实验室危险废物管理台账制定要求与记录内容！ 一、基本原则 1、产生危险废物的实验室要建立危险废物管理台账，确定危险废物管理台账记录的负责人，明确岗位职责，负责人对危险废物管理台账的真实性、准确性和完整性负法律责任。 2、产生危险废物的实验室根据危险废物产生、贮存、利用、处置等环节的动态流向，如实建立各环节的危险废物管理台账。具体记录内容参考本文的给出的表格。 3、危险废物管理台账分为电子管理台账和纸质管理台账两种形式。 产生危险废物的实验室可通过国家危险废物信息管理系统、企业自建信息管理系统或第三方平台等方式记录电子管理台账。 二、频次要求 1、产生后盛放至容器和包装物的，应按每个容器和包装物进行记录； 2、产生后采用管道等方式输送至贮存场所的，按日记录； 3、其他特殊情形的，根据危险废物产生规律确定记录频次。 三、记录内容 危险废物产生环节： 需要记录产生批次编码、产生时间、危险废物名称、危险废物类别、危险废物代码、产生量、计量实验室、容器/包装编码、容器/包装类型、容器/包装数量、产生危险废物设施编码、产生部门经办人、去向。 危险废物入库环节： 记录入库批次编码、入库时间、容器/包装编码、容器/包装类型、容器/包装数量、危险废物名称、危险废物类别、危险废物代码、入库量、计量实验室、贮存设施编码、贮存设施类型、运送部门经办人、贮存部门经办人、产生批次编码。 危险废物出库环节： 应记录出库批次编码、出库时间、容器/包装编码、容器/包装类型、容器/包装数量、危险废物名称、危险废物类别、危险废物代码、出库量、计量实验室、贮存设施编码、贮存设施类型、出库部门经办人、运送部门经办人、入库批次编码、去向。 危险废物自行利用/处置环节： 记录自行利用/处置批次编码、自行利用/处置时间、容器/包装编码、容器/包装类型、容器/包装数量、危险废物名称、危险废物类别、危险废物代码、自行利用/处置量、计量实验室、自行利用/处置设施编码、自行利用/处置方式、自行利用/处置完毕时间、自行利用/处置部门经办人、产生批次编码/出库批次编码。 危险废物委外利用/处置环节： 记录委外利用/处置批次编码、出厂时间、容器/包装编码、容器/包装类型、容器/包装数量、危险废物名称、危险废物类别、危险废物代码、委外利用/处置量、计量实验室、利用/处置方式、接收实验室类型、利用/处置实验室名称、许可证编码/出口核准通知单编号、产生批次编码/出库批次编码。 四、记录保存 保存时间原则上应存档5年以上。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 库德里阿兹威毕赤酵母：白酒酿造和产乙酸乙酯 库德里阿兹威毕赤酵母是Pichia属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究，具体用途为对灰葡萄孢霉、青霉菌、黑曲霉等果蔬致病菌具有拮抗作用。 一、菌种简介平台编号：Bio-84638 规格：冻干粉 拉丁属名：Pichia Kudriavzevii 中文名称：库德里阿兹威毕赤酵母拉丁名称：Pichia kudriavzevii来源历史：←北京工商大学收藏时间：2017/8/1原始编号：GJ4-1原产国：中国资源归类编码：15151113125模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：化能异养；嗜温；趋酸；兼性厌氧。YPD琼脂30℃培养2天， 菌落乳白色，圆形，边缘环纹起皱，粘稠，直径3.5-6.5mm。细胞卵形、椭圆形，单个，大小1.3-1.9×3.5-10μm。无性繁殖方式为芽殖。具体用途：白酒酿造，产乙酸乙酯。生物危害程度：四类培养基编号：CM0077培养基名称：5 °Bé麦芽汁琼脂培养基成分：5°Bé麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，自然pH。培养温度：30℃需氧类型：好氧分离基物：芝麻香型白酒大曲采集地：山东省高青县保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：白酒酿造，产乙酸乙酯。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征MEA培养基，25℃培养72 h，菌落乳白色，质地粘稠，表面平坦，不反光。菌体椭圆形或棒状，3.0-20 μm×2.5-5.0 μm，芽殖，有假菌丝。能够利用D-葡萄糖、甘油、山梨醇、N-乙酰-葡萄糖苷，不能利用2-酮基-葡萄糖酸盐、L-阿拉伯糖、D-木糖、侧金盏花醇、木糖醇、D-半乳糖、肌醇、山梨醇、α-甲基-D-葡萄糖、纤维二糖、D-乳糖、D-麦芽糖、D-蔗糖、海藻糖、D-松三糖和D-棉籽糖。 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一种）、原种（二种）和栽培种（三种）三。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备，其中(1)～(4)为孢子制备过程。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。放线菌孢子的培养基大多是采用麸皮或豌豆浸出液及无机盐与琼脂制成的。将斜面孢子接入扩大的扁瓶孢子培养基中,于28～37℃培养5～14天。所获得的大量孢子可直接作为种子罐(6)的种子。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶(5)液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐(7)的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃)：是适用范围广的微生物保存法。 六、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                       人骨髓肥大细胞的运输和保存及使用方法！ 肥大细胞（Mast Cell）广泛分布于皮肤及内脏粘膜下的微血管周围。分泌多种细胞因子，参与免疫调节（TB细胞，APC细胞活化）。表达MHC分子，B7分子，具有APC功能，也表达大量的IgE Fc 受体，释放过敏介质。具有弱的吞噬功能。和血液的嗜碱粒细胞同样为具有强嗜碱性颗粒的组织细胞。 一、细胞简介平台编号：Bio-132421 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞细胞名称：人骨髓肥大细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述肥大细胞（Mast cell, MC）是和血液的嗜碱粒细胞一样，具有强嗜碱粒颗粒的组织细胞，细胞核小，位于细胞中央。MC分泌多种细胞因子，参与免疫调节。此外，还表达MHC分子，B7分子。有研究表明，MC在超敏反应如支气管哮喘的致病方面起着重要作用，在自身免疫疾病如多发性硬化、类风湿关节炎中起作用。 三、细胞特性1)组织来源于实验动物的正常骨髓组织。2)细胞鉴定：CD117免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：圆形或卵圆形细胞，悬浮培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、细胞发育肥大细胞来源于造血干细胞，但是实际上，由骨髓刚进入外周血液循环系统的肥大细胞仍处于未成熟状态，只有当它们的前体细胞迁移到最终定居的地方，即血管组织或浆膜腔中才能完成分化和(或)成熟。在哺乳类以及其他脊椎动物中，肥大细胞广泛分布于整个血管组织，尤其是皮下或皮肤内，以及接近血管、神经、平滑肌、分泌黏液的腺体和发囊部位。肥大细胞主要分布于机体与外界环境相通的地方，如皮肤、气道和消化道，这些部位经常可以接触到病原体、变应原以及其他环境中的物质。因此，肥大细胞在体内的分布特点，使得它与DC一起成为造血-免疫系统中首先与环境中变应原、其他抗原以及入侵病原体相互作用的细胞群。肥大细胞具有较长的生存期，在适当的刺激条件下，可以再次进入细胞周期并增殖；肥大细胞前体也可大量募集、停留，并在局部成熟，使得肥大细胞群得以扩大。在下列情况下，肥大细胞的数量、局部组织分布以及表型特征可发生变化，例如对各种感染尤其是对寄生虫蠕虫感染出现应答时，在多种适应性免疫应答特别是慢性应答的过程中，以及发生持续性炎症及组织重建的状态下。全身或局部组织中的肥大细胞，不论就其生存、增殖．还是重要的表型特征，均受到了良好的调控，这些调控包括固有免疫与适应性免疫应答中对各种刺激的易感性、细胞贮存和产生分泌性物质的能力，以及对特异性刺激发生分泌性应答的力度。影响肥大细胞数量和表型的主要因素包括c-Kit的配体即干细胞因子(SCF)、肥大细胞主要的生存和发育因子IL-3，以及Th2相关细胞因子IL-4与IL-9：其中还有其他细胞因子、生长因子及趋化因子的参与。 七、相关疾病肥大细胞增生症是一种皮肤、骨骼、淋巴结、内脏及单核-巨噬细胞系统中以肥大细胞异常增生为特征的较为少见的疾病。根据肥大细胞侧重侵犯器官的不同，临床上可分为以下数型：(一)皮肤受累型 (二)皮肤及骨骼受累型 (三)骨髓、肝、脾、淋巴结受累型 (四)肥大细胞增生症合并肥大细胞性白血病。系统性肥大细胞增生症(systemic mastocytosis，SM)是一种皮肤、骨骼、淋巴结、内脏及单核-巨噬细胞系统中以肥大细胞异常增生为特征的较为少见的疾病。肥大细胞又称组织嗜碱细胞，正常人外周血中无之，在骨髓中仅占有核细胞的0.03%，肥大细胞分布于全身各疏松结缔组织、如血管周围、皮肤、呼吸、消化、泌尿生殖系，肝、脾、淋巴结、胸腺等处。肥大细胞的颗粒中含有组胺、肝素、嗜酸粒细胞趋化因子。缓慢反应物质、5-羟色胺等，其中以组胺含量最高。当肥大细胞脱颗粒或胞质破碎释放组胺等之后，常见皮肤潮红、心动过速、低血压、皮肤瘙痒及皮肤划痕症(+ )等表现。本症分布广泛，但多见于以色列及白色人种。我国已有数例报道，男女均可罹患，病因不明。 八、临床表现1、皮肤受累型亦称色素性寻麻疹，此型最为常见，约占本症的90%以上。其特征是部分皮肤(易见于面部、头皮、背部等处)色素沉着，当搔抓或针刺时出现明显的寻麻疹，常为圆或椭圆形、浅或深褐色的斑疹，皮肤活检时真皮内有大量肥大细胞存在。色素性寻麻疹一般出生后即可见，但约25%出现于青春期、成人阶段。2、皮肤及骨骼受累型有些SM病例除皮肤外，还伴有骨骼损害。骨活检显示骨皮质增生，有相当可观的纤维化而呈成骨性改变。可能与肥大细胞分泌的透明质酸酶、血清素及肥大细胞有促进网状纤维形成能力有关。亦可见溶骨性病变，与肥大细胞长期浸润压迫有关，此溶骨性病变可被误诊为骨转移癌。 九、防治对肥大细胞增生症无有效治疗方法，只能口服肥大细胞稳定剂如酮替芬、曲尼司特等。当发生肥大细胞综合征时立即肌注1：1000肾上腺素0.4-0.6ml，静脉滴注氢化考的松加维生素C。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     紫色红曲霉的性质与用途及生产工艺！ 紫红曲霉（Monascus purpureus）是一种腐生真菌，因其能产大量的天然红色素而受到广泛关注，一般存在于树木、土壤和堆积物等环境中。从分类学上来讲，紫红曲霉属于真菌界（Fungi），子囊菌门 （Ascomycota），子囊菌纲 （Ascomycetes），散囊菌目 （Eurotiales），红曲霉科（Monascaceae），红曲霉属（Monascus）。红曲霉属包含有多个菌种，其中，由中国科学院微生物研究所和轻工部食品研究所正式收集编目的8种重要红曲霉便包含了紫红曲霉。紫红曲霉嗜酸，能耐pH3.5，其生长的温度范围为26-42℃。 菌种简介平台编号：Bio-66220 提供形式：冻干物拉丁属名：Monascus Purpureus 中文名称：紫色红曲霉属名：Monascus种名加词：purpureus来源历史：←天津科技大学(46010)收藏时间：2007.2.9原始编号：ZF09资源归类编码：15151515101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产具体用途：发酵生产红曲特征特性：在麦芽汁培养基上菌落平坦稀疏至丰厚，初为粉色后变为紫色，有皱及气生菌丝，背面紫红色，菌丝透明无色，分生孢子单生或成链，直径6-9μm；子囊果球形，直径25-55μm，橙红色；子囊孢子卵形5.4-5.5×3.0-3.-3.3μm，淡红色。    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：*12 Brix. 麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，pH自然。[注] 麦芽汁制备：大麦芽若干，粉碎后，加入4倍于麦芽重量的水，搅拌均匀，在55～60℃保温箱内糖化4h，取出过滤，得麦芽汁，测量此麦芽汁的体积和浓度后，分装于已灭菌的三角瓶中，0.6kg/cm2灭菌40min备用，用时将滤液稀释至所需糖度。培养温度：30-32℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；生产；发酵生产红曲 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 紫红曲霉的重要产物 1、红曲色素 红曲霉是一种重要的生产色素的微生物，在世界范围内得到了广泛的应用。卫法监发的 [2001]84号文件将红曲霉，特别是紫红曲霉列为十大保健食品真菌菌种之一。红曲霉产生色素作为食品着色剂，已广泛使用于奶酪、米酒、肉制品和鱼制品等生产中。 其中由紫红曲霉在生长代谢过程中产生的红色天然色素，即红曲红色素，应用最为广泛。该色素属于蒽醌衍生物类，易溶于水和乙醇等极性溶剂。红曲霉产生的典型色素主要有三种：黄色素、橘色素和红色素。色素分子均是由一条短脂肪酸链（C6，C8）与一个六酮，通过聚酮化合物合成途径缩合而得到。这些色素并不是水溶性的，并且极不稳定，在强酸、强碱或者加热、光照等情况下均有可能分解或变性。 但是，这些脂溶性色素能与细胞内的蛋白质、氨基酸残基、核酸以及氨基糖上的氨基团反应，从而形成胞外的水溶性色素。水溶性色素用途较为广泛，因此怎样提高胞外水溶性色素的产量引起了人们的强烈关注。有研究发现，使用谷氨酸作为氮来源与胞内色素进行反应，能有效的提高胞外色素的积累，从而提高产量，而得到的胞外色素即为谷氨酸-色素复合物。橘色素在某些条件下可转化成黄色素或红色素。人们用氮原子替换橘色素中对应的氧原子使得色素的颜色从原来的黄色转变为红色。有研究证明红色素几乎没有抗菌活性，而橘色素有微弱的抗菌活性。 尽管有报道能够从红曲霉代谢产物中分离得到稳定且高产量的红色素，但是至今为止，红色素合成途径及机制仍不清楚。由于红曲霉产生的色素安全性高、热稳定性较强、对蛋白质的着色性好不易褪色、色彩鲜艳，并具有生产周期短、产量稳定、价格波动相对较小等优点，因此红曲色素的其应用价值远远高于其它色素。红曲红色素可以通过紫红曲霉的发酵来大量生产，改良后的菌种可以进一步提高产量，从而大大降低生产成本，因此继续开发并有效利用紫红曲霉对食品色素的应用有着十分重要的意义。 2、洛伐他汀 丝状真菌包括紫红曲霉的次级代谢产物洛伐他汀及其衍生物，均有很好的降低胆固醇的功效。胆固醇是胆汁酸与甾醇类激素的前体，对维系细胞膜的完整及生物体的健康起着重要的作用。然而，血液中低密度脂蛋白（LDL）和胆固醇含量过高时，就会沉积在动脉血管内壁，引发一系列的应激反应，最终导致心血管疾病的发生。全世界死于心力衰竭、心绞痛、高血压、及冠心病等心血管疾病的人数在逐年增加。2004年大约有 1710万人死于心血管疾病，占全球死亡的29%。这些死亡中约720万人死于冠心病，570万人死于中风。预计到2030年，几乎有2360万人将死于心血管疾病，而冠心病和中风继续成为这些死亡的主要原因。 人体内胆固醇的来源主要有两种：一是在肝中由酰基CoA经甲羟戊酸途径合成，该途径合成的胆固醇约占总胆固醇的60%-70%；二是通过饮食，在肠胃道经酞基CoA-胆固醇酞基转移酶（ACAT）酯化生成胆固醇。3-羟基-3-甲基-戊二酸CoA（HMG-CoA）还原酶是甲羟戊酸途径合成过程中限速步骤的催化剂，而洛伐他汀是HMG-CoA还原酶的可逆竞争抑制剂，因此具有降低体内胆固醇的作用。研究发现洛伐他汀明显抑制哺乳动物和动物细胞中甾醇的生物合成。从红曲霉和土曲霉的代谢产物中均能分离得到洛伐他汀。 3、橘霉素 橘霉素是一种毒枝菌素，具有毒性，首次从丝状真菌中分离得到。该聚酮化合物类次级代谢产物不仅在红曲霉中发现，在其它许多真菌中也有报道，如青霉菌、曲霉菌等。橘霉素有杀死革兰氏阳性细菌的能力，抗真菌、原虫，但同时对哺乳动物也有肾脏毒性，并对农产品、食物、食料等有污染作用。此外，橘霉素还经常伴随着肾毒素一赫曲毒素污染谷物、水果、肉类和奶酪等食品。体外实验证明橘霉素对肾脏线粒体细胞的功能造成多种损伤，最终导致细胞的死亡。常温下橘霉素是酸性柠檬黄色晶体，在甲醇溶液中的最大吸收波长为250 nm和333 nm。熔点为172℃，微溶于水，但易溶于稀氢氧化钠、碳酸钠或醋酸钠溶液，也可溶于甲醇、乙醇、乙睛等大部分的极性有机溶液。橘霉素可以形成螯合物，但在酸、碱或加热等情况下可能会降解。橘霉素是一种苯醌类甲基化物，其分子内部有两个氢键。在固体状态时，橘霉素的两个互变异构体p-quinone和o-quinone之间会相互转化，构成动态平衡。而在甲醇或甲醇与二氯甲烷的混合溶液中，橘霉素经过Michael-type亲和加成反应进行两个互变异构体的相互转化，该反应是可逆的，并达到动态平衡。在甲醇与二氯甲烷的混合溶液中，提高温度可使反应向天然橘霉素的方向移动。 紫红曲霉的发酵技术 从发酵技术而言，针对红曲霉的发酵技术大体上可分固态和液体两类。生产红曲霉中生理活性代谢产物的方式以固态发酵制备红曲米为主。能影响固态发酵制备红曲米的因素有：培养基种类、培养的环境温度、生产用菌株种类以及水分含量等等。发酵时，如果不能保持发酵底料有充足的水分和活度就有可能让其传导力减小，对整个发酵过程造成不利影响。固态发酵属于传统技术手段，有其弊端，因此，这几年先进的制曲工艺开始持续发展，这类新工艺让固态发酵法实现了机械化流程的生产，跟老工艺相比，不仅可以大大减小劳动强度，缩短发酵周期，更让发酵的整个操作过程大大简化，生产效率获得了极大提升。液态发酵有：周期短、成品质量稳定等多种优于液态发酵的特点，因此在紫红曲霉有关代谢产物的生产中备受关注。日本的一些制取红曲霉素的公司都是采用规模较大的液态发酵法，我国也有不少单位正在探索此工艺。一些研究显示在无光环境中培养红曲霉，可以促进色素的产生，若用红光或蓝光照射，可对红曲霉的生产形态造成一定的影响，进而对色素合成产生影响。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  食药用真菌黄绿墨耳的功效作用及相关研究！ 菌种简介 平台编号：Bio-11994  提供形式：斜面培养物 拉丁属名：Melanotus Flavolivens  中文译名：黄绿墨耳 拉丁学名：Melanotus flavolivens 菌株来源：←中国科学院微生物研究所←中国科学院华南植物研究所 保藏人：应建浙 直接来源国家：中国 保藏时间：12/24/1979 生物危害：四类 模式菌株：非模式菌株 菌株用途：食药用真菌 培养温度：25℃ 培养基：017     用途：食用真菌  注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） “黄绿墨耳真菌”对沉香树“结香”关键性作用 “黄绿墨耳真菌”等其它一些不知名的菌种， 就是使上述已经“受创”的沉香树，有可能“结香”的那股“东风”。 “黄绿墨耳真菌”在微生物学分类阶层系统中，是：微生物界、担子菌亚门、担子菌纲、伞菌目、球盖菇科、黑伞属中的一种菌类生物。 当自然界中的 “黄绿墨耳真菌”，无意中以任何形式，恰巧接触、或沾染上沉香树的“创口”上时，此类真菌就会顺势寄生在“创口”处，以本能的新陈代谢，维持生存。而沉香树“创口”部位早已“严阵以待”，拒绝并驱逐“黄绿墨耳真菌”等不速之客的到来。所以，“黄绿墨耳真菌”在此处的寄生状态，从专业术语上说，被称之为“逆境代谢”。总之，“黄绿墨耳真菌”等微生物已经无意中沾染上并入侵到沉香树的体内，进行生存代谢。这是自然界中司空见惯的，基本的生存法则。 沉香树“结香”的过程，是复杂的生物化学过程。 打个比方，人体的血液中有红血球、白血球和血小板等许多复杂物质。血小板的本能分工，是防范人体有可能发生的创口流血，起凝固作用；白血球的本能分工，是吞噬人体内或创口处，有可能遭遇的各种病菌；除此，人体内还有诸多免疫性抗体，也是为了准备应对各种病毒和微生物的侵害。那么，可以理解为，在沉香树的体内，也存在着一系列相应的物质。如树胶、树脂发挥着相当于血小板的功能；树体内的各种抗体，发挥着白血球似的功能，就是为了应对，像“黄绿墨耳真菌”之类的不速之客。沉香树里的树脂，是形成沉香的重要成分。 沉香树体内和“创口”处聚集的树胶、树脂、抗体等物质，本能地保护其自身安全，于是，抵御“黄绿墨耳真菌”等微生物感染、寄生的“战争”就打响了。这是一场自然界中，悄无声息的“生物化学战争”。菌类照例会不断繁殖并扩散着，沉香树本能的抵抗，在不懈地进行着。结果，它们搅成一团，如胶似漆，你中有我，我中有你，终于形成了一种新的物质，叫做：苄基丙酮。 随着时间的推移，或数月，或数年甚至更长时间，在这场漫长的生物化学战争中，苄基丙酮这种物质又在转化，最终，形成了两大类生物化学物质： 1、倍半萜化合物； 2、色酮类化合物。 可以这么说：这两大类化合物质就是沉香。 沉香因形成过程的不同，会使实体出现多种形态 千百年来围绕着千姿百态的“沉香”实体，人们有着一种约定俗成的认知与表述。在沉香树体内因伤病、腐朽，而自然形成的香块，常被称之为“熟结”；沉香树因任何原因受创而结香，并被从活树上采摘，称之为“生结”；沉香树枯死后被人们采集到的结香块，通常叫做“脱落”；因虫类寄生、蛀食而使沉香树产生结香的部分，称为“虫漏”。 除此，沉香还有“倒架”、“活沉”、“土沉”、“水沉”、“蚁沉”、“白木”等诸多成因不同、叫法不同的名称区别。故，十分复杂，有时还会有些“交叉”。 而且，因沉香树受创部位不同而结香的实体，民间还有：“皮油”、“牛耳”、“铁头”、“包头”、“粉头”、“烂头”、“铁顶”等，许多生动形象的说法。 总之，诸如此类由于沉香形成的方式、过程、环境、地域、形态、色差、体量、质地、比重、结构、香气、味道等的复杂因素与差异，及一系列不确定性，更凸显出了人类对沉香的了解、理解和研究，还存有着十分广阔的空间。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   食品车间微生物的污染与检查及控制与管理！ 百欧博伟生物：在食品工厂实行“微生物管理”，不是探索立即消灭微生物的管理方法，而是先对肉眼看得到的食物进行管理。微生物用肉眼不能直接观察到，先要调查被微生物污染的物品，从自己身旁考虑。 一、微生物污染传播的四大媒介 微生物污染传播污染的四大媒介为：空气、水、表面、人。 1、空气 空气携带着微生物来污染食品。每立方米的空气中至少含有60万颗尘粒，同时还存在着大量的微生物，在这样的空气条件下进行生产，肯定会污染食品。 因此，要杜绝带有大量尘埃微粒和微生物的空气污染食品的有效办法是对空气采取过滤和消毒措施。 2、水 从理论上来讲，微生物在纯水中是不能生长的。但是，用于生产中，还用于设施、设备清洗中的水，总会含有一定量的可溶性有机物和盐类。正是这些可溶性的物质可被微生物利用作为它们生长的养料源泉。 当带有大量尘埃粒子和微生物的水用于生产或清洗设施、设备时，就转移到食品上面，污染了食品。 因此，我们直接用于食品生产的水必须经过处理，以防止微生物通过水来污染产品。 3、表面 由于空气中的湿度，所有车间物体表面（包括天花板、墙壁、地面、设备、容器、工具或桌子）都包上一层含水的薄膜。表面因尘埃微粒和微生物由空气传播的回降而受到污染。 我们应该了解：一个看起来很干净的表面，实际上已经被千百万个微生物所污染，除非已经做了正确的消毒灭菌。 4、人 可能大家都不会想到的，人包括我们自己，是一个永不休止的污染媒介。当我们进入食品加工车间，也许将几百万细菌随我们一起带入车间。 二、如何实施微生物检查 过去，食品厂的微生物检查是由质量管理员对产品的中心样品进行做生物检验。 但是，只对最终产品进行微生物检查，不能达到微生物管理的目的，检查项目还需扩大，生产用水、原料、工人及机械均要检查。  但是，作为车间的卫生管理，质量管理员只是参与监控，而真正的实施在于员工的行动参与。 因此，为了推动微生物管理，有必要让员工广泛、深入地认识微生物，使自己的行动自觉地符合“微生物管理型行动”。 1、大肠菌群检查 自检的检查工具。标准检查法虽然规定了使用的培养基和菌数允许量，但是还需要有“自检”的简易方法及检查工具，并且使用效果要好。被检的微生物中最初步、最重要的是“大肠菌群”。 “大肠菌群”的存在，简单地说可能是粪便污染。这种细菌在食品中决不允许。市场上有使用简单的检查工具出售。还可借助灭菌棉体对机器、工具、环境、手指等进行检查。进行自检时，只要根据“有”、“无”作出“不行’和“行”的判断。 自己的手指、管路、工具均需检查，对一天操作结束后的灭菌洗净状态也应有一个要求，由于检查采用了与原料、中间产品、包装的检查相同的检查工具，所以可以逃行比较，容易管理。这些简易工具完全可检测大肠菌群，若扩大对金黄色葡萄球菌或一般细菌等检查则更理想。 2、环境微生物检查 工厂微生物污染的另一个原因是“环境”。环境微生物的检查，按正规方法需要设备和较大经费。 但是，调查空气中微生物，任何工厂都能检查。 空气中的微生物的来源有从工厂外摄入空气中的微生物及工厂内部产生的微生物。 一般用平板计数琼脂培养基，将培养皿打开一定时间后，进行培养，就可检查空气中浮游菌的数目。这种检查与检查大肠菌群一样也可由操作工人自己担任。 通过自检，不仅能知道检查结果，更重要是寻找出产生的原因及采取措施改进。 三、如何进行微生物卫生管理 1、实施整理整顿    工厂环境不整洁，如工厂内管路、软管、集装箱堆放场地等布局不合理、工作场所不能充分洗净灭菌，就很难确保达到卫生的要求。因此，工厂内首先进行整理整顿、合理布局，实施“微生物抑制”，保证工人顺利开展微生物管理。 2、对工人的教育   食品工厂最大污染源之一是人。在车间，无论机械化程度如何发展，任何地方都有人存在。但是使工人接受卫生安全知识较困难。最好办法就是开展“自检”，工人通过亲身体会自然地吸收知识。工人“自检”，既可改善污染原因又增加知识，自觉地养成微生物管理型行动。 3、SSOP管理标准的制订   每一工厂都有许多各式各样的问题、若不逐步解决，微生物就不能抑制。一定先要查明原因，然后制定“微生物抑制”标准，要制定阶段性完成目标，否则成了空话。随着标准控制指标的提高，微生物管理行动进一步落实，微生物抑制也简单了。 4、杀菌剂的使用    在杀菌剂使用前，要认真研究用各种杀菌方法，包括加热、紫外线、臭氧等，要考虑杀菌剂使用所产生的后果。要选择合适的杀菌剂，根据不同杀菌对象研究杀菌剂的使用方法，要防止不必要的杀菌剂混入食品，同时也要考虑对废水处理的不良作用。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  高加索酸奶迟缓乳杆菌的培养方法与实验内容！ 高加索酸奶乳杆菌是Lactobacillus属的微生物，原产地为中国。菌落乳白色，中等大小，边缘大多不整齐，长杆和中长杆；异型发酵，都能利用葡萄糖，果糖，不从半乳糖、甘露醇、山梨醇产酸。多糖粘度420 mpa.s。主要用途为研究；生产，具体用途为生产开菲尔乳。 一、菌种简介平台编号：Bio-85143 规格：冻干物 拉丁属名：Lentilactobacillus Kefiri 中文名称：乳杆菌属拉丁名称：Lactobacillus sp.来源历史：←江苏恒顺醋业股份有限公司收藏时间：2016/1/11原始编号：HSLZ-75原产国：中国资源归类编码：15131319101模式菌株：模式菌株(新种)主要用途：分类；研究特征特性：37℃厌氧培养7天，菌落圆形，灰白色，表面光滑，边缘整齐。菌体杆状，0.4-0.5 μm×1.5-3.5 μm，单个、成对或成堆排列。 16S rRNA序列接受号为KT783533。具体用途：分类学研究。生物危害程度：四类培养基编号：CM0006培养基名称：MRS培养基培养基成分：酪蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母粉 5.0g，葡萄糖 5.0g，乙酸钠 5.0g，柠檬酸二铵 2.0g，Tween 80 1.0g，K2HPO4 2.0g，MgSO4.7H2O 0.2g，MnSO4.H2O 0.05g，CaCO3 20.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.8。培养温度：37℃需氧类型：厌氧分离基物：醋醅采集地：江苏省保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：分类学研究。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一种）、原种（二种）和栽培种（三种）三。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备 ，其中(1)～(4)为孢子制备过程。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。放线菌孢子的培养基大多是采用麸皮或豌豆浸出液及无机盐与琼脂制成的。将斜面孢子接入扩大的扁瓶孢子培养基中,于28～37℃培养5～14天。所获得的大量孢子可直接作为种子罐(6)的种子。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶(5)液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐(7)的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃)：是适用范围广的微生物保存法。 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  兔膀胱基质成纤维细胞的使用方法与注意事项！ 一、细胞简介平台编号：Bio-132326 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞细胞名称：兔膀胱基质成纤维细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述膀胱是一个储尿器官。它是一个囊形结构，位于骨盆内，其后端开口与尿道相通。膀胱与尿道的交界处有括约肌，可以控制尿液的排出。膀胱基质成纤维细胞作为膀胱上皮细胞的支持细胞，起着十分重要的作用。体外培养膀胱基质成纤维细胞不仅为组织工程膀胱，尿道提供种植细胞的必要手段，也是研究膀胱纤维化的基础与前提。 三、细胞特性1)组织来源于实验动物的正常膀胱组织。2)细胞鉴定：波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、使用方法客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。1、取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。2、贴壁细胞消化1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。3、悬浮细胞处理1)收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中，用PBS清洗细胞培养瓶1-2次，收集清洗液；2)1200-1500rpm离心3min，弃上清，收集细胞沉淀；3)加入5ml新鲜完全培养基，用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞；将分散好的细胞调整合适密度接种至培养器皿中，置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；4)若遇到悬浮细胞团块较大，无法机械吹散时，向步骤2)中细胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至离心管中，用吸-管轻轻吹打混匀，37°C温浴2-3min，消化结束后，加入胰酶抑制剂(或血清)终止消化，用吸管轻轻吹打，分散细胞；1200rpm离心5min，弃上清，收集细胞沉淀；5)加入5ml新鲜完全培养基，用吸管轻轻吹打混匀；按传代比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；6)待细胞状态稳定后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。   4、细胞收货脱落1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化；3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基(补加1%FBS，促进贴壁)重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。5、细胞实验因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。        六、注意事项1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月。2、在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。3、传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。4、建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    罗尔细薄菌的储存与培养及打管说明与注意事项！  罗尔细薄菌是Athelia属的微生物，原产地为意大利。产菌核担子菌。主要用途为研究。  一、菌种简介平台编号：Bio-12320 提供形式：斜面培养物拉丁属名：Athelia Rolfsii 中文译名：罗尔细薄菌拉丁学名：Athelia rolfsii原始编号：CBS 191.62菌株来源：←CBS保藏人：周宇光直接来源国家：荷兰保藏时间：3/1/1998生物危害：四类模式菌株：非模式菌株培养温度：21℃培养基：014    分离源：榕树采集国家：意大利用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油请置于-80℃ 三、培养条件1、培养基编号：营养肉汤琼脂（Nutrient Agar）2、培养基成分： 蛋白胨 5.0 g牛肉浸粉 3.0 g NaCl 5.0 g 琼脂 15.0 g 蒸馏水 1000.0 mL pH 7.0培养芽胞杆菌时加入 5 mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽胞。以上成分 121℃，灭菌 15 min。液体培养基不添加琼脂。推荐使用成品培养基。3、需氧类型：好氧4、培养温度：30 ℃ 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 五、打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。9、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理。10、甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   NCI-H146人小细胞肺癌贴壁细胞系的应用！ 一、背景 NCI-H146人小细胞肺癌贴壁细胞系是一种常见的实验细胞系，被广泛应用于肿瘤研究，包括小细胞肺癌的研究。这种细胞系具有生长速度快、分裂旺盛、对癌基因突变易感等特点，因此被广泛用于肿瘤发生、发展、转移等方面的研究。 NCI-H146人小细胞肺癌贴壁细胞系的遗传背景比较清楚，具有多个基因突变，包括TP53、RB1等重要肿瘤抑制基因的突变。这种细胞系还具有某些与肿瘤转移相关的基因表达上调或下调的特点，因此被广泛用于探讨肿瘤转移的机制和寻找抗肿瘤药物的研究。 NCI-H146人小细胞肺癌贴壁细胞系是一种常用的肺癌细胞系，用于研究小细胞肺癌的发生、发展和治疗。该细胞系来源于一名患有小细胞肺癌的患者，经过多次传代和筛选，形成了具有贴壁生长特性的细胞株。 二、NCI-H146人小细胞肺癌贴壁细胞系具有以下特点 贴壁生长特性：该细胞系能够在含有血清的培养基中贴壁生长，形成单层或多层细胞。 高增殖率：该细胞系具有较高的增殖率，可以在短时间内获得大量的细胞。 多药耐药性：该细胞系具有多药耐药性，即对多种化疗药物具有抗性。 三、NCI-H146人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞培养操作 1)复苏NCI-H146人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)NCI-H146人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)NCI-H146人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 四、应用 NCI-H146人小细胞肺癌贴壁细胞系可以用于长链非编码RNA HOTTIP作为ceRNA参与小细胞肺癌增殖和耐药的机制研究： 探讨HOTTIP作为ceRNA诱导EMT参与小细胞肺癌发生发展及耐药机制的调节。通过本项目研究,进一步丰富小细胞肺癌发生及耐药的分子机制,为筛选小细胞肺癌耐药及预后的生物学标志物提供理论依据。 1、非编码RNA芯片课题组利用Arraystar公司的人类lncRNA芯片技术分析小细胞肺癌多药耐药细胞株(H69AR)、NCI-H146人小细胞肺癌贴壁细胞系与化疗敏感细胞株(H69)的lncRNA差异表达谱,并结合前期通过北京博奥生物芯片有限公司的miRNA芯片差异表达谱的结果,利用生物信息学技术寻找与小细胞肺癌耐药可能相关的非编码RNA分子。 2、临床样本收集2008年1月至2015年1月在南方医科大学附属顺德第一人民医院接受治疗的115例小细胞肺癌石蜡包埋组织,标本来自活检组织及纤维支气管镜检查穿刺组织,经病理诊断为小细胞肺癌。本研究经南方医科大学附属顺德第一人民医院伦理委员会批准,所有患者均签署知情同意书。 3、细胞培养人小细胞肺癌化疗敏感细胞株NCI-H69、NCI-H446、NCI-H146人小细胞肺癌贴壁细胞系和多药耐药细胞株NCI-H69AR均购自美国ATCC;另一多药耐药细胞株H446DDP细胞为本课题组根据文献报道(PMID:2436751)的NCI-H69AR细胞的建立方法构建;16HBE为人支气管上皮细胞株。 4、细胞转染(1)瞬时转染:采用阳离子脂质体法,将miR-574-5p mimics(模拟物)、inhibitors(抑制物)或antagomir(拮抗剂,更稳定,可用于动物实验)及其阴性对照(miR-NC)序列,和HOTTIP、HOXA11、HOXA13、EZH1的小干扰RNA序列和pcDNA3.1/PEX-3表达载体及相应的阴性对照载体,分别转染5株小细胞肺癌细胞和1株人支气管上皮细胞,获得瞬时上下调miR-574-5p、HOTTIP、H0XA11、HOXA13、EZH1的细胞。操作按LipofectamineTM2000试剂说明书进行。(2)稳定转染:①采用阳离子脂质体法,将表达HOTTIP的pcDNA3.1载体及相应的空载体、表达HOXA11、HOXA13的PEX-3载体及PEX-2空载体(绿色荧光标记)分别转染H69和H446细胞,通过G418筛选阳性转染子进行扩大培养,获得稳定高表达HOTTIP、HOXA11、HOXA13的H69、NCI-H146人小细胞肺癌贴壁细胞系和H446细胞株。操作按LipofectamineTM2000试剂说明书进行。②采用慢病毒法,将HOTTIP的siRNA干扰序列通过LV3慢病毒载体包装后进行靶细胞侵染实验,同时设立LV3-NC对照转染组,获得稳定沉默HOTTIP的H146、H69AR及H446DDP细胞株。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      水中的奥秘——水产养殖中神奇的益生菌！ 益生菌在水产养殖中扮演着重要的角色，可以促进鱼类、虾类等水生动物的健康生长，改善水质环境，增强免疫力，提高生产效益。 乳酸菌 乳酸菌是一类常见的益生菌，在水产养殖中有着重要的作用。 主要应用效果 1、促进消化吸收：乳酸菌能够降解饲料中的纤维素和蛋白质，释放营养成分，提高养殖生物对饲料的消化吸收率。 2、增强免疫力：乳酸菌可以调节养殖生物的肠道菌群，增强免疫系统功能，降低感染病原微生物的风险。 3、抑制有害菌生长：乳酸菌通过产生乳酸等有益代谢产物，抑制有害菌的生长，保持肠道微生态平衡。 酵母菌 酵母菌也是常用的益生菌之一，在水产养殖中发挥着重要作用。 主要应用效果 1、促进饲料利用：酵母菌可以发酵饲料中的糖类和纤维素，提高饲料的营养价值，增加养殖生物对饲料的吸收利用率。 2、抗应激效果：酵母菌可以调节养殖生物的神经内分泌系统，减轻应激对生物体的影响，提高免疫力和抗病能力。 3、促进生长：酵母菌中含有丰富的维生素和氨基酸，有助于促进养殖生物的生长发育，提高生长速度。 益生菌复合制剂 除了单一的乳酸菌和酵母菌外，益生菌复合制剂也是水产养殖中常用的产品。其优势在于结合了多种益生菌的功能，有助于综合调节养殖生物的肠道菌群，提高综合免疫力和抗病能力。 明串菌 明串菌是一种常用的益生菌，在水产养殖中有着广泛的应用。 主要应用效果 1、促进鱼类排泄：明串菌可以在鱼体内生产有益物质，促进鱼类的肠道蠕动，增加排泄，减少废物在体内的滞留时间。 2、提高水质：明串菌能够降解底泥中的有机物质，减少底层污染，改善水质环境，减少养殖水体中的氨氮等有害物质。 双歧杆菌 双歧杆菌是一类益生菌中的精英。 主要应用效果 1、调节肠道功能：双歧杆菌可以平衡养殖生物的肠道微生物群落，促进肠道消化吸收功能的正常运转，减少腹泻等问题。 2、抗菌效果：双歧杆菌具有良好的抗菌作用，可以有效抑制有害菌的生长，降低疾病发病率，提高养殖生物的健康水平。 琼脂菌 琼脂菌在水产养殖中也属常用的益生菌之一。 主要应用效果 1、促进食欲：琼脂菌通过分泌激素调节饥饿感，促进食欲，提高养殖生物对饲料的摄入量和消化吸收率。 2、增强抗氧化能力：琼脂菌富含抗氧化物质，可以增强养殖生物的抗氧化能力，减少氧化应激对生物体的伤害。 益生菌在水产养殖中的应用具有广泛的前景和重要意义，通过合理选用和使用益生菌，在维护水产养殖生态平衡、增强生物健康、提高产出效益等方面发挥着积极作用。因此，在进行水产养殖过程中，科学合理地应用益生菌是非常必要的，并且需要结合具体情况进行细致调控，以获得最佳的养殖效果和经济效益。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 人原代皮脂腺细胞收到后的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-135718 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞细胞名称：人原代皮脂腺细胞用途：原代细胞 细胞用途：仅供科研使用。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述皮脂腺是附属皮肤的一个重要器官，其分布广泛，主要功能是合成和分泌皮脂，滋润皮肤、毛发，抑制和杀灭皮肤表面的细菌。同时，皮脂和汗液仪器构成脂质膜，其与皮肤屏障的完整性有密切关系。 三、细胞特性1）细胞来源于术后人的皮脂腺组织。2）细胞鉴定：CK7免疫荧光染色为阳性。3）经鉴定细胞纯度高于90%。4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5）细胞生长方式：多角形细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。 七、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备1）准备MEM 培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      菌落计数的基本步骤与具体过程及注意事项！ 一、菌落计数的一般步骤 1、样品的稀释 2、培养和计数 3、结果与报告 二、具体过程 1、样品的稀释 （1）固体和半固体样品 称取25g置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1：10的样品匀液。 （2）液体样品 以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。 上步完成后，用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。 根据对样品污染状况的估计，选择1个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 之后，及时将15mL～20mL冷却至48℃的平板计数琼脂培养基（可放置于48℃±2℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。 2、注意事项 移液过程使用的器具，都应避免微生物污染。使用耐高压移液枪，核查洗耳球无菌程度，避免移液枪触及均质袋或试管内壁…… 样品匀液完成后，可按相同操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。 3、培养和计数 样品稀释完成后，就要进行培养和菌落计数了。 待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按相同条件进行培养。 培养完成后，就要进行菌落计数了，计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。 选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 （1）大片菌落 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。 （2）链状生长 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。 （3）结果与报告 为了生成结果和报告，需要根据计数结果和公式计算出菌落总数。需要注意的是，对于菌落数量不同的培养皿，计数原则有所不同。 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。 称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   HEK293人胚肾细胞系的作用与应用及相关研究！ 一、背景 HEK293人胚肾细胞系也被称为人胚胎肾细胞293（Human Embryonic Kidney 293），它是一种永生化细胞系，衍生自人胚胎肾脏。这些细胞具有转染效率高，易于培养等特点。HEK293细胞系是由荷兰生物学家Alex van der Eb在1973年从人类肾脏细胞中首次分离出来的。这些细胞是在女性胎儿的组织培养物中生长的。后来，Van der Eb实验室的博士后研究员Frank Graham对这些细胞进行了剪切的人类腺病毒5型DNA转染，使其能够非常有效地产生大量重组蛋白。因此，该细胞系被命名为HEK293，以纪念这次实验是Frank Graham的第293次实验。 二、HEK293人胚肾细胞系细胞培养操作 1)复苏HEK293人胚肾细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)HEK293人胚肾细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)HEK293人胚肾细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 HEK293人胚肾细胞系可以用于氧化应激在氢醌致人胚肾细胞HEK293 DNA损伤中的作用： 氢醌(1,4-dihydroxybenzene,HQ)是一种重要的工业化学品,可作为摄影工业的显影剂,橡胶工业的抗氧化剂,食品的抗氧化剂生产中间体,并作为聚合乙烯和丙烯酸为单体抑制剂。日常生活中通过某些药物、化妆品也可长时间接触。HQ是苯的代谢物,在苯毒性效应中发挥着重要作用。HQ主要在肝内代谢,经尿排出而解毒；部分富集于骨髓组织,进一步代谢生成对苯醌和对苯半醌。人群流行病调查及实验动物研究均发现长期接触HQ可对肝、肾、骨髓造血造成损伤。1999年,国际癌症研究机构(International Agency for Research on Cancer,IARC)就将HQ归为第三类致癌物,即现有证据尚不能就其对人类致癌性进行分类。体外实验表明,HQ可引起染色体突变。 研究选用HEK293细胞作为试验系统,探讨HQ的DNA损伤作用及可能机制,旨在为评估HQ对人类健康的危害提供有价值的实验室依据。 方法：试验系统为HEK293人胚肾细胞系。通过改良的单细胞凝胶电泳(SCGE)试验检测细胞DNA损伤情况。通过罗丹明123(Rh123)和吖啶橙(AO)分别测定细胞内线粒体膜电位和溶酶体膜稳定性；通过2’,7’—二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)和苯二醛(OPT)分别测定细胞内活性氧(ROS)及还原型谷胱甘肽(GSH)水平。用免疫组化方法测定8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)在细胞内的表达水平。为探讨其可能的氧化性机制,采用DL—甲硫氨酸磺酰亚胺(BSO)和抗氧化物质羟基酪醇(HT)干预法测定细胞内ROS水平及线粒体膜电位对HQ所致DNA损伤效应的影响。 结果：HQ(3.125,6.25,12.5μM)作用于细胞后,DNA的迁移距离明显增加,且呈剂量依赖关系；作用于HEK293细胞可引起细胞内溶酶体膜稳定性的破坏和线粒体膜电位的下降,也可使细胞内ROS表达水平的明显增加及GSH的耗竭；明显增加HEK293人胚肾细胞系内8-OHdG水平。HT能够拮抗HQ引起的DNA链断裂的形成；BSO能够加剧HQ引起的DNA链断裂的损伤。 结论：HQ可致HEK293人胚肾细胞系DNA损伤,其作用机制可能是通过线粒体膜电位的下降,溶酶体膜破坏,细胞内ROS产生增高及GSH的耗竭,进而导致氧化性DNA损伤。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    微生物实验室耗材管理准则！赶紧收藏起来吧！ 实验室消耗品是实验室人员实验室管理的必要工具。实验室管理员应统一管理实验室耗材和试剂，并详细记录实验室收到的所有耗材和试剂。 每个负责人应根据其负责的实验类型接收相应的耗材和试剂。不同的实验室有不同的耗材管理方法。实际上很难管？不好管？给你支支招！ 一、明确管理职责 实验室应明确实验室的安全负责人、检验耗材的管理部门。管理部门应制定相应的采购、保管、使用的程序和相应的考核制度。耗材使用部门应明确本部门的安全责任人和耗材管理人员。 二、检验耗材的分类 检验耗材包括试剂类耗材和非试剂类耗材。 试剂类耗材包括：化学试剂、基准试剂、标准物质、实验室用水、微生物培养基、试剂盒、相关试剂配制的溶液或固体混合物等。 非试剂类耗材包括：玻璃器皿、实验用气体、仪器专用耗材、滤纸、橡胶制品等。检验耗材中具有感染、腐蚀、放射性等危险特性，在运输、储存、使用和处置中，容易造成人身伤亡、财产损坏或环境污染而需要特别防护的物品和易制毒化学品成为“危险品”。危险品目录根据GB6944《危险品货物分类和品名编号》、《剧毒化学品目录》和《易制毒化学品的分类和品种目录》确定。 三、管理要求 1、制定采购计划 实验室应当制定采购计划并按计划进行采购，而一些实验室，没有采购计划，对供应品采购比较随意，一方面增加了验收的工作量，另一方面为检测工作质量造成了不稳定的因素。采购计划应信息全面充分，应明确耗材的品名、规格、级别、数量、采购时效，有保质期的必须填写保质期限，是否需要证书等证明文件，涉及危险品的应有实验室安全负责人会签等。 2、实施采购 建立健全供应商档案，对同一类供应品的供应商至少应保持3名以上，对供应商的资质、信誉度以及经营的品种进行调查评价，在供应品的采购上做到既要经济，更要保证质量，一定要把供应品的质量放在第一位；根据采购情况，定期对供应商进行评价并记录，通过长期的合作筛选出合格的供应商。采购计划实施时，向合格供应商询价，一般要求向2家以上的合格供应商询价。确定供应商后，签订采购合同。 3、耗材验收 耗材验收上即要做到全面，也要有的放矢，切合实际的对可能影响检测质量的环节去检查，排除影响检测工作的因素。这也是实验室的经验和教训的积累。管理部门负责耗材的规格、级别、数量、保质期、质量证明文件的验收。使用部门负责耗材质量的验收，对关键性耗材的验收时应制定相应的文件来指导验收工作。 如刻度吸管、量筒、容量瓶等计量类玻璃器具在实验室消耗较大，我们实际工作中不可能对每一只玻璃器具都进行检定，但应至少保留一套已检定的器具用于对采购的计量类玻璃仪器进行比对验收，以确定采购的玻璃仪器准确度在可控范围之内。 用于痕量元素检测用的盐酸、硝酸，应通过仪器检查其是否有背景干扰；色谱使用的有机溶剂应通过仪器检查被测目标峰处是否有干扰；微生物培养基可以通过阴性或阳性对照试验来验收；实验室用水可以根据国家标准GB6682-2008《分析实验室用水规格和试验方法》对相应等级要求指标进行检验验收。 采购验收工作中容易出现的误区，有的实验室供应品验收流于形式，而有的实验室对某一个品牌一次验收合格了就认为今后采购就不用再验收了。 有的实验室认为，是大厂生产的知名试剂就没问题，就适用于所有的检测工作。其实再好的产品都有一个合格率和质量指标的波动范围，而我们过分相信企业的产品质量为100%而疏于验收，这是对检测工作极不负责任的行为，会为我们的检测工作带来一定的风险。因此，未经验收或验收不合格的耗材不得入库，验收合格的耗材方可入耗材库，建立库存台账。 4、耗材领用 耗材领用时，由管理部门和使用部门做好耗材交接，并做好出库记录。剧严格执行按需领用，计量记录，剩余退回的原则。瓶装耗材在使用场所保留一定的库存，使用部门在领用新耗材时将旧瓶（空瓶）退库。退库的空瓶由实验室委托有资质的单位进行处理。 四、耗材库管理 耗材库应有详实的入库记录、库存记录、出库记录和退库记录，做到账实相符。编制库存耗材的电子文档，实时更新，供使用和管理人员查阅。根据耗材的特性分类存放： 品实行双人双锁，单独存放； 氧化性物质与还原性物质隔离存放； 有机类与无机类分区域摆放； 固体在上，液体在下等。根据耗材的储存要求，配置安全设施，做好耗材库环境监控，填写监控记录，确保环境满足要求。加强危险品管理，品实行双人双锁，计量领用、剩余退回。严禁明火和其他非耗材物品进入库房。 五、耗材使用管理 耗材使用时，应注意保护耗材的标签标识，防止标签的污染损坏。需要特殊要求保存的应满足保存要求，做好相关记录；注意耗材的有效使用期，应在有效期内使用耗材，超过有效期的耗材一般作为检验废弃物处理，防止误用。取用试剂后，应及时有效封闭瓶口，防止试剂污染失效或外溢污染环境或产生安全事故。瓶装试剂耗材用完后应将空瓶退回耗材库，不得随意处置或丢弃空试剂瓶。 配置的试剂溶液应符合规定要求，及时书写并加贴标签。应用合适的容器存放试剂，不得用容量瓶、刻度试管等长期储存配置溶液。实验用气瓶使用时应进行必要的固定，防止摔倒，造成事故；更换气瓶时，应注意阀门连接处检漏等。 六、检验耗材检查考核 实验室应对耗材的管理工作进行必要的检查和考核。对耗材保存使用过程中容易产生的问题的关键点加以明确的要求和控制，定期进行监督检查和考核。培养良好规范的耗材使用习惯，引导检验耗材管理工作有序合理的开展，保证实验安全和检验数据准确。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  鉴别细菌的一种方法：革兰氏染色法知识解析！ 百欧博伟生物：在微生物鉴定中，革兰氏染色应该是最初接触的一种区分细菌的实验方法。通过革兰氏染色鉴定后，区分出革兰氏阳性菌和阴性菌，凭借结果以作后续的鉴定分离细菌。可以说，革兰氏染色在微生物研究过程中，是一个应该掌握的技术。 1、细菌的细胞壁 要了解革兰氏染色的原理，先了解细菌的细胞壁： 细菌的细胞壁主要由肽聚糖组成，能够固定细胞外形和保护细胞不受损伤，其主要功能包括： 特定的抗原性以及抵御抗生素、噬菌体的能力； 固定细胞外形以及提高机械强度，避免外力的损伤； 是细胞生长、分裂和运动（主要是有鞭毛的细菌）的必需构造； 阻挡大分子物质（对生命活动有危害或潜在危害的物质）进入细胞。 2、细菌细胞壁的差异 细菌细胞壁除了含有肽聚糖，还有其它组分，这些组分是革兰氏阳性菌和阴性菌所不同的。 革兰氏阳性菌的细胞壁主要由60%-95%的肽聚糖组成，还有10%-30%磷壁酸；阴性菌的细胞壁与阳性菌细胞壁相比较，虽然厚度相对薄，但是成分复杂，除了肽聚糖外，还有一层由脂多糖、磷脂和若干外膜蛋白组成的外膜结构。 革兰氏阳性菌与阴性菌细胞壁的主要差异如下： 肽聚糖层：阳性菌的较厚且层次多，阴性菌的为单层且薄； 外膜：只有阴性菌存在外膜结构，包括了脂多糖和类脂； 磷壁酸：多数阳性菌都有磷壁酸，阴性菌不存在磷壁酸； 对机械力的抗性：阳性菌抗机械力的能力强于阴性菌； 抗溶菌酶的能力：阴性菌抗溶菌酶的能力优于阳性菌。 3、革兰氏染色的机制 革兰氏染色以细菌细胞壁化学成分的差异引起脱色能力的不同为基础，即，细菌能否将染色剂阻碍在细胞壁中的原理，进行区分阳性菌和阴性菌，其结果为：阳性菌的细胞壁能够将染色剂结晶紫阻留而染成紫色；阴性菌的细胞壁不能将染色剂阻留，经过复染后形成红色。 经过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成结晶紫与碘的复合物，该复合物不溶于水。阳性菌因为细胞壁较厚、肽聚糖层多和交联致密，且不含类脂，当乙醇/丙酮进行脱色处理时，肽聚糖网层结构因失水导致网孔变小，结晶紫与碘的复合物就被阻留在细胞壁中。 阴性菌因为细胞壁较薄，且外膜层类脂物质含量高，受到乙醇/丙酮作用，细胞壁结构发生改变，外膜的类脂溶解，肽聚糖网层不能够将结晶紫与碘的复合物阻留，重新恢复为无色的状态，然后经过沙黄等红色染剂的复染形成红色。 4、革兰氏染色的操作 革兰氏染色的基本步骤如下： 固定：涂片干后加热固定，火焰固定时涂片膜朝上，以中等速度越过火焰3次，或使用乙醇/甲醇固定； 初染：滴加结晶紫染液，1分钟，清水洗去染液； 媒染：加碘液，1分钟，水洗； 脱色：加脱色液，摇动10-30秒，至无紫色脱落，水洗； 复染：加复染液，30秒，水洗； 镜检：涂片干后镜检。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  海岸分枝杆菌的形态特征与培养方法及实验内容！ 海岸分枝杆菌是Mycobacterium属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类学研究，具体用途为模式菌株。 一、菌种简介平台编号：Bio-03107 提供形式：冻干物拉丁属名：Mycobacterium Litorale 中文译名：海岸分枝杆菌拉丁学名：Mycobacterium litorale原始编号：F4菌株来源：←北京理工大学生命学院保藏人：张建丽直接来源国家：中国保藏时间：3/10/2010其他保藏编号：=JCM 17423生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株培养温度：28℃培养基：0234    其他培养条件分离源：海岸海沙采集地点：海南省海口市采集国家：中国用途：模式菌株 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征革兰氏阳性，杆状，有时有分枝，可呈丝状体。抗酸。无内生孢子或分生孢子。含分枝菌酸。主要的醌为MK-9（H2）。多为致病菌。 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：（1）蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。（2）糖液保存法：适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：土壤保存法;砂土保存法;硅胶保存法;磁珠保存法;麸皮保存法;纸片(滤纸)保存法。 六、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml-0.5ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板，操作完毕后尽快置于厌氧环境下恒温培养；若需接种液体培养基，制作培养液时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养液中的氧气）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 TALL-104人急性T淋巴细胞白血病细胞的培养方法！ 一、细胞简介平台编号：Bio-133070 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：TALL-104 细胞名称：TALL-104人急性T淋巴细胞白血病细胞产品类别：人源细胞系生长特性：悬浮生长培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS传代方法：1：2传代细胞形态：淋巴细胞样冻存条件：无血清细胞冻存液传代方法：1:2传代 传代情况：2~3天换液 培养体系：温度：37℃ ； 气相：空气，95%；CO2，5% 细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 冻存条件：无血清细胞冻存液 用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞的运输和保存干冰运输及复苏好存活细胞（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 三、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 四、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 五、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。5、客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术售后服务电话，我们随时给予解答。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   凝结芽孢杆菌的测定方法之样品准备与平板培养！ 凝结芽孢杆菌的测定方法 1、蛋白胨稀释液的制备: 将1g蛋白胨(细菌蛋白胨除外)溶于1000ml去离子水中，用盐酸调节pH至7.0，灭菌温度为121℃。时长15分钟。 2、微量元素溶液制备: 微量元素水溶液营养成分的组成如表1所示   3、液化GYE琼脂培养基的制备: 营养成分的组成如表2所示   使用乳酸溶液调节上述营养成分混合液pH到6.3。将混合液转移到大锥形瓶中，向锥形瓶中加入15.0g琼脂。使用铝箔包裹锥形瓶，将其放置于加热板上进行加热，并搅摔，直到琼脂完全溶解。随后在高压灭菌锅中在121℃下进行至少15分钟灭菌。待高压灭菌锅可以安全打开时，将锥形瓶放置于50℃的水浴中。 4、样品准备 4.1 食品取样 称取25g样品，置于无菌均质袋中，加225ml灭菌蛋白胨水，拍击式均质器均质至完全溶解于蛋白胨水，混匀。 注:若样品不能完全溶于蛋白胨水，需要将蛋白胨水预热至50C再加入样品，或加入样品后将混合悬浮液置于50℃预热5min,直至样品完全溶解。 4.2 检查混合悬浮液pH值。若pH小于7.0，用氢氧化钠(5N)溶液调节pH至8.5±0.2;若pH大于8.7，用盐酸溶液(5N)调节pH至8.5±0.2。 4.3 样品移取20-30ml均质悬浮液于50ml离心管中于75℃水浴30min,立即冷却至45℃以下，然后移液。 4.4 移取1.0ml该液于9.0ml灭菌蛋白胨水的试管中，涡旋彻底混匀(10-2稀释管即得)。 4.5 根据要求重复操作。所做稀释度及平板培养所用稀释度应随预期孢子数变化而变化。 注1:将每个稀释度溶液混匀，然后移液; 注2:步骤4.3:将离心管置于水浴后立即开启计时器。 5、平板培养 液化GYE琼脂培养基，然后置于水浴中冷却至50℃以下(该培养基容易凝固，要置于50℃左右的水浴锅内) ;每个稀释度准备两个无菌培养皿。分别从最后两个稀释管溶液中加1.0ml于相应编号的培养皿中，然后将15至20ml的熔融培养基倒至各个培养皿，彻底混匀。待固化时，将平板翻转，40℃+2℃培养48小时，同时准备一个只包含琼脂培养基及一个只含有1.0ml蛋白胨稀释液和琼脂培养基作为阴性对照。 6、平板计数 菌落数在30至300之间的平板计数最为理想。平板计数只记录满足以下条件的菌落:琼脂表面的菌落需要直径为1mm到5mm;白色到奶色，凸面，具有完整的边缘和光滑的表面。嵌在琼脂培养基中的菌落需要直径为0. 5mm-1mm在琼脂中具有奶色的点状体。 6.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g(ml)样品中菌落总数结果。 6.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式(1)计算: N= ∑C/ (n1+0.1n2)d........................ (1) 式中: N-样品中菌落数: ∑C - 平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和: n1 - 第一稀释度(低稀释倍数)平板个数; n2 - 第二稀释度(高稀释倍数)平板个数; d - 稀释因子(第一稀释度)。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 化妆品微生物的安全通用要求与污染及注意事项！ 一、知识背景 化妆品成分复杂，一般都含有丰富的营养物质，适宜微生物的生长繁殖。 化妆品的品质与化妆品中微生物的指标有重要关系，只有微生物指标合格的化妆品，才能够被人们放心使用。随着化妆品微生物检测手段的发展，世界上各个国家或者地区都推行了属于自己国家的化妆品微生物含量标准，对微生物的含量进行了明确的规定，这样就能够最大程度减少微生物产生的病毒对化妆品产生的污染现象，不但能够提升其质量安全，同时还能够保护消费者的身体健康。  二、基本信息 化妆品的品质与化妆品中微生物的指标有着重要关系，只有微生物指标合格的化妆品，才能够被人们放心使用。 微生物指标作为衡量化妆品质量的重要指标之一，按照《化妆品安全技术规范》（2015版）规定，化妆品中微生物应该符合规定的限值。 首先要检测的就是化妆品中微生物的菌落总数，菌落总数的测定能够检测出化妆品样品被细菌污染的程度，这也是对化妆品样品进行卫生学总体评价的综合依据。 其次要检测的是耐热大肠菌群、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、霉菌和酵母菌。  三、化妆品来源 化妆品中的微生物一是从生产过程中来的(一次污染)，二是在使用过程中产生的(二次污染)。其中使用过程中的二次污染情况较为严重，一般表现为使用时间越长，污染越严重。 一次污染 ①原料。化妆品的许多原料都是微生物生长繁殖所需要的营养物质，受微生物污染的原料将直接影响化妆品的卫生状况。极易受到微生物污染的原料主要是天然动植物成分，如蛋白质、淀粉等；易受到微生物污染的原料还包括离子交换水、增稠剂、胶质、表面活性剂等；相对来说，较难受到微生物污染的原料有油脂、蜡、石蜡、高级脂肪酸、香料、精油、酯类。 ②生产设备。化妆品的生产设备的角落、接缝处极易隐藏微生物，使化妆品受到污染。 ③生产过程。若在生产过程中的生产技术指标（如灭菌温度和时间等）达不到要求，未能将微生物完全灭除，以及上岗操作人员卫生状况不良等都可能是化妆品受到微生物污染。 ④包装容易和环境。化妆品的包装物，如瓶、盖等若清洗，消毒不彻底，很容易藏有微生物；生产、包装场所不符合卫生净化要求都会使化妆品收到微生物污染。  二次污染 在使用过程中产生的(二次污染)。 四、化妆品安全通用要求 按照我国的《化妆品安全技术规范》（2015版）规定，化妆品上市前应进行必要的检验，检验方法包括相关理化检验方法、微生物检验方法、毒理学试验方法和人体安全试验方法等。 化妆品终产品必须达到微生物指标要求，在进行配方设计时，要建立适宜的防腐体系，以避免在生产和消费者使用的环节微生物污染内容物造成终产品细菌或霉菌、酵母菌超标，或产生有害的致病菌。在生产环节采用一定的灭菌工艺，也可以有效地杀灭微生物，避免产品遭受一级污染，进而减少配方中防腐剂的添加量。防腐剂在配方中用量的降低也在一定程度上提高了终产品的安全性。 五、化妆品微生物污染 化妆品微生物污染问题始终存在，且污染的微生物极有可能对人体造成伤害，导致各种疾病的发生。 1946年，Hills报道了由于使用染有破伤风梭状芽孢杆菌的爽身粉导致数个新生儿死亡的病例，这是首次关于化妆品微生物污染的报道。20世纪60年代后，陆续有研究者从化妆品中分离出机会性病原体。  造成化妆品污染的主要微生物是病原细菌和致病真菌。病原细菌包括革兰氏阳性细菌（链球菌、葡萄球菌、双球菌、部分芽胞菌和棒状杆菌）、革兰氏阴性细菌（沙门氏菌、绿脓杆菌、奈瑟氏菌、弧菌、嗜血杆菌、大肠杆菌、结核杆菌、痢疾杆菌、产气杆菌）；致病真菌包括青霉、曲霉、根霉、毛霉、白色念珠菌、表皮藓菌、新型隐球酵母。 六、相关法规 化妆品微生物污染问题始终存在，且污染的微生物极有可能对人体造成伤害，导致各种疾病的发生。因此，加强化妆品卫生质量的监管必不可少，而采用良好的检测技术是完善管理制度的必要条件。 我国《化妆品卫生监督条例》规定，在我国销售的化妆品均须办理卫生许可或备案手续，并对生产企业、产品等各方面进行评估，其中就包括了微生物指标等。因此，在购买化妆品时，可通过国家食品药品监督管理局官网的数据查询模块查询产品的许可或备案情况。 《化妆品行政许可检验管理办法》明确规定化妆品微生物检验项目应包括菌落总数、粪大肠菌群、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、霉菌和酵母菌；2015版《化妆品安全技术规范》要求对于微生物检测主要是细菌总数与霉菌和酵母菌总数，在总数控制于标准以下的前提下,不得检测出耐热大肠菌群、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌，并阐述了对应上述各项目的检测方法。 微生物评估： 1、为了确保产品质量和消费者的安全，有必要对上市的每批产品进行常规微生物检测。在现场报告中，应说明检查的项目、使用的标准和方法，以及在每个批次产品中获得的结果，并纳入到该批次产品的档案文件中。 2、对于正在开发中的化妆品，应通过试验对其防腐剂的有效性进行评估，以确保贮存和使用过程中的微生物稳定性和防腐作用。在化妆品产品研发阶段应进行微生物挑战试验，通过试验数据评价该产品的防腐效能。 3、对于正常贮存和使用条件下可能变质或形成消费者感染风险物质的化妆品，应确保防腐剂的防腐效能。 4、对于防腐体系相同且配方近似的产品，可根据已有的资料和实验数据开展风险评估工作，但化妆品安全风险评估人员需阐明理由，说明情况。 七、注意事项 防范化妆品微生物污染，要把好三关。 1、选购 在购买化妆品时，可通过国家药品监督管理局官网的数据查询模块查询产品的许可或备案情况。 2、存放 开封后的储存环境很重要。应放在阴凉干燥、温度在20～25℃的环境中，避免日光直射。把化妆品放在卫生间其实是不对的，最好放在房间的梳妆台，保持通风和干燥；不要丢弃化妆品外盖内的保护盖，它可以防止空气进入，减少活性成分的流失，用完后务必将瓶盖封紧。 3、使用 尽量不要用手指直接挖取，应用清洁的塑料棒来取用。只能用手时，要先洗净双手；适量取用，多余部分不应放回瓶中，以免污染。开封后的化妆品最好不要长久存放，尽快使用。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   金氏拟杆菌的保藏条件与注意事项及打管说明！ 一、菌种简介平台编号：Bio-120924 规格：冻干物拉丁属名：Parabacteroides Goldsteinii 中文名称：金氏拟杆菌拉丁名称：Parabacteroides goldsteinii来源历史：JCM原始编号：WAL 12034原产国：美国模式菌株：是生物安全级别：一级其它保藏中心编号：JCM 13446=ATCC BAA-1180=CCUG 48944=DSM 19448=KCTC 15612培养基编号：35、177培养基成分：EG GAM血平板培养温度：37℃培养时间：24.0需氧类型：专性厌氧分离基物：人体组织采集地：美国保存方法：冷冻干燥管保藏用途：教学，研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基*TSA+5%脱纤维蛋白羊血（血琼脂平板）*GAM 培养基（建议直接买成成品培养基） 三、保藏条件培养物和安瓿冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请放-20°C 保存。甘油请置于-80°C。  四、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml-0.5ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板，操作完毕后尽快置于厌氧环境下恒温培养；若需接种液体培养基，制作培养液时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养液中的氧气）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2 支，中国微生物菌种查询网提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    食吡啶红球菌：用于工业污水净化（晴仑废水） 食吡啶红球菌是Rhodococcus属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类；研究；教学。 一、菌种简介平台编号：Bio-03038 提供形式：冻干物拉丁属名：Rhodococcus Pyridinivorans 中文译名：食吡啶红球菌拉丁学名：Rhodococcus pyridinivorans原始编号：No.3-2菌株来源：←中国科学院微生物研究所保藏人：杨惠芳直接来源国家：中国保藏时间：4/1/1977其他保藏编号：生物危害：四类模式菌株：非模式菌株菌株用途：工业污水净化（晴仑废水）培养温度：28℃培养基：0002    其他培养条件分离源：塔式生物滤池第三层采集地点：上海市第二化纤厂采集国家：中国用途：工业污水净化（晴仑废水） 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征细菌菌体呈短杆状，分散排列，菌落直径约2-3mm，菌落为圆形，黄色，表面光滑，边缘整齐。细菌无荚膜，无芽孢，革兰氏染色为阳性，细菌通过裂殖进行繁殖。该细菌为异养型细菌，在生长过程中需要氧气，不需要阳光，接触酶反应阳性，氧化酶反应阴性。该细菌的最适生长温度为30℃左右，最适环境pH为7.0左右。该细菌在生长过程中不需要添加生长因子和其他营养物质。  三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    微生物培养基：孟加拉红培养基的成分分析！ 微生物培养基是微生物检测中的重要组成部分。在过去实验室往往是自制培养基使用，但是随着社会的发展，现在大多数的实验室已经完全用商品化培养基代替了自制，这样一来大大减少了工作量并且保证了质量的稳定。但是我们作为使用者，依然需要对培养基的基本成分的作用机理进行了解。 微生物生长所需要的营养物质 微生物生长所需要的营养物质主要以相对应的有机物与无机物的形式存在。这些营养物质按照它们在微生物机体中的生理作用不同，区分成碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水六大类。 其中，化能异养型微生物的能源和碳源都来自于有机物，利用有机物的氧化分解产生能量进行生长。 化能自养型微生物以二氧化碳为碳源，利用无机化合物氧化过程中释放出的能量进行生长。 孟加拉红培养基的成分分析 霉菌酵母菌计数常用的培养基是孟加拉红（虎红）培养基，其中加入了一定量的氯霉素可有有效地抑制绝大多数细菌菌落的生长。 以检测霉菌酵母菌的孟加拉红培养基为例：   对于具体成分的分析： 1、琼脂(agar)：一种多糖分子化合物,(C12H18O9)n，胶体，冷却至40℃开始逐渐凝固，在微生物培养基中被用作凝固剂，来改变培养基的物理性状(固体或半固体)，其本身不被细菌分解利用，也无营养作用。 2、水分，微生物需水量随种类不同而不同，而它们的繁殖与培养基中的水分活性有关，水分活性越低，繁殖越差，一旦水分活性低于某种水平时，整个繁殖就停止。因此配置培养基时，水分与培养基配比要准确，倾注平板的量不宜过少。 3、为避免培养基PH变化对微生物生长造成影响，需要在培养基中加入缓冲剂。培养基的pH必须控制在合适的范围内，以满足不同类型微生物的需要。 例如，酵母菌和霉菌生长所需的适宜pH在3.8～6.0范围，但是，随着营养物质被逐渐分解，微生物不停的生长繁殖和代谢，培养基的pH会开始变化，因此，为了维持培养基pH的相对恒定，通常在培养基中加入pH缓冲剂，如上述的磷酸二氢钾。磷酸二氢钾呈弱酸性，当培养基中碱性物质积累导致OH-浓度增加时，OH-则与弱酸性盐结合形成弱碱性化合物，培养基pH就不会过度升高。 4、注意各种营养物质的浓度与配比（如碳氮比），营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需，浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用。以葡萄糖为例，低浓度时，随着剂量的增加甚至可以干扰某些抑菌剂的抑菌作用，但是高浓度时，反而会起到抑菌效果。 5、抑菌成分的抑菌作用并非百分之百，因为必须考虑到高浓度的抑菌剂的效果会“不分敌我”，所以在这种情况下采用抑制非目标菌的剂量往往不会最优。 孟加拉红培养基中的氯霉素，并不能完全抑制细菌的生长，少量种类的细菌会在孟加拉红培养基上生长良好，并且会通过孟加拉红的染色成为粉红色，外观上与酵母菌无异。所以当我们检测食品时发现了“酵母菌”，请不要忘记做镜检确认。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

              高低温试验箱做实验不可以装满样品的原因及注意事项！ 高低温试验箱适用于工业产品高低温可靠性试验。在高温、低温循环变化的情况下，检验电子电工、汽车摩托车、航空航天、船舶武器、科研单位等相关产品的零部件和材料的各项性能指标。 大家在咨询实验项目时，相信经常会被问到[请问您的测试样品有多大]，其实这个问题的目的，就是为了清楚了解试验箱型号能不能满足被测试样品的摆放需求。 根据相关标准，高低温试验箱的箱内容积至少应是被测试产品外廓体积的3～5倍，高低温试验箱做实验不可以装满样品的原因主要有以下三个： 1、气流与样品间热交换影响 被测样品放入箱体后，通道会变容，从而导致气流速度增加，加速气流与被测产品之间的热交换。这与环境条件的再现不一致，因为相关标准规定试验箱内试验样品周围的空气流速不应超过1.7m/s，以防止试验样品和周围气氛不符合实际的热传导。在空载时试验箱内平均风速为0.6-0.8m/s，不超过大概1m/s。 如果满足上述要求规定的空间和面积比，流场风速可能会增加50%-100%左右，平均极限风速不超过1.7m/s，满足标准规定的要求。如果在试验中不受限制地增加被测样品的体积或迎风截面积，实际试验时气流风速会增加到超过试验标准规定的极限风速，其试验结果的有效性将受到怀疑。 2、样品周围环境参数均匀性影响 工作室内环境参数的精度指标是在空载状态下检测的结果。一旦放入被测产品，会影响试验箱工作室内环境参数的均匀性。被测产品占用的空间越大，影响就越严重。 实验数据显示，流场迎风面与背风面的温差可达3℃~8℃，严重时可达10℃以上。因此，必须尽可能满足标准中规定的要求，以确保被测产品周围环境参数的均匀性。 3、箱壁/附近与流场中心温差影响 根据导热原理，箱壁附近的气流温度一般与流场中心温度相差2℃~3℃，在高低温上下限时，也可达5℃。箱壁温度与箱壁附近流场温度又相差2-3℃，取决于箱壁的结构和材料，试验温度与外界大气环境的差异越大，上述温差也越大，因此，与箱壁100-150mm之间的空间是不可利用的。 4、注意事项 产品之间不要放置太过密集，若产品是液体、浓液，则一定要用容器装好再放入箱内；橡胶类产品需要用盘子垫着；如果是易挥发、易燃易爆或是有自燃点的产品，温度切记不能设置太高，也不能让液体洒出来，还有一些小的零部件产品需提前准备合适的托盘。 所以，大家在测试过程中，满足标准要求的情况下，可以根据上面的内容来对高低温试验箱试验样品进行正确摆放，预留主要样品的测试空间，这样才能获取更准确的测试数据，有利于产品的研发和改善。 如果需要做的样品数量多，而测试设备又不够的情况下，只能分批次进行测试，这样才可以得到更加准确的测试数据。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

              除菌过滤器微生物截留的试验目的与方法及结果与讨论！ 1、目的 探讨非最终灭菌注射剂生产过程中除菌过滤器对微生物的截留效果，确认过滤除菌工艺的有效性与安全性。 2、方法 采用孔径为0.22 μm除菌级聚醚砜滤芯，以直径在0.3～0.4 μm的缺陷假单胞菌为生物指示剂，将菌液用滤芯过滤，计算被过滤液体过滤前的微生物数量与过滤后的微生物数量比的常用对数值(LRV)。 3、结果 菌液过滤前后微生物数量比的常用对数值LRV大于7。 4、结论 滤芯每平方厘米有效过滤面积符合中国药典2005年版2部附录ⅩⅦ灭菌法的规定，确认除菌过滤工艺在注射剂生产过程中的有效性与安全性。   除菌过滤器在药品生产中主要用于无菌药品的除菌过滤，除菌过滤是药品生产过程中非常重要的一种除菌方式，特别是对非最终灭菌的注射剂而言，除菌过滤是消除药液中微生物的唯一方法。通过对除菌过滤器滤芯材质的选择、灭菌方法、完整性测试以及细菌的截留试验，确认除菌的效果，提高除菌过滤在注射剂生产过程中无菌保证程度重要性的认识。  一、材料与方法  1、试验材料  (1)滤芯：滤膜材质为聚醚砜，10英寸226卡式，孔径：0.22 μm，级别：除菌级，滤膜面积：3 600 cm2。来源：颇尔过滤器(北京)有限公司。(2)全自动过滤器完整性测试仪：上海先维过滤设备厂，型号：212A。(3)甘露醇：广西南宁化学制药有限公司，批号：0809110，配置20 kg 浓度为0.5%的水溶液。(4)微生物指示剂：缺陷假单孢菌(ATCC19146直径0.3～0.4 μm)，北京鑫四环消毒技术开发中心。(5)菌液浓度：每平方厘米应达到107个菌的挑战水平。(6)培养基：硫乙醇酸盐流体培养基：北京三药科技开发公司，批号:081111；营养琼脂：广东环凯微生物科技有限公司，批号:200902081；营养肉汤：广东环凯微生物科技有限公司，批号:200901071。(7)试验压力：约为0.2 Mpa。(8)试验流量：筒式过滤器2～3.86L/(m3·min)。  2、方法  1.2.1 滤芯的清洗   将滤芯浸泡于0.1%氢氧化钠溶液中12～24 h，取出用注射用水反复冲洗至冲洗水的pH值呈中性。  1.2.2 完整性测试   将过滤器与完整性测试仪连接，向经过注射用水充分浸润的过滤器(含滤芯)中通入压缩空气，观察压力表读数的变化，当浸入液面下的导管出口处出现第1个气泡时，读取压力表指示值，此压力值即为滤器滤芯的起泡点压力，压力要求≥0.31 Mpa。 1.2.3 缺陷假单胞菌液的制备   取缺陷假单胞菌的新鲜培养物少许，接种至营养肉汤培养基中，于(32.5±2.5)℃培养18～24 h，活菌计数将上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成含菌 1.2.4 微生物截留试验   (1)过滤系统灭菌：将试验所需的不锈钢桶、硅胶管、过滤器及滤芯等置于脉动真空灭菌器中于121 ℃灭菌30 min。(2)对照试验：取1 000 mL甘露醇溶液(0.5%)用无菌过滤器压滤，各取2份样品，分别用薄膜过滤法处理后，一份作阴性对照，另一份在最后1次冲洗液中加入缺陷假单胞菌菌液1 mL( 二、结果  药液过滤前的微生物的数量与药液过滤后的微生物数量比的常用对数值为7.8，大于标准规定值7，结果见表1。证明除菌级滤芯可达到每平方厘米107个菌的截留效果，完全符合非最终灭菌注射剂的生产工艺要求。表1  微生物截留试验结果（略）  三、讨论  除菌过滤器微生物截留试验结果表明，孔径为0.22 μm除菌级滤芯对微生物的截留试验可达到LRV大于7的微生物截留效果，达到除菌的目的。但是与其他灭菌方法相比，除菌过滤的风险最大，实际生产中宜安装第2只已灭菌的除菌过滤器再过滤1次药液，最终的除菌过滤器应尽可能接近灌装点。因此，对于采用除菌过滤和无菌生产工艺生产的注射剂产品，在除菌过滤时，被过滤产品总的微生物污染量应控制在规定的限度内。要达到这一目的，应在无菌控制的环境下进行过滤操作，相关的设备、包装容器、胶塞及其他物品应采用适当的方法进行灭菌，并防止再次污染。对生产用原辅料还应进行微生物限度的检查，以降低其微生物负载率，通过整个生产过程的严格控制，采用经验证确认的除菌过滤和无菌生产的工艺，产品的无菌是能够得到保证的。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     肺炎链球菌的实验室检查与诊断及安全防护！ 一、知识简介 肺炎链球菌于1881年首次由巴斯德（Louis Pasteur）及G. M. Sternberg分别在法国及美国从患者痰液中分离出。为革兰染色阳性，菌体似矛头状，成双或成短链状排列的双球菌，有毒株菌体外有化学成分为多糖的荚膜。 二、生物学性状 1、形态与染色 典型的肺炎链球菌为革兰染色阳性球菌，直径约1μm。常呈双排列。有毒株在体内形成荚膜。普通染色时荚膜不着色，表现为菌体周围透明环，无鞭毛，不形成芽胞。菌体衰老时，或由于自溶酶( autolysin)的产生将细菌裂解后，可呈现革兰染色阴性。 2、培养特性 需氧或兼性厌氧。在固体培养基上形成小圆形、隆起、表面光滑、湿润的菌落。培养初期菌落隆起昰穹隆形，随着培养时间延长，细菌产生的自溶酶裂解细菌使菌落中央凹陷，边缘隆起成“脐状”。肺炎链球菌在血琼脂平板上菌落周围形成α溶血环。培养基中加入5%~10%CO2可促进细菌的生长。奥普托欣（Optochin）可抑制肺炎链球菌生长。 3、生化反应 大多数新分离出的肺炎链球菌可发酵菊糖，故菊糖发酵试验在鉴别肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌时有一定的参考价值。 4、抗原构造与分型 荚膜多糖抗原存在于肺炎链球菌荚膜中。根据荚膜多糖抗原性的不同将肺炎链球菌分为84个血清型，其中1~3型致病力强，主要引起人类大叶性肺炎。 5、抵抗力 抵抗力较弱，56℃15~30分钟即被杀死。对一般消毒剂敏感。有荚膜株抗干燥力较强。对青霉素、红霉素、林可霉素等敏感。 三、检查及诊断 （一）实验室检查 1、标本采集 包括痰、脓液、血液、脑脊液等标本。 2、细菌学检查 痰直接涂片作革兰染色及荚膜染色镜检，如有革兰阳性、带荚膜的双球菌或链球菌，可做出初步病原诊断。痰培养24-48小时可确定病原体。10%-20%患者合并菌血症，应做血培养，血培养检出肺炎链球菌有确诊价值。聚合酶链反应(PCR)检测及荧光标记抗体检测可提高病原学诊断水平。 3、分离培养 常采用羊血平板，有助于其溶血特征的识别和进一步鉴定，而且初代分离应置5%~10%CO2的环境下培养。在血平板上，肺炎链球菌的菌落直径0.5~1.5mm，灰白色、半透明、表面光滑（有些菌株可表现为粘液状）扁平，周围环绕着草绿色溶血环。培养或放置24h以上的培养物还会由于肺炎链球菌的自溶作用而致菌落中央塌陷而边缘隆起，而呈脐窝状。 4、鉴定试验 ①胆汁溶菌试验：本试验的原理基于胆盐能够通过活化肺炎链球菌的自溶酶而溶解肺炎链球菌，但不能溶解草绿色链球菌。常用的方法包括快速平板法和标准试管法。前者取一接种环2%去氧胆酸钠溶液加于血平板待鉴定菌的菌落上，置35℃孵育15~30min，菌落溶解消失为阳性。而后者则是在1ml待鉴定菌18~24h培养液中加入2滴10%去氧胆酸钠溶液，35℃孵育5-10min后鉴定菌管由混浊变为透明者为阳性。 ②奥普托欣（Optochin）试验：用以与其他草绿色链球菌相鉴别。用接种环将单个待鉴定菌落均匀涂于血平板上，用含量为5μg的optochin纸片贴于接种区中央，35℃需氧培养过夜，抑菌圈 >18mm的为阳性。本菌为阳性。 5、小鼠毒力试验 若用有毒力的菌株接种小鼠，接种后12-36h，小鼠死亡。 （二）血常规检查 白细胞计数升高，中性粒细胞比例多>80%，并有核左移，细胞内可见中毒颗粒。年老体弱、酗酒免疫功能低下者可仅有中性粒细胞增多。 （三）胸部X线检查 呈多样性，早期仅见肺纹理增粗，或受累的肺段、肺叶稍模糊。随着病情进展，可呈斑片状或大片状实变阴影，在病变区可见多发性蜂窝状小脓肿，叶间隙下坠消散期，因炎性浸润逐渐吸收，可有片状区域吸收较快而呈现“假空洞”征。一般起病3-4周后才完全消散。 （四）诊断要点 根据寒战、高热、胸痛、咳铁锈色痰、鼻唇疱疹等典型症状与肺实变体征，结合胸部Ⅹ线检查，容易做出初步诊断。病原菌检测是本病确诊的主要依据。 四、安全防护 根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定，人间传播的微生物名录（待颁布）肺炎链球菌属于三类，BSL-2。相关的防护事宜包括： （一）操作要求 1、实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。 2、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。 3、所有的操作过程应尽量细心，避免产生和溅出气溶胶。 4、对于污染的锐器，必须时刻保持高度的警惕，包括针、注射器、玻片、加样器等。 5、注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器（即注射器和针头是一体的）。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。 6、打碎的器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在倒掉前，应按照相关的规定进行消毒。 7、所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。离开该系统进行消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关的法规。 8、溅出或偶然事件中，明显暴露于传染源时，要立即向实验室主任报告。进行适当的医学评估、观察、治疗，保留书面记录。 9、按日常程序、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。污染的设备在送去修理、维护前，要按照相关的规定消毒；在离开设施转移前，要按照相关的规定打包运输。 （二）安全设备 1、正确使用和保养生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其他合适的人员防护设施、或物理遏制装置。 2、确定可能形成传染性气溶胶或溅出物的实验过程，包括离心、研磨、匀浆、剧烈震荡或混匀、超声波破裂、开启装有传染源的容器、采集感染标本等。 3、涉及高浓度或大体积的传染源时，若选用密封转头或带安全罩的离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放实验室内离心。 4、当必须在生物安全柜外处理标本时，需采取面部保护措施（跟镜、口罩、面罩、或其他防溅装置），以免传染源或其他有害物溅或洒到面上。 5、在实验室内，必须使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非实验室区域时，防护服必须留在实验室内。防护服可以在实验室内处理，也可以在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。 6、可能接触潜在传染源、被污染的表面或设备时，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重复使用，不能用于接触“洁净”的表面（键盘、电话等），也不应当戴着到实验室外。要备有带滑石粉的乳胶手套。脱掉手套后，要洗手。          欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

               克鲁维毕赤酵母：用于生产与教学及发酵植物性材料  克鲁维毕赤酵母是Pichia属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；教学；生产，具体用途为发酵植物性材料。 一、菌种简介平台编号：Bio-65054 规格：冻干物拉丁属名：Pichia Kluyveri 中文名称：克鲁维毕赤酵母属名：Pichia种名加词：kluyveri来源历史：←甘肃省科学院生物研究所(51615)收藏时间：2008.11.21原始编号：咸7资源归类编码：15151113125模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；教学；生产具体用途：发酵植物性材料特征特性：细胞卵形，长形到圆柱形；单个成双或成链；在液体中形成皱状菌膜；形成假菌丝；发酵葡萄糖，不发酵蔗糖，麦芽糖；同化葡萄糖，不同化可溶性淀粉，麦芽糖；不同化硝酸钾；在无维生素生长阳性；耐受5％NaCl。    生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：咸菜培养基：*12 Brix. 麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，pH自然。[注] 麦芽汁制备：大麦芽若干，粉碎后，加入4倍于麦芽重量的水，搅拌均匀，在55～60℃保温箱内糖化4h，取出过滤，得麦芽汁，测量此麦芽汁的体积和浓度后，分装于已灭菌的三角瓶中，0.6kg/cm2灭菌40min备用，用时将滤液稀释至所需糖度。培养温度：25℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；教学；生产；发酵植物性材料 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征细胞卵形，长形到圆柱形；单个成双或成链；在液体中形成皱状菌膜，形成假菌丝；发酵葡萄糖，不发酵蔗糖，麦芽糖；同化葡萄糖，不同化可溶性淀粉，麦芽糖；不同化硝酸钾；在无维生素生长阳性；耐受5％NaCl。 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请放-20°C 保存。甘油请置于-80 度。  四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 五、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 六、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说，菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     C8-D1A鼠小脑细胞的应用及冻存与传代方法！ 一、细胞简介平台编号：Bio-73447 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：C8-D1A 细胞名称：C8-D1A（鼠小脑细胞） 种属：小鼠 年龄（性别）： 组织来源：生长特性：贴壁 细胞形态：神经细胞样 背景描述 生长培养基：DMEM高糖＋10% FBS＋1% P/S培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃用途：(种属鉴定正确)注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、收到冻存细胞的处理方法1、37°C水浴预热培养基；2、从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）；3、在超净台中加入5ml培养基重悬细胞，1000rpm离心5min；4、弃上清，加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中，轻轻晃匀；5、置于37°C，5%CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话，瓶盖不要拧太紧)；6、第二天，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。 三、细胞传代1、当细胞融合度达到90%以上时，给细胞传代；2、37°C水浴预热培养基；3、在超净台中，弃培养基，加入2-5mlPBS清洗细胞后，再加入1ml胰酶消化细胞；4、显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，加入5ml培养基终止消化；5、用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散；6、将细胞移入离心管中，1000rpm离心5min；7、弃上清，加入15-20ml的培养基重悬细胞后转入T75培养瓶中或按适当比例传到T25瓶中（确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间），细胞密度大于1×104cells/cm2，混匀细胞悬液，确保均匀分布；8、将培养瓶置于37°C，5%CO2的无菌培养箱中培养。 四、应用用于超短波通过调节MK2/TNF-α通路抑制炎症反应促进脊髓损伤修复研究：超短波（USW）治疗在临床上越来越受到广泛关注。USW作用广泛,可扩张局部血管,改善局部血液循环和组织营养,还可以消炎镇痛,提高神经肌肉兴奋性和生物活性。USW曾被报道对SCI有保护作用。炎性反应是脊髓继发性损伤的一个重要环节,一般持续时间较长,损伤范围较广。其中最常见的炎性因子是TNF-α及IL-1β,在细胞毒性反应中起非常重要作用。丝裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶2（MK2）及其介导的炎症参与SCI。MK2参与调控细胞周期、细胞迁移、肌动蛋白重构以及炎症反应等。MK2还参与关节炎、高血压、动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、急性胰腺炎以及银屑病等疾病的炎症反应过程。H2O2处理的C8-D1A星形胶质细胞中,MK2、TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白表达与对照组相比显著升高（P 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   肺炎链球菌的传播方式与抗原构造及鉴定方式！ 一、知识简介 肺炎链球菌于1881年首次由巴斯德（Louis Pasteur）及G. M. Sternberg分别在法国及美国从患者痰液中分离出。为革兰染色阳性，菌体似矛头状，成双或成短链状排列的双球菌，有毒株菌体外有化学成分为多糖的荚膜。 二、形态与染色 典型的肺炎链球菌为革兰染色阳性球菌，直径约1μm。常呈双排列。有毒株在体内形成荚膜。普通染色时荚膜不着色，表现为菌体周围透明环，无鞭毛，不形成芽胞。菌体衰老时，或由于自溶酶( autolysin)的产生将细菌裂解后，可呈现革兰染色阴性。 三、传播方式 本病主要为散发，可借助飞沫传播，冬季与初春多见，常与呼吸道病毒感染并行。患者多为原来健康的青壮年或老年与婴幼儿，男性较多见。吸烟者、痴呆者、支气管扩张、慢性支气管炎、慢性病患者及免疫抑制者等易感染。感染后可获得特异性免疫，同型菌二次感染少见。 四、抗原构造 1、荚膜多糖抗原 存在于肺炎链球菌荚膜中。根据荚膜多糖抗原性的不同将肺炎球菌分为91个血清型。 2、菌体抗原 ⑴C多糖：存在于肺炎链球菌细胞壁中，具有种特异性，为各型菌株所共有。C多糖可被血清中C-反应蛋白沉淀。在钙离子存在时，C多糖可与正常人血清中称为C-反应蛋白（C reactive protein,CRP）的β球蛋白结合，发生沉淀。 ⑵M蛋白：具有型特异性。M蛋白刺激机体产生的相应抗体无保护作用。 五、抗原变异 肺炎链球菌可能发生的变异有荚膜变异：即从有荚膜有毒力的光滑（S）型菌变异为失去荚膜毒力减低或消失的粗糙（R）型。 六、鉴定方式 1、荚膜肿胀试验(capsule swelling test) 亦称为Quellung试验。新鲜的标本悬液与等量不稀释的肺炎球菌分型诊断血清混合后，覆以盖玻片，油镜下观察。标本中肺炎球菌若与同型免疫血清相遇，荚膜将显著增大。 2、凝集试验（agglutination test） 将可疑肺炎球菌与已知标准分型血清作玻片凝集试验，若细菌凝集成堆，为同型肺炎球菌。 七、细菌防治 避免淋雨受寒、疲劳、醉酒等诱发因素。对于老弱体衰和免疫功能减退者，如糖尿病、慢性肺病、慢性肝病、脾切除者，可注射肺炎免疫疫苗。 病人在发热期间，应卧床休息，吃容易消化的食物，多喝水。磺胺类药物、青霉素等对肺炎等疾病的治疗较为有效。 由于肺炎球菌对多种抗生素敏感，早期治疗通常患者可很快恢复。青霉素G为首选治疗药物。但已发现肺炎球菌对青霉素、红霉素、四环素的耐药菌株。对青霉素的耐药菌株，对万古霉素依然敏感。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 菌落总数模拟乳粉质控样品的使用说明与注意事项！ 菌种简介平台编号：Bio-84545 规格：冻干物 拉丁属名：质控样品 中文名称：菌落总数模拟乳粉质控样品模式菌株：模式菌株 需氧类型：好氧用途：微生物类 真空西林瓶 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 产品说明1、测试项目：菌落总数测定（模拟乳粉）2、形式：冻干菌粉为真空西林瓶包装；模拟乳粉质控样品配套奶粉为铝箔袋真空包装。每个相同货号的冻干菌粉和配套奶粉作为一个样品。3、保存：收到样品后立即按照产品标签上推荐的储存温度保存。4、前处理：冻干菌粉开启后，立即加入 1.5mL 稀释液，待溶解后震荡均匀，取 1mL 加入 225mL 稀释液中，然后再将同货号的配套奶粉加入到上述稀释液中，充分均质混匀，按照《4789.2-2016 食品安全国家标准食品微生物学检验 菌落总数测定》进行后续检测。5、结果报告：实验结束后出具报告，报告单位以 CFU/g 表示。 注意事项1、收到样品后，请按照产品标签标注的储存条件保存。2、从冰箱中取出的样品需在室温平衡 30-60min 再使用。3、西林瓶内样品处于真空状态，开启时要小心。4、从开启样品到测试结束均应按照无菌操作进行。5、冻干粉末状态的样品为一个样品单元，是不可分割的整体，勿取其中一部分测试。6、稀释液可以用生理盐水或磷酸盐缓冲液。7、用稀释液溶解样品时，必须在西林瓶中进行，不允许将西林瓶中的样品（冻干菌粉）倒出西林瓶再水化。8、样品中含有活的微生物（可能含有致病微生物），请不要直接用手接触西林瓶内样品，请在符合生物安全规定的条件下操作。9、培养过程中请随时观察检测结果并予以记录。 微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！ 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到Z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得Z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！