BTT739小鼠膀胱移行细胞癌的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-133463规格：1×10^6cells/T25培养瓶细胞信息：BTT739细胞名称：小鼠膀胱移行细胞癌产品类别：小鼠细胞系生长特性：贴壁生长培养体系：1640+10%FBS细胞形态：上皮细胞样冻存条件：无血清细胞冻存液保存条件：95％（ViabilitybyTrypanBlueExclusion）  细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。  用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）   三、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。  2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。  3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：  1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。  2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。  3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。  4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。  PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。 四、注意事项1、细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等；2、细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果；3、常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片）；4、干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染；5、细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力；6、细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    人肾上腺皮质细胞的背景与应用及相关研究！ 一、背景 人肾上腺皮质细胞是从人肾上腺皮质组织中分离得到的细胞系，该细胞可通过GFAP特异性抗体的免疫荧光鉴定。该细胞不含HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母菌和真菌。 肾上腺皮质是构成肾上腺外层的内分泌腺组织。它能分泌由数种类固醇混合而成的肾上腺皮质激素，皮质内还含有为数更多的类固醇。肾上腺皮质由3层构成，最外层为球状带（zona glomerulosa），接着为占大部分的束状带（zona fasciculata），内层为网状带（zona seticularis）。其功能异常可以引起肾上腺皮质功能亢进、肾上腺皮质功能减退、肾上腺皮质增生等。 肾上腺皮质（adrenal cortex）球状带分泌盐皮质类固醇，束状带分泌糖皮质类固醇，网状带分泌肾上腺性激素。脑垂体前叶的促肾上腺皮质素具有促进肾上腺皮质的发育和分泌的作用，但球状带的活动则受血管紧张素Ⅱ的支配。肾上腺皮质通过这些激素的分泌，对物质代谢有重要关系，特别是参与机体对一切有害刺激的应激反应。另外，肾上腺皮质激素对脑及脑垂体都具有反馈作用，从而可调整促肾上腺皮质素释放因子和促肾上腺皮质素的分泌。这样，肾上腺皮质的调节系统便形成反馈回路。 肾上腺皮质区域与髓质区域之间有着广泛的联系，皮质细胞存在于髓质区域，而嗜铬细胞存在于皮质区域。这两种细胞的紧密联系说明细胞间存在交换，也使得对两种肾上腺内分泌系统之间旁分泌信号传导的深入研究提供了可能。 二、应用 用于顺式联苯菊酯对映体对H295R细胞肾上腺皮质激素分泌的选择性干扰效应研究： 研究拟除虫菊酯类农药顺式联苯菊酯（cis-BF）对H295R细胞肾上腺皮质激素分泌的选择性干扰效应及其作用机制。 方法：利用高效液相色谱系统和手性色谱柱对cis-BF两对映体（1S-cis-BF和1R-cis-BF）进行拆分,并通过气相色谱系统和圆二色光谱仪对单个对映体分别进行定量分析和构型判定。选取H295R细胞为研究模型,将细胞暴露于不同浓度（0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L）1S-cis-BF/1R-cis-BF或1S-cis-BF/1R-cis-BF与8-Br-cAMP（500μmol/L）的混合物24 h,同时设置DMSO（0.1%,v/v）为溶剂对照组、8-Br-cAMP（500μmol/L）为阳性对照组。 用MTS法检测细胞增殖活性,确定染毒浓度。用ELISA法检测细胞上清液中皮质醇、醛固酮水平和细胞内cAMP含量,并用RT-qPCR法分析类固醇激素合成相关酶（StAR、P450scc、3βHSD2以及CYP17）mRNA的表达水平。 结果：cis-BF两对映体在高效液相色谱系统和手性色谱柱上成功得到分离,且1S-cis-BF和1R-cis-BF纯度均在99%以上。MTS结果显示,高浓度（1、10μmol/L）1S-cis-BF/1 R-cis-BF对细胞增殖活性有刺激作用（P RT-qPCR结果显示,与溶剂对照组相比,0.1μmol/L 1S-cis-BF显著下调本底StAR、P450scc、3βHSD2和CYP17 mRNA表达水平（P cAMP测定结果显示,与对照组相比,0.1μmol/L 1S-cis-BF染毒致细胞内cAMP含量降低了8.10%（P 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    双倒卵形红冬孢酵母菌的培养方法与打管说明！ 双倒卵形红冬孢酵母是Rhodosporidium属的微生物，原产地为太平洋，在中国分离。主要用途为研究，具体用途为大洋酵母。 一、菌种简介平台编号：Bio-64197规格：冻干物拉丁属名：Rhodosporidium Diobovatum中文名称：双倒卵形红冬孢酵母菌属名：Rhodosporidium种名加词：diobovatum来源历史：←天津科技大学(35013)←浙江工商大学收藏时间：2007.2.9资源归类编码：15151111105模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产具体用途：酿造食醋生物危害程度：四类致病对象：无培养基：*12 Brix. 麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，pH自然。[注] 麦芽汁制备：大麦芽若干，粉碎后，加入4倍于麦芽重量的水，搅拌均匀，在55～60℃保温箱内糖化4h，取出过滤，得麦芽汁，测量此麦芽汁的体积和浓度后，分装于已灭菌的三角瓶中，0.6kg/cm2灭菌40min备用，用时将滤液稀释至所需糖度。培养温度：28℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；生产；酿造食醋注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油请置于-80℃ 三、培养条件1、培养基编号：麦芽汁琼脂（Malt Extract Agar）2、培养基成分：5°Bé麦芽汁 1000.0 mL 琼脂 15.0 g麦芽汁制备：大麦芽若干，粉碎后，加入 4 倍于麦芽重量的水，搅拌均匀，在 55℃～60℃保温箱中糖化 4 h，取出过滤，得麦芽汁，测量此麦芽汁的体积和浓度(波美度 Bé)后，分装于已灭菌的三角瓶中。121℃，灭菌 15 min 后备用。以上成分 121℃，灭菌 15 min。液体培养基不加琼脂。推荐使用成品 MEA 培养基。3、需氧类型：好氧4、培养温度：28 ℃ 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 五、打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。9、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

              鸡胚气管黏膜上皮细胞永生化的运输和保存及其使用！ 一、细胞简介平台编号：Bio-132570规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：永生化细胞细胞名称：鸡胚气管黏膜上皮细胞用途：（种属鉴定）注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述气管以软骨、肌肉、结缔组织和黏膜构成。软骨为"C"字形的软骨环，缺口向后，各软骨环以韧带连接起来，环后方缺口处由平滑肌和致密结缔组织连接，保持了持续张开状态。在近端下呼吸道的上皮表面，主要是纤毛上皮细胞，它与基底细胞及杯状细胞一起构成假复层上皮，到达气管腔表面的大部分细胞为纤毛上皮细胞，基底细胞与基底膜相连，通过半桥粒固定于上皮，在远端下呼吸道中，Clara细胞和基底细胞占优势，纤毛细胞已不存在，杯状细胞数量减少，上皮形态更象柱状，整个上皮存在于一薄层基底膜上，通过间质结缔组织组成的网状层相互支撑，上皮下存在其它的结缔组织和纤维细胞。该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。注意事项：收到细胞后第一次传代建议1：2传代，充液培养基是维持培养基，不能用来培养细胞。 三、细胞特性1)组织来源于实验动物的正常气管黏膜组织。2)细胞鉴定：广谱角蛋白(PCK)免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养。 四、推荐培养基我们推荐使用原代上皮细胞培养体系作为体外培养原代气管上皮细胞的培养基。名称 体积 浓度 保存条件 原代上皮细胞基础培养基 500ml 1× 4℃、避光 原代上皮细胞培养添加剂 5ml 100× -20℃、避光 胎牛血清（FBS） 10ml 终浓度2% -20℃、避光 双抗（青霉素/链霉素，P/S） 5ml 100× -20℃、避光  五、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 六、产品使用    （1）本产品仅能用于科研（2）本产品未通过直接用于活体动物和人的审核（3）本产品未通过用于活体诊断的审核 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

          ATCC BAA-1247鲍氏志贺氏菌的培养与储存注意事项！ 鲍氏志贺氏菌，细胞圆球状,在直角两个平面交替分裂形成四联状,一般细胞成对生,单生者罕见,不成链状排列。革兰氏阳性,不运动,兼性厌氧。在MRS培养基上菌落小,呈白色。沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。接触酶阴性,不产细胞色素。功用产酸,菌群,维持肠道微生态平衡。在动物体内对病原微生物有颉颃作用,可竞争性地抑制病原微生物,,产生有益的代谢产物,激活酸性蛋白酶的活性,参与机体的,防止有害物质产生。 一、菌种简介平台编号：Bio-091777规格：Freeze-Dried拉丁属名：Shigella Boydii Ewing菌株名称：鲍氏志贺氏菌用途：ATCC原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Shigella boydii Ewing 拉丁名(ATCC? BAA-1247?) 统一编号 Strain Designations 别名 SH-108Application 用途 Emerging infectious disease researchEnteric ResearchBiosafety Level 生物安全等级 2Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedPreceptrol? noType Strain 模式菌株 yesMedium 培养基 ATCC? Medium 3: Nutrient agar or nutrient brothGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度 : 37.0°CName of Depositor 寄存者 H TaborSpecial Collection ATCCReferences 参考文献 . Identification and characterization of Shigella boydii 20 serovar nov., a new and emerging Shigella serotype.. J. Med. Microbiol. 54: 741-748, 2005. 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。  六、储存注意事项储存时,提高水分含量则菌群活力。高温制粒时,必须对产品进行包被处理。不饱和脂肪酸对乳酸片球菌具有颉颃作用,配合日粮中添加乳酸片球菌,应尽量避免与添加的油脂直接接触。饲料中的钙也会明显影响乳酸片球菌的活性。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                 收藏！引发食源性疾病的致病菌主要有那几种？ 百欧博伟生物：伴随着社会经济的发展，人们的生活中越来越少不了各种美味。大街小巷，天南地北的各种小吃和食物每时每刻的都在吸引着大家的眼球。美味是不可不吃的，但是要吃也要吃那些干净卫生的食物，这样才能避免食源性疾病的发生，保证健康。食源性致病菌作为引发食源性疾病的重要因素，已经引起各界的广泛重视。 通常引发食源性疾病的致病菌主要有以下七种： （一）致病性大肠埃希菌 大肠埃希氏菌为革兰阴性杆菌，无芽孢，长有鞭毛，能运动。致病性大肠埃希氏菌可分为：肠产毒素性大肠埃希氏菌、肠致病性大肠埃希氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌、肠侵袭性大肠埃希氏菌、肠凝聚性大肠埃希氏菌、扩散粘附性大肠埃希氏菌。引发出血性腹泻的通常为大肠埃希菌0157: H7较为常见。由肠出血性大肠埃希氏菌（0157: H7）引起的肠道疾病可表现出轻度腹挥、水样便、继以大量出血等症状。 （二）沙门氏菌 沙门氏菌（ Salmonella） 为沙门氏菌属肠杆菌科，无芽孢、无荚膜的革兰氏阴性直杆菌，多数具有菌毛，沙门氏菌血清型众多，全球已发现2523个血清型，我国约存在300 个，这些血清型均可引起食源性疾病，由沙门氏菌引起的临床症状通常在感染后12～72h 内出现，主要表现为发烧、头痛、恶心、呕吐、腹痛和腹泻等。 （三）志贺氏菌 志贺氏菌属于肠杆菌科志贺氏菌属，该菌为无荚膜、无鞭毛，无芽孢状态，该菌为兼性厌氧菌。志贺氏菌属根据血清学分型可分为以下4个种群：宋内氏志贺氏菌、福氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌和痢疾志贺氏菌。 （四）单核细胞增生李斯特氏菌 单核细胞增生李斯特氏菌简称单增李斯特菌，为李斯特氏菌属 （ Listeria） ，革兰氏阳性短杆菌，芽孢和荚膜，需氧或兼性厌氧。单核细胞增生李斯特菌被分为16个血清型，其中l/2a、l/2b、l/2c、3a、3b、3c、4a、4b均被认为是具有致病特性的致病菌株。 （五）副溶血性弧菌  副溶血性弧菌（ Vibrio Parahemolyticus） 系弧菌科弧菌属，革兰氏阴性多形态杆菌或稍弯曲弧菌，嗜盐，在无盐培养基上不能生长。副溶血性弧菌产生的毒素主要有两种，即：耐热性溶血素TD（thermostable direct hemolysin）和TDH（TDH relatedhemolysin TRxO）两类。主要表现为腹痛，多为阵发性绞痛，并伴有腹泻、恶心、呕吐、发热等症状的急性胃肠炎，感染者的粪便多呈水样，且混有黏液或脓血。 （六）溶血性链球菌 链球菌呈球形或椭圆形，需氧或兼性厌氧菌，营养要求较高。根据链球菌在血液培养基上生长繁殖后是否溶血及其溶血性质分为三类：①α-溶血性链球菌；②β-溶血性链球菌；③γ-溶血链球菌；溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变态反应。 （七）金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌（ S. aureus） 属于微球菌科葡萄球菌属，该菌无芽孢、鞭毛，多数无荚膜，为需氧或兼性厌氧菌。人感染金黄色葡萄球菌后主要引起恶心、呕吐、腹部痉挛、水性或血性腹泻等胃肠道症状，严重者可引起局部化脓感染，如肺炎、盆腔炎、心包炎，甚至败血症、脓毒症等全身性感染。  微生物菌种查询网可以定制制备常用4代定量微生物菌种（生孢梭菌，大肠埃希氏菌，白色念珠菌，铜绿假单胞菌，黑曲霉等）不同浓度如10E3，10E5,10E6浓度。为了满足更广用户的不同需求，单位代理引进国际知名质控菌种产品生产厂家：法国梅里埃MBL，BIOBALL定量产品，赛默飞REMEL科技定性定量商业产品。精准接种量，即用型使用方便快捷，产品种类齐全并且提供产品COA分析证书。PS：Remel质控微生物；BIOBALL质控微生物；Microbiologis（MBL）质粒微生物，点击有链接详细介绍。欢迎您的咨询！

                  人肝内胆管癌细胞的处理方法与培养步骤及应用！ 一、背景 人肝内胆管癌细胞源自一位女性肝胆管细胞癌患者，呈上皮细胞样。HCCC-9810细胞染色体模式数为71，但其染色体数目可以在22-117的范围内变动。HCCC-9810细胞倍增时间为20.4小时；细胞内AFP、CEA和CA19-9的分泌水平低，HCCC-9810细胞在裸鼠中的成瘤率为20%。 二、人肝内胆管癌细胞的培养 1）准备RPMI-1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2）人肝内胆管癌细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）人肝内胆管癌细胞冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 三、人肝内胆管癌细胞处理 1）冻存人肝内胆管癌细胞的复苏： 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。 2）人肝内胆管癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法： 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 3）人肝内胆管癌细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 四、应用 人肝内胆管癌细胞可以用于谷氨酰胺酶2介导MDR1表达调控肝内胆管癌细胞对5-氟尿嘧啶化疗敏感性的研究： 探讨GLS2在ICC中的化疗耐药的作用及其潜在机制。 方法：首先,通过UALCN在线分析工具在生物信息数据库中检索ICC中GLS2、MDR1表达水平及两者的相关性。运用Western blot、免疫组化临床进一步验证40例ICC组织、癌旁组织GLS2和MDR1表达水平及两者相关性并分析,GLS2表达水平与临床病理因素及患者预后之间的相关性。然后,过表达RBE细胞GLS2表达,Western blot验证过表达效率。之后使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测过表达GLS2细胞及NC细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶的化疗敏感性。 最后,Western blot检测过表达GLS2的ICC细胞及NC细胞MDR1的表达,初步阐明GLS2调控ICC化疗耐药潜在分子机制。 结果： 1、数据库分析结果显示在ICC癌组织中GLS2表达水平显著低于正常肝组织,而MDR1表达水平显著高于正常肝组织,并且GLS2表达与MDR1表达呈负相关。进一步Western blot和免疫组化验证,可以得到与之前一致的结果。GLS2蛋白表达与肿瘤数量、包膜、淋巴结转移、临床分期有关,GLS2表达越高,ICC患者预后越好。 2、上调RBE细胞GLS2表达后,可显著提高RBE细胞对5-氟尿嘧啶化疗敏感性。 3、上调RBE细胞GLS2表达后可显著降低MDR1表达。 结论：GLS2通过介导MDR1表达提高ICC细胞对5-氟尿嘧啶化疗敏感性化疗敏感性,并且GLS2的表达越高提示患者预后越好。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     RTL-W1虹鳟鱼肝细胞系的实验培养操作步骤！ 细胞简介平台编号：Bio-128953规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：RTL-W1细胞名称：虹鳟鱼肝细胞系RTL-W1产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2细胞数量：1x10^6：1x10^6保存温度：37℃：-198℃运输方式：常温保温运输；干冰运输安全等级：1仅供科研：1类培养体系：DMEM高糖培养基（不含丙酮酸钠）+10%FBS+1%三抗简介：虹鳟鱼肝细胞系RTL-W1贴壁培养，不规则形态注释：Group:Fish cell line.用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，水浴锅 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需复苏的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入 37℃温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管 ，打开盖子 ，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀。3、操作离心 ， 调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟4、弃去上清液 ，重悬离心管底部细胞沉淀 ，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基 ，计数 ，调整细胞密度，接种培养瓶 ，37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液，继续培养。6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中 细胞传代操作说明（贴壁细胞）实验仪器 ：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中 ，愈合度达到 80% ，可进行传代。2、按 T25 培养瓶计 ，吸出完全培养基 ，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。 1000r/min 离心 10 min ，弃上清收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。  细胞传代操作说明（悬浮细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代） 。 细胞冻存操作说明实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需冻存的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管 ，冻存管 ，记号笔实验步骤：1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞 ，则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ，并登记。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 植物细胞悬浮培养的基本条件与影响因素有哪些？ 植物细胞悬浮培养是一种常见的细胞培养技术，目前已广泛用于生产次生代谢物，如多糖、皂苷、生物碱、黄酮类及多酚等物质。 一、什么是细胞悬浮培养？ 植物细胞悬浮培养是指植物细胞或小的细胞聚集体在液体培养基中，于摇床上进行悬浮培养。这些细胞或小的聚集体来自愈伤组织，某个器官或组织，甚至幼嫩的植株，通过物理或化学的方法进行分离而获得。 与传统的整株材料相比，植物细胞悬浮体系由于其分散性好、细胞形状及细胞团大小大致相同，而且生长迅速、重复性好、易于控制等有利因素，被广泛用于生理学、细胞学、生物化学、发育生物学及遗传学、分子生物学的研究。 二、植物细胞悬浮培养的基本条件 一个成功的细胞悬浮培养体系必须满足以下3个基本条件： 1、悬浮细胞培养物分散性好，细胞团较小，一般由几十个以下的细胞组成，但很少有完全由单细胞组成的悬浮细胞系。 2、均一性好，细胞形状和细胞团大小大致相同，悬浮系外观为大小均一的小颗粒，在倒置显微镜下观察为体积和形状大致相同的细胞团。 3、生长速度，悬浮细胞的量一般2~3d甚至更短时间便可增加1倍。 因此，在进行大规模生产之前，必须先使愈伤化的细胞能最大程度的分散，再从中筛选出增殖速度快和含有用成分高的细胞株。 为了从愈伤组织获得单细胞和小的细胞集合体，必须首先获得疏松的愈伤组织。从继代培养的愈伤组织中挑选质地疏松、色泽淡黄、表面呈现颗粒状的愈伤组织，接种于含有培养液的三角瓶中（通常溶液占培养瓶体积1/3左右），用镊子夹碎至比较均匀的小颗粒，置于摇床内进行悬浮培养，1周后用200目不锈钢滤网过滤，除去大的细胞团，加入新鲜培养基开始继代培养。 三、植物细胞悬浮培养的影响因素 1、初始接种量对悬浮细胞生长的影响 悬浮细胞的生长具有群聚效应，细胞密度太低，悬浮细胞生长缓慢；细胞密度过高时，细胞生长速度过快，细胞液泡变大，悬浮细胞容易积累有害物质，不利于悬浮细胞系的建立。 只有密度合适，才能促进细胞生长，利于培养物的分散，形成细微的细胞团颗粒，建成胚性细胞系。所以悬浮细胞系在继代培养过程中，初始接种量以40ml的液体培养基加入1.5g左右的培养物为宜。 2、不同激素浓度对悬浮细胞生长的影响 激素是影响细胞状态的重要调控因素，不含2,4-D的培养液完全不能建立悬浮细胞系。过低浓度的2,4-D则不利于悬浮细胞系的分散，高浓度2,4-D虽然能促进悬浮细胞的分裂，但是细胞液泡化，内含物少，不利于体细胞胚胎的发育。激素种类和配比对于培养细胞的生长和次生代谢物含量的增殖都有极大的影响。 3、蔗糖浓度对悬浮细胞生长的影响 在组织培养中，蔗糖不仅是植物赖以生长的重要碳源，而且也是渗透压调节剂，因而起着十分重要的作用。例如在草莓的悬浮培养过程中发现，在0~30g/L时，随着蔗糖浓度的增加，细胞增殖倍数呈上升趋势；30g/L时，细胞的增殖倍数最大；蔗糖浓度超过60g/L，细胞增殖倍数呈明显的下降趋势。 4、不同附加物对悬浮细胞生长的影响 水解酪蛋白、酵母提取物、椰乳、麦芽提取物等有机附加物有利于离体培养的植物组织和细胞的生长，比加入单一的氨基酸更好。在建立禾本科植物胚性细胞悬浮系的尝试中，人们对水解酪蛋白、酵母提取物、椰乳等的作用进行了研究，多数结果表明这些有机添加物的确可以促进胚性细胞悬浮培养物的生长、增殖，并可以提高其胚胎发生能力。 5、细胞悬浮培养与pH值 培养过程中悬浮系有最适的pH值，例如在水稻悬浮细胞培养中发现，pH值为6.0时，培养基中生长的细胞密度增长较快，并且其鲜重增加了4.4倍。不过，培养过程中悬浮细胞系的生长速率及pH值也常发生变化。 6、悬浮细胞系的继代周期 悬浮培养细胞的生长曲线能为细胞继代周期的确定提供重要的参考数据，根据悬浮培养细胞的生长曲线来判定继代培养的周期，得以及时更换悬浮培养液，稳定悬浮系。 四、结语 植物细胞悬浮培养技术研究已经取得了许多优异成绩，不仅揭示了高等植物细胞方面的重大理论问题，而且在实践中已被广泛地应用到作物品种改良、工业化生产次生代谢产物等一些研究和生产领域。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   ATCC 96803 合轴马拉色菌的微生物培养方法！ 一、菌种简介平台编号：Bio-132124规格：Frozen拉丁属名：Malassezia Sympodialis菌株名称：合轴马拉色菌用途：ATCC原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Malassezia sympodialis Simmons et Guého 拉丁名ATCC 96803 编号Product category Fungi Product type Yeast Strain designation 别名 EG 604 [CBS 7222, GSU 8541] Type strain 模式菌株 Yes Isolation 分离源 source Healthy ear Geographical isolation United States; Georgia; Atlanta Product format 提供形式 Frozen Storage conditions 保藏温度 -80°C or colderSpecific applications Biomedical Research and Development Material Preceptrol NoMedium 培养基 ATCC Medium 2693: modified Dixon (mDixon) ATCC Medium 2737: Modified Leeming & Notman Agar (MLNA) Temperature 培养温度 24-26°C Atmosphere 需氧情况 Aerobic Handling procedure Frozen ampoules packed in dry ice should either be thawed immediately or stored in liquid nitrogen. If liquid nitrogen storage facilities are not available, frozen ampoules may be stored at or below -70°C for approximately one week. Do not under any circumstance store frozen ampoules at refrigerator freezer temperatures (generally -20°C). Storage of frozen material at this temperature will result in the death of the culture. To thaw a frozen ampoule, place in a 25°C to 30°C water bath, until just thawed (approximately 5 minutes). Immerse the ampoule just sufficient to cover the frozen material. Do not agitate the ampoule. Immediately after thawing, wipe down ampoule with 70% ethanol and aseptically transfer at least 50 µL (or 2-3 agar cubes) of the content onto a plate or broth with medium recommended. Incubate the inoculum/strain at the temperature and conditions recommended. Inspect for growth of the inoculum/strain regularly. The sign of viability is noticeable typically after 1-2 days of incubation. However, the time necessary for significant growth will vary from strain to strain.Deposited as Malassezia sympodialis Simmons et Gueho Depositors E Gueho Chain of custody ATCC Type of isolate Human Special collection NCRR Contract Cross references 参考文献 GenBank AF064024 26S ribosomal RNA gene, partial sequence GenBank AJ249953 26S ribosomal RNA gene, partial sequence 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 六、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                   人胚胎膀胱组织来源细胞的培养条件与方法！ 人胚胎膀胱组织来源细胞是分离自胚胎膀胱组织的原代细胞，主要用于胚胎膀胱组织细胞的相关细胞学研究。 细胞简介平台编号：Bio-132194细胞规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：CCC-HB-2细胞名称：(CCC-HB-2细胞)人胚胎膀胱组织来源细胞细胞生长：贴壁生长细胞形态：上皮样细胞数量：1×106个细胞数细胞传代：1：3传代细胞特性：取材自引产的11周男性胚胎组织细胞纯度：93％细胞活力：87％（ViabilitybyTrypanBlueExclusion）细胞检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌细胞冻存：液氮冻存（基础培养基+10%DMSO+20%FBS）细胞运输：干冰运输（1Vial）或活细胞运输（T-25flasks）细胞用途：只可用于科研不可用于临床诊断和治疗注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） (CCC-HB-2细胞)人胚胎膀胱组织来源细胞培养条件：1、培养基：RPMI-1640培养基（不含Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗+800ng/ml Taxol2、温度：37.0°C3、气体:空气 95%，CO2 5% (CCC-HB-2细胞)人胚胎膀胱组织来源细胞培养方法：收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml培养液继续培养。如果细胞已长满（达80-90%）。即可进行传代，具体步骤如下：a、弃去培养液，用PBS洗1-2次。b、向瓶内加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有6ml 含10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。c、加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养d、传代比例：1:2-1:3温馨提示：培养瓶里面的培养液是加入*高药物浓度的，为800ng/ml。我们采取缓慢增加药物的梯度的方法。具体步骤是，首先加含200ng/mlTaxol药物的培养液，放入培养箱，这段时间会有小部分细胞悬浮起来，属于正常情况，通过换液可以去掉，等细胞待长满就可以消化传代了，这时可以一直用含药物培养液来消化培养细胞，一两代之后就可以将药物浓度提高到500ng/ml，两代后可以将药物浓度提高至*高水平800ng/ml，含药物培养液用于细胞培养都没有问题，冻存的时候就不要在冻存液里加药物了。 (CCC-HB-2细胞)人胚胎膀胱组织来源细胞保存和应用：客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞，如是新鲜原代细胞，客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。如是冻存细胞，客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。(CCC-HB-2细胞)人胚胎膀胱组织来源细胞复苏的原则：在实际操作中，冻存细胞要进行复苏，再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化，以避免慢速融化水分渗入细胞内，再次形成胞内结晶损伤细胞。 如何选购上等的(CCC-HB-2细胞)人胚胎膀胱组织来源细胞？1）该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。2）收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。3）仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。4）用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。5）请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议直接购买我司提供的完全培养基。 (CCC-HB-2细胞)人胚胎膀胱组织来源细胞售后服务：1)发货时附：细胞实拍图片两张、细胞培养说明、细胞操作处理方法、细胞质量问题反馈表等。2）细胞污染问题，请在收到产品48小时内给我们真实的实验结果；细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们真实的实验结果，我们调查核实后予免费调换，不收取任何费用。3）如用户收到细胞8-15天之内因处理不当造成细胞死亡或污染，我公司将以6.5折优惠价重新提供一株原细胞。4）如用户在16-30天内因处理不当造成细胞死亡或污染，我公司将以8折优惠价重新提供一株原细胞。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

               软骨素类芽孢杆菌的培养方法与实验内容及打管说明！ 芽孢杆菌属（Bacillus），细菌的一属，能形成芽孢（内生孢子）。它们对外界有害因子抵抗力强，分布广，存在于土壤、水、空气以及动物肠道等处。 一、菌种简介平台编号：Bio-02902提供形式：冻干物拉丁属名：Paenibacillus Chondroitinus中文译名：软骨素类芽孢杆菌拉丁学名：Paenibacillus chondroitinus原始编号：NBRC 15376菌株来源：←IFO保藏人：周宇光直接来源国家：日本保藏时间：6/3/2004其他保藏编号：=ATCC 51184 =CCUG 28527 =DSM 5051 =CIP 103123 =JCM 9072 =LMG 18040 =NRRL NRS-1351生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株培养温度：30℃培养基：0002    分离源：土壤用途：模式菌株注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、微生物菌种的培养1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃)：是适用范围广的微生物保存法。 五、培养及打管说明1、安瓿瓶开封:用浸过75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、菌株恢复培养:用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基,滴入安瓿管内,轻轻振荡,使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液,移植于1-2支建议的培养基试管中,并在建议的条件下培养。3、注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在6-10℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,需要连续两次继代培养才能正常生长。4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

              棘阿米巴的形态特征与分类研究及感染症状与治疗方法！ 一、菌种简介 棘阿米巴，自由生活的小型原虫。棘阿米巴多见于污染的土壤和水体中，现已分离到7个致病种，其中以卡氏棘阿米巴（A．castellanii）为多见。棘阿米巴入侵途径尚不完全清楚，已知可从皮肤伤口、穿透性角膜外伤、损伤的眼结膜或经呼吸道、生殖道等进入人体。多数寄生于脑、眼、皮肤等部位。 二、形态特征 棘阿米巴有滋养体期和包囊期。滋养体是棘阿米巴的活动形式，为长椭圆形，直径为15-45微米。在适宜环境下表面伸出多数棘状突起，称为棘状伪足，无鞭毛型，以伪足缓慢移动。通常依靠细菌为食物，以二分裂方式进行繁殖，繁殖周期平均约为10小时（6-24小时）。 当环境条件不适宜时，滋养体变小，分泌生成厚的双层囊壁，形成包囊。包囊类圆形，直径为10-25微米，内壁光滑为多边形，外壁常呈皱缩状，内外相接处形成棘孔，是包囊代谢的通道。在病变组织内可查见包囊，但不易检查到滋养体。包囊对外界环境的抵抗力极强，对一般抗菌药物、氯化物、化学消毒剂等均不敏感。包囊甚至在自然环境下可以生存数年。 不同种的棘阿米巴包囊的形态和大小各异，有圆球形、星形、六角形、多角形等。  三、分类研究 (1)形态学分类：1977年，Pussard和Pons主要根据包囊形态将其分为18个种，3个类群。致病的棘阿米巴主要属于类群Ⅱ，类群Ⅲ中的A.culbertsoni也有致病性。 类群Ⅰ的主要特点是：大包囊和滋养体包囊平均直径≥18μm，包囊内外壁距离很宽，外囊光滑或轻微皱褶，内囊呈星形，内外囊壁在内壁突起处相接，棘孔盖在内囊处。 类群Ⅱ的主要特点是：包囊平均直径 类群Ⅲ的主要特征是：包囊平均直径 由于棘阿米巴广泛存在于自然界，又分致病种及非致病种，所以很有必要在属及属以下水平鉴定棘阿米巴。但棘阿米巴形态分种具有一定的局限性，如一些外界条件可影响包囊形态；处于不同时期的包囊形态不同；同一类群内各种的形态相近，尤其是类群Ⅱ、Ⅲ。因此，很多研究者在寻找更客观更准确的分型方法。 (2)基因分型：分析DNA序列差异是最有希望对棘阿米巴在属以下水平进行确切分型的方法。研究较多的是18S rDNA基因测序分型。 四、分布区域 棘阿米巴呈世界性分布。通常，可在土壤和尘埃，新鲜水源如湖水、河水和温泉中、矿物盐水和海水中找到棘阿米巴。也可以存在于泳池、热盆浴、直饮水（如管壁的淤积层中和龙头中），甚至加热、通风、空凋和加湿等设备中。  五、致病性 现已分离到7个致病种，其中以卡氏棘阿米巴（A．castellanii）为多见。棘阿米巴入侵途径尚不完全清楚，已知可从皮肤伤口、穿透性角膜外伤、损伤的眼结膜或经呼吸道、生殖道等进入人体。  六、感染症状 棘阿米巴角膜炎的症状与其他许多普通眼部感染症状相似。症状会持续数周至数月，各人所表现出的症状不尽相同，其主要表现如下：眼痛、眼红肿、视力模糊、对光敏感、眼睛有异物感、多泪。眼睛感染棘阿米巴的患者不会觉察到感染在体内的扩散。 棘阿米巴可以引发严重的，甚至是致死性的脑部感染和被称为“肉芽肿阿米巴脑炎”的脊索感染。一旦发生了此感染，患者会出现头痛、颈部僵硬、反胃呕吐、疲惫、思维混乱、对周围的人和环境缺乏反应、失去平衡感及对身体的控制、癫痫和出现幻觉等症状。病程超过数周，患者通常会死亡。 七、高危人群 尽管感染非常罕见，但隐形眼镜使用者感染棘阿米巴角膜炎的风险较大。隐形眼镜使用者的如下行为会增加感染棘阿米巴角膜炎的风险： 隐形眼镜的保存和操作不规范。 隐形眼镜消毒不规范 (比如使用自来水或自制液体去清洗隐形眼镜)。 戴隐形眼镜游泳、热水盆浴或淋浴。 接触受污染的水。 有角膜外伤史。 2012年9月，英国科学家警告称，棘阿米巴虫若寄生在隐形眼镜上，可能最终导致眼瞎。并指出大多数人由于不注意隐形眼镜卫生，用自来水清洗或戴着隐形眼镜洗澡都可能染上该虫。寄生虫会啃食角膜，导致眼痒、流泪、视力模糊、怕光、眼睑肿胀并且非常疼痛。 由棘阿米巴引发的皮肤感染或扩散病患多发生于免疫系统不完善者或有慢性病的人群中。 八、治疗方法 眼睛和皮肤的感染一般是可以治疗的。如果怀疑自己眼睛或皮肤感染了棘阿米巴，应去咨询医生。当确诊后，药物治疗是非常有效的。药物治疗应采用联合用药的方式，在治疗的不同阶段用药方法也不同。 多数的脑部和脊索棘阿米巴(肉芽肿阿米巴脑炎)患者会死亡。  北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                新技术让微生物与化肥不再“水火不容”！ 百欧博伟生物：化肥盐度指数高，对农作物有益的微生物难以在高盐环境中生存，这是常识。如今，一种新技术正破解“化肥与微生物难以兼容”这一难题。 之前，以中国工程院院士周卫为组长，由山西农业大学校长张强研究员、北京农学院副校长段留生教授、上海化工研究院院长商照聪研究员等众多权威专家组成的专家组，对“高养分高活性化肥生物复合肥”项目进行了评价，专家认为“该项目成果整体达到了国际领先水平”。该成果的亮点在于将难以兼容的化肥和微生物复合在一起，并应用到了实践中，实现了“1+1>2”的效果。该技术已拿到50多件发明ZL。 上述成果由山东省农业科学院农业资源与环境研究所研究员刘兆辉团队与五洲丰农业科技有限公司等7家单位合作完成，是产学研合作的结晶。 党的二十大报告从“全方位”高度概括了夯实粮食安全根基、保障粮食安全的全过程、系统性措施。“在当前阶段，要想保障粮食安全，提高粮食产量，必须实现良种、良法、良肥三者统一。”刘兆辉向科技日报记者表示，化肥对我国粮食增产的贡献高达50%，但缺点在于利用率低。化肥中的氮、磷利用率分别只有40%和20%左右，长期大量施用会造成土壤板结、环境污染。 微生物肥料可以修复被污染的土壤，但缺点是对大田作物施用困难、肥效缓慢、保质期短。如何将难以兼容的微生物与化肥复合，实现“1+1>2”的效果？ 从1998年开始，刘兆辉团队便与企业合作，历经国家级项目、山东省重点攻关课题、科技部转化资金项目、科技部重点国际合作项目等持续研究，取得了“高效生物磷肥生产技术”“环境友好型肥料的创制与应用”分别荣获山东省科技进步奖二等奖、山东省技术发明奖一等奖等的突破。 刘兆辉表示，近10年来，团队在国家重点研发计划和公益性农业行业科研专项等项目支持下，破解了3大难题：传统微生物菌剂浓度低，加入化肥难；缺少有效的微生物活性保护剂；传统复合肥造粒过程高水分、高温干燥使得微生物难存活。 微生物之所以与化肥难以兼容，除了后者的高盐性，还在于后者加工过程的高温和水分，使得微生物难以存活。 记者了解到，该团队创新性地从海洋藻类以及其他植物提取物中筛选出4种兼具促生抗逆新型微生物活性保护剂，解决了微生物与化肥不能直接接触的难题。五洲丰农业科技有限公司负责人王学江告诉记者，针对化肥加工中高温、水分问题，我们研发了低温高压干法保活造粒工艺，避免了温度和水分的介入。 不过，该团队筛选的微生物也不普通。他们从海水原位、滨海盐碱地盐生植物根际、植株和高盐稀态酱醪中定向筛选出260余株耐盐能力强的优异功能菌，以及具有生物防治功能的微生物菌种50多株，活化土壤养分的微生物菌种140多株，最终用了近30年筛选出具有高效耐盐、促生、解磷、解钾、抗逆等功能的8个生产型菌种，研发出超高浓度微生物菌剂生产工艺，建立了规模化生产线。将该菌剂加入肥料生产中，肥料中的微生物菌剂量可达到2亿/克以上。 “最重要的是成本没有增加，还降低了。”刘兆辉表示，得益于低成本和高效用，该成果已在山东、河南、河北、吉林等地建立了40个核心试验示范区。田间试验表明，化肥生物复合肥在保持主要粮食作物稳产的同时可减少化肥用量，显著提高了肥料利用率。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    C28/I2人正常软骨细胞的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-133595规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：C28/I2细胞名称：C28/I2人正常软骨细胞产品类别：人源细胞系生长特性：贴壁生长培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS传代方法：1：2传代细胞形态：上皮细胞样冻存条件：无血清细胞冻存液细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特性1)细胞来源于人的关节组织。2)细胞鉴定：Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ)免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。 三、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 四、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 五、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 六、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 唾液乳杆菌水杨素亚种的储存与培养及打管说明！ 唾液乳杆菌水杨素亚种是Lactobacillus属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究，具体用途为发酵乳品辅发酵剂。 一、菌种简介平台编号：Bio-61663提供形式：冻干物拉丁属名：Lactobacillus Salivarius Subsp. Salicinius中文名称：唾液乳杆菌水杨素亚种属名：Lactobacillus种名加词：salivarius subsp. salicinius来源历史：←北京林业大学食品微生物实验室（1.0233）收藏时间：2008.10.31原始编号：ZJ48资源归类编码：15131319101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究具体用途：发酵面制品特征特性：糖发酵试验:葡萄糖发酵产酸不产气;纤维二糖、果糖、半乳糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、甘露糖、棉子糖、核糖、山梨醇、蔗糖、海藻糖、木糖、松三糖等发酵呈阳性反应;鼠李糖发酵呈阴性反应。    生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：酸面团采集地：河北省承德市培养基：酪蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母粉 5.0g，葡萄糖 5.0g，乙酸钠 5.0g，柠檬酸二铵 2.0g，Tween 80 1.0g，K2HPO4 2.0g，MgSO4.7H2O 0.2g，MnSO4.H2O 0.05g，CaCO3 20.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.8。培养温度：30℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；发酵面制品注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。  三、培养条件1、培养基编号：CM00062、培养基成分：酪蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母粉 5.0g，葡萄糖 5.0g，乙酸钠 5.0g，柠檬酸二铵 2.0g，Tween 80 1.0g，K2HPO4 2.0g，MgSO4.7H2O 0.2g，MnSO4.H2O 0.05g，CaCO3 20.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.8。3、需氧类型：好氧4、培养温度：30℃ 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，并取 100μL 转接到固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   人膀胱移行细胞癌细胞的培养操作及应用研究！  一、背景 人膀胱移行细胞癌细胞是一种来源于膀胱的肿瘤细胞，是膀胱癌的主要类型之一。T24细胞源自病人的转移性细胞腺癌，对T24和相关细胞株有细胞毒性。T24细胞群体倍增时间为19小时，含ras(H-ras)癌基因。 二、人膀胱移行细胞癌细胞培养步骤 1、人膀胱移行细胞癌细胞培养基及培养冻存条件准备： 1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,添加NaHCO3 1.5g/L,D-葡萄糖2.5g/L,丙酮酸钠0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。 2）膀胱移行细胞癌细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）膀胱移行细胞癌细胞冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。 2、细胞处理： 1）复苏人膀胱移行细胞癌细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）人膀胱移行细胞癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）人膀胱移行细胞癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。 三、应用 人膀胱移行细胞癌细胞可以用于腺病毒介导诱导型一氧化氮合酶基因转染对膀胱移行细胞癌细胞的影响： 研究试图通过腺病毒介导的方法将外源性iNOS导入膀胱移行细胞癌细胞T24中,上调细胞内iNOS基因的表达,促使细胞释放大量NO,提高细胞内NO的浓度,从而干扰细胞的生长周期,诱导细胞发生凋亡。以腺病毒介导的基因转移技术在肿瘤基因治疗中应用较为普遍,目的基因可以整合到病毒基因组而后随病毒一起感染宿主细胞。腺病毒具有嗜膀胱细胞的特性,而膀胱又是一个半开放器官,这使应用腺病毒载体进行膀胱癌的基因治疗成为可能。基因治疗联合现有治疗方法寻找对抗膀胱癌复发的新思路和新途径已成为研究热点。 采用联合小剂量化疗药物(HCPT、THP)对人膀胱移行细胞癌T24细胞进行体外杀伤,并进行比较,为腺病毒介导的iNOS的基因疗法联合化疗药物治疗膀胱癌提供一定的实验依据。本课题由三部分组成。 目的：利用腺病毒表达系统构建携带iNOS基因的重组腺病毒载体,并获得rAd-iNOS重组腺病毒,用于后续对T24细胞作用的研究。本实验在先前工作的基础上,将iNOS基因开放阅读框(open reading frame,ORF)片段先亚克隆至腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-1,然后体外重组至腺病毒载体pAd/BL-DEST,构建重组腺病毒载体,并转染HEK293细胞进行腺病毒包装,从而获得重组腺病毒rAd-iNOS。 方法：为确保模板质粒pReceive-M29-iNOS的正确性,将模板质粒进行序列测定。测序正确后,双酶切pReceive-M29-iNOS及腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-1,琼脂糖凝胶电泳检测后分别回收iNOS片段的带和线状pYr-adshuttle-1载体带,连接,转化感受态大肠杆菌DH5α,摇菌扩增,提取重组质粒pYr-adshuttle-1-iNOS,进行酶切鉴定和DNA测序。将鉴定正确的重组质粒采用LR体外同源重组将iNOS表达框亚克隆至腺病毒表达载体pAd/BL-DEST,PacI酶切重组腺病毒载体pAd-iNOS,使重组腺病毒载体线性化后转染包装细胞HEK 293,包装成重组腺病毒rAd-iNOS,PCR鉴定并测定病毒滴度。 结果：经测序,模板质粒pReceive-M29-iNOS的DNA序列分析结果与预期结果完全相符,与NCBI公布的iNOS的ORF进行序列比对,正确性高达100%；经酶切分析、测序结果表明腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-1-iNOS和腺病毒载体pAd-iNOS构建成功；经PCR鉴定,重组腺病毒rAd-iNOS包装成功,其滴度达5.8×108PFU/ml。 结论：成功构建了重组腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-1-iNOS和重组腺病毒载体pAd-iNOS后,采用HEK293细胞进行腺病毒包装,最终获得重组腺病毒rAd-iNOS。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   大肠菌群的检验方法与操作流程及注意事项！ 百欧博伟生物：由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。 目前国内采用的食品大肠菌群检测方法主要有国家食品药品监督管理总局发布的国家标准和国家质量监督检验检疫总局颁布的进出口行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。但两种方法都是采用推测、验证两大步骤。 推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。 证实试验：将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36±1℃培养48±2h，观察是否产气。以BGLB产气为阳性。查MPN表，报告每ml(g)样品中大肠菌群的MPN值。 为方便大家使用和观看，为大家总结MPN法检验大肠菌群的流程如下： 乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。 证实试验：挑取LST产气的发酵管，接种BGLB发酵管36±1℃培养48±2h，观察产气情况。 报告：根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN表，报告每ml（g）大肠菌群的MPN值。 具体操作参见GB4789.3、SN/T0169-2010《进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法》 贴心提醒，MPN采用统计学的方法，通过稀释培养计数，经一系列复杂的运算，估算出具有共同特性的一类微生物在食品中存在的概率。 1、MPN检索表： MPN 为最大可能数(Most Probable Number)的简称。这种方法，对样品进行连续系列进行稀释，加入培养基进行培养，从规定的反应呈阳性管数的出现率，用概率论来推算样品中菌数最近似的数值。 MPN检索表只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度，则表内数字应相应降低或增加10倍。注意国家标准和行业标准中所附MPN表所用稀释度是不同的，而且结果报告单位也不相同。 2、抑菌剂： 大肠菌群检验中常用的抑菌剂有胆盐、十二烷基硫酸钠、洗衣粉、煌绿、龙胆紫、孔雀绿等。抑菌剂的主要作用是抑制其它杂菌，特别是革兰氏阳性菌的生长。 标准中LST肉汤利用十二烷基硫酸钠作为抑菌剂，BGLB肉汤利用煌绿和胆盐作为抑菌剂。 抑菌剂虽可抑制样品中的一些杂菌，而有利于大肠菌群细菌的生长和挑选，但对大肠菌群中的某些菌株有时也产生一些抑制作用。有些抑菌剂用量甚微，称量时稍有误差，即可对抑菌作用产生影响，因此抑菌剂的添加应严格按照标准方法进行。 为保证实验结果的可靠性，大肠菌群检验过程中又有哪些注意事项呢？ 1、检样时注意无菌操作； 2、稀释时采用的稀释液可以用磷酸盐缓冲液或生理盐水，接种时可采用九管法，设置三个梯度，分别为0.1g/mL、0.01g/mL、0.001g/mL，每一个稀释度的试管应充分混匀； 3、每次实验需要有阴性对照； 4、使用小倒管培养基配制时，为排净气泡，灭菌时不要把试管的盖子盖的太紧，灭菌后注意观察一下倒管中的气体是否排完全； 5、高压灭菌后，等高压灭菌锅的压力表达到0，取出培养基放到冰箱冷却，效果会比较好； 6、在实际工作中，大肠菌群的产气量不同，有时倒管中充满气体，有时倒管中只有非常少的气体（类似小米粒的气泡），这时可以轻轻摇晃试管，如有气泡沿管壁快速上浮，应考虑可能有气体产生。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                      主要用于产己酸和白酒增香的：科氏梭菌 科氏梭菌是Clostridium属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类；教学，具体用途为己酸，白酒增香。 一、菌种简介平台编号：Bio-67361规格：冻干粉/培养物拉丁属名：Clostridium Kluyveri中文名称：科氏梭菌拉丁名称：Clostridium kluyveri来源历史：←黑龙江轻工研究所分离（黑80#）收藏时间：1979-00-00原产国：中国资源归类编码：15131711101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产特征特性：G-，周生鞭毛。菌落扁豆形，白色。发酵乙醇，不发酵葡萄糖、果糖、乳糖和淀粉。不水解淀粉，不分解纤维素。生长温度范围15~37℃，耐受温度80℃。具体用途：产己酸,白酒增香。生物危害程度：四类培养基编号：CM0172培养基名称：己酸细菌培养基(Caproic Acid Bacteria Medium)培养基成分：酵母膏 1.0g，醋酸钠 0.5g，MgSO4 7H2O 0.02g，K2HPO4 0.04g，CaCO3 0.5g，(NH4)2 SO4 0.05g，蒸馏水100ml。[注] 0.5 kgf/cm2灭菌30min，然后无菌操作加入乙醇（总浓度达2%～2.5%）。培养温度：34℃需氧类型：厌氧保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：研究；生产；产己酸,白酒增香。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征科氏梭菌，菌落乳白色、近圆形、边微波状，2.53.5mm，细胞杆状、稍弯、单个、成对或成短链状，周生鞭毛运动，G+，产芽孢，孢子卵圆，微碱，有机化能，厌氧，产己酸。 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 柠檬色短小杆菌的培养方法与实验内容及使用范围！ 柠檬色短小杆菌是Curtobacterium属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类；研究；教学。 一、菌种简介平台编号：Bio-56959提供形式：冻干物拉丁属名：Curtobacterium Citreum中文名称：柠檬色短小杆菌属名：Curtobacterium种名加词：citreum来源历史：←北京普泰科技开发有限公司收藏时间：2013.5.28原始编号：11资源归类编码：15131526105模式菌株：非模式菌株主要用途：研究具体用途：餐厨垃圾处理特征特性：菌体革兰氏阳性，短杆状，0.41×0.48～0.81μm，成链状排列，无芽孢。在含NA培养基上，菌落圆形，黄色，表面隆起，湿润有光泽，不透明，边缘整齐。    生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：PT007复合菌培养基：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：30℃资源保藏类型：培养物保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：10675用途：研究；餐厨垃圾处理注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征柠檬色短小杆菌，细菌菌体呈短杆状，分散排列，菌落直径约2-3mm，菌落为圆形，黄色，表面光滑，边缘整齐。细菌无荚膜，无芽孢，革兰氏染色为阳性，细菌通过裂殖进行繁殖。该细菌为异养型细菌，在生长过程中需要氧气，不需要阳光，接触酶反应阳性，氧化酶反应阴性。该细菌的最适生长温度为30 ºC左右，最适环境pH为7.0左右。该细菌在生长过程中不需要添加生长因子和其他营养物质。  三、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,酿酒酵母菌组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 星座链球菌的培养特性与生化反应及鉴别要点！ 星座链球菌由星座亚群( S. constella subsp constellatus ) 和咽喉亚群( S. constellatus subsp pharynges) 组成。本菌属咽峡炎群，该群还包括咽峡炎链球菌(S. anginosus) 和中间链球菌(S. intermedius)。 一、菌种简介平台编号：Bio-80354规格：Freeze-Dried拉丁属名：Streptococcus Constellatus菌株名称：星座链球菌形态：成双或短链排列培养特性：在5 % CO2 环境下生长良好用途：ATCC原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Streptococcus constellatus (Prévot) Holdeman and Moore 拉丁名(ATCC? 9963?) 统一编号 Deposited As Streptococcus sp.Strain Designations 菌株别名 NIH 966Isolation 分离基物 Isolated from a patient with ethmoid sinusitisBiosafety Level 生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedPreceptrol? noType Strain 模式菌株 noAntigenic Properties Lancefield's group FMedium 培养基 ATCC? Medium 44: Brain Heart Infusion Agar/BrothATCC? Medium 260: Trypticase soy agar/broth with defibrinated sheep bloodGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 37℃Atmosphere 需氧情况: AnaerobicName of Depositor 寄存人PA Long 三、形态与染色革兰阳性球菌，成双或短链排列。在含有血液、血清的肉汤培养基中呈链状排列。 四、培养特性在5 % CO2 环境下生长良好。在血琼脂平板上35℃培养1 8~ 2 4 h ，形成较小( 直径约1. 0 mm) 、灰白色、圆形、光滑、温润、边缘整齐、有明显的β溶血环的菌落。 五、生化反应触酶试验阴性，分解葡萄糖，不分解甘露醇和山梨醇，α葡萄糖苷酶、透明质酸酶、VP 和精氨酸双水解酶试验阳性，β- D 半乳糖苷酶、β- D 葡萄糖苷酶和CAMP 试验均为阴性，杆菌肽耐药。 六、鉴别要点1、本菌特征革兰阳性球菌，成双或短链排列，菌落较小，有明显的β溶血环，触酶、胆汁七叶苷、CAMP试验和杆菌肽抑菌试验均阴性。2、与化脓性链球菌的鉴别 两者均有β溶血，但星座链球菌杆菌肽耐药，而化脓性链球菌杆菌肽敏感。3、与无乳链球菌的鉴别两者菌落形态相似，但星座链球菌CAMP 试验阴性，而无乳链球菌CAMP 试验阳性。 七、临床意义星座链球菌广泛分布于外部环境，以及人和动物的体表、口鼻腔和肠道，也是化脓性链球菌之一，可引起心内膜炎、肺炎、菌血症、腹腔或皮肤感染等。药敏试验的选药原则: 首选青霉素或氨苄西林，其次红霉素、氯霉素、克林霉素、氧氟沙星、万古霉素、头孢曲松等抗生素。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                 KG-1A人急性骨髓白血病细胞系的特点与应用！ 一、背景 KG-1A人急性骨髓白血病细胞系是一种人类急性髓系白血病的细胞系，来源于中国医学科学院血液学研究所。该细胞系具有高度致死性、易产生耐药性和易发生突变等特点，因此在临床治疗中应用较为有限。 二、KG-1A人急性骨髓白血病细胞系具有以下特点 1、来源：KG-1A细胞系是由中国医科大学附属第一医院的研究人员从中国健康人群中分离出来的，因此具有较高的亲缘关系和代表性。 2、分化程度：KG-1A细胞系的分化程度较低，即原始造血干细胞水平，这使得它在体外培养时具有较强的增殖能力和抗凋亡能力。 3、基因组特征：KG-1A细胞系具有较丰富的基因突变，包括常见的染色体易位、缺失、插入等，这些突变为研究AML的分子机制提供了丰富的资源。 4、临床应用：由于KG-1A细胞系具有较强的体外生长能力和较好的体内移植潜力，因此在AML的基础研究和临床治疗中具有重要价值。 三、KG-1A人急性骨髓白血病细胞系培养步骤 1、准备培养基：使用含有葡萄糖、氨基酸、维生素和矿物质的LB(Luria-Bertani)培养基。将培养基加入高压灭菌器中进行灭菌，然后将其放入37°C、5%CO2的恒温培养箱中预热至37°C。 2、收集细胞样本：从患者体内采集骨髓或外周血样本，并按照标准操作规程处理样本。通常采用Ficoll-Paque或Percoll离心法分离出白血病细胞。 3、洗涤细胞：用生理盐水洗涤细胞两次，以去除残留的血液成分和杂质。 4、添加抗生素：将0.5μg/ml的gentamicin或kanamycin添加到培养基中，以防止细菌污染。 5、分瓶培养：将洗涤后的细胞悬液加入到预先准备好的无菌试管中，每个试管加入约100μl的细胞悬液。将试管标记上患者的姓名和日期，并将它们放置在37°C、5%CO2的恒温培养箱中。 6、细胞生长与传代：观察细胞的生长情况，当细胞密度达到80%时，需要进行传代。传代的方法是将细胞悬液转移到新的无菌试管中，每瓶加入10-20ml的新鲜培养基，并在37°C、5%CO2的恒温培养箱中继续培养。 四、应用 KG-1A人急性骨髓白血病细胞系可以用于KG1a耐药细胞的构建及其通过sEVs改变受体细胞耐药性的研究： 通过地西他滨梯度诱导构建了一株耐受地西他滨的KG1a(急性髓系白血病细胞),以下简称KG1a-DAC。通过检测KG1a和KG1a-DAC的IC50,以及地西他滨对KG1a和KG1a-DAC增殖能力和细胞活力的影响。 结果表明成功构建了KG1a-DAC(KG1a-DAC比KG1a对地西他滨的IC50>=10)。接着,本论文以KG1a和KG1a-DAC为实验对象,研究KG1a-DAC是否影响KG1a对地西他滨的敏感性。 主要实验结果如下: (1)与KG1a-DAC共培养可以降低KG1a对地西他滨的敏感性。并且发现KG1a-DAC来源的条件培养基也可以降低KG1a对地西他滨的敏感性。 (2)用KG1a-DAC来源的sEVs处理KG1a后,实验结果表明KG1a-DAC来源的sEVs能显著降低KG1a对地西他滨的敏感性。 (3)共培养后的KG1a中地西他滨代谢相关蛋白ENT1,DCK,CDA蛋白没有显著变化,但是抑癌基因P15INK4B显著降低。用KG1a-DAC来源的sEVs处理KG1a,实验结果表明KG1a-DAC来源的sEVs能抑制地西他滨诱导KG1a中P15INK4B表达。且通过GW4869抑制sEVs的分泌阻碍了KG1a-DAC对KG1a的影响,进一步证明KG1a-DAC主要通过sEVs抑制KG1a中P15INK4B表达,减弱其对地西他滨的敏感性。 (4)通过miRDB,miRWalk,targetscan数据网站预测,以及RT-qPCR验证鉴定出KG1a-DAC来源的sEVs包含靶向P15INK4B基因的miR-323b-5p。通过向KG1a中瞬时转染miR-323b-5p inhibitor后与KG1a-DAC共培养,再检测KG1a中P15INK4B的表达,实验证明miR-323b-5P的靶基因是P15INK4B。 (5)向KG1a中瞬时转染miR-323b-5p inhibitor后与KG1a-DAC共培养,随后通过CCK8检测KG1a的活力,结果证明miR-323b-5p inhibitor能阻断共培养影响KG1a对药物的敏感性。 综上发现KG1a-DAC通过sEVs传递miR-323b-5p,从而抑制KG1a中P15INK4B的表达,以此降低KG1a对地西他滨的敏感性。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  类谷糠乳杆菌的特点与优势及微生物培养方法！ 类谷糠乳杆菌是Lactobacillus属的微生物，原产地为中国。菌体长杆状，单个或链状排列，G+。在MRS琼脂培养基上，菌落形态呈圆形，较小，较湿润，白色。可发酵葡萄糖产乳酸。主要用途为研究，具体用途为发酵泡菜。产乳酸。  一、菌种简介平台编号：Bio-090897规格：冻干物拉丁属名：Lactobacillus Parafarraginis中文名称：类谷糠乳杆菌拉丁名称：Lactobacillus parafarraginis来源历史：←中国科学院成都生物研究所收藏时间：2018/1/15原始编号：cq8.1.2原产国：中国资源归类编码：15131319101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：菌体长杆状，单个或链状排列，G+。在MRS琼脂培养基上，菌落形态呈圆形，较小，较湿润，白色。可发酵葡萄糖产乳酸。具体用途：发酵泡菜。产乳酸。生物危害程度：四类培养基编号：CM0006培养基名称：MRS培养基培养基成分：酪蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母粉 5.0g，葡萄糖 5.0g，乙酸钠 5.0g，柠檬酸二铵 2.0g，Tween 80 1.0g，K2HPO4 2.0g，MgSO4.7H2O 0.2g，MnSO4.H2O 0.05g，CaCO3 20.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.8。培养温度：37℃需氧类型：微需氧分离基物：泡菜水采集地：重庆市渝中区保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：发酵泡菜。产乳酸。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 五、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

               核盘菌的形态特征与生态习性及分布地区与经济用途！ 一、菌种简介核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)是一种危害作物和蔬菜的世界性的重要的植物病原菌。核盘菌可以广泛地侵染很多单子叶和双子叶植物。对菌核病的防治主要依靠化学农药，然而化学防治不仅成本高、污染环境，而且防效也不理想；同时，食品的安全性也受到严重影响。 二、基本信息中文名：核盘菌 外文名：Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary 门：子囊菌门纲：锤舌菌纲目：柔膜菌目科：核盘菌科属：核盘菌属  三、形态特征子囊盘小, 呈小杯状，浅肉色至褐色，单个或几个从菌核上生出，直径0.5-1cm，柄褐色细长，弯曲，长3-5cm，向下渐细，与菌核相连。菌丝体可以形成菌核，长柄的褐色子囊盘产生在菌核上。菌核形状多样，长3-15μm。子囊圆柱形，120-140μm×11μm，孢子通常8个，单行排列，椭圆形，8-14μm×4-8μm，侧丝细长, 线形, 无色, 顶部较粗。 四、形态描述菌核黑色，不规则形，由暗色的皮层和无色的髓部构成，5-18×2-6 mm；子囊盘生于菌核上，盘状，中央凹陷，具柄，直径1.7-7.0 mm，子实层米色、肉桂色、或淡褐色，子层托颜色稍淡于子实层，柄基部暗色；外囊盘被为角胞组织，厚35-76（-105）μm，外层细胞近球形、椭圆形或长形，细胞纵轴与囊盘被表面垂直，8-32×7-23μm；盘下层为交错丝组织，厚50-260μm，菌丝无色，宽3-8μm；子实下层发育不健全，厚 15-30μm；子实层厚 127-150μm；子囊近圆柱形，具8个子囊孢子，孔口在碘液中呈蓝色，110-130×5.0-6.5μm；子囊孢子椭圆形至近梭形，无色，单细胞，不具油滴或具 2个小油滴，在子囊中单列排列， 7.5-11.0×3.0-4.0μm；侧丝线形，宽1.5-2.0μm。小分生孢子在培养中常见。  五、生态习性生于林地、田间上，是油菜的重要病原物。  六、分布地区吉林、河南、江苏、四川、广西、广东、江西、福建、台湾、湖南、湖北、浙江、甘肃、陕西、贵州、新疆等。 七、经济用途记载可食用，不过一般个体小，食用价值不大。日本曾利用此菌发酵培养，制取的多糖，对小白鼠肉瘤180有抑制作用。另外，此菌危害十字花科、豆科、茄科、芸香科等植物。 八、采集地Acalypha australis L. (铁苋菜)：台湾 ( 653 ).Allium fistulosum L. (葱)：台湾 ( 653 ).Alternanthera sessilis (L.) DC. (连子草)：台湾 ( 653 ).Amaranthus viridis L. (皱果苋)：台湾 ( 653 ).Anagallis arvensis L. (海绿)：台湾 ( 653 ).Apium graveolens L. (芹菜)：台湾 ( 653 ).广西 ( 4 ).Arctium lappa L. (牛蒡)：台湾 ( 653 ).Asteromaea indica (L.) Bl. (鸡儿肠)：四川 ( 262 ).Astragalus sinicus L. (紫云英)：台湾 ( 653 ).Beta vulgaris L. ([艹+恭]菜)：台湾 ( 653 ).四川 ( 262 ).Bidens pilosa L. (三叶鬼针草)：台湾 ( 653 ).Blumea sericans Hook. f. (丝艾纳香)：台湾 ( 653 ).Boehmeria nivea (L.) Gaud. ( 麻)：台湾 ( 653 ).Bothriospermum tenellum Fisch (柔弱斑种草)：台湾 ( 653 ).Brassica campestris L. (野油菜)：浙江 ( 104 ).江西 ( 43 ).台湾 ( 653 ).广东 ( 211 ).广西 ( 41 ).Brassica campestris L. var. oleifera DC. (油菜)：浙江 ( 256 ).江西 ( 71 ).福建 ( 307 ).湖北 ( 298 ).湖南 ( 56 ).Brassica campestris L.var.purpuraria Bail. (紫菜苔)：四川 ( 262 ).Brassica cernua Forbes et Hemsl. (大油菜)：四川 ( 262 ).Brassica chinensis L. (小油菜)：浙江 ( 25 ).广西 ( 4 ).四川 ( 262 ).Brassica juncea (L.) Czern. et Coss. (芥菜)：浙江 ( 25 ).台湾 ( 653 ).湖北 ( 298；337；).广西 ( 4 ).四川 ( 262 ).Brassica juncea (L.) Czern. et Coss. var. tumida Tsen et Lee (茎用芥菜)：四川 ( 165 ).Brassica oleracea L. (甘蓝)：江苏 ( 43 ).台湾 ( 653 ).湖北 ( 298 ).广西 ( 4 ).四川 ( 262 ).Brassica oleracea L. var. botrytis L. (花椰菜)：台湾 ( 653 ).Brassica oleracea L. var. capitata L. (卷心菜)：吉林 ( 282 ).浙江 ( 256 ).福建 ( 29；195；).湖南 ( 191 ).Brassica pekinensis Rupr. (大白菜)：吉林 ( 282 ).新疆 ( 137 ).Brassica rapa L. (芜菁)：广西 ( 130 ).Brassica spp. (芥属)：浙江 ( 25 ).四川 ( 112 ).Cajanus cajan (L.) Millsp. (木豆)：广西 ( 4 ).四川 ( 262 ).Calendula arvensis L. (小金盏花)：台湾 ( 653 ). 九、讨论这是 Sclerotinia Fuckel的模式种，其异名多达15个，而且寄主范围十分广泛，可寄生在60个科的350余种草本植物上（Kohn，1979；戴芳澜，1979）。一般情况下见到的多为该种的菌核，子囊盘从菌核上产生，油菜菌核的子囊盘比较容易获得。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                米根霉的形态特点与生活史及培养方法与发酵应用！ 一、菌种简介 米根霉(Rhizopus oryzae Went et Pr.Geerl.) 是中国药和酒曲中的重要霉菌之一 。在土壤、空气及其他物质上亦常见。菌落疏松或稠密，最初白色后变为灰褐至黑褐色，匍匐枝爬行，无色。假根发达，指状或根状分枝。囊托楔形，菌丝形成厚垣孢子，接合孢子未见。发育温度30～35℃，最适温度37℃，41℃亦能生长。能糖化淀粉、转化蔗糖 ，产生乳酸、反丁烯二酸及微量酒精。产L(+)乳酸能力强，达70%左右。 二、基本信息 中文名：米根霉 外文名：Rhizopus oryzae Went et Pr.Geerl. 类型：中国药和酒曲中的重要霉菌之一 最适温度：37℃ 三、形态特点 米根霉在分类上属于接合菌亚门(Zygomycota)，接合菌纲(Zygomycetes)，毛霉目(Mucorales)，毛霉科(Mucoraceae)，根霉属(Rhizopus)。菌落疏松或稠密，最初呈白色，后变为灰褐色或黑褐色。菌丝匍匐爬行，无色。假根发达，分枝呈指状或根状，呈褐色。孢囊梗直立或稍弯曲，2－4株成束，与假根对生，有时膨大或分枝，呈褐色，长210－2500μm，直径5－18μm,囊轴呈球形或近球形或卵圆形，呈淡褐色，直径30－200μm．囊托呈楔型。孢子囊呈球形或近球形，老后呈黑色，直径60－250μm．孢囊孢子呈椭圆形、球，其形状、大小不一致，未见接合孢子。该菌于37－40℃能生长。 斜面培养基：PDA培养基 ．去皮马铃薯200 g，切成小块，加水1 L，煮沸30 min，双层纱布过滤取清液．加水补充至1 L，再加琼脂20 g．基础发酵培养基 (g/L)：葡萄糖100，尿素2.0，KH2PO4 0.3，NaH2PO4 0.08，MgSO4·7H20 0.25，ZnSO4·7H20 0.08，CaCO3 50(单独灭菌)。 四、分布区域 中国、泰国 五、生活史 米根霉的生活史分为有性繁殖世代和无性繁殖世代，在台湾环境以无性繁殖为主。 1、无性世代 孢子囊孢子为多室球形，从孢子释放离开，早良好的生长条件下先长出发芽管，再形成白色、分枝、气生的菌丝。真菌在菌丝基部形成匍匐丝和假根，最后由后者再长出孢子囊柄和孢子囊，孢子囊里面长有孢子囊孢子。如此完成无性生殖。 2、有性世代 米根霉是属于异宗配合的真菌，有性繁殖世代有两个不同的生理亲和型菌丝，即阳性（+）和阴性（—）菌丝。这些菌丝是由孢子囊孢子发芽形成。当两个可亲和的接合子梗接触后形成原配子囊。两个原配子囊融合形成配子囊，进行质配，发育成原接合孢子囊，以后成为黑色厚壁的接合孢子囊，内部含有一个接合孢子。接合孢子发芽形成孢子囊和孢子囊孢子，完成有性繁殖 六、培养方法 斜面培养：34℃，培养5～7 d． 摇瓶发酵培养：取一新鲜的斜面活化菌种，加入20 mL生理盐水，用接种环刮下孢子，制成孢子悬浮液，取1 mL孢子悬浮液接种于装有60 mL发酵培养基的250 mL三角瓶中，添加一定量CaCO3，34℃，200 r/min摇床培养60 h． 培养时最佳培养基和培养条件为( L)：葡萄糖160，氯化铵2，KH2PO4 0.3，MgS04·7H20 0.25，ZnSO4·7H20 0.08．最佳培养条件为：34℃，摇床转速200 r/min，250 mL三角瓶装培养液50mL,一次性添加CaCO3 80 g/L用于调节pH值．选自集美大学学报(自然科学版) 七、发酵应用 米根霉产糖化酶发酵条件的研究 米根霉经常被用于发酵工程，主要是利用它分泌的淀粉糖化酶，将淀粉转化为葡萄糖。 其淀粉糖化酶的活性受环境的影响，如下： ①发酵时间最好在40小时左右，大约40小时以后酶活性开始下降，60小时后不足一半。 ②最适温度约30℃左右，高于30℃后酶活性急剧下降。 ③最佳ph约6，酸性环境要好于碱性环境。 ④最适酒精浓度约6%vol，高于12%vol后活性急剧下降。 ⑤金属Cu、Ca、Mg离子能促进酶活性，Mn、Zn则不利于酶活性，Fe亚铁离子对酶的抑制作用最大。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                嗜根考克氏菌：指定试验菌种及抗生素效价测定 嗜根考克氏菌是Kocuria属的微生物，原产地为中国。非模式菌株。球状，多聚排列，黄色，G+，无芽孢，异养，好氧，不需光照对不良环境具有一定抗性。耐干旱，有一定耐辐射能力。主要用途为研究；教学。  一、菌种简介平台编号：Bio-56728提供形式：冻干物拉丁属名：Kocuria Rhizophila中文名称：嗜根考克氏菌属名：Kocuria种名加词：rhizophila其它中心编号：=CMCC 28001来源历史：←CMCC←北京生研所←FDA(1001)收藏时间：2011.3.9资源归类编码：15131518102模式菌株：非模式菌株主要用途：研究具体用途：抗生素效价测定。卫生部颁布的《乳及乳制品中舒巴坦敏感β-内酰酶类物质检验方法—杯碟法》指定试验菌种。生物危害程度：四类致病对象：无培养基：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：30℃资源保藏类型：培养物保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：10445用途：研究；抗生素效价测定。卫生部颁布的《乳及乳制品中舒巴坦敏感Β-内酰酶类物质检验方法—杯碟法》指定试验菌种。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、微生物培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 五、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  棱柄马鞍菌的特征与分类及生态习性与经济用途！ 棱柄马鞍菌，马鞍菌科马鞍菌属，子囊果小。褐色或暗褐色，菌盖马鞍形。此种可食用，但也有记载有毒不宜采食。有时此种菌盖多皱曲，外形又近似于鹿花菌。 一、菌种简介平台编号：Bio-30755规格：培养物拉丁属名：Helvella Lacunosa中文名称：棱柄马鞍菌拉丁属名：Helvella种名加词：lacunosa Fr.收藏时间*：2008-10-20来源历史：西北农林科技大学转原产国：中国资源归类编码：15151700000模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；教学特征特性：子实体小。菌盖直径2-5cm，马鞍形，褐色或暗褐色，表面平整或凸凹不平，边缘不与菌柄连接。菌柄长3-9cm，粗0.4-0.6cm，灰白至灰色，具纵向沟槽。子囊（200-280）μm×(14-21)μm，每个子囊里有8个孢子。孢子无色，光滑，含一大油滴，椭圆形或卵形，（15-22）μm×(10-13)μm。侧丝细长，有或无隔，顶部膨大，粗达5-10μm。夏秋季于林中地上单生或群生。可食用。生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：菌体采集地区：陕西采集具体地点：镇安木王国家森林公园针阔叶混交林培养基信息：培养基编号: 14 培养基名称: PDA培养温度：25资源保护类型：培养物保藏方法：定期移植法共享方式：资源交换性共享提供形式：斜面培养物实物状态：有实物用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征子囊果小。褐色或暗褐色，菌盖马鞍形。菌盖直径2-5cm，表面平整或凸凹不平，盖边缘不与菌柄连接。菌柄长3-9cm，粗0.4-0.6cm，灰白至灰色，具纵向沟槽。子囊200-280μm×14-21μm。孢子椭圆形或卵形，光滑, 无色, 含一大油滴，15-22μm×10-13μm。每个子囊里有8个孢子。侧丝细长，有或无隔, 顶部膨大，粗达5-10μm。 三、分类地位盘菌目、马鞍菌科、马鞍菌属。 四、分布地区黑龙江、吉林、辽宁、河北、山西、青海、甘肃、陕西、江苏、四川、云南、新疆、西藏等。 五、生态习性夏秋季在林中地上单个或成群生长。 六、经济用途此种可食用，但也有记载有毒不宜采食。有时此种菌盖多皱曲，外形又近似于鹿花菌。 七、培养及打管说明1、安瓿瓶开封：产品仅用于科研用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长。4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                       用于小麦赤霉菌病防治研究的：小麦赤霉菌 小麦赤霉菌是Gibberella属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；生产。 一、菌种简介平台编号：Bio-65806提供形式：冻干物拉丁属名：Gibberella Zeae中文名称：小麦赤霉菌属名：Gibberella种名加词：zeae来源历史：←北京工商大学化工学院（30012）←南开大学微生物系收藏时间：2006.3.26原始编号：PDA1（麦）资源归类编码：15151516103模式菌株：非模式菌株主要用途：研究具体用途：用于小麦赤霉菌病防治研究。特征特性：有性态子囊壳近圆锥形，蓝黑色，子囊棒状，无色，子囊孢子纺锤形，稍弯曲，多胞，无色，子囊壳形成最适宜的温度为20~28℃，在低于10℃时很少发生，子囊孢子萌发适温为25~30℃，代谢产物含有玉米赤霉烯酮等多种毒素。生物危害程度：四类致病对象：无培养基：马铃薯提取液 1.0L，葡萄糖 20.0g，琼脂 15.0g，pH自然。[注] 马铃薯提取液：取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1.0L煮沸30min，滤去马铃薯块，将滤液补足至1.0L。培养温度：26℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：40527用途：研究；用于小麦赤霉菌病防治研究。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征小麦赤霉菌，菌落正面白色绒毛状，背面蓝色；分生孢子梗二叉分枝，短枝筒形，顶细长；分生孢子顶生，纺锤形，单孢、少2孢和4孢；有蓝色膨大的菌丝。 三、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。 四、培养条件1、培养基编号：CM01722、培养基成分：酵母膏 1.0g，醋酸钠 0.5g，MgSO4 7H2O 0.02g，K2HPO4 0.04g，CaCO30.5g，(NH4)2 SO4 0.05g，蒸馏水 100ml。[注] 0.5 kgf/cm2 灭菌 30min，然后无菌操作加入乙醇（总浓度达 2%～2.5%）。3、需氧类型：厌氧4、培养温度：34℃ 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系菌种。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    盲肠肠球菌的培养方法及单层冻干管打管说明！  盲肠肠球菌是Enterococcus属的微生物，原产地为比利时。革兰氏阳性球状菌。主要用途为分类学研究，具体用途为模式菌株。 一、菌种简介平台编号：Bio-53158规格：冻干物拉丁属名：Enterococcus Cecorum菌株名称：盲肠肠球菌属：Enterococcus原产地：比利时模式菌株：模式菌株其他编号：AS1.2139 =JCM 8724=ATCC43198 =DSM20682培养基编号：116培养温度：37培养时间：18-24 小时用途：模式菌株注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基（血琼脂平板） 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。  四、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用 0.3-0.5ml 的培养液或无菌水溶解，接种在 1-2 支平板上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。 五、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  DT40鸡淋巴瘤细胞的知识与应用及培养操作步骤！ 一、背景 DT40鸡淋巴瘤细胞是来自Hyline SC鸡法氏囊淋巴细胞株经鸟类白血病病毒诱导建株的。原始淋巴瘤用罗氏相关病毒1(RAV-1)感染出生１天的小鸡得到。法氏囊中生成的肿瘤制成细胞悬液后通过静脉注射输入同基因型的受体小鸡。经过一次体内移植后，建立了DT40细胞株。这株细胞包含的前病毒基因整合在c-myc原癌基因的上游，表达的c-myc RNA水平较高。它缺少一个正常c-myc基因，但含有两个拷贝ALV去调控的myc基因。这株细胞保留了重排免疫球蛋白轻链基因(IgL)的能力。 在IgL位点，DT40包含一个重排和一个胚系同源基因。c-rel基因和v-rel癌基因在DT40细胞株中都能诱导组织相容性(MHC)II类抗原表达。v-rel诱导的MHCII表达比c-rel诱导快，且其有效性在数周后达到c-rel的50倍。这株细胞呈淋巴母细胞表型。传染性检测表明DT40释放低水平的传染性RAV-1。这株细胞可以用于稳转研究。 二、细胞培养步骤 1、培养基及培养冻存条件准备： 1）准备DMEM培养基；优质胎牛血清，10%；鸡血清，5%；b-巯基乙醇，0.05mM；双抗，1%。 2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 2、细胞处理： 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%，即可进行传代培养。 1.收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。 3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 三、应用 用于REV感染对HD11和DT40细胞凋亡相关因子表达的影响研究： 针对REV免疫抑制的特征,选取HD11（鸡巨噬细胞系）和DT40（鸡淋巴瘤细胞）为研究对象,应用分子生物学技术和免疫学方法结合检测试剂盒,通过对REV感染上述细胞后病毒载量、细胞线粒体膜电位和Ca2+含量及细胞凋亡率等进行检测,同时测定了细胞线粒体途径重要凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2 mRNA表达和蛋白含量变化。 主要研究结果如下： （1）于REV感染的HD11、DT40细胞中均检测到了该病毒,表明REV可在HD11和DT40细胞中复制增殖。且在病毒感染HD11细胞后48 h,病毒载量到达峰值;REV感染DT40细胞后12-72 h,其病毒载量均呈上升趋势。 （2）REV感染HD11细胞后24-36 h,其细胞活力极显著（P （3）REV感染HD11和DT40细胞后,其细胞线粒体膜电位分别在病毒感染后36-48 h、36-72 h显著（P （4）REV感染HD11和DT40细胞后,其细胞内Ca2+含量均在36 h和48 h显著（P0.05）。 （5）REV感染HD11细胞后24-36 h和72 h,其细胞凋亡率均极显著（P0.05）;REV感染DT40细胞后12 h、48 h和72 h,DT40细胞凋亡率极显著（P （6）REV感染HD11细胞后,其Bcl-2 mRNA表达在24-36 h极显著（P REV感染DT40细胞后,其Bcl-2 mRNA表达在12 h、48-72 h均极显著（P0.05）。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！