小鼠食管平滑肌细胞接收后的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-73781 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 细胞名称：小鼠食管平滑肌细胞培养条件：原代细胞取组织现分用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述食管是咽和胃之间的消化管，哺乳动物的食管结构上由内向外分四层:黏膜层、黏膜下层、肌层、外膜。食管平滑肌集中在肌层，仅在食管的下 2/3段存在，其中中段的 1/3位骨骼肌和平滑肌混合组成，下 1/3段全部为平滑肌，而上段1/3全部为骨骼肌。食管的运动，上部的横纹肌受舌咽神经和迷走神经的支配，这些运动神经元末梢以运动终板形式进入骨骼肌。迷走神经尚支配食管其余部分的平滑肌，其节前纤维末梢与食管壁内神经丛的节细胞发生突触联系，再发出节后纤维支配平滑肌细胞。在吞咽时，吞咽中枢兴奋通过上述运动神经元和迷走神经传出纤维，引起食管各段的肌肉发生蠕动。食管壁内神经丛可以不依赖外来神经来控制食管蠕动。 三、细胞特性1)细胞来源于人正常食管组织。2)细胞鉴定：平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于 90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：长梭状细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存 1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过 85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、培养步骤（1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。（2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 （3）细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃ 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                ATCC BAA-630褐色喜热裂孢菌的特点与优势及培养！ 一、菌种简介平台编号：Bio-81839 规格：Freeze-Dried 拉丁属名：Thermobifida Fusca 菌种名称：褐色喜热裂孢菌用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Thermobifida fusca (McCarthy and Cross) Zhang et al. 拉丁名(ATCC® BAA-630™) 统一编号Strain Designations 菌株别名 ER1 (genome sequencing strain), (David B Wilson, personal communication) Application 用途 Degrades cellulose Degrades xylan Biotechnology Isolation 分离基物 Derived from existing strain isolation date: 1988 Biosafety Level 生物安全等级 1 Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country. Product Format 提供形式 freeze-dried Preceptrol® no Type Strain 模式菌株 no Medium 培养基 ATCC® Medium 2382: Hagerdahl medium Growth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 50.0°C Atmosphere 需氧情况: Aerobic Name of Depositor 寄存人 DB Wilson, E Lin Special Collection NSF - Bacteriology Chain of Custody 来源国家 D B Wilson E Lin Isolation 分离基物 Derived from existing strain isolation date: 1988 Year of Origin 收藏年份 1988 References 参考文献 genome sequencing strain Wilson DB. Biochemistry and genetics of actinomycete cellulases. Crit. Rev. Biotechnol. 12: 45-63, 1992. PubMed: 1733521 mutagenesis of Thermobifida fusca strain YX David B Wilson, personal communication genome sequencing strain David B Wilson, personal communication 三、产品特点1、该菌具有解磷、解钾的功能。2、具有活化土壤中硅、钙、镁中量元素作用。 3、具有提高铁锰铜锌钼硼供应的功效。 4、提高或延长肥效,减少化肥用量。 5、提高作物抗逆性,预防或减轻病害。   四、产品优势1、产品质量稳定，是为科研和生产提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装，冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法，保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序，确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业，疾控中心、质检局、出入境、药检局等等，得到广泛好评。 五、产品功效1、分解出长石、云母等矿物中的钾、硅,也能分解出磷灰石中的磷,,具有溶磷、释钾和固氮功能,同时能在生长繁殖过程中产生有机酸、氨基酸、多糖、激素等有利于植物吸收和利用的物质。2、本品在土壤中繁殖后,分泌植物生长刺激素及多种酶。3、菌体内的钾在菌体死亡后,游离出来,又可被植物吸收利用。作为微生物肥料中的一种重要功能菌,可提高土壤速效钾、磷含量,提高作物产量和品质等多种效。 六、培养及打管说明1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长。4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                 牛原代骨骼肌微血管内皮细胞的运输与保存及使用！ 一、细胞简介平台编号：Bio-136999 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶细胞信息：原代细胞 细胞名称：牛原代骨骼肌微血管内皮细胞注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述微血管内皮细胞受损已被视为创伤、感染、休克、肿瘤、血管疾病等多种疾病和综合症发生发展的病理基础。一旦微血管内皮细胞受损，必然影响甚至破坏微血管内皮细胞正常的生物学功能，引起多种疾病的发生。微血管内皮细胞间连接与血管通透性有着非常密切的关系。微血管内皮细胞合成与分泌前列环素、一氧化氮、内皮源性超极化因子和内皮素等物质，来维持血管的正常状态。 三、细胞特性1）细胞来源于实验动物正常肌肉组织。2）细胞鉴定：vWF免疫荧光染色为阳性。3）经鉴定细胞纯度高于90%。4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5）细胞生长方式：铺路石状细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    微生物基本知识之微生物洁净室的清洁与消毒！ 百欧博伟生物：清洁和消毒的目的是为了保证洁净室能在一个合适的时间周期内达到规定的微生物洁净水平要求。因此，洁净室的清洁与消毒是污染控制中一个很重要的部分。以下列出八个涉及到清洁和消毒的重要步骤，旨在保证洁净室的“洁净”。 1、正确理解清洁和消毒 清洁和消毒是两个不同的概念，有时候人们会混淆这两个概念。清洁，最主要的是使用清洁剂并在消毒之前进行。清洁剂是表面清洁，就是把表面的“油污”（例如灰尘和油脂）除去。油污去除是进行消毒之前很重要的一个步骤，因为表面油污残留越多，消毒的效果就会越差。 清洁剂一般是穿透油污降低表面强度（油污依附在表面），以达到清除的效果（粗略地说，清洁剂增加了水的清洗能力）。 消毒是采用化学杀菌方式，能杀灭大量的微生物繁殖体（另外，一些消毒剂是杀孢子剂）。 2、选择最适合的清洁剂和消毒剂 选择最合适的清洁剂和消毒剂是很重要的。洁净室的管理人员要确保清洁剂和消毒剂的效果以及为不同类型的洁净室选择合适的清洁剂和消毒剂。需要注意的是有些清洁剂和消毒剂不能混合使用。 在选择清洁剂的过程中，以下几点很重要： a)清洁剂应是中性、非离子型的。 b)清洁剂应该是不起泡沫的。 c)清洁剂应该和消毒剂相匹配（即清洁剂的残留不会削弱消毒剂的效果）。 在选择消毒剂的过程中，要考虑以下几点： a)为了满足GMP法规的要求，两种消毒剂应轮换使用。虽然监管部门要求使用两种不同的消毒剂，但是，科学地说，这是没有必要的。针对这一点，应选择两种有不同效果的消毒剂。明智的选择是，其中要有一种能杀死细菌孢子的消毒剂。 b)消毒剂应该具有广谱消毒作用（范围广），即消毒剂能有效的杀灭很多种类的微生物繁殖体，其中包括革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。 c)理论上，消毒剂应该很迅速的起作用（作用快）。消毒的速度取决于消毒剂杀死一个微生物群所需要的接触时间。接触时间就是使用消毒剂的表面必须保持湿润的时间。 d)有机物的残留和清洁剂的残留不能影响消毒剂的效果。 e)更高级别的洁净室（例如ISO 14644的5和7级）必须采用无菌的或者经洁净室操作人员灭菌后的消毒剂。 f)消毒剂应能够在洁净室运行温度条件下使用。如果这个洁净室是冷藏室，那么就要检查消毒剂能不能在这个温度下起作用。 g)消毒剂不能损伤被消毒的材料，如果会发生损伤，就要采取措施避免损伤的发生。很多能杀死细菌孢子的消毒剂都是含氯的，使用后若不及时擦除残留物，就会损伤材料，例如不锈钢材料。 h)消毒剂应对操作人员无害并符合当地健康安全法的标准。 i)消毒剂应该经济实惠且要便于稀释并装入符合要求的容器，例如手动式喷雾壶。 3、理解不同种类的消毒剂 消毒剂有很多不同的种类，适用于不同的消毒形式，针对于微生物有不同的消毒效果。消毒剂作用于微生物细胞时包括以下几个不同的方式，作用于细胞壁，细胞质薄膜（即磷脂和酶提供各种消化目标的地方）或者细胞浆。在杀细菌孢子和非杀细菌孢子（区分非氧化性和氧化性化学物质）的消毒剂之间做选择时，理解不同种类消毒剂之间的区别就显得尤为重要。 非氧化性消毒剂包括酒精，醛，两性表面活性剂，双胍，酚和季铵化合物。氧化性消毒剂包括卤素和氧化剂，例如过氧乙酸和二氧化氯。 4、验证消毒剂 验证包括实验室测试并使用美国AOAC标准或欧洲标准。有些测试可以由消毒剂的制造商实施，但是有些测试必须在厂房内进行。 消毒剂验证包括挑战性测试，即挑战不同浓度的消毒剂溶液（作为悬浮液测试），挑战不同材质的被消毒表面，以及挑战不同微生物的消毒效果，包括从厂房内分离的微生物的测试。 5、影响消毒剂效果的因素 在实际情况中，有很多因素会影响消毒剂的消毒效果。为了确保消毒活动的成功，能够了解这些因素是很重要的。影响消毒剂效果的因素包括： a)浓度：正是浓度的选择保证了最大程度上的微生物杀死率。消毒剂浓度越大杀死细菌越多是一个谬论。因为消毒剂只在合适的浓度起作用。 b)时间：消毒剂使用的时间很重要。消毒剂与微生物结合，穿过细胞壁，并达到消毒的具体目标部位，消毒剂这个特定的工作模式需要足够的时间。 c)微生物的数量和种类。对于某些特定的的微生物繁殖体，消毒剂的消毒效果不明显。一大群独立的微生物芽孢聚集在一起，不具有杀死细菌芽胞的消毒剂就失去了作用。 d)温度和pH值：每一种消毒剂都有一个最有效的pH值和温度范围。如果温度和pH值不在这个范围之内，消毒剂的消毒效果就会受到影响。 6、清洁材料 实施消毒和清洁时所使用是材料必须合适，能够将每一种清洁剂和消毒剂均匀涂成薄层。用于无菌生产区域的地板，设备表面和墙壁的清洁剂和消毒剂，这些材料必须是经过洁净室认证，并无颗粒脱落（如无纺布、不起毛的绒布）。 7、清洁技术 清洁消毒方法很重要。如果清洁剂和消毒剂没有正确使用，就不能有效地清洁区域表面，由于消毒剂不能穿过表面油污层，那么厂房内就会保持过高的微生物污染水平。 规定的清洗和消毒步骤必须到位，例如： 清扫灰尘和碎屑（如适用） 使用清洁剂溶液进行擦拭 确保清洁剂已干 使用消毒剂溶液进行擦拭 保持接触表面面湿润，保证足够接触时间 使用注射用水或70%IPA（异丙醇）进行擦拭，清除消毒剂的残留 8、监控清洁和消毒的有效性 用以评估清洁和消毒的有效性的方法主要是通过洁净室环境监测结果。通过触碟和棉签对表面进行微生物取样来进行评估。如果得到的结果不在规定的行动限或公司内控标准限度内，那就可能以下几个方面出了问题：清洁剂和消毒剂、清洁的频率或者清洁的方法。相反，如果结果是符合标准的，那么洁净室的管理人员就能自信的说，洁净室是真正的“洁净”。 9、总结 以上所列的就是使用清洁剂和消毒剂保持洁净室洁净的八个步骤。建议最好将上述提到的步骤整合到SOP中，并对操作和管理人员进行培训。一旦厂房设施经过验证并处于受控状态，最重要的事情就是使用正确的方法或技术以及合适的清洁剂和消毒剂，并在规定的周期内对厂房进行持续清洁和消毒。这样，洁净室就能保持洁净。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

               产左聚糖微杆菌的优势特点与微生物培养及注意事项！ 产左聚糖微杆菌是Microbacterium属的微生物，原产地为中国。细胞呈细长、不规则的杆菌。革兰氏阳性。不生孢，不抗酸。不运动或以1～36根鞭毛运动。好氧，弱厌氧。主要用途为研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-03262 提供形式：冻干物拉丁属名：Microbacterium Laevaniformans 中文译名：产左聚糖微杆菌拉丁学名：Microbacterium laevaniformans原始编号：BW34菌株来源：←中国科学院微生物研究所保藏人：王保军直接来源国家：中国保藏时间：4/6/2010生物危害：四类模式菌株：非模式菌株培养温度：30℃培养基：0033    其他培养条件分离源：土壤采集地点：河南省武陟县采集国家：中国用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、菌种培养1、孢子制备⑴放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 六、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

               别样恶臭假单胞菌的培养方法与实验内容及操作步骤！ 别样恶臭假单胞菌，革兰阴性杆菌，有些菌株为卵圆形，单端丛毛菌，运动活泼。专性需氧，最适生长温度25℃~30℃，42℃不生长，4℃生长不定，菌落与铜绿假单胞菌相似，但只产生荧光素（青脓素），不产生绿脓素，借此可与铜绿假单胞菌相区别，其陈旧培养物有腥臭味。 一、菌种简介平台编号：Bio-131911 规格：冻干粉 拉丁属名：Pseudomonas Alloputida 菌株名称：别样恶臭假单胞菌培养基：蛋白胨：10.0，牛肉粉：3.0，氯化钠：5.0，琼脂：15.0，pH值：7.3±0.1(25℃)生长条件：30℃；18-24h；好氧存储条件：2-8℃安全等级：2形态：菌落直径为1-2mm，圆形，边缘整齐，不透明，正面黄色，颜色较浅，中间凸起，表面光滑，质地湿润，G－（红），杆菌。分离基物：土壤模式菌株：no应用领域：生物信息学用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基* 营养琼脂培养基（NA）* 胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）* LB 培养基（以上三款培养基任选一种即可） 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 四、操作步骤 ①准备1支含有5~10mL液体培养基或无菌水的试管和2个平板；②安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂，随后用镊子将其敲碎；③吸取0.5mL液体培养基打入冻干管，充分溶解后重新打回液体试管中，混匀；④吸取0.2mL菌悬液打入平板中，涂布均匀，重复两次获得两个平板；⑤置于上述培养条件下培养，菌种长出即可使用。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后 2 个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   IEC-6大鼠小肠隐窝上皮细胞的培养技巧有哪些？ 一、细胞来源描述 大鼠小肠隐窝上皮细胞主要来源于小肠的上皮组织。小肠是消化道的一部分，由十二指肠、空肠和回肠组成。其中，小肠的上皮组织由多种细胞类型组成，包括隐窝上皮细胞、吸收细胞、杯状细胞等。 隐窝上皮细胞是小肠上皮中最常见的细胞类型之一。它们位于小肠黏膜的隐窝区域，形成了许多腺体样的结构，被称为小肠隐窝。隐窝上皮细胞具有分泌黏液和素有保护作用的功能。 注：该细胞表达肠上皮特有抗原。氢化可的松可抑制该细胞的生长。（该细胞体外倍增次数有限，请使用靠前批次于实验） 以下是详细的IEC-6细胞培养技巧，包括操作步骤、培养条件、细胞复苏、传代和冻存等操作步骤： 二、IEC-6细胞的培养基配制 培养基可以使用DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）或RPMI-1640培养基，添加10%胎牛血清（FBS）。 在培养基中加入10ug/ml胰岛素，胰岛素是无血清哺乳动物细胞培养基中的普遍添加物质，在许多细胞活动中发挥重要作用：如促进糖和氨基酸转运，提高合成代谢降低分解代谢，刺激细胞生长等等。 DMEM +10%胎牛血清+1%P/S+10ug/ml胰岛素 注意: ①低温保存的细胞非常脆弱，请将冻存管放入37C的水中解冻，尽快复苏细胞。 ②提前室温预热培养基。 1、在无菌区准备好 15ml 离心管和 T-25 培养瓶并分别加入 5ml 完全培养基; 2、将冻存管放入 37C水浴锅中，握住冻存管不停晃动，直到内容物完全融化。然后立即将冻存管从水浴中取出，擦干并喷洒 75%乙醇，移至无菌区; 3、小心地拆卸盖子，不要碰到里面的螺纹，用移液枪轻轻吸出细胞悬液，加入到准备好的15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min; 4、弃上清后，轻弹离心管底部分散细胞沉淀，加入适量完全培养基重悬细胞后转入准备好的 T25 培养瓶 (建议加液量: 5~7ml) ; 5、轻轻摇动培养瓶使细胞均匀分布，如有必要(如使用不透气瓶)，松开阀盖，以便气体交换 6、将培养瓶放入 CO 培养箱中培养 三、细胞培养条件 在37°C的恒温培养箱中培养细胞。 维持细胞的湿度和合适的CO2浓度（通常为5%）。 四、细胞传代 1、细胞未长至 85%时，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，若培养瓶上无特殊标注，吸去剩余培养液，只留 6-8ml 培养液继续培养。 细胞已长满达 85-95%。即可进行传代，具体步骤如下: （1）弃去培养液，用 PBS 洗涤 1-2 次; （2）加入 1.0m 胰酶消化液，37C 消化约 10min(消化时间根据不同细胞及所用胰酶有所差异)，显微镜下观察细胞消化情况，若细胞回缩变圆、透亮、轻拍瓶壁呈流沙样脱落，则迅速拿回操作台，加入至少双倍的含 10%血清的完全培养液，终止消化并轻轻吹打细胞.使其变成单细胞悬液; （3）将细胞收集于离心管中离心 1000rmp/5min，弃上清，轻弹管底，将细胞弹散：加入新鲜培养基重悬细胞，进行传代；如果没有特别说明，建议收到细胞后的第一次传代比例为 1:2。 注：①观察细胞密度最好用(4X 物)观察，以确的断胞密度，观察细胞形态请用(10X 或20X)高倍镜观察。②推荐使用 0.25%胰酶EDTA 消化液。③瓶中运输的培养液不能重复使用，请换新鲜培养液培养。④有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心重后接种到新瓶内。 五、细胞冻存 当细胞达到合适的传代次数时，可以进行冻存以备将来使用。 使用合适的冻存培养基，含有10%二甲基亚砜（DMSO）和10%胎牛血清。 缓慢添加冻存培养基到细胞培养皿中，使细胞逐渐适应冻存液的浓度。 将细胞悬浮液分装到冻存管中，并在-80°C或液氮罐中冷冻保存。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     小肠结肠炎耶尔森菌亚种的实验室检查方法！  小肠结肠炎耶尔森氏菌属肠杆菌科，最适生长温度为22～29℃，在0℃也能生长。有34种O抗原，19种H抗原和1种K抗原，由抗原组成可分成许多菌群。从病人分离出的菌型大多数为O3型，少数为O5、O8、O9和混合型。 一、菌种简介平台编号：Bio-75128 规格：Freeze-Dried拉丁属名：Yersinia Enterocolitica Subsp. Enterocolitica 菌株名称：小肠结肠炎耶尔森菌亚种用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Yersinia enterocolitica subsp.菌株拉丁名enterocolitica (Schleifstein and Coleman) Frederiksen(ATCC® 9610™)菌株编号Strain Designations菌株别名: 33114 [CCUG 11291, CCUG 12369, CIP 80.27, DSM 4780, LMG 7899, NCTC 12982]  /Type Strain模式菌株: yes  /Biosafety Level生物安全等级: 2Deposited As Bacterium enterocoliticum Schleifstein and Coleman Classification Enterobacteriaceae, YersiniaStrain Designations菌株别名 33114 [CCUG 11291, CCUG 12369, CIP 80.27, DSM 4780, LMG 7899, NCTC 12982]Application Media testing Pharmaceutical and Personal CareIsolation 分离源Tissue, human; glanders-like infection of the face New York, United StatesBiosafety Level生物安全等级 2Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Antigenic Properties biovar 1, serogroup O:8 RefProduct Format提供形式 freeze-driedStorage Conditions Frozen保藏方法: -80℃ or colderFreeze-Dried冻干物: 2℃ to 8℃Live Culture活菌: See Propagation SectionPreceptrol® noType Strain模式菌株 yes Ref, Ref, (Frederiksen WA study of some Yersinia pseudotuberculosis-like bacteria (Bacterium enterocoliticum and Pasteurella X).In: Frederiksen WProceedings of the XIV Scandinavian Congress of Pathology and Microbiology, Oslo 1964OsloNorwegian Universities Press103-104, 1964) Antigenic Properties biovar 1, serogroup O:8 RefComments注释  Phagovar Xz Sal/Esc-Pyz-CRMOX+Medium培养基 ATCC® Medium 44: Brain Heart Infusion Agar/BrothGrowth Conditions生长条件Temperature培养温度: 30℃Atmosphere需氧情况: AerobicName of Depositor JM Coffey, RM PikeIsolation分离源  Tissue, human; glanders-like infection of the face New York, United StatesReferences参考文献  Bergey's Manual Syst. Bacteriol. 1: 505, 1984.Schleifstein JI, Coleman MB. An unidentified microorganism resembling B. ligniere and Past. pseudotuberculosis, and pathogenic for man. N.Y. State J. Med. 39: 1749-1753, 1939.Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media; Approved Standard - 3rd Edition. Wayne, PA. Clinical and Laboratory Standards Institute; CLSI M22-A3.   Skerman VB, et al. Approved lists of bacterial names. Int J Syst Bacteriol 30: 225-420, 1980.Validation list no. 75. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 50: 1415-1417, 2000.   McIver MA, Pike RMChronic glanders-like infection of face caused by an organism resembling Flavobacterium pseudomallei WhitmoreIn: McIver MA, Pike RMClinical miscellany1Springfield, ILCharles C.Thomas16-21, 1934   Frederiksen WA study of some Yersinia pseudotuberculosis-like bacteria (Bacterium enterocoliticum and Pasteurella X).In: Frederiksen WProceedings of the XIV Scandinavian Congress of Pathology and Microbiology, Oslo 1964OsloNorwegian Universities Press103-104, 1964   Microbiology of food and animal feeding stuffs--Guidelines on preparation and production of culture media-- Part 2: Practical guidelines on performance testing of culture media.. Geneva (Switzerland):International Organization for Standardization/ANSI;ISO ISO 11133-2:2003. 三、细菌的实验室检查及其它检查1、标本采集常为粪便以及食物，也可取血液和尿液等。粪便标本采集要求：采集的动物粪便标本应新鲜，病人的粪便标本最好在发病3-5病日内，使用抗生素之前。粪便采集量每份不少于5克，置于干净塑料袋或置于运送培养基中于6小时内送实验室检测，夏季标本的保存和运送要注意冷藏。原则上每天采集的标本可分两次送至实验室，即上午的标本中午12时前送到，下午的标本晚6时前送到，以便于及时开展检测医`学教育网搜集整理。2、分离培养——以粪便标本为例（1）冷增菌粪便与改良磷酸盐缓冲液以1：10混合于4℃增菌，并于10天，20天分别转种麦康凯MAC平板或耶尔森菌属专用选择性培养基CIN于25℃培养24～48h.（2）该菌的菌落在MAC平板上呈无色透明，在CIN平板上呈粉红色，偶尔有一圈胆盐沉淀；（3）将可疑菌落接种改良克氏双糖培养基25℃培养24h～48h，上、下层均为阳性（即显黄色）者接种Rustigian氏尿素培养基（使成浓厚菌悬液），振荡10秒钟25℃培养2～4h.（4）尿素阳性者再接种半固体各2管，1管于25℃培养24h，另1管于37℃培养24h.该菌在25℃动力阴性，37℃动力阴性。3、生化鉴定（25℃培养）：典型小肠结肠炎耶尔森菌主要的生化反应情况：脲酶阳性、硫化氢阴性、VP25℃阳性、鸟氨酸脱羧酶阳性。发酵葡萄糖、蔗糖产酸不产气，不发酵密二糖和鼠李糖。4、血清分型。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   ATCC 23212 豚鼠气单胞菌的特点与危害有哪些？ 豚鼠气单胞菌，属质控菌株，除弯曲菌属需冷冻保存（-18℃）外，其它都应在2-8℃保存。 一、菌种简介平台编号：Bio-087327 规格：Freeze-Dried 拉丁属名：Aeromonas Cavia 菌株名称：豚鼠气单胞菌用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Aeromonas caviae (ex Eddy) Popoff 拉丁名(ATCC? 23212?) 统一编号Deposited As Aeromonas dourgesi subsp. anaerogeneStrain Designations 别名 1317Isolation 分离基物 WaterBiosafety Level 生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedPreceptrol? noType Strain 模式菌种 noComments 注释 TaxonomyReferred to as the type strain of Aeromonas dourgesi subsp. AnaerogeneMedium 培养基 ATCC? Medium 3: Nutrient agar or nutrient brothGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 37.0°CName of Depositor 寄存者 H LeclercIsolation 分离基物 WaterReferences 参考文献 Bergey's Manual Syst. Bacteriol. 1: 548, 1984.Popoff M, Veron M. A taxonomic study of the Aeromonas hydrophila-Aeromonas punctata group. J. Gen. Microbiol. 94: 11-22, 1976. PubMed: 932684. . Curr. Microbiol. 5: 109-114, 1981. 三、产品危害豚鼠气单胞菌(A.caviae)，引起人类和动物的腹泻在全世界许多国家都发现，我国2012年来相继也有不少报道。2010年在熊猫腹泻标本中同时检出侵袭性大肠杆菌(EIEC)和豚鼠气单胞菌(A.caviae)，在国内尚未见报道。 四、菌株特点1、该菌为需氧芽孢杆菌，细菌繁殖体G兰氏染色阴性呈紫色，细菌芽胞孔雀绿着色。其细菌繁殖体对培养基要求低，在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨琼脂上生长良好，表面粗糙呈米黄色。2、适生长繁殖湿度为56－65℃，培养24h即可形成菌落，37℃下24h看不到菌落。3、本生物指示剂载体为高级滤纸片，染菌量为5×105－5×106cfu/片或1×106cfu/片，封装在小纸袋内，热死亡时间为121℃，3.9 min阳性，19 min阴性；D10值1.3－1.9 min，符合美国药典第十一版规定标准。4、该菌无毒，热抗稳定，在冰箱内4℃下保存一年抗力无明显下降，在常温（20℃左右）可保存1个月。 五、培养条件1、营养肉汁琼脂：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.0。[注]培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。pH7.0。121℃，15min。2、需氧类型：好氧3、培养温度：55℃ 六、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌1-2天，酵母3天，霉菌5-7天，大型真菌7-10天。2、试管斜面种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我司不负责任。4、使用者应保证菌种的安全储存和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。 七、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                 星海湾链霉菌的培养方法与实验内容及使用范围！ 星海湾链霉菌是Streptomyces属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类；研究，具体用途为共生微生物/野生鲻鱼肠道共生菌 产酶微生物/ 纤维素酶。 一、菌种简介平台编号：Bio-84764 规格：冻干物拉丁属名：Streptomyces Xinghaiensis 中文名称：星海湾链霉菌拉丁名称：Streptomyces xinghaiensis其它保藏中心编号：=ATCC 19609来源历史：←ATCC收藏时间：2017/1/4原始编号：M48-E2724 [NRRL B-2702]资源归类编码：15131517101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：ISP 2培养基，28℃培养7 d，菌落表面褶皱状，气生菌丝白色，基内菌丝黄色，无可溶性色素。ISP 4培养基，28℃培养7 d，菌落表面光滑，气生菌丝黄色，基内菌丝浅黄色，无可溶性色素。ISP 5培养基，28℃培养7 d，菌落表面褶皱状，气生菌丝白色，基内菌丝乳白色，无可溶性色素。高氏I号培养基，28℃培养6 d，孢子丝柔曲或螺旋状，有孢囊，孢子圆形。 GenBank接收序列号：M57437。具体用途：生产天冬氨酸转移酶、生产大菌素、生产泰乐菌素。生物危害程度：四类培养基编号：CM0038培养基名称：ISP-2培养基， (Yeast Extract Malt Extract Agar II)培养基成分：酵母粉 4.0g，麦芽提取物 10.0g，葡萄糖 4.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.3。培养温度：26℃需氧类型：好氧分离基物：土壤保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：生产天冬氨酸转移酶、生产大菌素、生产泰乐菌素。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征与模式菌株Streptomyces xinghaiensis S187(T) EF577247相似性为99.745%；革兰氏阳性，Marine agar 2216(BD)培养基25℃培养14天观察：单菌落圆形、3-5mm、表面粗糙、质地、干燥、无光泽、中央凸起、边缘规则，土黄色，孢子白色，基内菌丝土黄色，无可溶性色素；在25℃MA培养基上生长5天,蛋白酶、淀粉酶、脂酶（三丁酸甘油酯）阴性，纤维素酶（透明圈7/12）。  三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 六、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  大鼠子宫内膜上皮细胞的应用及培养操作步骤！ 一、背景 大鼠子宫内膜上皮细胞指的是大鼠子宫内膜上皮细胞。子宫内膜是指构成哺乳类子宫内壁的一层，对动情素和孕激素都起反应，因此可随着性周期（发情周期、月经周期）发生显著的变化。子宫内膜覆盖着粘膜，由粘膜上皮与其下方的固有层所组成，而粘膜上皮为柱状上皮、立方上皮或复层柱状上皮。当动情素分泌时，各上皮细胞将长大、分裂使数目增多。 大鼠子宫内膜上皮细胞具有一些特性，包括组织来源于实验动物的正常子宫组织，细胞鉴定显示广谱角蛋白（PCK）免疫荧光染色为阳性，经鉴定细胞纯度高于90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。在培养条件下，这些细胞以铺路石状、不规则形态贴壁生长。 大鼠子宫内膜上皮细胞也可以用于研究内膜功能的各种方面，包括激素调节、细胞信号传导途径和细胞分化。 二、大鼠子宫内膜上皮细胞培养操作 1)复苏大鼠子宫内膜上皮细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)大鼠子宫内膜上皮细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)大鼠子宫内膜上皮细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 大鼠子宫内膜上皮细胞可以用于益气化瘀方对子宫复旧不全大鼠子宫内膜细胞凋亡及Bcl-2蛋白、Bax蛋白表达影响： 探讨益气化瘀方对子宫复旧不全大鼠子宫内膜上皮细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响,了解产后子宫内膜发生、增殖和演变的规律,为多种产后疾病的预防和治疗提供重要的指导依据。 方法：分娩后40只SD大鼠随机分为五组,每组别含有8只SD雌鼠,分别是：空白组、模型组、新生化颗粒组、益气化瘀方低剂量组、益气化瘀方高剂量组。分娩后,将过夜培养(生理盐水稀释成1.0×107个/mL)的大肠杆菌,分别对模型组、新生化颗粒组、益气化瘀方高、低剂量组进行造模,即子宫内接种大肠杆菌,子宫接种量为0.2mL。于造模成功后第一天,分别给予空白组、模型组、新生化颗粒组、益气化瘀方高、低剂量组连续7天灌胃处理,第8天腹主动脉采血后,取标本。通过光镜观察HE染色各组大鼠子宫切片的病理改变；采用TUNEL法检测Rat Endometrial Epithelial Cells细胞凋亡及免疫组化Bcl-2蛋白、Bax蛋白的表达。 结果： (1)光镜下观察,模型组大鼠子宫内膜上皮细胞连续性部分中断,且子宫内膜部分小血管扩张、充血,上皮细胞坏死脱落,间质疏松水肿,大量的炎性细胞浸润；新生化组及益气化瘀方高剂量组子宫内膜连续性好,无明显的上皮损伤,未见明显炎细胞浸润,间质致密；益气化瘀低剂量组大鼠子宫内膜可见少量连续性中断,内膜上皮损伤较轻,间质较致密,炎细胞少。 (2)与空白组比较,模型组的大鼠子宫内膜上皮细胞凋亡率明显升高(P0.05)。 (3)与空白组比较,模型组Bcl-2表达明显减少(P0.05)。 结论：益气化瘀方可能通过上调Bcl-2蛋白表达及下调Bax蛋白的表达,降低大鼠子宫内膜上皮细胞凋亡的发生,促进子宫内膜增生修复,从而促进产后子宫复旧。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  淡紫紫孢菌的优势特点与作用机理及使用方法！ 淡紫紫孢菌是Purpureocillium属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究，具体用途为近海丝状真菌。 一、菌种简介平台编号：Bio-107169 规格：冻干物拉丁属名：Paecilomyces Lilacinus 菌株名称：淡紫紫孢菌拉丁名称：Paecilomyces lilacinus原产国：中国中文名称：淡紫紫孢菌主要用途：曾用名：培养基编号：14培养温度(℃)：28℃其他保藏中心编号：培养时间(天)：5-7天来源历史/保藏单位：需氧类型：好氧生物安全级别：一级收藏时间：2017-07-01模式菌株：否用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征与Purpureocillium sp. A5(KT239373)的相似度为100%；在PDA培养基上培养一周后菌落直径为3-4cm,菌落呈椭圆状，粉红色，中间菌丝为毛绒状，菌丝为白色，周围菌丝为粉红色；反面菌落颜色为浅黑色，无可溶色素。 三、知识背景淡紫紫孢菌原名是淡紫拟青霉菌，是高科技生物技术研制开发而成的微生物，淡紫紫孢菌是新型纯微生物活孢子制剂。属于内寄生性真菌，是一些植物寄生线虫的重要天敌，能够寄生于卵，也能侵染幼虫和雌虫，可明显减轻多种作物根结线虫、胞囊线虫、茎线虫等植物线虫病的危害。 四、作用效果1、对植物病原菌具有拮抗效能，能够大大抑制菌丝的生长，从而预防病害。对玉米小斑病、小麦赤霉病、黄瓜炭疽病菌、棉花枯萎病和水稻恶苗病等都有很好的防治效果。2、孢子萌发后，所产生的菌丝可穿透线虫的卵壳、幼虫及雌性成虫体壁，菌丝在其体内吸取营养，进行繁殖，同时分泌毒素和几丁质酶，破坏卵、幼虫及雌性成虫的正常生理代谢，从而导致线虫死亡。3、淡紫紫孢菌可寄生半翅目的荔枝蝽蟓、稻黑蝽；同翅目的叶蝉、褐飞虱；等翅目的白蚁；鞘翅目的甘薯象鼻虫以及鳞翅目的茶蚕、灯蛾等。产生几丁质酶从而抑制虫害的发生。 五、淡紫紫孢菌的作用机理1、寄生：与线虫卵囊接触，生防菌菌丝包围整个卵进行寄生。2、侵占：代谢产生衍生物和几丁质酶，穿透线虫的卵壳、幼虫及雌性成虫体壁，菌丝在其体内吸取营养，进行繁殖。3、杀灭：破坏卵、幼虫及雌性成虫的正常生理代谢，同时分泌毒素对线虫起毒杀作用。另外，淡紫紫孢菌在培养过程中，能产生丰富的次生代谢产物，包括类吲哚乙酸产物、几丁质酶、葡聚糖酶与丝蛋白酶等，可以显著促进植物根系与植株的生长，同时对种子的萌发与生长也有促进作用。 六、淡紫紫孢菌的产品优势（1）有效防治线虫，减少重茬危害。（2）抗菌抑菌，有效防治作物病害。（3）促进作物健壮生长。 七、淡紫紫孢菌的使用方法（以100亿CFU/g淡紫紫孢菌为例）（1）菌肥有效成分添加：根据登记要求的菌数按比例添加原菌粉。（2）灌根：兑水稀释1000到1500倍，每株浇灌200毫升到300毫升，根据植株的大小和线虫发生强度可以适当调节用量。（3）穴施施在种子或种苗根系附近，亩用量400克。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                微生物实验室常用的接种方法有哪些？收藏起来吧！ 常用的接种方法有以下几种： 1、划线接种  这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。 2、三点接种  在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。 3、穿刺接种  在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。 4、浇混接种  该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45℃左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。 5、涂布接种  与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。 6、液体接种  从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。 7、注射接种  该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。 8、活体接种  活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。 注：有所接种必须无菌操作 培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                ATCC 35681 固氮类芽孢杆菌冻干管打管说明书！ 固氮类芽胞杆菌是Paenibacillus属的微生物，原产地为中国。细胞呈杆状，革兰氏染色阳性，阴性或可变，以周生鞭毛运动。在膨大包囊内有椭圆形芽孢，在营养琼脂上无可溶性色素。兼性厌氧或严格好氧。主要用途为分类；研究；教学。  一、菌种简介平台编号：Bio-137367 规格：冻干物拉丁属名：Paenibacillus Azotofixans 菌株名称：固氮类芽孢杆菌其他编号：=ATCC 35681；DSM 5976形态：菌落直径为1-2mm，圆形，边缘不整齐，不透明，正面黄色，颜色较浅，中间凸起，表面光滑，质地湿润，G＋（蓝紫色），杆菌。培养基：TSA生长条件：30℃；24-48h；好氧；存储条件：2-8℃安全等级：1分离基物：小麦根模式菌株：yes用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、传代方法①准备上述平板2块；②安瓿管表面消毒后在安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂，随后用镊子将其敲碎；③吸取0.5mL无菌水打入冻干管，充分溶解菌粉后，打入2块平板，200μL/个，涂布均匀；④将平板置于上述培养条件下培养，菌种长出即可使用。 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20°C 保存。  五、注意事项1) 首次活化，用尽量少的复水液溶解，接种在 5ml 的液体培养基中，静止培养，如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。 六、单层安瓿瓶冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  马加迪湖盐单胞菌的培养与保存方法及实验内容！ 马加迪湖盐单胞菌是Halomonas属的微生物，原产地为肯尼亚。生长pH范围7.0-11.0，最适9.0-10.0。生长盐浓度为0-20%(w/v)，最适盐浓度0%-7% (w/v)。主要用途为分类；研究，具体用途为分类学研究。  一、菌种简介平台编号：Bio-85283 规格：冻干粉 拉丁属名：Halomonas Magadiensis 中文名称：马加迪湖盐单胞菌拉丁名称：Halomonas magadiensis其它保藏中心编号：=DSM 15367=KCTC 22195=NCIMB 13595来源历史：←DSMZ←NCIMB收藏时间：2015/3/31原始编号：21M1原产国：肯尼亚资源归类编码：15131143101模式菌株：模式菌株主要用途：分类；研究特征特性：生长pH范围7.0-11.0，最适9.0-10.0。生长盐浓度为0-20%(w)，最适盐浓度0%-7% (w)。具体用途：分类学研究。生物危害程度：四类培养基编号：CM1021培养基名称：马加迪湖盐单胞菌培养基培养基成分：葡萄糖 10.0 g ; 蛋白胨 (Difco) 5.0 g ; 酵母提取物 (Difco) 5.0 g ; KH2PO4 1.0 g ; MgSO4 × 7 H2O 0.2 g ; NaCl 40.0 g ; Na2CO3 10.0 g ; 琼脂 20.0 g ; 蒸馏水 1000.0 mL。培养温度：37℃需氧类型：好氧分离基物：沿海地区沉积物采集地：肯尼亚保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：分类学研究。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 五、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 依赖的人淋巴T细胞Kit225的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-133632 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：IL-2 细胞名称：IL-2依赖的人淋巴T细胞Kit225产品类别：人源细胞系生长特性：贴壁生长培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS传代方法：1：2传代细胞形态：上皮细胞样冻存条件：无血清细胞冻存液细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特性1）来源：小鼠小脑神经2）形态：上皮细胞样，贴壁生长3）含量：>1x106 个/mL4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装 三、细胞的运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。 四、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备DMEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。3、轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。4、移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   汉氏盐单胞菌的形态特征与主要价值及使用范围！ 汉氏盐单胞菌是Halomonas属的微生物，原产地为美国。主要用途为分类；研究，具体用途为分类学研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-85284 规格：冻干粉 拉丁属名：Halomonas Hamiltonii 中文名称：汉氏盐单胞菌拉丁名称：Halomonas hamiltonii其它保藏中心编号：=DSM 21196=KCTC 22154来源历史：←DSMZ←KCTC收藏时间：2015/3/31原始编号：W1025原产国：美国资源归类编码：15131143101模式菌株：模式菌株主要用途：分类；研究特征特性：菌落奶油色或淡黄色，光滑，半透明，圆形，全缘。好氧，革兰氏阴性，菌体呈棒状，不产芽胞，2.0-3.0 ×0.9-1.0 μm，有侧生/极生鞭毛，能运动。积累PHB。不产生EPS。生长温度范围10-40℃（最适温度30-35℃），生长pH值为 7-10（最适pH 8-9）。盐浓度为0-20%(w/w)时可以生长（最适0-5％w）。在麦康凯琼脂上生长良好。在固体MH培养基上厌氧看不到生长。对阿莫西林、氨苄西林、羧苄青霉素、头孢噻肟、头孢西丁、萘啶酸、呋喃妥因、多粘菌素B、利福平、磺酰胺、四环素、妥布霉素敏感。耐红霉素，卡那霉素，新霉素，链霉素，甲氧苄啶/磺胺甲恶唑和万古霉素。对氯霉素和青霉素G易产生耐药性。主要泛醌：Q-9，存在少量Q-8。主要脂肪酸为C18 :ω7c和C16:0，16S rRNA gene: AM941396。具体用途：分类学研究。生物危害程度：四类培养基编号：CM0847培养基名称：胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）(CAIQ0701)培养基成分：胰蛋白胨 15.0g，大豆胨 5.0g，氯化钠 5.0g，琼脂 13.0 g，蒸馏水 1.0L，pH7.3±0.2。培养温度：28℃需氧类型：好氧分离基物：透析机排水管采集地：美国加利福尼亚州保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：分类学研究。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征菌落奶油色或淡黄色，光滑，半透明，圆形，全缘。好氧，革兰氏阴性，菌体呈棒状，不产芽胞，2.0-3.0 ×0.9-1.0 μm，有侧生/极生鞭毛，能运动。积累PHB。不产生EPS。生长温度范围10-40℃（最适温度30-35℃），生长pH值为 7-10（最适pH 8-9）。盐浓度为0-20%(w/w)时可以生长（最适0-5％w/v）。在麦康凯琼脂上生长良好。在固体MH培养基上厌氧看不到生长。对阿莫西林、氨苄西林、羧苄青霉素、头孢噻肟、头孢西丁、萘啶酸、呋喃妥因、多粘菌素B、利福平、磺酰胺、四环素、妥布霉素敏感。耐红霉素，卡那霉素，新霉素，链霉素，甲氧苄啶/磺胺甲恶唑和万古霉素。对氯霉素和青霉素G易产生耐药性。主要泛醌：Q-9，存在少量Q-8。主要脂肪酸为C18 :ω7c和C16:0，16S rRNA gene: AM941396。  三、培养条件1、营养肉汁琼脂：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.0。[注]培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。pH7.0。121℃，15min。2、需氧类型：好氧3、培养温度：55℃ 四、操作流程菌株复苏:(按三区划线法将留菌管内的原始菌株进行复苏)1)所有菌株,显色培养基分4区,每区一株,标明菌株号、菌种名常用缩写如下:cal: 白念珠菌 cgl:光滑念珠菌 cpa: 近平滑念珠菌 ctr: 热带念珠菌 ckr: 克柔念珠菌 cne: 新型隐球菌,其他菌种标记全名2)隐球菌除传显色培养基以外,另传1/2块血平皿上述菌株统一37oC孵育48h菌种鉴定:(48h后观察结果) 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌1-2天，酵母3天，霉菌5-7天，大型真菌7-10天。2、试管斜面种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我司不负责任。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

               猪胎盘滋养层细胞的培养与使用方法及注意事项！ 一、产品信息平台编号：Bio-105908 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶细胞信息：原代细胞 细胞名称：猪胎盘滋养层细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞简介在胚胎发育成桑椹胚后，桑椹胚进一步发育，细胞开始出现分化。聚集在胚胎的一端，个体较大的细胞，称为内细胞团（inner cell mass，ICM），内细胞团的细胞是胚胎干细胞是一种未分化的细胞，具有发育全能性，将来发育成胎儿的各种组织，而沿透明带内壁扩展和排列的，个体较小的细胞，称为滋养层细胞，它们将来发育成胎膜和胎盘。所以做基因诊断时，通常取少量滋养层细胞诊断是否患有遗传病，这样不会影响胎儿发育。本公司生产的猪胎盘滋养层细胞采用密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×105/T25方瓶，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 三、培养基信息我们推荐使用猪胎盘滋养层细胞专用完全培养液作为体外培养猪胎盘滋养层细胞的培养基。 四、细胞特性1)细胞来源于鼠正常胎盘组织。2)细胞鉴定：广谱角蛋白（PCK）免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：上皮样，多角形细胞，贴壁培养。 五、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 六、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 七、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。5、客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术售后服务电话，我们随时给予解答。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

               HMSC-bm人骨髓间充质干细胞的复苏与传代实验步骤！ 人骨髓间充质干细胞来源于发育早期的中胚层和外胚层，属于多能干细胞，MSCs可以在体内或体外特定的诱导条件下，分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞。 细胞简介平台编号：Bio-132150 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：HMSC-Bm 中文名称：人骨髓间充质干细胞产品简称：HMSC-bm细胞数量：1*10^6组织来源：骨髓形态特征：纺锤形，成纤维样生长方式：贴壁生长背景描述：骨髓来源的人间充质干细胞，具备分化成脂肪、成骨和软骨的能力。据报道，该细胞CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166表达阳性，CD14、CD31、CD34、CD45表达阴性。培养条件：MSC专用培养基；空气95%，二氧化碳5%；37℃培养换液频率：2-3天传代比例：1：3冻存液配方：70%完全培养基，20%FBS，10%DMSO安全性：BSL-1供应限制：仅供科研运输方式：常温运输（T25培养瓶）用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，水浴锅 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需复苏的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入 37℃温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管 ，打开盖子 ，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀。3、操作离心 ，调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟4、弃去上清液 ，重悬离心管底部细胞沉淀 ，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基 ，计数 ，调整细胞密度，接种培养瓶 ，37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液，继续培养。6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中 细胞传代操作说明（贴壁细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中 ，愈合度达到 80% ，可进行传代。2、按 T25 培养瓶计 ，吸出完全培养基 ，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10 min ，弃上清 收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。  细胞传代操作说明（悬浮细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。 细胞冻存操作说明实验仪器：超净工作台，CO2 培养箱，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗 ，DMSO实验材料：T25 细胞培养瓶，需冻存的细胞，移液枪，枪头，离心管，冻存管，记号笔实验步骤：1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ，并登记。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

               嗜盐纤细芽孢杆菌的培养方法与注意事项及打管说明！ 嗜盐纤细芽孢杆菌是Gracilibacillus属的微生物，原产地为中国。芽孢菌纲革兰氏阳性杆菌。主要用途为分类学研究，具体用途为模式菌株。 一、菌种简介平台编号：Bio-03904 提供形式：冻干物拉丁属名：Gracilibacillus Halophilus 中文译名：嗜盐纤细芽孢杆菌拉丁学名：Gracilibacillus halophilus原始编号：YIM-C55.5菌株来源：←云南大学保藏人：崔晓龙直接来源国家：中国保藏时间：4/29/2006其他保藏编号：=DSM 17856生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株培养温度：45℃培养基：0221    分离源：盐碱土样采集地点：青海省采集国家：中国用途：模式菌株 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20°C 保存。  四、注意事项1) 首次活化，用尽量少的复水液溶解，接种在 5ml 的液体培养基中，静止培养，如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。 五、单层安瓿瓶冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    大鼠软骨细胞的运输和保存及使用与注意事项！一、细胞简介平台编号：Bio-117088 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 细胞名称：大鼠软骨细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述软骨细胞存在于关节软骨中，负责分泌II型胶原和其它类型的胶原以及非胶原的细胞外基质大分子。成软骨细胞的增殖和分化与脊椎动物骨架的发育有着密切的关系。软骨细胞能分泌和响应一系列的生长因子，包括IGF-1和IL1。体外培养的软骨细胞是研究软骨修复和关节炎病理的有用模型。 三、细胞特性1)组织来源于实验动物的关节组织。2)细胞鉴定：Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ)免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：长梭状，不规则细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核、 六、细胞收到后的处理方法 收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置若干小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100×，200×各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行售后的依据。  细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）   七、细胞培养步骤  1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。  2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。  3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml 含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO 后进行冻存。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：  1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。  2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。  3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。  4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。  PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 八、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 ATCC 44897萝卜链格孢菌的特点与优势及培养！ 一、菌种简介平台编号：Bio-83289 规格：Frozen 拉丁属名：Alternaria Japonica 菌株名称：萝卜链格孢菌用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Alternaria japonica Yoshii 拉丁名(ATCC? 44897?) 统一编号Strain Designations 别名 IFO 5244Biosafety Level 生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country. Product Format 提供形式 frozen Preceptrol? no Type Strain 模式菌种 no Medium 培养基 ATCC? Medium 200: YM agar or YM broth Growth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 24.0°C Name of Depositor 寄存者 IFO - Institute for Fermentation, Osaka Chain of Custody 来源国家 ATCC Isolation 分离基物 Japan 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用；2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压；3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境；4、复活迅速,可在短期内成为优势种群；5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境；6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和生产提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 六、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                  微生物杀灭效果验证：紫外线杀菌灯的杀菌性能！ 百欧博伟生物：常见的紫外线杀菌消毒属于照射消毒，只需将紫外线杀菌灯照射需要消毒的物品，或在需要杀菌消毒的环境放置紫外线杀菌灯即可。紫外线可集中很高的强度在短时间内杀灭细菌和病毒，属于纯物理消毒方法，无二次污染。那么，与常规的化学消毒和加热消毒相比，紫外线消毒的效果又该如何判定呢？ 《消毒技术规范》卫生部（2002年版）是紫外线杀菌灯表面杀菌消毒效果评价常用的标准之一，此标准通过测定紫外线灯(包括双灯管组合灯具) 的辐照强度及对微生物的杀灭作用，以验证其杀菌性能是否达到合格标准。 辐照强度 普通型或低臭氧型直管紫外线灯( 30W )，新灯管的辐照度值应≥90μW/cm2。使用中的灯管，辐照度值应≥70μW/cm2。多灯管组合灯具的测定方法和合格标准同单支灯管。对异型(非直管型)、高强度型，或非30W功率等灯管的检测距离和辐照度值合格标准，随产品用途和使用方法而定。原则上，应不低于产品使用说明书注明的辐照度值，并按其推荐剂量[即辐照度值乘以照射时间(s)]进行杀菌试验，证明能满足应用所需效果者可判为实验室测试合格。同时，辐照强度检测每次鉴定抽查10支灯管，每支灯管重复测定3次。各次数据均达标准才可判辐照强度合格。 微生物杀灭效果 评估菌种：金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、大肠杆菌(8099)、铜绿假单胞菌（ATCC 15442）枯草杆菌黑色变种(ATCC 9372)芽孢等细菌及其芽孢和真菌。 在进行微生物杀灭效果测定时，按技术规范规定的方法首先制备细菌及其芽孢和真菌菌片，在指定的照射位置上进行照射。照射分为3个时间组，各组时间的设置应使能测出将试验细菌及其芽孢和真菌杀灭对数值≥3.00所需的最低剂量，完成将照射后样本进行活菌培养计数的测定。 测试中，同时设立阳性对照组(菌片对照)与阴性对照组(培养基对照)。阳性对照组，将该批菌片2片分别放入含5.0mL PBS试管中，电动混匀器震荡20s或各振敲80次。阴性对照组，以同次实验用培养基或PBS接种培养基培养，观察有无细菌生长。 试验重复3次。每次试验中的阳性对照菌片，检测回收菌量均应在5×10⁵cfu/片～5×106cfu/片，阴性对照组应无菌生长，各次试验对细菌及其芽孢和真菌的杀灭对数值均≥3.00。该照射时间可判为消毒合格所需照射的时间。对异型(非直管型)、高强度型，或非30W功率等灯管的照射距离，需随产品的用途和使用方法而定。 除以上两项之外，紫外线灯产生的臭氧量也可影响杀菌效果和使用的安全，故还需测定臭氧浓度进行综合评价。技术规范中指出：臭氧浓度应写明于使用说明书中，低臭氧紫外线灯产生的臭氧浓度，应不超过国家规定的工作场所安全浓度（0.3mg/m3）。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  凝结芽孢杆菌在畜牧业中的创新应用与发展前景！ 凝结芽孢杆菌属厚壁菌门，是革兰阳性菌，兼性厌氧，适合在畜禽肠道中生长繁殖。凝结芽孢杆菌代谢主要产生L-乳酸，属同型发酵乳杆菌，代谢产物同时含少量乙酸、丙酸和甲酸等，具有与乳杆菌和双歧杆菌相似的肠道益生功能。因此，在畜牧业在有广泛的应用及巨大的潜力。 1、提高饲料利用率 凝结芽孢杆菌能够促进动物饲料的消化吸收，从而提高饲料利用率。通过添加凝结芽孢杆菌到动物饲料中，可以改善动物的肠道菌群平衡，增强肠道功能，提高养殖动物对饲料中营养物质的吸收效率，减少浪费和环境污染。 2、增强免疫力 凝结芽孢杆菌具有抗菌和免疫调节功能，可以提高养殖动物的免疫力。它可以增强动物的免疫系统，提高机体抵抗病毒、细菌和寄生虫等病原体的能力，减少疾病发生的风险，从而降低养殖业经济损失。 3、减少环境污染 传统畜牧业养殖方式造成了大量的废弃物和环境污染。凝结芽孢杆菌的应用可以降低粪便中有害气体的产生，如氨气和硫化氢等，减少气味和环境污染，改善畜牧业养殖的生态环境。 4、生物防治和抗生素替代 凝结芽孢杆菌具有一定的抗菌作用，可以用于预防和治疗一些常见的畜禽疾病，从而减少抗生素的使用。这有助于减少抗生素在畜牧业中的滥用，降低抗生素耐药性的风险，为安全食品生产提供支持。 5、提高生产效益 凝结芽孢杆菌的应用可以帮助提高畜牧业养殖的生产效益。通过促进动物的生长和发育，凝结芽孢杆菌可以增加畜禽的体重和肉质品质，提高产肉和产奶量，从而增加畜牧业的经济收益。此外，凝结芽孢杆菌还可以减少动物的应激反应，改善畜禽的养殖环境适应能力，进一步提高生产效益。 6、降低饲料成本 凝结芽孢杆菌的应用可以帮助降低养殖业的饲料成本。通过提高饲料的利用率和消化吸收能力，凝结芽孢杆菌可以减少动物对饲料的需求量，降低饲料成本开支。这对养殖业的可持续发展和经济效益具有积极影响。 凝结芽孢杆菌在畜牧业养殖中的应用具有广阔的前景。它可以提高饲料利用率，增强动物免疫力，减少环境污染。虽然还需进一步的研究和实践，但凝结芽孢杆菌已经展现了其在畜牧业中的巨大潜力。采用凝结芽孢杆菌技术，可以推动畜牧业向着更加可持续、高效和有责任的方向发展，造福养殖业和整个社会。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                小鼠心脏纤维原细胞的实验室分离方法与质量检测！ 一、产品信息平台编号：Bio-132644 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 产品名称：小鼠心脏纤维原细胞组织来源：心脏组织产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞简介小鼠心脏纤维原细胞分离自心脏组织；心脏由心肌细胞和非心肌细胞组成，非心肌细胞占细胞总数的70%，其中90%以上的非心肌细胞由心肌成纤维细胞组成。纤维细胞是机能不活跃的成纤维细胞。胞体呈梭形，胞质较少，弱嗜酸性，胞核小，染色深。电镜下可见，细胞中粗面内质网和高尔基体均不发达。当组织受损时，纤维细胞可转化为成纤维细胞而参与修复过程。纤维细胞和成纤维细胞是处于不同功能状态的同一种细胞，如在组织损伤后的修复过程中，纤维细胞可转化为功能活跃的成纤维细胞。纤维细胞较小，呈多角形，胞质较少，弱嗜酸性，胞核亦较小，染色较深，电镜下粗面内质网较少，高尔基复合体不发达。成纤维细胞较大，呈星形或梭形，有突起，细胞核呈卵圆形，染色质稀疏，染色淡，核仁明显，胞质较多。成纤维细胞能合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白和蛋白多糖，形成胶原纤维、弹性纤维和网状纤维以及基质成分。心肌成纤维细胞主要功能为对心肌细胞起结构支持作用并负责细胞基质外的合成，当心肌损伤时能产生旁分泌生长因子。心肌成纤维细胞是心脏结缔组织中最常见的细胞，可合成和分泌胶原纤维、弹性纤维、网状纤维及有机基质，并且在外伤等因素刺激下，部分纤维细胞可重新转变为幼稚的成纤维细胞，其功能活动也得以恢复，参与组织损伤后的修复。因此，对心肌成纤维细胞的生理学研究成为现代心血管领域研究的一个重点。 三、方法简介小鼠心脏纤维原细胞采用胶原酶消化法制备而来制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。 四、质量检测小鼠心脏纤维原细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 五、培养信息培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 换液频率 每2-3天换液一次 生长特性 贴壁 细胞形态 成纤维细胞样 传代特性 可传1-2代 消化液 0.25%胰蛋白酶 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 小鼠心脏纤维原细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  尼泊尔葡萄球菌的培养条件与注意事项及保藏方法！ 尼泊尔葡萄球菌是Staphylococcus属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究，具体用途为酿造豆瓣，产乳酸。 一、菌种简介平台编号：Bio-090837 规格：冻干物 拉丁属名：Staphylococcus Nepalensis 中文名称：尼泊尔葡萄球菌拉丁名称：Staphylococcus nepalensis来源历史：←中国科学院成都生物研究所收藏时间：2018/3/1原始编号：JN-6(MR)10.1原产国：中国资源归类编码：15131315101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：菌落圆形，湿润，边缘光滑，白色。细胞圆形，单个或葡萄状排列，G+。酸性和兼性环境下可生长，含10%NaCl培养基中能生长，在有葡萄糖的牛肉膏蛋白胨液体培养基中可产生乳酸。具体用途：酿造豆瓣，产乳酸。生物危害程度：四类培养基编号：CM0002培养基名称：营养肉汁琼脂培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：30℃需氧类型：好氧分离基物：后酵期郫县豆瓣（发酵3个月）采集地：四川省成都市郫都区保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征尼泊尔葡萄球菌，菌落圆形，湿润，边缘光滑，白色。细胞圆形，单个或葡萄状排列，G+。酸性和兼性环境下可生长，含10%NaCl培养基中能生长，在有葡萄糖的牛肉膏蛋白胨液体培养基中可产生乳酸。 三、菌株特点  1、该菌为需氧芽孢杆菌，细菌繁殖体G兰氏染色阴性呈紫色，细菌芽胞孔雀绿着色。其细菌繁殖体对培养基要求低，在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨琼脂上生长良好，表面粗糙呈米黄色。2、适生长繁殖湿度为56－65℃，培养24h即可形成菌落，37℃下24h看不到菌落。3、本生物指示剂载体为高级滤纸片，染菌量为5×105－5×106cfu/片或1×106cfu/片，封装在小纸袋内，热死亡时间为121℃，3.9 min阳性，19 min阴性；D10值1.3－1.9 min，符合美国药典第十一版规定标准。4、该菌无毒，热抗稳定，在冰箱内4℃下保存一年抗力无明显下降，在常温（20℃左右）可保存1个月。 四、培养条件1、营养肉汁琼脂：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.0。[注]培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。pH7.0。121℃，15min。2、需氧类型：好氧3、培养温度：55℃ 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌1-2天，酵母3天，霉菌5-7天，大型真菌7-10天。2、试管斜面种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我司不负责任。4、使用者应保证菌种的安全储存和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。 六、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                      JM109感受态细胞的背景与应用及制备方法！ 一、背景 JM109感受态细胞是通过理化方法诱导JM109细胞，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的状态。JM109感受态细胞是通过处理使细胞的通透性变大，直观的说，使得细胞膜表面出现一些孔洞，便于外源基因或载体进入感受态细胞。由于细胞膜的流动性，这种孔洞会被细胞自身所修复。 二、制备方法 （一）CaCl2法 1、将快速生长的大肠杆菌置于经低温（0℃）预处理的低渗氯化钙溶液中，便会造成细胞膨胀，同时Ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来，离开所在区域，诱导细胞成为感受态细胞。细胞膜通透性发生变化，极易与外源DNA相粘附并在细胞表面形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基－磷酸钙复合物。联合其它的二价金属离子（如Mn、Co）、DMSO或还原剂等物质处理细菌，则可使转化率提高100～1000倍。 2、此时，将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激（90s），细胞膜的液晶结构会发生剧烈扰动，并随机出现许多间隙，外源DNA就可能被细胞吸收。进入细胞的外源DNA分子通过复制、表达，实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。 3、将转化后的细胞在选择性培养基上培养，筛选出带有外源DNA分子的阳性克隆。 （二）电转法 电击法不需要预先诱导细菌的感受态，依靠短暂的电击，促使DNA进入细菌，转化率最高能达到109~1010转化子/ug闭环DNA。因操作简便，愈来愈为人们所接受。 M109菌株来源于E.coli K strain，是提取高质量DNA的理想菌株，recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。携带hsdR17基因型背景，使得异源DNA不被内源核酸酶系统降解。laqI qZΔM15的存在使JM109可用于构建克隆，蓝白斑筛选实验； JM109感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率可达109cfu/μg DNA。 三、应用 用于高保真酶介导的突变敏感性分子开关用于三种常见遗传性疾病分子诊断的研究： mtDNA12S rRNA基因PCR产物克隆至pMD19-T载体，转化E.coli JM109感受态细胞，通过LB/Amp/IPTG/X-gal平板筛选白色克隆，载体通用引物对其进行菌液PCR扩增初步确定阳性克隆，并通过序列分析进行确证，得到mtDNA12S rRNA基因的野生模板质粒。反向PCR对其野生质粒模板实施体外mtDNA12S rRNA基因A1555G和C1494T定点突变，Dpn I内切酶降解甲基化的野生质粒DNA模板后，再次转化E.coli JM109感受态细胞，同前筛选阳性克隆，测序鉴定得到mtDNA12SrRNA基因C1494T和A1555G突变质粒模板。进一步设计与mtDNA12S rRNA基因A1555G和C1494T突变位点配对及三末端不配对的3’硫化修饰正向引物，在其下游设计一条公共反向引物，分别构成野生检测引物与突变检测引物，对mtDNA12SrRNA基因野生质粒模板和A1555G和C1494T突变质粒模板，进行高保真DNA聚合酶介导的双向引物延伸反应，利用凝胶成像系统对其PCR结果进行分析。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    微生物得到纯培养的过程之分离纯化操作方法！ 百欧博伟生物：含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物（mixed culture）。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养（pureculture）。在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多种。 １、倾注平板法 首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40-50℃左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。 2、涂布平板法 首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。 3、平板划线法 最简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，最后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。 4、富集培养法 富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。 5、厌氧法 在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器，把这支试管放在沸水浴中加热数分钟，以便逐出培养基中的溶解氧。然后快速冷却，并进行接种。接种后，加入无菌的石蜡于培养基表面，使培养基与空气隔绝。另一种方法是，在接种后，利用N2或CO2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。有时为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离的样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。 6、单细胞（或单孢子）分离法 是采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养。较大的微生物，可采用毛细管提取单个个体。个体相对较小的微生物，需采用显微操作仪，在显微镜下用毛细管或显微针、钩、环等挑取单个微生物细胞或孢子以获得纯培养。单细胞分离法对操作技术有比较高的要求。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                溶血性链球菌检验的主要内容与适用范围及操作步骤！ 1、主题内容与适用范围  本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。  本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球的检验。  2、引用标准     GB  4789.28  食品卫生微生物学检验  染色法、培养基和试剂  3、设备和材料  3．1  温箱：36±1℃。  3．2  水浴：36±1℃。  3．3  显微镜。  3．4  离心机。  3．5  试管架。  3．6  灭菌平皿。  3．7  灭菌小试管。  3．8  载玻片。  3．9  灭菌吸管：1 mL、10 mL。  3．10  灭菌镊子。  3．11  均质器。  3．12  酒精灯。  3．13  接种环。  4、培养基和试剂  4．1  葡萄糖肉浸液肉汤：按GB  4789.28 中 4.1 规定，在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。  4．2  肉浸液肉汤：按 GB 4789.28 中 4.1 规定。  4．3  匹克氏肉汤：按 GB 4789.28 中 4.62 规定。  4．4  血琼脂平板：按 GB 4789.28 中 4.6 规定。  4．5  人血浆。  4．6  0.25%氯化钙。  4．7  灭菌生理盐水。  4．8  杆菌肽药敏纸片（含 0.04 单位）。  5、检验程序  6、操作步骤  6．1  样品处理     称取 25 g 固体检样；称取 25 mL 液体检样，加入 225 mL 灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。  6．2  一般培养  将上述混悬液吸取 5 mL，接种于 50 mL 葡萄糖肉浸液肉汤；或直接划线接种于血平板，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经 36±1℃培养 24 h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。  6．3  形态与染色  本菌呈球形或卵圆形，直径0.5～1  µm，链状排列，链长短不一，短者4～8个细胞组成，长者 20～30 个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。   6．4  培养特性  该菌营养要求较高，在普通培养基上生长不良，在加有血液、血清培养基中生长较好。溶血性链球菌在血清肉汤中生长时管底呈絮状或颗粒状沉淀。血平板上菌落为灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约0.5～0.75  mm，为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌周围有 2～4  mm 界限分明、无色透明的溶血圈。  6．5  链激酶试验  致病性乙型溶血性链球菌能产生链激酶（即溶纤维蛋白酶） ，此酶能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。 吸取草酸钾血浆 0.2  mL，加0.8  mL 灭菌生理盐水，混匀，再加入 18～24  h36±1℃培养的链球菌培养物 0.5 mL 及 0.25%氯化钙 0.25 mL（如氯化钙已潮解，可适当加大至 0.3%～0.35%） ，振荡摇匀，置于 36±1℃水浴中 10 min，血浆混合物自行凝固（凝固程序至试管倒置，内容物不流动） 。然后观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如 24 h 后不溶解即为阴性。     草酸钾人血浆配制：草酸钾0.01 g 放入灭菌小试管中，再加入5 mL人血，混匀，经离心沉淀，吸取上清液即为草酸钾人血浆。  6．6  杆菌肽敏感试验  挑取乙型溶血性链球菌液， 涂布于血平板上， 用灭菌镊子夹取每片含有 0.04单位的杆菌肽纸片，放于上述平板上，于 36±1℃培养 18～24  h，如有抑菌带出现即为阳性。同时用已知阳性菌株作为对照。  北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 微生物诱变育种的基本程序及操作要点有哪些？ 一、诱变育种基本程序 微生物诱变育种一般按照图12-1所示工作程序进行。 二、诱变育种的操作要点 （一）出发菌株的选择 用来进行诱变的菌株称为出发菌株。诱变育种的目的在于提高微生物代谢产物的产量、改进质暈或产生新的代谢产物。因此，选择出发菌株对诱变效果尤为重要。   1、作为出发菌株疢对诱变剂敏感，变异幅度大。 2、从自然界分离到的野生型菌株，对诱变剂敏感，易发生正向突变。由自发突变经筛选得到的菌株也属于野生型菌株。 3、经诱变处理获得的高产菌株再诱变时易出现负突变，继续提高产量较难，不易直接作出发菌株。 4、选择易于表现出基因发生改变的单倍体细胞，酵母菌二倍体细胞很稳定，应该挑选异宗接合的单倍体菌株或用子囊孢子进行诱变。 5、选择单核或细胞核少的细胞，在霉菌的诱变育种中，多采用分生孢子或孢子囊孢子进行诱变处理。 (二）细胞悬液的制备 1、采用生理状态一致的单细胞或单孢子进行诱变处理，不可能使细胞均匀地接触诱变剂，还可以减少分离性表型延迟现象的发生。因此，诱变处理前的细胞应尽可能达到同步培养和对数生长期状态。 2、一般诱变处理真菌孢子或酵母菌营养细胞，其细胞悬液浓度应为106个/ml而细菌营养细胞或放线菌孢于浓度为108个/ml，细胞悬液浓度可用平板计数法和血球计数板法测定。 3、一般情况，使用物理诱变剂处理时，用生理盐水配制细胞悬液；而使用化学诱变剂处理时，由于pH变化易引起诱变剂性质的改变而都使用缓冲液配制细胞悬液。 (三）诱变剂和处理方法的选择 1、诱变剂的选择 对诱变剂的要求是使遗传物质改变大，难于产生回复突变，这样获得的突变株突变性状稳定。亚硝基胍(NTG)和甲基磺酸己酯(EMS)等烷化虽能引起高频度的变异，但它们多是引起碱基对转换突变，易发生回变；而能引起染色体大损伤或移码的紫外线、γ-射线等诱变剂，其有优越性能。 2、诱变剂量的选择 选择最适诱变剂量，也就是在提高突变率的基础上，即能扩大变异幅度，又能使变异向正向突变范围移动的剂量。研究方向正向突变多出现在偏低剂量中，形态变异多发生在偏高剂量中，而一般形态变异多趋向于降低产量。   3、诱变处理方法的选择 （1）紫外线与光复活的交替处理，能使紫外线诱变作用得到显著增强。多次紫外线照射后，并在每次照射后进行-次光复活，突变率将大大提高。 （2）诱变剂的复合处理有一定的协同效应，复合处理有以下几种方式：两种或多种诱变因子先后使用；同—种诱变剂重复使用；两种或两种以上诱变剂的交替使用等。 (四）中间培养 突变基因的出现并不意味着突变表型的出现，表型的改变落后于基因型改变的现象，称为表型延迟。其原因是分离性延迟和生理性延迟造成的。为此，必须将诱变处理的菌液进行中间培养，即将菌液接入完全液体培养基中培养过夜。 （五）突变株的分离 1、营养缺陷性菌株的分离 （1）淘汰野生型、浓缩缺陷型 （2）缺陷菌株的检出 （3）营养缺陷型的鉴定 2、抗性突变菌株的分离 （1）抗药性突变株的分离 （2）抗代谢结构类似物突变菌株的分离 3、产量性状突变的分离 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！