的最大值与最小值是质控株在标准条件下多次重复实验的95%可信限，故20次连续质控结果中仅允许1次落在范围外，但不能偏离质控允许范围中间值[（最大值+最小值）/2]4个标准差。由于允许范围恰好包括4个标准差，故落在允许范围外的抑菌圈直径一定要在离中间值一个允许范围（中间值±1个允许范围）之内。此外，20次或更多次药敏结果的平均值应接近中间值。如果20次连续质控结果中≥2次或30次中有≥4次结果超出了允许范围，则提示实验过程中存在问题，必须查找原因加以解决。 常规的药敏质控可按下法进行：连续测定某药对质控株的药敏结果，每天一次，共测20或30天，取得20或30个值。   ⑴如果20个值中仅有一个值，或30个值中仅有三个以下的值超出允许范围，则结果基本可信，可改每天质控一次为每周一次。此后，若某周出现一次质控值超出允许范围，则于当天查找原因（包括用错纸片和质控株，菌株污染，孵育条件错误等），经纠正明显错误后重测，如结果在允许范围内可继续每周一次的质控；如未能找出明显原因则需采取立即纠正措施：连续质控五天，每天一次：①若五次结果皆在允许范围以内，则继续每周一次的质控；②五次结果只要有一次失控，则存在系统误差，需进行增加的纠正措施：查找到原因，然后改每周一次质控为每天一次，完成20（或30）天质控，其间失控次数若在一次（或三次）以内，则再改为每周一次。    ⑵如果有两个（或四个）以上的值超过允许范围，则继续做每天一次的质控。    ⑶每当改变试剂、药敏纸片和培养基等时，均要重新进行连续20（或30）天的质控。   ⑷每次失控均要查找原因，纠正后才能发出报告。 （三）培养基、试剂和染色的质控  1、培养基的质控   培养基无论是自制的还是商业购买的，都应注明生产日期和效期。培养基的质控主要包括以下四个方面：① 无菌试验，每批培养基在高压或过滤除菌后均要抽取样本进行培养，以证实无菌生长。②支持生长试验，以适宜的菌株接种，经培养应生长良好。③选择和抑制生长试验，对选择性培养基应至少分别选1株可生长、1株被抑制菌进行接种培养，可生长菌应生长良好，被抑制菌应不能生长。④生化反应培养基至少应分别选阳性和阴性反应菌株各1株，以证实应有的生化反应。常用的质控菌见表2，请正确选用。 2、生化反应试纸和试剂的质控   试纸和试剂无论是外购的还是自制的，在使用时一定要注明开启时间和失效期。测定代谢产物的试纸或试剂，要用已知阳性和阴性的菌株进行测试，并作好测试记录。测定代谢产物的试剂，要防止细菌的污染。触酶、氧化酶、凝固酶试剂在开瓶时以及使用中，每天至少要分别用一阳性和阴性菌测试1次。    杆菌肽、Optochin、ONPG、XV纸片（条）在开瓶时以及使用中，每周至少要分别用一阳性和阴性菌测试1次（XV纸片仅做阳性菌）。用于分枝杆菌鉴定的试剂在开瓶或配制时，以及每次使用时，均要做阳性菌对照（铁的摄取试验还要做阴性对照）。    抗血清在开瓶时和使用中每月需分别用阳性反应和阴性反应菌做1次测试。抗原检测试剂和DNA探针在每次操作时，均要设阴、阳性对照。    其他试剂和纸片仅在开瓶或配制时，做1次阴、阳性反应测试即可。各种常用试纸和试剂的质控菌和预期结果见表3。 3、染色的质控   常用染色的质控要求见表4，质控结果应作好记录。     （四）仪器设备质量监测       实验室内的各种仪器设备的运行情况，应每天进行监测，每一仪器均要有专人按使用说明书要求进行维护保养，仪器上要附有运行记录卡，每天由维护保养人记录温度等指标的变化情况。一旦发现异常或失控，应立即查找原因并进行维修。    （五）积极参加室间质评        要按规定参加细菌学的室间质评，对实验室质控水平进行全面评估，不断提高检测水平。 三、检验后质量管理  检验工作完成后，要综合检验结果，正确及时地发出报告。阳性结果应先通知医师，以争取时间抢救患者。对于可疑的阴性结果或与临床不符的结果，要与医师共同探讨，找出可能的原因，不断提高诊断水平。对于所分离的特殊菌株，最好设法保存，以利于今后的研究工作。经常征求医护人员和患者的意见，加强相互间的沟通，重视医师和患者的投诉和抱怨，定期对质量管理工作进行评价，作出书面总结。要求全体检验人员都知道存在的问题和克服的办法，不断调整和改进质量管理体系。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  ATCC 27566里拉微球菌的培养方法与实验内容！ 里拉微球菌是Micrococcus属的微生物，原产地为中国。TSA培养基，30℃培养24 h，菌体球形，直径0.3-0.5 μm，单个、成对或四联排列，革兰氏阳性。30℃培养72 h，菌落黄色，圆形，凸起，光滑，不透明，边缘整齐。主要用途为研究。  一、菌种简介平台编号：Bio-74995 规格：Freeze-Dried 拉丁属名：Micrococcus Lylae 菌株名称：里拉微球菌用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Micrococcus lylae Kloos et al.拉丁名(ATCC 27566 )菌株编号Strain Designations 菌株别名 JL 178Isolation 分离源 Human skinBiosafety Level 生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedStorage Conditions 保藏方法Frozen 冷冻物: -80℃ or colderFreeze-Dried 冻干物: 2℃ to 8℃Live Culture 活菌: See Propagation SectionPreceptrol noType Strain 模式菌株 yesMedium 培养基 ATCC Medium 3: Nutrient agar or nutrient brothGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 30℃Atmosphere 需氧情况: AerobicName of Depositor WE KloosIsolation 分离源  Human skinReferences 参考文献  Kloos WE, et al. Isolation and characterization of micrococci from human skin, including two new species: Micrococcus lylae and Micrococcus kristinae. Int. J. Syst. Bacteriol. 24: 79-101, 1974.Skerman VB, et al. Approved lists of bacterial names. Int J Syst Bacteriol 30: 225-420, 1980.Cross References Nucleotide (GenBank) : AX109592 Sequence 325 from Patent WO0123604.Nucleotide (GenBank) : AF214778 Micrococcus lylae RecA protein (recA) gene, partial cds. 三、微生物培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                  生防真菌之绿僵菌的侵染机理与生防机制及应用！ 绿僵菌属（Metarhizium）真菌是一种具有较强致病性的麦角菌科异虫草属昆虫病原真菌，该属菌株可寄生于约8个目、42个科，共200多种昆虫、螨类和线虫体内。据报道，目前已有13种绿僵菌，包括金龟子绿僵菌（M. anisopliae）、贵州绿僵菌（M.guizhouense）、黄绿绿僵菌（M. flavoviride Gams&. Rozsypal）、白色绿僵菌（M.ablum）、棕色绿僵菌（M. brunneum）、平沙绿僵菌（M.pingshaense）、柱孢绿僵菌（M. cylindrosporum）、翠绿绿僵菌（M.iadini）、大孢绿僵菌（M. majus）、蝗绿僵菌（M.acridum）、耐寒绿僵菌（M. frigidum）、鳞翅目绿僵菌(M.lepidiotae)和球孢绿僵菌（M. globosum）。绿僵菌具有分布范围广、杀虫、对人畜农作物无毒害等特点，被制成粉剂、干菌丝、混合剂及无纺布菌条等形式的真菌生防制剂，用于农业、林业害虫的生物防治，防治效果极佳，具有很高的生态应用价值和经济应用价值。 绿僵菌从何而来？ 最早发现绿僵菌的是梅契尼科夫（Metschnikoff），他在1879年观察到一批死亡的金龟子在昆虫死后两天，从它们身上生出菌丝，尤其显著的是菌丝环绕着气门的周围，菌丝初为白色，随后变为绿色，最后呈暗绿色。随后，Sorokin（1883年）根据梅契尼科夫确定的金龟子虫霉(Entomophthora anisopiae Metsch. )转属建立了绿僵菌属（Metarhizium）。绿僵菌可从金龟子、梨虎幼虫、叶蝉等昆虫尸体中分离获得。自绿僵菌建属以来，相继发现42个新种和变种。最早的绿僵菌应用是Metchnikoff在1880年尝试应用并取得成功，这使生物防护中生物防治制剂开始以病原真菌作为原材料。 为什么开发绿僵菌生防制剂？ 近年来，因为化学农药的大量使用，食品和药材安全问题、环境保护问题倍受重视，使得生防制剂的研发及推广应用更加刻不容缓。绿僵菌产生分生孢子的方式有液体深层发酵、固体发酵及液固双相发酵工艺，由于液固双相发酵综合了前两者的优势： （1）提高真菌竞争力，降低杂菌污染； （2）提高真菌产分生孢子速度，减少培养时间； （3）确保接种菌液对固体颗粒物质的均匀覆盖，使菌体能同步生长。而以绿僵菌为原料的真菌生防制剂剂型主要有粉剂、可湿性粉剂、混合剂等类型。具有环保无污染、高效低成本且不易使害虫产生抗药性等潜在优势。 绿僵菌的侵染机理及生防机制是什么？ 绿僵菌对寄主的入侵是寄主与病原菌之间的生理生化作用的综合结果。目前绿僵菌对昆虫寄主的侵染过程已基本清晰，首先是分生孢子附着在昆虫体表，孢子萌发后产生入侵菌丝并穿过体壁在及主体内大量繁殖，同时产生毒素并形成圆筒状孢子，最终导致寄主死亡。在侵染过程中绿僵菌分泌多种酶（如蛋白酶、几丁质酶、脂酶等），形成特殊结构（如附着胞、穿透钉、穿透菌丝等），并克服昆虫体表某些物质的抑制作用及昆虫体内的一系列免疫活动。 总体来说，绿僵菌的侵染过程主要分为以下几个阶段：孢子萌发、穿透虫体、体内发育和致死。 1、孢子萌发 分生孢子黏附于寄主表皮后，受体表有关活性物质的刺激而萌发产生芽管，芽管的生长对表皮具有很强的影响性。目前有部分研究认为，芽管可依靠菌丝先端分泌的黏液黏附在寄主上表皮表面，经过螺旋式伸长，寻找合适侵染点，并进一步分化产生穿透钉。例如氨基酸、蛋白质、糖类、类脂等一般的营养物就能使金龟子绿僵菌分生孢子发芽。 2、穿透虫体 绿僵菌在附着胞形成期间可产生大量的胞内蛋白酶，通过酶解作用使得附着胞下面蜡层消失，促进穿透钉通过机械作用挤入上表皮。Butt（1988）的研究表明此过程寄主也将引发免疫反应，包括体壁障碍、体表短链脂肪酸如辛酸、奎酸的抑制作用、血细胞和血淋巴的应急机制等。 3、体内发育和致死 绿僵菌穿透昆虫体壁后即在昆虫体内发育，生长过程中会产生一系列环状六肽毒素即绿僵菌素，作为免疫抑制因子能够限制和削弱寄主的防御反应，最终导致昆虫死亡。 绿僵菌生防制剂的生产普遍以大米、米糠和稻壳为固体载体，采用液固双相发酵工艺促进绿僵菌菌丝或芽生孢子生长进而在短时间产生大量分生孢子，通过加工制成以粉剂、可湿性粉剂及混合剂为主的剂型开发成真菌类生物制剂产品用于作物虫害防治。 绿僵菌生防制剂的应用及前景如何？ 农作物在全生育期会遭受多种病虫为害导致质差量少的现象且日益严重。绿僵菌生防制剂在杀虫、防病和促进植物生长等方面已表现出巨大的应用潜力。同时，绿僵菌类生防制剂在未来可多方面进行推广应用与扩大生产，包括生防制剂剂型、工厂规模化化生产方式、其他类真菌杀虫剂的开发等。同时，可利用基因工程手段，通过改造相关功能区域来提高产孢速率，增强防治作用。生防制剂作为公认的“无公害农药”中的真菌杀虫剂，它在保护环境和构建生态平衡上具有一定的意义。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      多样化微生物菌剂的应用领域与应用前景！ 微生物菌剂是指由微生物制备和应用的一类产业产品，广泛应用于农业、环境保护、生物医药等领域。微生物菌剂的种类繁多，可根据其来源和应用领域进行分类。 1、益生菌菌剂 益生菌菌剂是由有益菌株制备的微生物菌剂，如乳酸菌、酵母等。这类菌剂主要应用于农业领域，以促进动物消化道健康、增强养殖动物免疫力为主要目的。益生菌菌剂可以促进饲料消化吸收，改善肠道菌群平衡，提高作物、牲畜和家禽的生长性能和养分利用率。 2、生物农药类菌剂 生物农药类菌剂由一些具有生物防治作用的微生物制备而成，如枯草芽孢杆菌、拟南芥绿菌等。这些菌剂可用于农作物病虫害防治，通过竞争、拮抗、侵入害虫或病原体的生活环境，抑制害虫繁殖或病原菌感染，达到防治的效果。与化学农药相比，生物农药类菌剂对环境友好、对人体无毒副作用。 3、生物有机肥类菌剂 生物有机肥类菌剂是由微生物或微生物代谢物制备的一类有机肥料，如巨大芽孢杆菌、放线菌类菌剂等。这类菌剂主要应用于农业领域，用于土壤调理、提高土壤肥力和改良土壤结构。生物有机肥类菌剂可以分解复杂有机质，释放出养分供作物吸收利用，增加土壤保水保肥能力，改善土壤微生物群落结构。 4、环境修复类菌剂 环境修复类菌剂主要用于油污、重金属污染、化学品残留等环境污染场景。这类菌剂通过菌株的代谢能力，分解有害物质，转化为无害或较低毒性的物质，实现环境的修复。常见的环境修复类菌剂包括石油降解菌剂和重金属污染修复菌剂等。 5、生物制剂辅料类菌剂 生物制剂辅料类菌剂主要用于微生物菌剂的贮存、稳定和增效等方面。这类菌剂可以提高微生物菌剂的存活率和适应性，增加菌剂在特定条件下的生物活性。常用的生物制剂辅料类菌剂包括保护剂、保鲜剂和增效剂等。 6、土壤改良类菌剂 土壤改良类菌剂包括一系列利用微生物菌群来改善土壤物理性质、提高土壤结构和增加土壤肥力的菌剂。例如，一些固氮菌剂能够与植物的根系共生，将大气中的氮转化为植物可利用的形式，提供植物所需的氮源。还有一些磷溶解菌剂能够分解土壤中的无机磷，将其转化为植物可吸收的有机磷形式。这些菌剂有助于提高土壤肥力，减少化肥的使用量，实现可持续土壤管理。 7、生物饲料添加剂类菌剂 生物饲料添加剂类菌剂是将一些有益的微生物菌株添加到饲料中，以促进畜禽的消化吸收和生长发育。例如，添加进饲料的益生菌能够改善动物的肠道健康，提高免疫力，降低消化道疾病的发生率。此外，一些酶制剂如纤维素酶和淀粉酶可以帮助动物更好地消化纤维素和淀粉，提高饲料利用效率。 8、水体净化类菌剂 水体净化类菌剂是指用于水质净化和污水处理的微生物菌剂。这些菌剂具有生物降解有机物和去除氮、磷等污染物的能力，有助于提高水体的生态环境和水质。常见的水体净化类菌剂包括水中生长的植物如互花米草以及具有吸附、分解和去除能力的微生物如好氧菌和厌氧菌等。 通过对微生物菌剂的分类，我们可以更好地了解其在不同领域中的应用和作用机制。微生物菌剂的发展和应用给农业生产、环境保护等领域带来了新的机遇和挑战，为实现可持续发展提供了有力支持。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                      大鼠肝实质细胞的性质与用途及生产工艺！ 一、产品信息 平台编号：Bio-73655  规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶  细胞信息：原代细胞  产品名称：大鼠肝实质细胞 培养条件：原代细胞取组织现分 组织来源：肝脏组织 产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶 用途：研究 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞简介 大鼠肝实质细胞分离自肝脏组织；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用；肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里最大的器官，位于机体中的腹部位置，在右侧横隔膜之下，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方，胃的上方。肝脏是机体消化系统中最大的消化腺，为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构：肝脏位于右上腹，隐藏在右侧膈下和肋骨深面，大部分肝为肋弓所复盖，仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁，肝上面则与膈及腹前壁相接。肝实质细胞是指具有肝功能的单位，是肝脏的基本组成单位之一。肝实质细胞与主要病生理变化：急性肝炎、肝硬化、肝脓肿。肝实质细胞属于中高度分化细胞，生长营养需求高，在体外存活时间短；细胞呈圆形或多角形，核大而圆，居中，常染色质丰富，部分有双核或多倍体核。肝脏作为体内重要的器官，在整个物质代谢过程中具有广泛而多样的作用。 三、方法简介 实验室分离的大鼠肝实质细胞采用混合酶灌流消化、反复低速离心制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。 四、质量检测 实验室分离的大鼠肝实质细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 五、培养信息 包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）  培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等  换液频率 每2-3天换液一次  生长特性 贴壁  细胞形态 上皮细胞样  传代特性 可传1-2代  消化液 0.25%胰蛋白酶  培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%  大鼠肝实质细胞体外培养周期有限；建议使用北京百欧博伟生物技术有限公司配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  实验室培养基的配制与灭菌实验原理与操作步骤！ 一、实验目的 1、了解并掌握培养基的配制、分装方法。 2、掌握各种实验室灭菌方法及技术。 二、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固。但多次反复融化，其凝固性降低。 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 三、实验材料 1、器皿及材料 天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。 2、药品试剂  蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。 四、操作流程 称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。 五、操作步骤 1、培养基的制备 （1）称量药品 根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 （2）溶解 用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分。 （3）调节pH 根据培养基对pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH。测定pH可用pH试纸或酸度计等。 （4）溶化琼脂 固体或半固体培养基须加入一定量琼脂。琼脂加入后，置电炉上一面搅拌一面加热，直至琼脂完全融化后才能停止搅拌，并补足水分(水需预热)。注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。 （5）过滤分装 先将过滤装置安装好。如果是液体培养基，玻璃漏斗中放一层滤纸，如果是固体或半固体培养基，则需在漏斗中放多层纱布，或两层纱布夹一层薄薄的脱脂棉趁热进行过滤。过滤后立即进行分装。分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口，以免浸湿棉塞，引起污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5，半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜；分装三角瓶，其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。 （6）包扎标记 培养基分装后加好棉塞或试管帽，再包上一层防潮纸，用棉绳系好。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。 （7）灭菌 上述培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌。普通培养基为121℃20min，以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份。培养基经灭菌后，如需要作斜面固体培养基，则灭菌后立即摆放成斜面(图3-2)，斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜；半固体培养基灭菌后，垂直冷凝成半固体深层琼脂。 （8）倒平板 将需倒平板的培养基，于水浴锅中冷却到45～50℃,立刻倒平板。 2、灭菌方法    灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。 加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌体内 蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可增加灭菌效力。 （1）湿热灭菌 ①煮沸消毒法 注射器和解剖器械等均可采用此法。先将注射器等用纱布包好，然后放进煮沸消毒器内加水煮沸。对于细菌的营养体煮沸约15～30min，对于芽孢则需煮沸约1～2h。 ②高压蒸汽灭菌法 高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的温度升高到121℃，经15～30min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。 ③操作方法和注意事项如下： a.加水 打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线。立式消毒锅最好用已煮开过的水，以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够，防止灭菌过程中干锅。 b.装料、加盖 灭菌材料放好后，关闭灭菌器盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸汽锅密闭，勿使漏气。 c.排气     打开排气口(也叫放气阀)。用电炉加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一起从排气孔排出，当有大量蒸汽排出时，维持5min，使锅内冷空气完全排净。 d.升压、保压和降压 当锅内冷空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。当压力上升至所需压力时，控制电压以维持恒温，并开始计算灭菌时间，待时间达到要求（一般培养基和器皿灭菌控制在121℃，20min）后，停止加热，待压力降至接近“0”时，打开放气阀。注意不能过早过急地排气，否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外。 e.灭菌后的培养基空白培养 灭菌后的培养基放于37℃培养箱中培养，经24h培养无菌生长，可保存备用；斜面培养基取出后，立即摆成斜面后空白培养；半固体的培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后，空白培养。 （2）干热灭菌法 通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤，即加热至160～170℃维持1～2h。 干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。凡带有胶皮的物品，液体及固体培养基等都不能用此法灭菌。 ①灭菌前的准备 玻璃器皿等在灭菌前必须经正确包裹和加塞，以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内；三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸，用棉绳以活结扎紧，以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染；吸管以拉直的曲别针一端放在棉花的中心，轻轻捅入管口，松紧必须适中，管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去，灭菌时将吸管装入金属管筒内进行灭菌，也可用纸条斜着从吸管尖端包起，逐步向上卷，头端的纸卷捏扁并拧几下，再将包好的吸管集中灭菌。 ②干燥箱灭菌 将包扎好的物品放入干燥烘箱内，注意不要摆放太密，以免妨碍空气流通；不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱的温度升至160～170℃并恒温1～2h，注意勿使温度过高，超过170℃，器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧。如果是为了烤干玻璃器皿，温度为120℃持续30分钟即可。温度降至60～70℃时方可打开箱门，取出物品，否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂。用此法灭菌时，绝不能用油、蜡纸包扎物品。 ③火焰灭菌 直接用火焰灼烧灭菌，迅速彻底。对于接种环，接种针或其它金属用具，可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌。此外，在接种过程中，试管或三角瓶口，也采用通过火焰而达到灭菌的目的。 六、结果 1、记录各种不同物品所用的灭菌方法及灭菌条件（温度、压力等）。 2、试述高压蒸汽灭菌的过程及注意事项。 七、思考 1、制备培养基的一般程序是什么？ 2、做过本次实验后，你认为在制备培养基时要注意些什么问题？ 3、灭菌在微生物学实验操作中有何重要意义？ 4、试述高压蒸汽灭菌的操作方法和原理。 5、高压蒸汽灭菌时应注意哪些事项？ 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   MDA-MB-231（人乳腺癌细胞）的知识与应用！ 一、背景 MDA-MB-231是一种源自人类乳腺癌的细胞系，常被用作生物医学研究的模型系统。这种细胞系具有侵袭性强、易转移和耐药等特点，因此在癌症生物学、药物筛选和临床前研究中具有广泛的应用价值。 MDA-MB-231细胞系是通过将乳腺癌患者的胸腔积液中的癌细胞进行体外培养而得到的。这些细胞具有上皮样形态，生长迅速，并且能够在裸鼠体内形成肿瘤。此外，MDA-MB-231细胞系还具有多种生物学特性，如高表达HER2/neu基因、产生多种生长因子和蛋白酶等，这些特性使得它成为研究乳腺癌发生、发展和转移的理想模型。 在研究中，MDA-MB-231细胞系常被用于模拟乳腺癌的生物学行为，如细胞增殖、迁移、侵袭和耐药等。此外，该细胞系也被广泛用于药物筛选和临床前研究，以评估药物对乳腺癌细胞的杀伤作用和潜在疗效。例如，有研究表明，某些中药成分可以通过抑制MDA-MB-231细胞的增殖和诱导凋亡来发挥抗癌作用。 然而，需要注意的是，虽然MDA-MB-231细胞系具有一定的代表性，但并不能完全模拟真实的人体环境。因此，在将实验结果应用于临床之前，仍需要进行更多的实验验证和临床研究。此外，MDA-MB-231细胞系的培养和传代也需要特定的条件和方法，以确保细胞的稳定性和可重复性。 二、MDA-MB-231细胞系培养操作 1)复苏MDA-MB-231细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)MDA-MB-231细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)MDA-MB-231细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 MDA-MB-231可以用于苦参碱联合多西他赛促进三阴性人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的机制研究： 在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中探索苦参碱和多西他赛联合使用对细胞增殖和凋亡等的影响;在此基础上利用蛋白组学和生物信息学技术研究苦参碱联合多西他赛抗人乳腺癌MDA-MB-231细胞的进一步分子机制,并进行体外、体内实验验证。 方法： 1、通过CCK-8、克隆形成、Transwell、划痕实验、流式细胞术等实验探索不同浓度的苦参碱和多西他赛单药及联合用药对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响,在此基础上选取苦参碱(1mM)、多西他赛(10nM)和联合用药(苦参碱1mM+多西他赛10nM)等模式对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的克隆形成、侵袭、迁移及促凋亡等作用。用蛋白印迹实验检测上述用药模式对人乳腺癌MDA-MB-231细胞Caspase和Bcl-2家族相关蛋白质表达的影响。 2、利用蛋白组学和生物信息学技术研究苦参碱联合多西他赛抗人乳腺癌MDA-MB-231细胞的靶分子,并通过相关实验验证。质粒过表达该分子后,采用联合用药的处理模式检验靶分子过表达后人乳腺癌MDA-MB-231细胞的细胞表型和Caspase家族相关蛋白质变化情况。 3、建立人乳腺癌MDA-MB-231细胞BALB/c裸鼠移植瘤模型,待肿瘤体积达到约100mm3时,将裸鼠随机分为如下4组,每组8只,并进行如下处理:①对照组(Control):等体积的生理盐水,腹腔注射,5次/周,共计15次。②苦参碱组(Mat):苦参碱500mg/kg,腹腔注射,5次/周,共计15次。③多西他赛组(Doc):多西他赛8mg/kg,腹腔注射,1次/周,共计3次。④联合组(Comb):苦参碱+多西他赛(苦参碱50mg/kg,腹腔注射,5次/周,共计15次;多西他赛8mg/kg,腹腔注射,1次/周,共计3次)。研究过程中观察各组荷瘤裸鼠的一般情况,测量裸鼠体重、肿瘤体积等指标。达到实验要求后采血后送检血常规、肝功能,脱颈处死裸鼠,剥离裸鼠肿瘤,拍照记录并测量肿瘤组织质量。分别进行肿瘤组织的HE染色、Tunel染色及相关蛋白的免疫组化检测。 结果： 1、苦参碱和多西他赛单药均呈一定程度的浓度及时间依赖性的方式抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、克隆形成、侵袭、迁移及促凋亡能力,两药联合使用具有协同作用。蛋白印迹实验证实:苦参碱和多西他赛单药作用人乳腺癌MDA-MB-231细胞后,Cleaved-caspase-3、-8、-9及Bax等促凋亡蛋白表达均有所上调,而抑凋亡蛋白Bcl-2表达有所下降,两药联合使用具有协同作用。 2、蛋白组学分析提示HN1是苦参碱处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞后的下调蛋白之一(Fold change:0.61);苦参碱联合多西他赛的用药模式对MDA-MB-231细胞的增殖、克隆形成、侵袭、迁移及促凋亡能力可被过表达HN1所抵消。 3、苦参碱与多西他赛的联合用药模式对人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤的体积和瘤重的抑制起到协同作用,免疫组化检测提示联合用药的给药模式在抑制肿瘤组织中CD31、VEGF、Cleaved-caspase-3、HN1的表达方面具有协同作用,并且这种用药模式对裸鼠的一般状况、体重、肝功能和血常规均无明显影响。 结论：苦参碱(1mM)联合多西他赛(10nM)的用药模式对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的抗肿瘤作用具有协同作用,该作用可能是通过下调HN1表达来实现的。苦参碱与多西他赛的联合用药模式对人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤的体积和瘤重的抑制起到协同作用,且对裸鼠的一般状况、体重、肝功能和血常规均无明显影响。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  发酵肉制品中的微生物生物化学知识和研究动态！ 百欧博伟生物：传统发酵肉制品的微生物来源于环境中随机感染。这些微生物菌群主要是微球菌、凝固酶阴性的葡萄球菌、链球菌和乳酸杆菌。在香肠加工过程中，上述微生物可分别来自特定的香肠配料和生产的各单元操作。食盐和其他腌制剂的加入有利于这些微生物的生长，而抑制原料肉中的微生物菌群。肉馅的冷处理、肠衣包裹隔绝氧气和烟熏过程都有利于有益发酵型微生物的生长。 虽然微生物的生长一般不会直接导致高活力的酶促反应，但它们高浓度的活细胞代谢将引起原料肉大的变化。通过添加发酵剂提高有益微生物的起始数量，增加微生物的代谢活性，引发肉制品的理化变化，可生产出优质的发酵肉制品。 大多数微生物能够利用碳水化合物作为生长的能量来源。假单胞菌、酵母菌、霉菌、微球菌等微生物能在肉的表面好气生长，并将糖类物质彻底地氧化为二氧化碳和水，或者非彻底氧化生产有机酸。碳水化合物彻底氧化的产物对产品的颜色和风味有一定的影响，然而微生物在这些反应中获得了充足的能量，并通常形成荚膜，使表面成膜发黏。这种黏性物质可以阻止氧气的传递或者联合其他的原因而使氧化反应不能彻底进行，这可能是发酵肉制品中厌气性微生物普遍的代谢方式。此外，与腌制有关的发酵肉制品中许多微生物不能彻底氧化碳水化合物，必须依赖于发酵作用来维持生长。 自然发酵肉制品中微生物主要是一些乳酸细菌、能耐受亚硝酸盐的细菌。同型乳酸发酵菌能代谢碳水化合物产生乳酸，并导致产品低pH，而出现酸味。异型乳酸发酵细菌代谢碳水化合物可形成乙醇、二氧化碳、乳酸、醋酸等代谢终产物。这些组分对终产物的风味、颜色和组织结构会产生不同程度的影响。优质发酵肉制品的生产是多种微生物共同生长，并通过控制工艺参数来调节微生物代谢产物的组分和含量而形成的综合生态效应。碳水化合物代谢的微量产物也可能影响发酵肉制品的风味。乙酰是乳酸细菌产生的，它与乳酸混合形成的风味就不同于乳酸单独存在时的风味。此外，一些乳酸细菌产生的多糖也可能影响发酵肉制品的味道。 许多微生物通过胞外或胞内蛋白酶能够代谢肉中的蛋白质、肽、氨基酸。这些蛋白酶和肽酶是一个复杂的酶系。我们还不能分别确定它们在发酵肉制品中的专一性底物和特定的反应历程。微生物产生的水解酶类可引起蛋白质的液化和溶解。蛋白质的水解可以产生各种氨基酸，而氨基酸被微生物进一步分解形成胺、脂肪酸和硫醇。这些物质存在的量及相互间的比例，对发酵肉制品的色泽、风味会产生重大影响。 氨基酸的酶解，通常是氧化脱氨产生氨和α–酮酸。梭状芽孢杆菌可以使氨基酸发生氧化还原脱氨产生氨、酮酸和脂肪酸。另一种形式的氨基酸降解是脱羧，形成二氧化碳和胺。其他的微生物酶能分解酪蛋白产生吲哚和其他产物；半胱氨酸和甲硫氨酸的分解可以释放出硫化氢；精氨酸可转化为鸟氨酸、二氧化碳和氨；而组氨酸则有多种代谢途径。氨基酸代谢对发酵肉制品的影响主要是挥发性组分的形成。这些挥发性组分构成发酵肉制品风味和芳香的重要性有待进一步研究。肉类蛋白质的化学变化所形成的二氧化碳、硫化氢、亚硝酸盐可直接参与肉品色素的反应而影响肉的颜色。此外，微生物的相互作用，可产生一系列的氧化还原反应。 一些微生物可产生酯酶水解或分泌氧化酶氧化脂肪，而导致肉制品“发哈”。但“发哈”并非由微生物所引起。在发酵肉制品中水解脂类的微生物通常是假单胞菌、革兰氏阴性杆菌、酵母和霉菌，霉菌还有强烈的脂肪酸氧化降解能力。脂肪水解形成的大量脂肪酸对微生物的生长有抑制作用。通过特定发酵剂代谢终产物的分析，不饱和脂肪酸氧化会对微生物产生过氧化物毒害。 饱和脂肪酸的微生物氧化代谢按β-氧化途径进行。此外，微生物代谢系统中产生的过氧化物可以催化肉制品中不饱和脂肪酸的化学氧化。 虽然蛋白质和脂肪的降解极有可能与肉制品的腐败有关，但对发酵肉制品加工工艺和微生物专用发酵剂的控制与选择，可以使这些变化朝有利于改善肉制品品质的方向发展，从而生产出品质一流的产品。霉菌、酵母菌和微球菌由于它们各自的蛋白酶和酯酶活性而作为发酵剂被广泛应用。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  用于分析检测与质量控制的：阪崎氏年轻泰坦杆菌  一、菌种简介平台编号：Bio-59899 提供形式：冻干物拉丁属名：Cronobacter Sakazakii 中文名称：阪崎氏年轻泰坦杆菌属名：Cronobacter种名加词：sakazakii来源历史：←中国检验检疫科学研究院食品安全研究所(10403)收藏时间：2007.3.5原始编号：2（2-17）资源归类编码：15131122000模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；分析检测具体用途：研究、质量控制特征特性：G-杆菌，赖氨酸脱羧酶阴性，鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶阳性，山梨醇、侧金盏花醇、粘液酸和服-泼二氏实验均阴性，蔗糖、棉子糖、蜜二糖为阳性，产黄色素，兼性厌氧，最适pH7.4~7.6。    生物危害程度：三类致病对象：人致病名称：脑膜炎，脓血症传播途径：经口、消化道分离基物：奶粉培养基：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：36℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：21543用途：研究；分析检测；研究、质量控制 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。  三、培养条件1、培养基编号：CM0002 营养肉汁琼脂2、培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入 5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。推荐使用商品化成品培养基。3、需氧类型：好氧4、培养温度：36℃ 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 五、打管说明书1、西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖， 注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入 0.2ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。2、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲破裂处。菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。7、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。8、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理。9、甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

               人主动脉血管平滑肌细胞复苏与传代及冻存实验步骤！ 细胞简介平台编号：Bio-73458 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：HA-VSMC 细胞名称：人主动脉血管平滑肌细胞HAVSMC产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2细胞数量：1x10^6；1x10^6保存温度：37℃；-198℃运输方式：常温保温；运输干冰运输安全等级：1仅供科研：1类培养体系：DMEM高糖培养基（Hyclone）+10%胎牛血清（Gibco）+1%双抗（Hyclone）培养温度：37℃二氧化碳浓度：5%简介：人主动脉血管平滑肌细胞HAVSMC取自女性供体，贴壁培养。注释：倍增时间35h用途：细胞系注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）实验仪器：超净工作台，CO2 培养箱，倒置显微镜，水浴锅，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶，需复苏的细胞，移液枪，枪头，离心管实验步骤：1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入37℃温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管 ，打开盖子 ，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀。3、操作离心，调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟4、弃去上清液，重悬离心管底部细胞沉淀，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基 ，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液，继续培养。6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中。 细胞传代操作说明（贴壁细胞）实验仪器：超净工作台，CO2 培养箱，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞，移液枪，枪头，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，愈合度达到 80%，可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吸出完全培养基，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10 min ，弃上清 收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。  细胞传代操作说明（悬浮细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜，离心机实验试剂：DMEM 培养基，胎牛血清，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶，需传代的细胞，移液枪，枪头，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。 细胞冻存操作说明实验仪器：超净工作台，CO2 培养箱，倒置显微镜，离心机实验试剂：DMEM 培养基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗 ，DMSO实验材料：T25 细胞培养瓶，需冻存的细胞，移液枪，枪头，离心管，冻存管，记号笔实验步骤：1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ，并登记。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    圆弧青霉的储存条件与培养方法及打管说明！ 圆弧青霉微生物个体虽小，却在自然界起着巨大的作用。它能把复杂的天然有机物（动植物遗体）及大量的人工合成物有机物，分解为简单的有机物，最终降解成无机物还到大自然中。 一、菌种简介平台编号：Bio-66332 规格：冻干物拉丁属名：Penicillium Cyclopium 中文名称：圆弧青霉属名：Penicillium种名加词：cyclopium其它中心编号：=AS 3.4041来源历史：←黑龙江省轻工科学研究院(L184) ←中科院微生物研究所收藏时间：2007.3.5资源归类编码：15151913115模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：菌落无轮纹或轮纹不明显，呈粒状或簇状，分生孢子梗直径3-3.5μm，帚状枝分作3层，分生孢子亚球形，光滑或略粗糙，直径3-4μm。    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：蔗糖 30.0g，NaNO3 3.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 1.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.0～6.5。培养温度：25℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究； 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。 三、培养条件1、培养基编号：查氏琼脂(Czapek's Agar)2、培养基成分：蔗糖 30.0g，NaNO3 3.0g，MgSO4・7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4・4H2O 0.01g，K2HPO4 1.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.0～6.53、需氧类型：好氧4、培养温度：25℃ 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 五、打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。9、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 HKC人肾小管上皮细胞的性质与用途及生产工艺！ 一、知识概述人肾小管上皮细胞源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入HPV-16E6/E7基因而获得永生化。将含有HPV-16E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN16E6/E7转染外生包装细胞Psi-2，Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317，将PA317产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN16E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418筛选转导克隆。Southern和FISH分析显示HK-2细胞来源于单克隆。PCR检测证实HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。 二、产品信息平台编号：Bio-73299 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：HKC 细胞名称：HKC（人肾小管上皮细胞） 种属：人 年龄（性别）：组织来源： 生长特性：贴壁 细胞形态：多角形 背景描述：HKC细胞常用于肾小管上皮细胞代谢方面的研究。 生长培养基：DMEM/F12＋5% FBS＋1% P/S培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 三、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 四、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 五、细胞接受后的处理方法1）收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。2）请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将 T25 瓶置于 37℃培养约 2-4 h，让细胞适应稳定下新环境。3）请将培养瓶里的培养液吸取到 2 个 50 ml 离心管中，1000 rpm 离心 5 分钟，收集悬浮的细胞。原瓶中留取 5-10 ml 培养基，用于细胞的继续培养。收集的悬浮细胞可以置于新的细胞培养瓶中继续培养。4）如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代，传代时请使用新鲜培养基逐步替代瓶中自带的培养基。培养瓶中留一部分原装培养液，再补加自己新配的培养基至适当容积，例如 4-10 ml，让细胞逐步适应新的培养基环境。5）接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。如果细胞发生污染，或者细胞无法传代成功，请务必在7日内给予反馈！ 六、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有 1 ml 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4 mL 培养基混合均匀。在 1000 RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2 mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10 cm 皿中，加入约 8 ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。2、加 1ml 消化液（0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按 6-8 ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000 RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加 1-2 mL 培养液后吹匀。4、将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8 ml 培养基的新皿中或者瓶中。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 1 ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、4 min 1000 rpm 离心去掉上清。加 1 ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1 ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  A-72犬癌细胞的培养操作步骤与注意事项有哪些？ 一、细胞简介平台编号：Bio-132141 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：A-72 细胞名称：犬癌细胞细胞数量：1*10^6组织来源：--形态特征：--生长方式：贴壁背景描述：--培养条件：89%1640+10%FBS+1%双抗换液频率：--传代比例：--冻存液配方：90%FBS+10%DMSO安全性：BSL-1供应限制：仅供科研运输方式：常温运输（T25培养瓶）注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞接受后处理方法1)收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。2)请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。3)弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的完全培养基。4)如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。5)接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。 三、细胞培养操作1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液 加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。2.加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3.按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL培养液后吹匀。4.将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面 T25 瓶为类；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO ，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 四、细胞培养注意事项1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。2、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确 认后我们为您再免费寄送一次。4、静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细胞汇合度 80% 左右时正常传代。5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户 自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我们技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。7、该细胞仅供科研使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    兔子宫微血管内皮细胞的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-132399 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞名称：兔子宫微血管内皮细胞用途：原代细胞 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述子宫微血管排列呈树枝状，管径较细，微血管之间的间距较大，子宫毛细血管与静脉之间并不是直接连接，其间有一个窦状隙结构，窦状隙壁上得纤维网眼，像海绵一样，血液经过窦状隙时血浆向整个组织内渗透进行物质交换后再回到静脉中。微血管作为分布最广的血管。它是连接微动脉和微静脉的血管。它们分支并互相吻合成网。管壁薄，通透性强。其功能是利于血液与组织之间进行物质交换。微血管管壁主要由一层内皮细胞和基膜组成。细的毛细血管横切面由一个内皮细胞围成。 三、细胞特性1）细胞来源于实验动物的正常子宫组织。2）细胞鉴定：vWF免疫荧光染色为阳性。3）经鉴定细胞纯度高于90%。4）不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5）细胞生长方式：铺路石，不规则细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。 七、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备MEM 基础培养基；优质胎牛血清，20%； 双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml。2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   用于抑制多种病原菌的：绿针假单胞菌橙色亚种 绿针假单胞菌橙色亚种是Pseudomonas属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；生产，具体用途为具促生作用，对真菌病害有拮抗作用。可产生抗生素吩嗪-1-羧酸（PCA）和植物生长素吲哚-3-乙酸（IAA）。可用于微生物教学研究，也可用于微生物肥料的制备。 一、菌种简介平台编号：Bio-135501 规格：冻干物拉丁属名：Pseudomonas Chlororaphis Subsp. Aurantiaca 中文名称：绿针假单胞菌橙色亚种拉丁名称：Pseudomonas chlororaphis subsp. aurantiaca原产国：中国主要用途：抑制多种病原菌培养基编号：2/100/108原始编号：MN47培养温度(℃)：30℃其他保藏中心编号：培养时间(天)：1-2d来源历史/保藏单位：广东博沃特生物技术有限公司需氧类型：好氧生物安全级别：BSL 1收藏时间：2023-02-06模式菌株：否用途：抑制多种病原菌 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征将JD37菌株在KB培养基上划线接种，非厌氧环境下，28℃下培养24 h后菌落直径达2 mm，菌落圆形微隆起，微黄色，边缘光滑，表面较湿润，易挑起。培养48 h后菌体产生橘红色色素，覆盖在菌落表面，同时菌落周围产生橘黄色色素。Genebank 注册号：GQ358919。  三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，酿酒酵母菌组成成分，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 五、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 六、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 人胚肺成纤维细胞的培养操作步骤及应用研究！ 一、背景人胚肺成纤维细胞是由H·Kuramoto于1968年分离的HEC-1-A细胞亚株。不同于HEC-A-1的是：HEC-1-B细胞在培养第13Chemicalbook5天到190天之间表现出稳定的生长周期，且重现扁平，与亲本细胞系相比更具铺路石样。此外，HEC-1-B细胞的主要染色体组是亲本细胞的两倍。人胚肺成纤维细胞来自14周龄男性胎儿的正常肺组织，为有限细胞系该细胞，老化前能传代42到46次群体倍增。它是正常二倍体细胞系，46，XY核型。模式染色体数为46，概率为70%。 二、人胚肺成纤维细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备MEM培养基；北美胎牛血清，10%；PS 1%。2）人胚肺成纤维细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）人胚肺成纤维细胞冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。2、人胚肺成纤维细胞处理：1）复苏人胚肺成纤维细胞：将含有1mL人胚肺成纤维细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查人胚肺成纤维细胞密度。2）人胚肺成纤维细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）人胚肺成纤维细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 对于人胚肺成纤维细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗人胚肺成纤维细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2ml完全培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。4、将人胚肺成纤维细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 下面以T25瓶为例；1、人胚肺成纤维细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮人胚肺成纤维细胞，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用人胚肺成纤维细胞可以用于P物质对人胚肺成纤维细胞作用及其机制的研究：探讨P物质(Substance P,SP)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)增殖与活化的作用及其调控机制,进一步揭示P物质参与肺间质纤维化中的作用机理,为临床治疗肺间质纤维化的药物研究与开发提供新的思路。方法：体外培养人胚肺成纤维细胞(MRC-5),取对数生长期的细胞为研究对象,展开以下研究:(1)以系列浓度(1、10、100、1000、10000 n M)的P物质处理MRC-5细胞,利用CCK8法检测系列浓度的P物质在不同时间点(24、48、72h)对MRC-5增殖活性影响。从而筛选出P物质对MRC-5细胞的作用浓度及时间。(2)利用天狼猩红染色检测系列浓度的P物质在72h时MRC-5细胞分泌胶原纤维含量变化。(3)使用Western blot检测系列浓度的P物质在72h时MRC-5细胞对α-SMA蛋白表达的影响。(4)在此基础上,我们将细胞分为三个组,分别是对照组、100 n M P物质组(简称P物质组)、100 n M P物质+10μM L732138组(NK-1R抑制剂)(以下简称P物质+L732138组),将以上三组细胞培养72h后,分别以CCK8法检测各组细胞增殖活性,用天狼猩红染色检测各组细胞分泌胶原纤维的含量变化,利用Western blot检测各组细胞α-SMA蛋白表达的变化,从而阐明P物质对MRC-5细胞的增殖及活化作用。(5)为研究P物质对MRC-5细胞的作用机制,将对照组、P物质组、P物质+L732138组三组细胞体外培养72h,利用Western blot检测各组细胞TGF-β1、Smad3、p-Smad3蛋白的表达变化。(6)为进一步检测SP/NK-1R在TGF-β1/Smad3信号通路中的作用,我们再次将细胞分为三个组,分别是对照组、100 n M P物质组(简称P物质组),100 n M P物质+10μM SB431542组(TGFβR1抑制剂)(以下简称P物质+SB431542组),分别以CCK8法检测各组细胞增殖活性,用天狼猩红染色检测各组细胞分泌胶原纤维的含量变化。结果：(1)MRC-5细胞经系列浓度(1、10、100、1000、10000 n M)P物质处理后,24 h后OD值无明显变化;与对照组比较,在处理48h及72h后,100n M P物质组细胞OD值均升高,其中以72h时OD值升高更为明显(P(2)MRC-5细胞经系列浓度P物质处理72 h后,与对照组比较,100 n M P物质组处理的细胞胶原纤维含量明显增多(P(3)经系列浓度P物质处理72 h后,与对照组比较,10 n M P物质组及100 n M P物质组细胞α-SMA蛋白相对表达水平均增高,其中以100 n M P物质组增高更为显著(P(4)细胞经药物处理72h后,与P物质组比较,P物质+L732138组细胞胶原纤维含量显著减少(P(5)细胞经药物处理72h后,与P物质组比较,P物质+L732138组细胞TGFβ1、p-Smad3蛋白相对表达量均明显降低(P(6)细胞经药物处理72h后,与P物质组比较,P物质+SB431542组细胞OD值、胶原纤维含量均明显降低(P 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   弗兰克氏菌属的命名来源与形态结构及固氮作用！ 一、菌种简介 弗兰克氏菌属，弗兰克氏菌科下的一属。与非豆科植物共生形成根瘤并能固定大气中的氮。菌体呈丝状，直径0.5～1.0微米。中国广泛栽培的木麻黄根瘤内有木麻黄弗兰克氏菌。 二、命名来源 Brunchorst（1886）首先提出弗兰克氏菌属（Frankia），以纪念弗兰克这个人。他首先提出了正确的共生概念，创造了共生（symbiontic）这个词。以后Becking重新定义了弗兰克氏菌属，并在放线菌目提出了弗兰克氏菌Frankiaceae与Frankia属。按他的意见，弗兰克氏菌科是在广泛分布的非豆科植物根瘤内进行绝对共生生活的微生物。 三、界定特征 Becking按照不同的寄主把弗兰克氏菌属分为10个种，Falni为典型种。1978年，弗兰克氏菌的离体培养成功，从而为它的分类开辟了新的领域，使各种生理生化指标的应用成为可能。1978年后，弗兰克氏菌的研究在世界上得到广泛重视，新的菌株被不断分离出来。国际弗兰克氏菌讨论会已经进行多次，大家多弗兰克氏菌属的定义有了统一的认识，符合下列特征的生物将被认为是弗兰克氏菌属的成员： （1）放线菌样、固氮、从根瘤分离出来的内生菌体。在纯培养下有以下特征： ①能在植物上诱发有效或无效的根瘤，能从植物根瘤中重新分离到。 ②在液体培养中产生含不动孢子的孢囊，有可能形成泡囊。 （2）自由生活还不清楚有侵染能力或固氮能力的放线菌，但具有①②中所描述的形态。 最显著的特征是能与非豆科木本植物共生固氮。 能与4个亚纲8科24属约194种的双子叶 被子植物共生，这些植物被称为放线菌根植物。 在有隔、分枝的菌丝体顶端的泡囊柄上形成泡囊，泡囊具有固氮功能。 在液体培养基中产生了三种特征性的细胞类型：基内菌丝、着生泡囊和孢子（一般无气生菌丝） 四、形态结构 1、总体形态 菌体丝状、纤细、稀疏，大多数种的菌丝直径为0.3——0.5微米，分枝具横隔。随着菌体的发育在菌丝顶端或菌丝间形成孢子囊，是菌丝多方分裂形成孢子堆的结构，形态多样，呈球形、圆锥形、梨形或钩状弯曲，大小不一，小的约10——30微米，大的更达100微米。孢子为不规则多面体状，无鞭毛，不波动。Frankia菌能形成具有固氮功能的顶囊，着生于顶囊柄上，再与菌丝相连，不同宿主来源的菌株在形态和大小上有一定差别。 2、特征结构 Frankia形态较为特异，一般具有以下4种特征性的结构： （1）菌丝  在体外培养为分枝状的营养菌丝，可分隔，粗细不一，宽度0.2——1.5微米。在电镜下观察到细胞壁由内外两层高电子层组成。模式菌株Cpll的菌丝外还包有多层外膜。 （2）孢囊 营养菌丝的顶端或中间经纵横分裂，膨大形成多腔孢囊，内含有许多孢子。孢囊形状多样，有圆球形、卵形、锥形、草莓形、纺锤形、棒形等，有的中间可突起为不规则形状。大小不一，通常10——60微米，最大可达100微米以上；孢囊外有一层与菌丝相似的片状外膜，孢子数量从几个到几百个不等，与年龄及营养状况有关。孢子壁厚，无鞭毛，不能游动，成熟孢子的孢壁外有2——3层膜状结构。 （3）泡囊 着生在菌丝顶端或短小的泡囊柄上，圆形，直径0.5——2.0微米，为Frankia的固氮场所，在氮缺乏的培养基中容易形成，是Frankia最具特征性的结构。泡囊表层有多重片层状结构，富含中性脂类，可防止氧进入泡囊内 （4）串珠状菌丝 Diem（1985）在Frankia菌株（ORSO21001）中发现存在一种特殊的菌丝体结构，它由加宽的营养菌丝经多重分隔形成类似孢子的细胞组成，呈串珠链状，称为串珠状生殖菌丝。他认为该结构有助于Frankia在不利环境下的生存和繁殖。 五、固氮作用 本科放线菌与非豆科植物共生形成根瘤并能固定大气中的氮。由于感染部位的刺激，许多变形侧枝集结在一起并重复分枝形成不规则球形体，直径可达几厘米。 根瘤可分为： ①桤木型，根瘤上小根短，形成栅状球团； ②杨梅型，根瘤上小根长，大部向上，形成丛根状体。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  浮游微生物采样器的常见故障及相应解决方法！ 浮游微生物采样器是一种用于收集水体中浮游微生物的设备，由采样器本体、滤膜、泵和控制系统组成。该产品通过泵将水样吸入，经过滤膜后，微生物被捕集在滤膜上，广泛应用于环境监测、水质评估和生态研究等领域。　　由于浮游微生物采样器使用环境的复杂性和设备本身的特点，常常会出现一些故障。下面是一些常见的故障及其相应解决方法。 1、无法启动 如果无法启动，首先检查电源连接是否正常。确保电源线连接牢固，并检查电源插座是否正常工作。如果问题仍然存在，可能是电源适配器或内部电路故障。此时，建议设备制造商进行维修或更换。 2、无法正常工作 如果无法正常工作，首先检查连接是否正确。确保泵与采样器的管路连接紧密，没有松动或漏气的情况。如果连接正常，但仍然无法正常工作，可能是机械部件损坏或电路故障。此时，需要制造商进行维修或更换泵部件。 3、采集容器无法密封 如果采集容器无法密封，可能会导致样品污染或泄漏。首先检查容器盖是否正确安装，并确保密封圈没有损坏或老化。如果问题仍然存在，可能是容器本身存在缺陷或损坏。建议制造商获得替换部件或更换整个采集容器。 4、采集效率低 如果采集效率低，可能是由于水流量不足或位置选择不当。首先检查水源供应是否正常，并确保进水口没有堵塞或受到限制。此外，确保放置在适当的位置，以便充分接触到浮游微生物。如果问题仍然存在，可能需要根据具体情况调整设置或使用更高效的采样器。 5、数据记录异常 如果数据记录异常，可能是由于传感器故障或存储器问题。首先检查传感器的连接是否正常，并确保传感器没有损坏或受到干扰。如果问题仍然存在，尝试重新格式化或更换存储器卡。如果问题仍然无法解决，建议制造商进行进一步的诊断和修复。 总之，浮游微生物采样器在使用过程中可能会遇到各种故障，但大多数问题都可以通过仔细检查和适当的维护来解决。如果遇到无法解决的故障，建议设备制造商或专业维修人员进行进一步的支持和修复。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

              嗜麦芽窄食单胞菌的病原学特点及耐药现状和耐药机制！ 一、知识简介 嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)属于黄单胞菌目的黄单胞菌科，是一种广泛存在于自然界和医院环境中的革兰阴性条件致病菌。该菌起初被命名为嗜麦芽假单胞菌，而后更名嗜麦芽黄单胞菌，于1993年再次被更名为嗜麦芽窄食单胞菌。 随着广谱抗菌药物、免疫抑制剂的广泛应用，以及侵袭性操作的不断增多，其分离率在非发酵菌属中呈上升趋势。由于致病力较弱，其感染常发生在免疫力低下、病情危重的患者，通常为医院感染，社区很少发生感染。此外，该菌对多种抗菌药物固有耐药，给临床抗感染治疗和感染防控带来挑战。 二、病原学特点 革兰阴性专性需氧菌，为非发酵菌，极端鞭毛，有动力，无芽孢，无荚膜，氧化酶阴性（部分菌种可以阳性），有氨气味，菌落不溶血，有黄色素。最适生长温度35℃，4℃不生长。在血琼脂平板上35℃培养18~24 h，形成圆形、光滑、湿润、浅黄色的菌落，48 h培养菌落增大呈黄色。在麦康凯琼脂平板上形成淡黄色菌落。可氧化分解葡萄糖和麦芽糖，能迅速氧化分解麦芽糖而对葡萄糖只能缓慢利用。 三、流行病学特点 嗜麦芽窄食单胞菌广泛分布于自然界（水、土壤、植物根系和动物体内等）中，亦可寄居于人的呼吸道和消化道中，此外从医院环境（如透析装置、人工呼吸装置、通气管道、氧气湿化瓶、血压计、医务工作者的双手等）中也能分离到该菌。这些被污染的环境表面是其传播的宿主和潜在来源，增加了交叉感染风险。 最常见的感染类型为下呼吸道感染，还可引起血流、泌尿系、腹腔、皮肤和软组织等部位的感染。另外嗜麦芽窄食单胞菌常和其它条件致病菌形成混合感染。嗜麦芽窄食单胞菌引起的感染可发生在儿童和成人中，特别是在免疫功能低下的患者群体中。感染的危险因素包括：恶性肿瘤、留置中心静脉导管、慢性呼吸道疾病、免疫功能低下、低蛋白血症、既往长期接受广谱抗菌药物治疗和住院时间长（尤其是ICU）等。 直接接触是主要的传播方式，医务人员的手是最常见的传播媒介，可通过人与人、人与物体表面的接触使易感人群感染。 四、耐药现状和耐药机制 CHINET 2021年数据显示：嗜麦芽窄食单胞菌在所有临床分离菌株中占比2.78%，排名第8位（表1）；在下呼吸道标本中占比5.6%，排名第7位。 嗜麦芽窄食单胞菌对碳青霉烯类、氨基糖苷类、哌拉西林/他唑巴坦、头孢曲松、氨曲南天然耐药，对左氧氟沙星、米诺环素、复方磺胺甲噁唑的耐药率较低。 了解嗜麦芽窄食单胞菌的感染特点和耐药机制，对临床合理用药和医院感染控制有积极意义。 其主要耐药机制有： (1)产生多种抗菌药物水解酶：天然产L1型金属β内酰胺酶和L2型头孢菌素酶，能水解包括头孢菌素类、碳青霉烯类及某些酶抑制剂； (2)细胞膜通透性下降，对多种抗菌药物不易渗透； (3)药物主动外排系统：SmeABC、SmeDEF可介导对β内酰胺类、氨基糖苷类、四环素、氯霉素和喹诺酮类抗菌药物耐药； (4)生物被膜屏障：借助生物被膜不仅可以黏附于医用材料（如气管插管），也可黏附于组织细胞上，长期定植于体内，有利于耐药的形成，并导致慢性感染反复发作； (5)可移动基因元件：复方磺胺甲噁唑耐药与I类整合子的sul基因和插入元件ISCR相关的sul2基因介导有关。 五、医院感染防控措施 严格遵守无菌技术操作规程，特别是放置留置管、换药、吸痰等医疗护理操作中避免交叉感染；强化手卫生管理，提高手卫生依从性；加强耐药性监测，落实对多重耐药嗜麦芽窄食单胞菌感染或定植患者的接触隔离措施；加强环境清洁与消毒，有效的环境与设备清洁/消毒有助于减少多重耐药嗜麦芽窄食单胞菌的传播风险；强化培训保洁员、采用合格的消毒/灭菌剂、采取有效的消毒方案和（或）核查表是环境管理的关键环节。 嗜麦芽窄食单胞菌对碳青霉烯类抗生素天然耐药，碳青霉烯类抗生素使用是筛选出嗜麦芽窄食单胞菌并导致感染的重要危险因素，因此，应加强抗菌药物合理使用，延缓和减少耐药嗜麦芽窄食单胞菌的产生。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    大鼠骨膜干细胞的运输和保存及培养操作规程！ 一、细胞简介平台编号：Bio-132450 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 细胞名称：大鼠骨膜干细胞细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述骨膜是覆盖在骨质表面的一层结缔组织。骨膜通过夏皮式纤维锚定在骨质上，充当外部肌肉组织和内部骨质的连接桥梁，这种结构有助于维持骨膜的完整性。骨膜由两部分组成，外层疏松的纤维层与内层致密的细胞层，纤维层中含有成纤维细胞、胶原纤维、弹力纤维及微管等。细胞层中多为骨膜源干细胞，这种干细胞与骨髓来源的间充质干细胞类似，具有多向分化的潜能。骨质修复、重塑和更新与骨膜中的干细胞密切相关。在正常生理状况下，骨膜组织发挥着维持骨质更新及重塑的作用，其中的干细胞既可以通过膜内成骨方式分化为成骨细胞，也可通过软骨内成骨方式分化为软骨细胞。 三、细胞特性1)细胞来源于实验动物正常关节骨膜组织。2)细胞鉴定：CD90或CD73免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：成纤维样细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议 1：2 传代。 七、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备 MEGM kit 培养基 （Lonza/Clonetics,CC-3150）备注：培养基包含（A+B）A：MEBM 基础培养液B: 细胞生长添加剂 5 管 5 管霍乱毒素（cholera toxin） (100ng/ml) 500 ulP/S 青霉素-链霉素 5 ml2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度，培养箱湿度为 70%-80%。3）冻存液：92.5%完全培养基，7.5%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入 4mL 培养基混合均匀。在 800-1000RPM 条件下离心 4-5 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入 T25 培养瓶中培养，补加培养基至 6ml。24-48h 后换液。2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。2.加 1ml 消化液（0.25%Trypsin）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加 1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制剂终止消化。3.轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，加 1-2mL培养液后吹匀。4.将细胞悬液按 1：3 到 1:4 比例分到新的含 6ml 培养基的新皿中或者瓶中。注：第一次传代推荐传代比例为 1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面 T25 瓶为类；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制剂终止消化，可使用血球计数板计数。2、4min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 完全培养基重悬细胞，根据细胞数量加入 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 7.5%，细胞密度 1-2xE6/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，至少 2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 八、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    微生物实验检测的能力验证和能力考核要点！ 一、要树立科学必须真实的观念，实验态度要端正。 要怀着一颗为了出具真实、准确，可信数据而敬畏的心去申请能力验证。 实验要求科学严谨,实验要预先充分练习和实践。能力验证是对实验室综合实验水平（人员，设备，环境等多因素）的评价。 首先要选好实验项目，找到与之配套的方法，进行充分的方法验证，从检测员能力，仪器设备性能，校检结果是否能满足实验需要，实验检测多次实验，检测环境是否进行了充分的考虑，实验确认好实验项目，认真学习标准，理解标准，并做到标准所规范的步骤，并对自己实验有了一定的信心后再去申请能力验证为宜。 举例：某实验室未经过充分实验方法确认，实验平时做的也少，直接申请了能力验证。实验过程生疏，照方抓药，手忙脚乱，造成稀释梯度不够，平板干燥，菌落蔓延，无法出具具体数值，实验失败。 二、实验室收到盲样菌株标本后，首先应做的事情。 1、检查标本的性状和确认包装情况，然后按照要求去能力验证网站提交收到样品情况。 2、仔细阅读参指导书，包括标本如何保存的信息，进行实验室内部工作分配，明确工作任务和要求。 3、实验前应严格按照作业指导书的要求制订检验流程，认真做好准备工作，包括实验中需要使用的器皿，须提前做好清洁灭菌。 三、能力验证样品处理。 1、定量项目，西林瓶内样品不可分割，应全部用于检测。一般参考书指导的是加40mL稀释液制成40mL样品。 2、定量项目样品稀释。指导书标明了稀释范围的，在稀释范围左右各加1个稀释度进行；书上没有稀释范围的，多做稀释倍数，选择合适的稀释倍数计数（一般可稀释至10-8）。 3、定量项目，除了要多做稀释倍数外，同时同一稀释度要多倒几皿，从原理上来讲，检测过程属于随机抽样检查，平板越多，数据越接近真值。考虑性价比，又不可能一直疯狂一个稀释度很多平板，所以能力验证时候多倒几皿，求好结果。 4、定性项目有一些重要步骤。 a、增菌及分离步骤尤其重要。选择合适的增菌液和分离用培养基对目标菌的检出非常关键，选择两种以上的增菌液和分离用培养基对菌株作直接分离和增菌后分离。 b、划线分离十分重要，要把增菌液中的目标菌尽量多的表达出来，要分出单个菌落并尽可能多挑取可疑菌落，确保分离到目标菌。 c、生化试验和血清学试验以营养琼脂平板上的纯培养细菌为好。 四、实验过程一定要做阴阳对照，全程空白对照。 再厉害的高手也有失手和看走眼的时候，所以阴阳对照就是一面镜子。对于一些荧光染色后进行判读的实验显得尤为重要。 这里扫盲一个误区，定量计数测菌数时，我们会认为空白就是直接取1mL无菌水然后加入到平板里，然后混菌倒皿，这是错误的。因为这样做的话，只能模拟证明稀释后倒平板这一步有没有污染。而无法证明从样品称取-样品稀释时候的污染质控情况。所以要做全程空白对照。 全程空白的含义就是把无菌液当成样品，然后走一遍实验过程。如果严格这么做的话，又会走向另一个极端，所以全程空白只从取样开始至稀释10-1做了简化，而不做后续稀释空白样的混菌实验。 在有些其他实验时候，会有样品空白以及稀释液空白，比如大气环境NOx和SO2的检测，有兴趣的可以去看看，对于全程空白的意义理解有更好的帮助。 五、培养基方面需要注意的地方。 1、培养基配制充分混匀后再灭菌。 正确做法是用一部分水搅拌均匀后，再加入剩余水量，混匀后灭菌或分装。 2、混菌法倒皿要充分混匀。 培养基倒完要左5圈右5圈（混匀速度一定要慢，目的是——避免培养基波动到二皿接触的缝隙部分造成后续污染），找较水平位置冷却凝固。 3、培养基要不要覆盖问题。 覆盖的目的是为了阻止活菌在培养基表层通过鞭毛移动，造成片状生长，无法计数这一不利现象的发生。这里可以发挥主观能动性-对于不运动的菌，可以不覆盖，对于运动的菌覆盖。 总结一下： a长期检测同一种样品，不覆盖并无蔓延现象，不覆盖；长期检测蔓延选择了覆盖，一直覆盖。 b未知样品，进行覆盖和不覆盖的比对实验，然后决定以后同样的样品是否需要覆盖。养成经验。 c能力验证实验，覆盖和不覆盖的都做，不要吝惜那么一点点培养基或耗材，毕竟能力验证实验做的漂亮才是实验室（是室而不是人！）能力的综合体现。 4、培养过程防止平皿干燥。 培养过程中培养基可以倒的适当厚一些，比如25mL。培养箱底部接一个不锈钢盆，装上足量无菌水（没有就去买几瓶哇哈哈怡宝什么的水倒里面）。 5、培养完成要保留实验平皿和其他相关材料。 作为能力验证，原始记录及实验报告还没出具完成，各种材料还是保留至数据出具后较好，便于出现问题现查原因，马上补救。 题外话：很多检测员等结果出了问题然后到网络上来求救，结果一问平皿已经洗掉了，那就不知道是什么状况了。有时候你问她她还会振振有词的讲：10-1，10-2都蔓延了，不洗掉干嘛，10-5，10-6没长菌，不洗掉干嘛？我当时真的无语，也不想多说话就没继续讲了。现在我回答一下这个问题：我要你一套完整梯度浓度的平皿，可以看出你10倍稀释梯度是不是稳定，还有蔓延是个什么状况，到底有多少，是一片还是局部还是很小一部分，然后根据整体数据估算结果（当然实验做成这样也基本算失败了，因为实验没有做到你可控的范围），是补救的一种（并不可取，属于垂死挣扎）。定量实验时，当天做完的稀释样品也要放冰箱里，虽然实验要求不能复检或重复检测，但作为微生物专业你是知道菌放在2-8℃下并不会长多少，如果第二天一看数据有蔓延或疑问，马上再做一次，这样也应该在误差范围内出数。 6、实验培养过程勤观察。 微生物培养过程一般需要几小时到几十小时，要利用这段时间观察培养箱及菌生长情况，比如温度是否稳定，培养室内湿度如何等等，多思多看，准备预案。方有可能得到与盲样一致的实验结果。 原始记录应有条理、思路清晰,完整准确地记录菌株鉴定检验的全过程,原始记录要包含时间、试验现象、试验结果三个要素，方便试验出现问题的查找。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                CAMA-1人乳腺癌细胞的特点与应用及培养操作！ 一、背景 CAMA-1人乳腺癌细胞系是一种用于研究乳腺癌的实验细胞模型。这种细胞系来自人乳腺癌细胞，经过一定的培养条件，可以在实验室中培养和繁殖。 CAMA-1细胞系的形态为上皮细胞样，具有贴壁生长的特性。这些细胞可以用于研究乳腺癌的生物学特性、药物筛选和肿瘤治疗等方面的实验。通过观察细胞的生长、增殖和凋亡等生物学行为，可以深入了解乳腺癌的发生、发展和转移机制，为乳腺癌的诊断和治疗提供新的思路和方法。 CAMA-1人乳腺癌细胞系是一种从人乳腺癌组织中分离出的细胞系。 二、该细胞系具有以下特点 形态特征：CAMA-1人乳腺癌细胞呈多角形或长条形，大小不一，有明显的核仁和胞质。 生长特性：CAMA-1人乳腺癌细胞具有较强的增殖能力，可以在体外持续传代，并且可以在体内形成肿瘤。 基因表达：CAMA-1人乳腺癌细胞通常表达多种与乳腺癌相关的基因，如ER、PR、HER2等。 CAMA-1人乳腺癌细胞系在生物学研究中具有广泛的应用价值，例如用于研究乳腺癌的发生和发展机制、筛选抗肿瘤药物、评估治疗效果等。同时，由于乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，因此CAMA-1人乳腺癌细胞系也被广泛应用于乳腺癌的研究中。 三、CAMA-1人乳腺癌细胞系培养操作 1)复苏CAMA-1人乳腺癌细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)CAMA-1人乳腺癌细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)CAMA-1人乳腺癌细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 四、应用 CAMA-1人乳腺癌细胞系可以用于双微体的分子细胞遗传学研究： 从ATCC公司筛选所有携带双微体的肿瘤细胞系，进行细胞培养，并在第3代、8代、13代时获取细胞。利用染色体核型分析技术检测双微体的数目及分布情况及粗略的细胞遗传学特征，发现不同肿瘤细胞系所携带双微体的数目及分布相差极大。继而通过arrayCGH获得扩增的基因，并明确其断裂点，采用相应的DNA探针，利用荧光原位杂交确认基因扩增并进一步确认染色体的来源及明确扩增的形式。 发现在10个细胞系中，血液肿瘤占10%（HL-60细胞系），MC-IXC细胞系，COLO-320DM细胞系，SW480细胞系及HL-60细胞系中由于MYC扩增基因所致，双微体广泛存在，但其扩增区域的断裂点不同，其中前2个细胞系MYC双微体与MYC均质染色区共存，后2个细胞系仅存在MYC双微体。SW1783细胞系、5637细胞系、CAMA-1人乳腺癌细胞系的扩增区域分别包含PDGFRA基因、RAF1基因及SOX4基因、MYEOV基因及CCND1基因，均以均质染色区的形式存在。T84细胞系、SNU-1细胞系及NCI-N87细胞系仅在部分细胞中见少量双微体，arrayCGH未见明显扩增的区域，未行扩增基因FISH检测。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   ATCC 11696 茄科罗尔斯通氏菌 百欧博伟生物 茄科罗尔斯通氏菌是Ralstonia属的微生物，原产地为中国。形状不规则、稍凸起、白色、光滑、有光泽、不透明、革兰氏阴性。主要用途为研究；教学。  一、菌种简介平台编号：Bio-74614 规格：Freeze-Dried拉丁属名：Ralstonia Solanacearum 菌种名称：茄科罗尔斯通氏菌用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Ralstonia solanacearum 菌株拉丁名(Smith) Yabuuchi et al.(ATCC? 11696?) 菌株编号Permits And Restrictions View PermitsDeposited As Pseudomonas solanacearum SmithStrain Designations 菌株别名 60-1 [ICMP 5712, NCPPB 325]Isolation 分离源 Tomato, Lycopersicon esculentum, North Carolina, 1953Biosafety Level 生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedPreceptrol? noType Strain 模式菌株 yes Ref, Ref, Ref, Ref, RefComments 注释 Depositor indicates that this strain is Race 1, biovar 1.Medium 培养基 ATCC? Medium 1167: Pseudomonas solanacearum mediumGrowth Conditions 生长条件 Temperature 培养温度 : 30.0℃Atmosphere 需氧情况 : AerobicName of Depositor T Denny Special Collection ATCCChain of Custody 来源国家 ATCC Isolation 分离源 Tomato, Lycopersicon esculentum, North Carolina, 1953 Year of Origin 1953References 参考文献 Validation list no. 45. Int. J. Syst. Bacteriol. 43: 398-399, 1993. Brenner DJ, et al. Validation list no. 57. Int. J. Syst. Bacteriol. 46: 625-626, 1996. PubMed: 8934914Yabuuchi E, et al. Proposal of Burkholderia gen. nov. and transfer of seven species of the genus Pseudomonas homology group II to the new genus, with the type species Burkholderia cepacia (Palleroni and Holmes 1981) comb.nov. [published erratum appears in Microbiol Immunol 37: 335, 1995]. Microbiol Immunol 36: 1251-1275, 1992. PubMed: 1283774 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。