化妆品生产过程中微生物污染的来源与控制方法！ 百欧博伟生物：化妆品的微生物危害，首先表现在感官上使用的色、香、味发生变化，导致质量下降，失去商品价值；更主要的是病原微生物及其代谢产物会导致人体健康受到危害，为此，有必要采取防止微生物污染的措施。 因此在化妆品生产时，除了在生产过程中加强卫生管理外，为了达到防腐、防霉的目的，大部分产品中必须加入防腐杀菌剂。 一、微生物对化妆品的危害 一般来说，只要有水、碳源、氮源、矿物质、微量的金属、氧和合适的温度及合适的pH值下，微生物就能生长繁殖，化妆品中一般都具备微生物这些生长和繁殖的条件。 特别是近年来大量营养物质（如人参提取液、胎盘提取液、水解蛋白和维生素等）在化妆品中的使用，为微生物的生长创造了更好的营养条件。 霉菌能在产品的表面繁殖，导致产品发霉，而细菌可在产品内外各部分繁殖，导致产品腐败。微生物污染的产品表现出如下现象： ①产品内外都变色。这是由于细菌产生色素所致。 ②产品表面形成红、黑、绿等颜色霉斑。这是由于霉菌产生不同色素所致。 ③产品发生气胀现象。这是由于微生物特别是醇母菌产生气体或难闻气味所致。 ④产品散发酸味。这是由于微生物分解有机物产生酸，使产品的 pH值降低。 ⑤乳化体破坏和分层。可能是由于细菌，霉菌分解膏体内的有机营养物。使乳化体受破坏，稳定性变差，出现黏度变化、分层和失去光泽等不同程度的变化。 二、化妆品微生物污染的来源 化妆品中造成微生物污染的主要途径有两个方面： 一是生产过程中由于原料、操作、工艺、设备、运输而被微生物污染，称为一次污染； 二是在使用过程中由于不注意卫生而引起的微生物污染，称为二次污染。 1、一次污染来源 一次污染的来源主要有以下几方面： （1）原材料 特别是一些含水的原材料（如动植物提取液）和一些吸附性强的粉状原料，往往容易被微生物污染。 （2）生产用水 生产去离子水的某些环节，如反渗透后的离子交换树脂在使用过程中也容易被微生物污染，从而使生产的去离子水被污染。另外，去离子水静置过程中，微生物能大量繁殖。 （3）设备 由于一些直接与内容物接触的设备在构造上较难分解拆卸，导致弯头、接缝处不易彻底清洗干净，造成微生物污染。 （4）制造环境 制造环境对保证产品的品质有着非常重大的意义，由于布局不合理，人流、物流不分，相应的卫生设施如空气过滤除尘装置、给排气装置、消毒杀菌设备等不健全，都非常容易造成制造环境的污染。 （5）从业人员 这是一个大污染源，如果对从业人员不进行相应的卫生培训教育和健康管理，是很难保证产品的卫生品质的。 2、二次污染来源 二次污染来源于人的手、大气等，主要为革兰阳性菌和霉菌等。消费者在使用和保管上的不当是造成产品变质的主要原因，主要有以下几点： ①将产品取到手中时发现量过多，又倒回瓶中； ②产品超期使用，一些季节性产品使用量不大，但轮换周期长； ③产品为使用方便而摆放在洗脸池边或浴室里，由于温度湿度较大，不仅容易滋生微生物，同时也会对产品的稳定性造成影响。 三、化妆品微生物污染的控制 对于微生物污染的控制，一方面是针对微生物污染的来源，从产品生产过程和使用过程进行控制；另一方面，是在产品配方中加入适量的防腐剂，在产品内部构建一个良好的防腐体系，抑制微生物的生长与繁殖。 下面主要介绍产品生产过程中的微生物控制方法。 1、生产环境的卫生控制 化妆品企业对选址、厂房设计、设备布局及建筑上的要求都有具体规定。 总体来说，生产车间按照生产流程应划分为制造室，半成品存放室，灌装室，包装室和容器清洗、消毒，干燥、存放室以及仓库，检验室和办公区等，做到上下工序衔接，人流、物流分开，避免交叉污染。 在生产区域内应划分洁净等级，内容物制造、充填等内容物有暴露可能的生产环节应设在洁净等级较高的洁净区内（10万～30万级洁净区）， 洁净区内的空气必须经过净化过滤处理，而且需要维持一定的压差，不同等级洁净区之间的压差应不小于49Pa.与室外的压差应不小于9. 8Pa。洁净区与非洁净区之间应设缓冲间，操作者进入洁净区必须经过更衣、风淋。 建筑上生产车间的地面使用不渗水、不吸水、无毒害的材料做成，表面平整、耐磨、防滑。墙面应用浅色、无毒、耐热、防潮、防霉的涂料，表面光滑、不起灰，便于清洁和消毒。对生产环境的消毒方式有日常的紫外线辐射消毒和定期的化学药剂消毒。 定期消毒的药剂，地面、墙面一般采用0.05%的次氯酸钠及0.5%的新洁尔灭等，操作室一般在密闭状态下采用1%~5%的福尔马林及0.05%~0.2%的新洁尔灭等喷雾。 另外，生产环境中空气系统的设计针对工厂每一个区域的特殊要求应有所不同，它应考虑在此区域进行操作所需要的空气质量，这将要求几种不同的空气处理系统，这些系统的设计要基于每一服务区域所需的空气质量。这些系统的设计必须要考虑几个方面，包括进入空气的质量、温度、湿度、交换速度和系统设计对空气纯度的要求，并且要考虑进／出通风口的位置，以及控制气流模式的管道的布置。 2、制造设备的微生物控制 产品的制造设备有制造釜、搅拌机、过滤器、泵、热交换器、管道、贮槽、充填器等。凡直接接触产品原料、半成品、成品的容器、设备、管道。必须采用无毒、耐腐蚀、不脱屑、能够反复清洗和消毒的材料制成。一般以不锈钢材质为好，内表面应光滑、不凹陷和无裂缝，表面吸附力低；构造上应能够分解拆卸，便于清洗灭菌。 操作台表面、设备器具的外表面一般采用不小于25min的70uW/cm2 紫外线灭菌灯照射；制造釜、贮槽、过滤器、管道等一般采用80℃以上灭菌去离子水冲洗30min, 必要时还可加上75%乙醇或其他杀菌剂消毒。 3、原材料的微生物控制 生产产品的主要原料有水、表面活性剂、油脂、蜡、保湿剂、增稠剂及粉体原料等，其他还有氨基酸、维生素、酶制剂等。原料的灭菌方式应根据原料不同而选择适宜的方式。例如粉体类被污染的微生物主要是革兰阳性菌和霉菌，通常采用 EO环氧乙烷和干热灭菌等方式；而制造用的去离子水中多为革兰阴性菌。可以采用加热灭菌、过滤灭菌和紫外线灭菌：相比较而言，油脂、蜡、保湿剂被微生物污染的机会较小，在加热制造的工艺中就可以保证杀灭微生物；对酶制剂等稳定性较差的产品，到目前为止还没有找到行之有效的方法。 化妆品用水一般采用去离子水或蒸馏水，贮存几天后会产生各种杂菌。为保证用水的质量，应每日检测水中的微生物，如果没有明显问题出现，可减少测试频率，但这必须建立在已证明的有效系统基础上。但对水处理系统中微生物控制装置及各用水点，每星期至少进行一次微生物检验，假如有某一取水点测试结果超标，必须进行全面分析，直到找出原因并采取果断措施加以改正。 4、作业人员的微生物控制 在《化妆品卫生监督条例》中明确规定，直接从事化妆产品生产的人员每年必须进行健康检查并取得健康证，而且8种疾病患者或带菌者不得从事产品生产活动。人的污染主要来源于人手、衣服和头发等，微生物类别主要是革兰阳性菌和霉菌。为防止人员带来的微生物污染，必须经常进行卫生管理方面的教育和培训，以提高操作人员的个人卫生意识，勤洗手、勤剪指甲、勤更衣，真正理解《化妆品生产企业卫生规范》中要求穿工服、戴帽、戴口罩、戴手套和定期消毒等的重要意义。 5、包装的污染控制 包装材料（桶、瓶、盖）的不卫生会造成化妆品的微生物污染，需要清洗后再投入使用。特定的包装是保持化妆品质量的措施之一。同一类型产品的保存视其包装类型不同而有不同防止微生物污染的效果，乳液化妆品采用泵式包装的效果好；香波使用旋盖要比滑动盖的效果好。 6、制品的微生物控制 除香水，指甲油、净甲液等产品本身所使用的原料就具有极高的防腐效果外，大多数产品防腐能力不强，需要添加防腐剂。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    禽腺病毒PCR试剂盒的知识与应用及相关研究！ 一、背景 禽腺病毒PCR试剂盒是一种用于检测禽腺病毒的生物试剂，采用PCR技术，可以快速、准确地检测禽腺病毒。 禽腺病毒PCR试剂盒通常包含PCR反应液、酶、引物等成分，其中PCR反应液是核心成分，包含DNA模板、引物、dNTP等。在PCR反应中，酶催化DNA合成，引物引导DNA链的延伸，dNTP提供合成DNA所需的原料。通过PCR反应，可以快速扩增DNA片段，从而达到检测的目的。 禽腺病毒PCR试剂盒具有高灵敏度、高特异性、高重复性等特点，可以快速、准确地检测禽腺病毒，为禽病防控提供有力的支持。同时，该试剂盒操作简便，易于使用，适用于专业实验室和基层单位的使用。 禽腺病毒是禽类中的一种病毒，主要引起禽类腺体的病变和功能障碍。该病毒具有不同的基因型，可引起禽类不同的临床症状和病理变化。其中，一些基因型可引起鸡的包涵体肝炎和心包积水综合征等疾病，这些疾病的发生率较高，对禽类健康和生产造成严重影响。 禽腺病毒主要通过呼吸道、消化道等途径传播，在禽群中可引起大规模的感染。预防和控制禽腺病毒感染主要采取疫苗接种、加强饲养管理和卫生消毒等措施。 禽腺病毒PCR试剂盒的检测原理是采用PCR技术，针对禽腺病毒的基因高度保守区域设计特异性引物，在PCR反应体系中含禽腺病毒核酸模板的情况下，利用PCR技术对禽腺病毒的核酸进行体外扩增检测。在反应过程中，引物引导DNA链的延伸，经过数轮循环扩增后，特异性扩增片段得以扩增。通过琼脂糖凝胶电泳技术对PCR扩增产物进行检测，依据特异性扩增片段的结果，判断待检样品中是否含有猪细小病毒源性成分，实现检测结果的定性分析。 二、应用 禽腺病毒PCR试剂盒可以用于血清4型禽腺病毒广西分离株全基因组测序分析、检测方法和致病性研究： 从Gen Bank下载FAdV-4变异株和非变异株的核苷酸序列,结合利用Primer Explorer V5和Premier 5.0引物设计软件,设计筛选了两套环介导等温扩增(LAMP)引物和2条分子信标探针,对反应时间、反应温度、引物浓度等进行优化,使用禽腺病毒PCR试剂盒建立了鉴别诊断FAdV-4变异株和非变异株的二重荧光LAMP检测方法。该法特异性好,在520 nm和670 nm双荧光通道下,对FAdV-4变异株、非变异株的扩增结果分别为绿色和红色,对FAdV-4变异株和非变异株混合感染样品的扩增结果为黄色,而对FAdV其它血清型、新城疫病毒、禽呼肠孤病毒等毒菌株的检测结果均为阴性;灵敏度高,检测下限为100 copies/μL;干扰性小,高浓度模板不影响低浓度模板的扩增。 使用禽腺病毒PCR试剂盒建立的二重荧光LAMP检测方法可区分FAdV-4变异株、非变异株和二者混合感染。为了解FAdV-4广西分离株的致病性,以不同剂量和途径感染SPF鸡。以不同剂量肌肉注射感染4周龄SPF鸡,记录每组发病和死亡情况;以101.5TCID50剂量通过肌肉注射和口服途径感染SPF鸡,剖检观察病变,并采集组织样品和棉拭子样品,通过荧光定量PCR方法检测病毒载量,通过组织切片观察病理学变化。 结果显示,剂量为107～103TCID50,可造成鸡100%死亡;剂量为102TCID50、10 TCID50和1 TCID50,死亡率分别为90%、30%和10%。肌肉注射比口服方式更易感,剖检发现明显的心包积液和肝脏肿胀发黄。肝脏出现广泛性的细胞变性坏死和核内包涵体,脾脏、法氏囊和胸腺三个免疫器官出现了广泛的淋巴细胞变性坏死。FAdV-4侵害肝脏、心脏等组织,主要的靶器官是肝脏,感染FAdV-4的鸡可通过咽喉和泄殖腔进行排毒。使用禽腺病毒PCR试剂盒建立的二重荧光LAMP检测方法对6株FAdV-4广西分离株进行了全基因组测序,并与国内外FAdV-4毒株序列进行比较分析,掌握了FAdV-4广西分离株的序列信息和变异情况。通过设计筛选两套LAMP引物,优化反应条件,建立了鉴别诊断FAdV-4变异株和非变异株的使用禽腺病毒PCR试剂盒建立的二重荧光LAMP检测方法。以不同的剂量和途径感染SPF鸡,结果发现FAdV-4对4周龄SPF鸡致病性强,肌肉注射方式更易感,组织嗜性广泛,主要的靶器官是肝脏,可通过泄殖腔和咽喉排毒。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     人肺微血管内皮细胞系的分离方法与质量检测！ 一、产品信息平台编号：Bio-83998规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：HULEC-5a细胞名称：HULEC-5a（人肺微血管内皮细胞） 种属：人 生长特性：细胞形态 组织来源：肺组织背景描述 生长培养基：MCDB131(without L-Glutamine)＋10ng/ml EGF＋1μg/ml Hydrocortisone＋10mM Glutamine＋10% FBS＋1% P/S培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞简介人肺微血管内皮细胞分离自肺组织；肺是机体的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆盖于心之上。肺有分叶，左二右三，共五叶。肺经肺系(指气管、支气管等)与喉、鼻相连，故称喉为肺之门户，鼻为肺之外窍。微血管内皮细胞密切参与包括再生、发育、伤口愈合等一系列生理及炎症反应。细胞呈梭形或多角形，形成单层后呈鹅卵石样或铺路石样排列。肺微血管内皮细胞构成半选择性屏障，该屏障对于肺气体交换，调节液体和可溶物在血液与肺间质之间的流动具有重要意义。 三、方法简介实验室分离的人肺微血管内皮细胞采用组织贴块法并结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。 四、质量检测实验室分离的人肺微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 五、培养信息包被条件       PLL(0.1mg/ml)，明胶(0.1%)培养基        含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等产品货号       CM-H001换液频率       每2-3天换液一次生长特性       贴壁细胞形态       内皮细胞样传代特性       可传2-3代消化液         0.25%胰蛋白酶培养条件       气相：空气，95%；CO2，5%人肺微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  红曲、红曲霉和红曲色素在肉制品中的应用研究！ 红曲是一种由人工接种红曲霉培养制成的发酵产品，在我国已有1000余年的使用历史。红曲霉作为重要的食品微生物资源，其代谢产物具有很高的生物学活性，在食品、医药等领域具有较高应用价值。主要介绍红曲、红曲霉及其主要代谢产物红曲色素的研究现状及开发前景。 红曲，中药名。为曲霉科真菌红曲霉Monascus purpureus Went.的菌丝体寄生在粳米上而成的红曲米。分布于河北、江西、浙江、台湾、福建、广东等地。具有健脾消食，活血化瘀之功效。常用于饮食积滞，脘腹胀满，赤白下痢，产后恶露不尽，跌打损伤。 红曲霉(Monascus),属于红曲科腐生丝状真菌,其种类丰富,是多种具有聚酮结构的次生代谢产物的产生菌口。红曲色素和洛伐他汀是其主要代谢产物。 红曲色素是一种由红曲霉属的丝状真菌经发酵而成的优质的天然食用色素，是红曲霉的次级代谢产物。红曲色素，商品名叫红曲红，是以大米、大豆为主要原料，经红曲霉菌液体发酵培养、提取、浓缩、精制而成及以红曲米为原料，经萃取、浓缩、精制而成的天然红色色素。 红曲色素是由微生物发酵产生的纯天然色素，现已证明红曲色素不含黄曲霉毒素。红曲色素具有预防癌症、抗菌活性，降低血糖水平和抗肿瘤等特性，可在着色、调味和肉类保鲜中替代全部或部分的硝酸盐和亚硝酸盐。因此,红曲色素现除用于肉制品防腐着色外。已广泛应用于调味品面制品、酒业等食品工业中。 多年来人们力图寻找亚硝酸盐的代替品，研究证明红曲是理想的替代物。红曲色素具有对酸碱稳定、耐热性强、对蛋白质的染色性好、几乎不受金属离子氧化剂和还原剂的影响等特点，是我国香肠、火腿、叉烧肉等制品使用的主要着色剂。特别是近年来，由于水溶性红曲红色素的出现，改善了红曲色素的水溶性，在腌制液及注射液中分散性好，易于调配，且对热稳定，因此使得红曲色素在肉制品中的应用范围越来越广。 近年来对红曲深入研究发现，红曲中具有莫那可林及氨基酪酸等具有显著抑制胆固醇合成、降低人体血液中血脂含量、降低血压的药物，红曲橙色素的Momascorubin及Rubropunctation 具有活泼的羟基，很容易与氨基起作用，因此红曲不但可以治疗胺血症且很有可能是优良的防癌物质。另外还含有丰富的麦角固醇、长链脂肪酸及多种抗菌活性物质。 红曲历史悠久，自古以来就是药食同源的天然食品添加剂。红曲作为着色剂已在肉制品中得到广泛的应用，随着人们对红曲霉有效生理活性物质认识的不断深入，红曲越来越多的药用价值和保健功效及其他的功能会被进一步发掘出来，应用于肉制品和其他食品中，为人类的健康发挥更大的作用。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  大鼠骨髓单核细胞的背景与应用及培养操作步骤！ 一、背景 大鼠骨髓单核细胞是从大鼠骨髓中分离出来的一种骨髓单个核细胞。骨髓单个核细胞是骨髓中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。这些细胞在机体防御系统、炎症反应及免疫反应中起着重要的作用。在分离这些细胞时，通常采用密度梯度离心法，将一定密度的细胞按相应密度梯度分布，进而将各种血细胞与单个核细胞分离。 大鼠骨髓单核细胞是一种存在于大鼠骨髓中的细胞类型，也称为骨髓单核细胞系。这些细胞是一种多能性干细胞，可以分化为多种类型的细胞，包括巨噬细胞、树突状细胞和粒细胞等。 骨髓单核细胞在免疫系统中起着重要的作用。它们可以吞噬和消化细菌、病毒和其他微生物，从而保护机体免受感染。此外，骨髓单核细胞还可以分泌多种细胞因子和趋化因子，调节免疫反应的发生和发展。 在医学研究中，大鼠骨髓单核细胞被广泛用于研究免疫系统的功能和疾病机制。例如，通过将特定的基因导入大鼠骨髓单核细胞中，可以研究这些基因对免疫系统的影响。此外，由于大鼠和人类的免疫系统存在一定的相似性，因此大鼠骨髓单核细胞也被用于研究人类免疫相关疾病的发病机制和治疗方法。 二、大鼠骨髓单核细胞培养操作 1)复苏大鼠骨髓单核细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)大鼠骨髓单核细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)大鼠骨髓单核细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 大鼠骨髓单核细胞可以用于Escherichia coli脂多糖对牙周靶细胞—成骨细胞和骨髓单核细胞的影响及其机制研究： 探讨了Escherichia coli LPS对成骨细胞和骨髓单核细胞的影响及其可能的作用机理和药物干预机制。 建立LPS诱导骨吸收模型，探讨了LPS诱导破骨细胞形成和骨吸收作用。结果显示LPS能诱导破骨细胞形成、骨吸收并激活Akt而导致p-AktSer473和p-AktThr308水平明显增加。而且PI3K的另一抑制剂Wortmanin可显著抑制破骨细胞形成和Akt的活化，并诱导成熟破骨细胞凋亡，表明LPS诱导破骨细胞分化、吸收和存活可能与PI3K／Akt信号通路激活有关。此外，本研究还探讨了葛根提取物-葛根素对骨形成和骨吸收的干预作用。 结果发现葛根素可明显促进骨形成并诱导Akt活化和核转位，且这种活化作用能被LY294002所阻断。同时，葛根素还可显著抑制LPS诱导的骨吸收和Akt活化，并促进成熟破骨细胞及其前体细胞-大鼠骨髓单核细胞凋亡。由此可知，葛根素可促进骨形成和抑制LPS诱导骨吸收，其机理可能与PI3K／Akt通路激活或灭活相关。 综上所述，本研究主要创新体现在： 1、本研究通过建立LPS诱导成骨细胞凋亡模型，论证了E．coli-LPS可抑制牙周靶细胞-成骨细胞增殖与分化而影响牙槽骨形成。 2、利用LPS诱导破骨细胞形成和骨吸收证实了E．coli-LPS可刺激牙周另一靶细胞-大鼠骨髓单核细胞分化为破骨细胞，并促进骨吸收，提示刺激大鼠骨髓单核细胞的分化、融合可诱导或加重牙槽骨吸收。 3、本研究通过对PI3K／Akt通路在E．coli-LPS诱导牙周靶细胞凋亡和骨吸收模型中的作用研究，为深入探讨LPS诱导的牙槽骨吸收和牙周炎发病机制提供一个新的信号通路，并为研制开发治疗该病药物提供新的作用靶点和一定的理论基础。 4、本研究还证实了葛根素可促进骨形成和抑制E．coli-LPS诱导的破骨细胞形成和骨吸收，因此葛根素可用于预防和辅助治疗LPS感染的牙周病，并为该药在牙周疾病上的应用提供了一定的理论依据。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  杀结节链霉菌的培养方法与注意事项及打管说明！  杀结节链霉菌，孢子丝短，大部分紧密螺旋形，有时钩状 或圈环状。孢子卵圆形至短柱形，似横隔分裂，表面光滑 ，有时有褶皱。主要用于产生杀结核菌素, 核酸内切酶。 一、菌种简介平台编号：Bio-00407提供形式：冻干物拉丁属名：Streptomyces Tubercidicus中文译名：杀结节链霉菌拉丁学名：Streptomyces tubercidicus原始编号：JCM 4558菌株来源：←JCM保藏人：刘志恒直接来源国家：日本保藏时间：11/25/1998其他保藏编号：=ATCC 25502 =BCRC 11886 =CBS 644.69 =DSM 40261 =ISP 5261 =KCTC 9109 =LMG 19361 =NBRC 13090 =NRRL B-生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株；Produces tubercidin, endonuclease培养温度：28℃培养基：0329    分离源：土壤采集地点：千叶县茂原市采集国家：日本用途：模式菌株；产生杀结核菌素, 核酸内切酶注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 三、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 四、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2 支，中国微生物菌种查询网提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    ATCC BAA-1295 吉氏拟杆菌，吉氏副拟杆菌 一、菌种简介平台编号：Bio-74727规格：Freeze-Dried拉丁属名：Parabacteroides Distasonis菌株名称：吉氏拟杆菌，吉氏副拟杆菌用途：ATCC原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Parabacteroides distasonis (Eggerth and Gagnon) Sakamoto and Benno 拉丁名(ATCC® BAA-1295™)  统一编号Deposited As Bacteroides distasonis Eggerth and GagnonStrain Designations  菌种别名 Vitek 400127 [NSB 50047]Application 用途 Quality control strainBiosafety Level 生物安全等级  2Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format  提供形式 freeze-driedStorage Conditions 保藏方法Frozen（冷冻物）: -80℃ or colderFreeze-Dried（冻干物）: 2℃ to 8℃Live Culture（活物）: See Propagation SectionPreceptrol® noType Strain noComments  注释 This organism is included in the bioMérieuxVITEK® 2 - ANC ID Card Quality Control Organism Set.Medium 培养基  ATCC® Medium 1490: Modified chopped meat mediumATCC® Medium 260: Trypticase soy agar/broth with defibrinated sheep bloodGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度 : 37℃Atmosphere 需氧情况 : Anaerobic gas mixture, 80% N2-10% CO2-10% H2Name of Depositor  寄存人 JL Colon-Reveles Special Collection ATCCReferences 参考文献   Sakamoto M, Benno Y. Reclassification of Bacteroides distasonis, Bacteroides goldsteinii and Bacteroides merdae as Parabacteroides distasonis gen. nov., comb. nov., Parabacteroides goldsteinii comb. nov. and Parabacteroides merdae comb. nov.. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 56(Pt 7): 1599-1605, 2006. PubMed: 16825636VITEK 2 ANC Comprehensive QC Set. bioMerieux. 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                   SNU668人胃癌细胞的培养与检测及注意事项！ 一、细胞简介平台编号：Bio-129530规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：SNU668细胞名称：SNU668人胃癌细胞别名：SNU668; NCI-SNU-668规格：T25形态特征：上皮细胞样生长特性：贴壁疾病：胃印戒细胞腺癌培养条件：RPMI-1640 10%胎牛血清基础培养基：DMEM血清：南美级别胎牛血清 配套完全培养基传代比例：1:2-1:4传代（培养面积比）传代方式：消化2-3分钟换液频率：2~3天换液1次冻存液配方：RPMI 1640+10%FBS+10%DMSO难度等级：+培养要点：暂无特征特性：该细胞源于一位63岁的黄种人男性患者。是低分化印戒细胞癌。用途：细胞系注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方式1、培养基：SNU668 专用培养基【PRMI-1640 培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%】2、培养环境：37℃、5%CO23、传代培养：当细胞密度达到 80%以上时，可以进行传代，传代比例 1:2~1:4，1~2 天传代一次。（1）用巴氏滴管吸出细胞培养瓶内的培养基；（2）加入 1ml 的 PBS，轻轻晃动润洗细胞，然后将 PBS 吸出；（3）加入 1ml 的胰酶，轻轻晃动浸润细胞，然后放在培养箱内消化 1~3 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间）；（4）在显微镜下观察，发现细胞变圆，轻轻晃动细胞便开始脱落，这时可以终止消化；（5）加入 4ml 含血清的完全培养基，用移液器吹打细胞，使细胞脱落并形成单细胞悬液；（6）将细胞悬液转移到 15ml 的离心管，1000rpm 离心 5min；（7）离心完成后吸出上清丢弃，再用移液管取 10ml 完全培养基将细胞重悬，轻轻吹打混匀；（8）将细胞悬液分装到两个新的 T25 细胞培养瓶中，放在 37℃的 CO2培养箱中进行培养。4、细胞冻存：使用本公司无血清冻存液可直接将细胞冻存在-80℃（无需使用程序降温盒），细胞在-80℃可保存 3 年，长期保存建议使用液氮罐。5、冷冻复苏细胞：将含有 1mL 细胞冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 5mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 4-6mL 完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 6cm 皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 三、质量检测1、STR 鉴定：正确2、细菌检测：阴性3、支原体检测：阴性 四、售后服务1、收到细胞后请及时查看瓶身有无破损，是否漏液等现象；2、用 75%的酒精喷洒培养瓶之后，放在培养箱中静置 2-4 小时以稳定细胞状态，然后用显微镜观察细胞状态并拍照记录，40 倍和 100 倍照片各一张（细胞在运输过程中存在少量的漂浮或者死亡属于正常现象）；3、原瓶中的培养基在细胞传代之后不建议继续使用，请配制新的完全培养基或者购买本公司的专用培养基；4、建议定期对细胞进行拍照记录；收到细胞后 7 天内，对细胞生长状态有任何问题，可申请售后。5、强烈建议：在第一次细胞传代时，使用附赠或者购买本公司配置的细胞培养瓶将细胞按照 1:2 进行传代，可以对比测试自配的培养基是否可以养好细胞。如果有以上任何问题，请及时联系本公司。 五、注意事项1、本产品仅限于科研用途，若用于临床诊断、治疗等其它用途，本公司概不负责！2、若使用本产品发表科学论文，请标注：SNU668 由北京百欧博伟生物技术有限公司（BIOBW）提供。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  刺糖多孢菌——土壤微生物资源调查及分类学研究 刺糖多孢菌是Saccharopolyspora属的微生物，原产地为中国。非模式菌株。基内菌丝在菌中央断裂为不规则杆状体，气生菌丝上有圈环状或松散螺旋形的短孢子链，用于土壤微生物资源调查及分类学研究。主要用途为分类；教学，具体用途为土壤微生物资源调查及分类学研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-136770规格：冻干粉拉丁属名：Saccharopolyspora Spinosa中文名称：刺糖多孢菌 属名：Saccharopolyspora 种名或亚种名：spinosa 来源历史：四川大学生命科学学院 收藏时间：1998-11-10 原始编号：980332 原产国：中国 模式菌株：非模式菌株 主要用途：分类；研究；教学 特征特性：非模式菌株。基内菌丝在菌中央断裂为不规则杆状体，气生菌丝上有圈环状或松散螺旋形的短孢子链，用于土壤微生物资源调查及分类学研究。 具体用途：土壤微生物资源调查及分类学研究 生物安全等级：四类 致病对象：无 致病名称：传播途径与感染方式   分离基物：土壤 采集地区：云南昆明 培养基编号：0039 培养温度：28℃ 用途：土壤微生物资源调查及分类学研究土壤注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、产品仅用于科研挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养4天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至0%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在0%～20%。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、保藏方法1、斜面低温保藏法产品仅用于科研将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长*后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏，如此连续不断。此法简便易行，容易推广，存活率高，故科研和生产上对经常使用的菌种大多采用这种保藏方法。2、石蜡油封藏法此法是在无菌条件下，将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上，石蜡油层高出斜面顶端lcm，使培养物与空气隔绝，加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或4℃冰箱内保藏。由于液体石蜡阻隔了空气，使菌体处于缺氧状态下，而且又防止了水分挥发，使培养物不会干裂，因而能使保藏期达～2年，或更长。但此法不适合厌氧性细菌。3、砂土管保藏法适用于产孢子的放线菌、霉菌及形成芽孢的细菌，对于一些对干燥敏感的细菌如奈氏球菌、弧菌和假单胞杆菌及酵母则不适用。砂土管法兼具低温、干燥、隔氧和无营养物等诸条件，故保藏期较长、效果较好，且微生物移接方便，经济简便。它比石蜡油封藏法的保藏期长，约～0年。4、麸皮保藏法此法以麸皮作为载体，吸附接入的孢子，然后在低温干燥条件下保存。适用于产孢子的霉菌和某些放线菌，保藏期在年以上。因操作简单，经济实惠，工厂较多采用。5、冷冻真空干燥保藏法简称冻干法，通常采用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成*干燥的固体菌块。并在真空条件下立即融封，造成无氧真空环境，置于低温下，使微生物处于休眠状态，而得以保藏。常用的保护剂有脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物质。6、液氮超低温保藏法以甘油、二甲基亚砜等作为保护剂，在液氮超低温（-96℃）下保藏。其主要原理是菌种细胞从常温过渡到低温，并在降到低温之前，使细胞内的自由水通过细胞膜外渗出来，以免膜内因自由水凝结成冰晶而使细胞损伤。此法操作简便、高效、保藏期一般可达到5年以上，是目前被公认的效的菌种保藏技术之一。 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   微生物基础知识：控制菌检验方法的验证！ 一、控制菌检验方法验证 建立药品的微生物限度检查时，进行控制菌检查方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的的控制菌检查方法测定。若药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，检验方法应进行重新验证。验证试验也可与供试品的控制菌检查同时进行。 1、验证用菌株 大肠埃希菌（Esherichia coli）【CMCC(B) 44102】或同等有效的 金黄色葡萄球菌（ Staphylococcus）【CMCC(B)26003】或同等有效的 乙型付伤寒沙门菌（Salmonella paratyphi B）【CMCC(B) 50094】或同等有效的 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）【CMCC (B) 10104】或同等有效的 验证实验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为0 代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。 2、菌液制备 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型付伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至10mL营养肉汤培养基中，35～37℃培养18～24小时；分别取培养液 1mL加0.9%无菌氯化钠溶液，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5~10-7，制成每1ml含菌数10～100CFU的菌悬液。 3、阴性菌对照组 设立阴性菌对照组是为了验证该控制菌检查方法的专属性。 方法同试验组，验证大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌检查法时的阴性对照菌采用金黄色葡萄球菌；验证铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌检查法时的阴性对照菌采用大肠埃希菌。阴性对照菌不得检出。 4、试验组 常规法 大肠埃希菌 取相当于1g或1mL供试品的供试液至100mL胆盐乳糖培养基中，阳性菌对照加入大肠埃希菌10～100CFU，阴性菌对照加入金黄色葡萄球菌 10～100CFU，35～37℃培养18～24小时，取此培养物按《微生物限度检查SOP》大肠埃希菌项下规定检查。 大肠菌群 取含适量（不少于10ml）的胆盐乳糖发酵培养基管3支，分别加入含供试品1g或1mL 、0.1g或0.1mL、含供试品0.001g或0.001mL的供试液，阳性菌对照加入大肠埃希菌10～100CFU，阴性菌对照加入金黄色葡萄球菌 10～100CFU，35～37℃培养18～24小时，按《微生物限度检查SOP》大肠菌群项下规定检查。 沙门菌 取供试品10g或10mL，直接或处理后接种至适量（不少于200mL）的营养肉汤培养基中，用匀浆仪或其他适宜方法混匀，阳性菌对照加入沙门菌 10～100CFU，阴性菌对照加入金黄色葡萄球菌10～100CFU，35～37℃培养18～24小时。按《微生物限度检查SOP》沙门菌项下规定检查。 铜绿假单胞菌 取相当于1g或1mL供试品的供试液至100mL胆盐乳糖培养基中，阳性菌对照加入铜绿假单胞菌10～100CFU，阴性菌对照加入大肠埃希菌10～100CFU，35～37℃培养18～24小时。按《微生物限度检查SOP》沙门菌项下规定检查。 金黄色葡萄球菌 取相当于1g或1mL供试品的供试液至100mL胆盐乳糖培养基中，阳性菌对照加入金黄色葡萄球菌10～100CFU，阴性菌对照加入大肠埃希菌 10～100CFU，35～37℃培养18～24小时。按《微生物限度检查SOP》金黄色葡萄球菌项下规定检查。 培养基稀释法： 供试品有抑菌作用，放大培养基量，由1：100放大到1：300、1：500或1：1000，由于容器体积限制，一般放大到500mL或1000mL，本法适用于抑菌作用不强的样品。 薄膜过滤法： 采用薄膜过滤法时，取规定量供试液，过滤，冲洗，试验菌应加在最后一次冲洗液中，过滤后，注入培养基或取出滤膜接入增菌培养基中。 离心沉淀集菌法： 取规定量供试液，如供试液含许多药渣，先以500转/分钟离心3~5分钟，取全部上清液，再以3000转/分离心20分钟，取下面1mL液体，并将适量的稀释剂洗涤管底的洗涤液一并移入同瓶增菌液中，培养，本法适用于中度抑菌作用的样品。 中和法： 在供试品溶液中加入相应的中和剂，以减除供试品中抑菌成分的作用，中和剂应对微生物无毒性，与抑菌成分结合后的产物应对微生物亦无毒性，或有毒性但不影响待检菌的检出。 5、结果判断 至少应进行3次独立平行试验。阴性菌对照组不得检出阴性对照菌。若试验组检出试验菌，照该供试液制备方法和控制菌检查法进行该供试品控制菌的检查；若试验组未检出试验菌，应采用自然沉降法、培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  精氨酸支原体半固体的配方知识和制备方法！ 一、背景及概述 支原体是一类无细胞壁，高度多形性，能通过滤菌器，可用人工培养基培养繁殖的最小原核细胞型微生物，大小在0.1-0.3µm，由于能形成丝状与分支形状，所以称为支原体。 支原体是介于细菌和病毒之间的微生物，能独立生活，自然界里种类繁多，分布广泛，造成危害相当大，涉及人、动物、植物和昆虫多个领域，都会有支原体造成的危害。支原体多数不致病，对人致病的支原体主要包括肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体、生殖器支原体。 精氨酸支原体半固体主要用于药品和生物制品中支原体检测。精氨酸支原体肉汤培养基是用来培养口腔支原体,利用精氨酸变红,则有口腔支原体的生长,如果要分离,则接种到精氨酸支原体琼脂培养基上。 二、精氨酸支原体琼脂培养基配方 猪胃消化物：10.0g，牛肉浸粉：5.0g，酵母浸粉：5.0g，氯化钠：2.5g，葡萄糖：1.0g，L-精氨酸：2.0g，琼脂：13.0g，pH7.1±0.2（25℃） 三、精氨酸支原体琼脂培养基配制方法 1）称取本品38.5g于1L蒸馏水或去离子水中，加热煮沸至完全溶解，分装,121℃高压灭菌15分钟，冷至56℃左右添加灭菌小牛血清（培养基：血清为8:2）,酌情添加青霉素等抑菌剂，摇匀，备用。精氨酸支原体琼脂培养基用于支原体的培养。 2）称取本品 25.52g,加热溶解于800ml蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,冷至室温,无菌操作加入 灭活小牛血清或马血清200ml和青霉素80万单位,混匀,分装无菌试管,备用。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                墨西哥假黄单胞菌的微生物培养方法与操作流程！ 墨西哥假黄单胞菌是Pseudoxanthomonas属的微生物，原产地为中国。革兰氏阴性菌，菌落圆形，表面粘稠湿润，能降解PVA。主要用途为研究；教学；生产，具体用途为生物降解材料降解性能研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-60490提供形式：冻干物拉丁属名：Pseudoxanthomonas Mexicana中文名称：墨西哥假黄单胞菌属名：Pseudoxanthomonas种名加词：mexicana来源历史：←北京工商大学化工学院(10511)收藏时间：2008.2.1原始编号：Lao431资源归类编码：15131127000模式菌株：非模式菌株主要用途：研究具体用途：环境污水处理特征特性：G-，直杆状细菌，端生鞭毛运动，好氧。菌落呈黄色。还原硝酸盐，能利用葡萄糖、棉子糖、木糖。显著降解污水中糖类有机物。  生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：活性污泥采集地：北京市海淀区培养基：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：32℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：22101用途：研究；环境污水处理注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 五、操作流程菌株复苏:(按三区划线法将留菌管内的原始菌株进行复苏)1)所有菌株,显色培养基分4区,每区一株,标明菌株号、菌种名常用缩写如下:cal: 白念珠菌 cgl:光滑念珠菌 cpa: 近平滑念珠菌 ctr: 热带念珠菌 ckr: 克柔念珠菌 cne: 新型隐球菌,其他菌种标记全名2)隐球菌除传显色培养基以外,另传1/2块血平皿上述菌株统一37oC孵育48h菌种鉴定:(48h后观察结果) 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   红曲霉的培养与保藏方法及注意事项与打管说明！ 一、菌种简介红曲霉 （Monascus purpureus Went.） 中文别名 红曲、红糟、红大米。散囊菌目中的一属子囊菌曲霉科真菌。存在于树木、土壤和堆积物等。在麦芽汁琼脂培养基上生长良好，菌落初为白色，老熟后变成淡粉色、紫色或灰黑色。多形成红色。代表种如紫红曲霉、安卡红曲霉、红色红曲霉、巴克红曲霉、烟色红曲霉、锈色红曲莓、变红红曲霉。红曲霉是腐生真菌，生长的最适pH为3．5～5，能耐pH3．5，尤嗜乳酸。生长温度为26～42℃最适温度32℃～35℃，能耐10%乙醇。红曲可用于酿酒、制醋、做豆腐乳的着色剂和调味剂。 二、基本信息平台编号：Bio-52199规格：冻干物拉丁属名：Monascus Anka Nakazawa Et Sato菌株名称：红曲霉其他编号：AS3.554培养基编号：13培养温度：30-35℃培养时间：5-7 天用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 三、培养基综合马铃薯培养基（PDA）20%马铃薯汁 1L 葡萄糖 20g MgSO4.7H2O 1.5g KH2PO4 3gVitanib B1 (硫胺素) Trace 微量约 8mg Agar (琼脂) 20g pH 自然20%马铃薯汁配制方法：马铃薯洗净去皮，取 200 克切成小块 , 加水 1000 毫升煮沸 20 分钟后滤去马铃薯块，将滤液补足 1000ml。  四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、保藏条件安瓿瓶冻干菌种和培养物应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油保藏温度为-80°C;请勿长期置于室温。  六、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后 2 个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 出口食品中蜡样芽孢杆菌的成分配制与检验方法！ 一、培养基明细名称                            规格         价格（元）甘露醇卵黄多黏菌素琼脂（MYP）   250g           *胰酪胨大豆多粘菌素肉汤          250g           *酚红葡萄糖肉汤                  250g           *硝酸盐肉汤                      20支           *营养琼脂                        250g           *L-酪氨酸营养琼脂                 *             *溶菌酶营养肉汤                   *             *改良V-P培养基                   20支           *动力培养基                      250g           *胰酪胨大豆羊血琼脂（TSSB）      250g           *Butterfield氏磷酸盐缓冲稀释液   250g           *亚硝酸盐试剂                     *             *碱性复红染色液                   *             * 二、备注1、依据SN 0176—92出口食品中蜡样芽孢杆菌检验方法 适用于出口食品的检验。2、L-酪氨酸营养琼脂配方：营养琼脂                     100ml5%灭菌L-酪氨酸悬液           10ml制法：将100ml营养琼脂融化，冷至45℃，加入5%灭菌L-酪氨酸悬液10ml，充分混匀后，分装试管，每管3.5ml。制成的斜面应迅速冷却防止L-酪氨酸分离而出。5%灭菌L-酪氨酸悬液：将0.5g酪氨酸加10ml蒸馏水混匀，121℃高压灭菌15min。3、溶菌酶营养肉汤配方：牛肉膏                       3.0g蛋白胨                       5.0g蒸馏水                       稀释至1000ml0.1%溶菌酶溶液               10.0mlpH6.8士0.1制法：将上述成分（溶菌酶溶液除外）溶解与蒸馏水并稀释至1000ml。校正pH后，分装于烧瓶中，每瓶99ml，121℃高压灭菌15min。于每瓶中加入0.1%溶菌酶溶液1ml，混匀后分装于灭菌试管，每管2.5ml。溶菌酶溶液：在65ml灭菌的0.1mol/l盐酸中加0.1g溶菌酶，煮沸20min溶解后，再用灭菌的0.1mol/l盐酸稀释至100ml。4、亚硝酸盐试剂试剂A：对氨基苯磺酸8.0g，溶解于1000ml 5mol/l乙醇中。试剂B：α-萘酚2.5g溶解于1000ml 5mol/l乙醇中。5、碱性复红染色液取碱性复红0.5g溶解于20ml乙醇中，再用蒸馏水稀释至100ml，滤纸过滤后储存备用。6、术语：蜡样芽孢杆菌（学名：Bacillus cereus）：革兰氏阳性，β溶血性的杆状细菌，它会引起食物中毒，例如"炒饭综合症"（Fried Rice Syndrome）。蜡样芽孢杆菌是需氧型，与其他芽孢杆菌相同，它会产生防御性的内芽孢。      北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 KHOS-240S人骨肉瘤细胞培养操作及注意事项！ 一、细胞基本属性平台编号：Bio-131490规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：KHOS-240S细胞名称：KHOS-240S（人骨肉瘤细胞）(STR鉴定正确) 别称：KHOS240S 种属：人类 年龄（性别）：女性，13岁 组织来源：骨 生长特性：贴壁细胞 细胞形态：上皮细胞样 背景描述：A revertant line of the KHOS/NP cell line (ECACC catalogue no. 84102903). Established after overnight incubation at 40.5°C and then sub-cloned at 36°C. The line has similar properties to the parent HOS cell line. Cells are non-tumourigenic in nude mice and no longer possess a rescuable MSV genome. 生长培养基：MEM（ATCC改良)＋10% FBS(164210-50) +1% P/S 推荐传代比例：1:3-1:5 推荐换液频率：2~3次/周 冻存条件：冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO温度：液氮 培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃ 保藏机构：ATCC; CRL-1545 用途：STR鉴定正确注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞培养操作1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。          b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。          c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面 T25 瓶为例；a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、培养注意事项 1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。 3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。 4、贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，用新鲜的完全培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。 5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。 6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 7、该细胞仅供科研使用。 8、备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议 1：2 传代。 9、注意：1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  微黄八叠球菌的菌株培养与操作流程及保藏方法！ 微黄八叠球菌是Sarcina属的微生物，原产地为中国。细胞近球形，革兰氏阳性，专性厌氧。主要用途为分类；研究；教学。  一、菌种简介平台编号：Bio-62208提供形式：冻干物拉丁属名：Sarcina Subflava中文名称：微黄八叠球菌属名：Sarcina种名加词：subflava来源历史：←上海工业微生物研究所(B701) ←天厨味精厂收藏时间：2008.11.17资源归类编码：15131711105模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产具体用途：研究特征特性：革兰氏阳性菌。肉汁琼脂平板：菌落黄色，粗糙粒状，圆形，突起，湿润，闪光，全缘。明胶穿刺：缓慢液化呈漏斗形。硫化氢产生试验阳性，能还原硝酸盐，从葡萄糖、乳糖或蔗糖不产酸    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：25℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；生产；研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、菌种的培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 三、操作流程菌株复苏:(按三区划线法将留菌管内的原始菌株进行复苏)1)所有菌株,显色培养基分4区,每区一株,标明菌株号、菌种名常用缩写如下:cal: 白念珠菌 cgl:光滑念珠菌 cpa: 近平滑念珠菌 ctr: 热带念珠菌 ckr: 克柔念珠菌 cne: 新型隐球菌,其他菌种标记全名2)隐球菌除传显色培养基以外,另传1/2块血平皿上述菌株统一37oC孵育48h菌种鉴定:(48h后观察结果) 四、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     人玫瑰杆菌的培养与保存方法及打管说明！  玫瑰杆菌是Roseobacter属的微生物，原产地为中国。菌落形态：菌落呈现乳白色，表面光滑不透明，边缘整齐。主要用途为分类；研究。  一、菌种简介平台编号：Bio-115133规格：冻干粉/培养物拉丁属名：Roseburia Hominis菌株名称：人玫瑰杆菌用途：DSM原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Name:Roseburia hominis Duncan et al. 2006DSM No.:16839, Type strainStrain designation:A2-183Other collection no. or WDCM no.:NCIMB 14029,CIP 109406,JCM 17582Isolated from:human faecal sampleCountry:United Kingdom of Great Britain and Northern IrelandScotland, AberdeenDate of sampling:1997Nagoya Protocol Restrictions:There are NO known Nagoya Protocol restrictions for this strain.History:Genbank accession numbers:16S rRNA gene: AJ270482complete genome: CP003040Cultivation conditions:Medium 58 +rumenfluid (20ml) +VFA-Mix; see medium 330 (10ml), anaerobic, 37°C Complete DSMZ Media ListSummary and additional information:For detailed information:Literature:10659, 25283Risk group:1 (classification according to German TRBA)Supplied as:Delivery form PricesPrice Category for this culture: 1Freight and handling charges will be added. See price list.  三、培养及打管说明1、安瓿瓶开封:用浸过75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、菌株恢复培养:用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基,滴入安瓿管内,轻轻振荡,使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液,移植于1-2支建议的培养基试管中,并在建议的条件下培养。3、注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在6-10℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,需要连续两次继代培养才能正常生长。4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。 四、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                   人急性T淋巴细胞白血病细胞的培养步骤及应用！ 一、背景 人急性T淋巴细胞白血病细胞该细胞源自一位14岁患有T淋巴细胞白血病男性的外周血。 急性淋巴细胞白血病（ALL）是一种起源于淋巴细胞的B系或T系细胞在骨髓内异常增生的恶性肿瘤性疾病。异常增生的原始细胞可在骨髓聚集并抑制正常造血功能，同时也可侵及骨髓外的组织，如脑膜、淋巴结、性腺、肝等。我国曾进行过白血病发病情况调查，ALL发病率约为0.67/10万。在油田、污染区发病率明显高于全国发病率。ALL儿童期（0～9岁）为发病高峰，可占儿童白血病的70%以上。ALL在成人中占成人白血病的20%左右。依据ALL不同的生物学特性制定相应的治疗方案已取得较好疗效，大约80%的儿童和30%的成人能够获得长期无病生存，并且有治愈的可能。 二、人急性T淋巴细胞白血病细胞培养步骤 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中，加入约6ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法： 方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入细胞库推荐的无血清冻存液。 三、应用 人急性T淋巴细胞白血病细胞可以用于FTO促急性T淋巴细胞白血病细胞生长的研究： N6甲基腺苷(m6A)修饰是mRNA内部丰度最高的修饰,其动态修饰过程和生物学功能由甲基转移酶(writer)、去甲基酶(eraser)和识别蛋白(reader)共同调控。FTO(Fat mass and obesity-associated protein)是m6A修饰的主要去甲基酶,具有促进肿瘤发生发展的功能,且已有多种研发成功的小分子抑制剂。然而,FTO在急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞中的表达、功能及作用机制尚无文献报道。本论文旨在研究FTO在T-ALL细胞中的表达和功能、解析FTO的作用机制,并评价FTO小分子抑制剂的抗T-ALL效能。 方法： (1)通过RT-qPCR检测FTO在T-ALL细胞与正常对照细胞中的表达;在T-ALL细胞中沉默和过表达FTO,并检测细胞的m6A修饰水平、生长和集落生成等;检测沉默FTO对细胞凋亡及Jurkat细胞在免疫缺陷(NSG)小鼠中诱发白血病的能力;检测沉默FTO对T-ALL患者来源细胞和正常造血细胞增殖的影响。 (2)RNA-seq筛选T-ALL细胞中受FTO表达影响的差异表达基因,并使用RT-qPCR验证;通过放线菌素D(ActD)和RNA甲基化免疫共沉淀(methylated RNA immunoprecipitation,MeRIP)等实验筛选FTO的下游靶基因;在单独沉默RAB7A(RAS-related GTP-binding proteins)后,检测细胞生长、集落生成和细胞凋亡等;在沉默FTO细胞中过表达RAB7A,通过RNA免疫共沉淀(RNA immunoprecitation,RIP)研究YTHDF2(YTH domain family 2,m6A识别蛋白)与RAB7A mRNA之间的相互作用;使用精胺普鲁兰递送的方法,在沉默FTO的细胞中沉默YTHDF2,检测细胞的生长、集落生成和RAB7A表达等。 (3)检测FTO的抑制剂(FB23-2)对T-ALL细胞的活性、集落生成、细胞凋亡和白血病生成能力的影响;并检测FB23-2对T-ALL患者来源细胞和正常造血细胞增殖的影响。 结果： (1)FTO在T-ALL细胞较正常造血细胞中异常高表达;FTO调控T-ALL细胞的m6A修饰水平,FTO促进T-ALL细胞的体外生长及集落生成能力;沉默FTO促进细胞凋亡、显著减弱Jurkat细胞在NSG小鼠中的成白血病能力； (2)RNA-seq和验证显示FTO在转录后水平调控RAB7A的表达,沉默FTO增强RAB7A mRNA上的m6A修饰;沉默RAB7A显著抑制T-ALL细胞的生长和集落生成能力,并诱发细胞凋亡;过表达RAB7A能部分“挽救”沉默FTO导致的生长抑制和凋亡增高;YTHDF2能在沉默FTO细胞中较对照细胞更强地结合RAB7A mRNA,沉默YTHDF2部分“挽救”沉默FTO导致的生长抑制与RAB7A表达受抑。 (3)FB23-2有效抑制T-ALL细胞的活性,集落生成能力,并诱发凋亡,但对正常造血细胞影响较小;FB23-2也显著减弱Jurkat细胞的白血病生成能力。结论:FTO在T-ALL细胞中异常高表达,通过抑制RAB7A的m6A/YTHDF2依赖性降解而稳定其表达;FTO/m6A/RAB7A通路促进T-ALL细胞的生长与生存;FTO的小分子抑制剂具有一定的抗T-ALL效能。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     用于分析检测和防霉抗菌的：缓慢葡萄球菌 缓慢葡萄球菌是Staphylococcus属的微生物，原产地为中国。细胞球形。单个，成对和不规则堆状。革兰氏阳性，不运动，不生芽孢。兼性厌氧。化能异养，既有呼吸亦有发酵二种代谢型。主要用途为研究，具体用途为生物防治。 一、菌种简介平台编号：Bio-58486提供形式：冻干物拉丁属名：Staphylococcus Lentus中文名称：缓慢葡萄球菌拉丁名称：Staphylococcus lentus其它保藏中心编号：=ATCC 8032来源历史：←上海市工业微生物研究所(B285) ←中国科学院微生物研究所收藏时间：2005-12-30原始编号：1.3374资源归类编码：15131315101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；分析检测具体用途：防霉抗菌。生物危害程度：四类培养基编号：CM0002培养基名称：营养肉汁琼脂培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：28℃需氧类型：好氧保存方法：真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；分析检测；防霉抗菌。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。  三、培养条件1、培养基编号：CM00022、培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入 5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。3、需氧类型：4、培养温度：37℃ 四、培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org)。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   人纤维肉瘤细胞接收后的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-73058规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：HT-1080细胞名称：HT-1080（人纤维肉瘤细胞） 种属：人 年龄（性别）：男；35岁 组织来源：结缔组织；纤维肉瘤 生长特性：贴壁 细胞形态：上皮细胞样 背景描述：HT-1080细胞含有活化的N-ras癌基因。 生长培养基：MEM＋10% FBS＋1% P/S培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃用途：(STR鉴定正确)注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特性1）来源：结缔组织；纤维肉瘤2）形态：上皮细胞样，贴壁生长3）含量：>1x10^6  细胞数4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装5) 用途：仅供科研使用。 三、细胞的运输和保存干冰运输及复苏好存活细胞（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。        五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备MEM（推荐iCell-0012）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。5、客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术售后服务电话，我们随时给予解答。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     坚韧类芽孢杆菌的特点与优势及微生物培养方法！ 坚韧类芽孢杆菌是Bacillus属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；生产，具体用途为生产糖化酶。 一、菌种简介平台编号：Bio-67437规格：Freeze-Dried拉丁属名：Paenibacillus Durus菌株名称：坚韧类芽孢杆菌用途：ATCC原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Paenibacillus durus (Smith and Cato) Collins et al. 拉丁名(ATCC® 35681™) 统一编号Strain Designations 菌株别名 : P3L-5 /Type Strain 模式菌株 : yes /Biosafety Level 生物安全等级 : 1Deposited As Bacillus azotofixans Seldin et al.Strain Designations 菌株别名  P3L-5Isolation 分离源 Wheat roots, Parana State, BrazilType Strain 模式菌株 yes Ref, Ref, Ref, RefBiosafety Level 生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式  freeze-driedPreceptrol® noType Strain 模式菌株  yes Ref, Ref, Ref, RefComments 注释 Nitrogen fixationMedium 培养基 ATCC® Medium 18: Trypticase Soy Agar/BrothGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度 : 30.0℃Name of Depositor 寄存人  L SeldinIsolation 分离源 Wheat roots, Parana State, BrazilReferences 参考文献  Seldin L, et al. Bacillus azotofixans sp. nov., a nitrogen-fixing species from Brazilian soils and grass roots. Int. J. Syst. Bacteriol. 34: 451-456, 1984. Validation list no. 52. Int. J. Syst. Bacteriol. 45: 197-198, 1995. 三、形态特征菌体杆状，孢子椭圆或柱状；菌落为浅黄色；能发酵葡萄糖、半乳糖、蔗糖，可同化甘露醇、硝酸盐；可利用柠檬酸盐为唯一碳源。发酵最适pH为6.7最适温度为30℃。产糖化酶，酶活9000 U。 四、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 五、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 六、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                   SW1353(人软骨肉瘤细胞）细胞培养操作规程！ 细胞简介平台编号：Bio-132137规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：SW1353产品简称：SW1353中文名称：(人软骨肉瘤细胞)(STR鉴定正确)细胞数量：1*10^6组织来源：软骨肉瘤形态特征：成纤维样生长方式：贴壁生长背景描述：SW1353细胞最初从一位72岁女性白人的右肱骨原发性级骨肉瘤中得到。最初的培养基是含有可的松和胰岛素的L-15添加10%FBS和抗生素。1982年1月ATCC收到1支传代至12代的冻存管。培养条件：Leibovitz'sL-15+10%FBS+1%P/S无二氧化碳培养,气相：空气，95%；二氧化碳，5%；温度：37℃换液频率：--传代比例：1:2传代，消化3-5分钟，3天可长满冻存液配方：90%FBS+10%DMSO安全性：BSL-1供应限制：仅供科研运输方式：常温运输（T25培养瓶）用途：STR鉴定正确注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） SW1353(人软骨肉瘤细胞）特点1、细胞颗粒感较重细胞传代培养时细胞内黑点及细胞外颗粒较多，建议使用优质血清及培养基培养细胞；2、传代、复苏注意细胞状态细胞消化或者复苏操作不当容易导致细胞死亡裂解产生大量碎片及颗粒，进而影响活细胞状态，注意消化或复苏过程尽量轻柔，严格控制消化时间和复苏操作规范，传代或复苏24h后建议观察细胞，建议换液一次去除死亡细胞。 细胞收货攻略（一）常温细胞1、T25瓶收货后，拆开外包装，用75%酒精消毒T25瓶表面，放37℃培养箱静置2-4h；2、吸走大部分培养基并留10-12 ml，显微镜下拍照保存细胞状态照片，观察细胞密度，若细胞密度大于80%即可按比例传代（首次传代比例建议1：2），若细胞密度低于70%可以留10-12 ml继续培养至细胞密度80%以上再进行传代培养；（二）冻存细胞1、细胞收货后尽快开箱检查，若干冰充足可以取出细胞迅速置于-80℃冰箱（2-3天内复苏）短期保存或液氮中长期保存，若干冰完全挥发建议立即复苏细胞并联系销售人员解决；2、冻存细胞建议尽快复苏一管培养检查，以免超出售后期，复苏步骤参考复苏攻略；3、复苏一管细胞出现异常及时联系销售人员，在专业技术支持的指导下进行下一步操作；TIPS：1、细胞收货出现漏液、培养瓶破损、干冰完全挥发等异常情况时，及时拍照联系销售人员；2、该细胞贴壁生长，一般T25瓶运输过程中较少出现大量细胞脱落并聚团的情况，少量细胞脱落是正常状态，不影响细胞生长，按正常操作步骤继续培养即可。3、尚恩生物T25瓶发货的细胞内含对应细胞的完全培养基，可以收集原装培养瓶内培养基经1500rpm离心5min后，取上清于4℃保存用于后续细胞培养； 细胞传代攻略1、先尽量吸干净T25瓶原培养基，再加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；2、T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层，将培养瓶放入37度培养箱消化；3、消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；4、混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；5、加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里，补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；TIPS：1、对于消化细胞程度，客户如果经验不多，无法准确掌控胰酶作用时间，建议客户按照下述操作：胰酶首先复温到室温后加入细胞，放入37度培养箱，然后每隔30秒，即吹打下细胞（此时吹打细胞应尽量轻柔，不能强行将细胞吹下，否则细胞可能出现机械损伤），如果能够吹打散细胞，说明细胞消化完成可以终止消化，如果30秒吹打不下，再等30秒重复操作直至能够轻柔的吹下细胞；2、T25瓶加10-12ml完全培养基，10cm皿加12-15ml，2-3天换液一次。3、细胞收货后首次传代建议按1：2传代，后续培养可以视具体细胞生长状态和密度情况决定传代比例；4、传代后24h建议观察细胞并换液一次去除死亡细胞； 细胞冻存攻略冻存步骤1、先将细胞按传代步骤消化、离心，至传代步骤4，弃细胞上清，获得细胞沉淀；2、加入适量预先配好的程序性冻存液轻轻重悬细胞，并将细胞悬液转移至做好标记的冻存管中；3、将冻存管放入程序性冻存盒，放入-80℃冰箱过夜；4、转移细胞至液氮保存并登记细胞保存位置，液氮保存24h后建议复苏一管检测冻存细胞的活性，若活性合格即可长期保存，若低于80%建议重新冻存；TIPS：1、检测冻存细胞活性结果未合格前，培养瓶内细胞建议继续培养直至确认冻存合格方可视需要丢弃；2、程序性冻存液需要配合程序性冻存盒使用，若使用非程序冻存液可以按产品说明书处理降温过程；3、T25培养瓶长满通常可以冻存2-3管，10cm皿长满可以冻存3-4管； 细胞复苏攻略复苏步骤1、将所需的完全培养基放在培养箱预热30min后开始复苏；2、准备37度温水，将细胞从液氮罐取中出，观察管内无液氮的情况下，捏住管盖，将细胞冻存部分浸入温水轻轻摇晃，融化至米粒大小冰块，终止水浴；3、将冻存管以离心力150g(约900rpm)左右离心1-2min，不同离心机具体转速会有差异；4、离心完成后，弃冻存液，用刚才预热的培养基缓慢加入冻存管，并轻柔重悬细胞后接种至T25或者10cm皿中。TIPS：1、冻存管在液氮长期保存过程中难免渗入液氮，取出细胞时震动不要过大，水浴前一定要观察管内是否存在液氮，若有液氮建议静置一会待液氮完全蒸发后再水浴；2、水浴时可以使用一次性PE手套包住冻存管避免直接接触水源，可以降低管盖缝隙渗入水导致污染的概率；3、水浴至剩米粒大小时及时终止水浴，避免过度水浴或水浴时间不足；4、建议水浴完成后直接在离心管内离心细胞，避免再次转移细胞；5、复苏后的细胞比较脆弱，吹打和转移细胞时尽量轻柔，复苏24h后换液去除死亡细胞； 常见问题及解决方案NO.1细胞密度怎么计算的？严格意义上，细胞密度需要收集细胞悬液计数细胞数量，但在实际培养过程中，并不需要为了精确控制细胞数量而消化细胞计数。因此，常用的细胞密度指细胞相对于最大生长密度的比值，贴壁细胞可以粗略的用细胞所占培养容器底面积百分比表示，即显微镜下观察培养容器底部，有细胞的区域占总区域的百分比值，当然这种表达方式受限于单个细胞生长不同密度时所占面积不同导致并不严谨，但也是相当直观、简便的表现细胞状态的一种方式；NO.2培养过程中细胞碎片较多怎么处理？1、细胞内的黑色颗粒是细胞外分泌泡及细胞器折光，这个属于细胞自身特性，无法清除也无法改变，大部分细胞都会有这种现象，只是不同细胞颗粒多少有区别，细胞培养体系不适应、营养缺乏、渗透压异常等均可能导致细胞内颗粒增加，建议使用合适的培养条件。2、细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片和细胞代谢产物，可以先吸走培养基后用PBS润洗清除，再加新的培养基继续培养。润洗不能清除的可以换液清洗后等细胞密度70-80%左右消化处理细胞，消化完成后加完全培养基终止消化，混匀细胞，收集细胞悬液900-1000rpm(约150g)离心3min，弃上清。再加5ml PBS重悬细胞，再离心后，用完全培养基重悬接种到新的培养皿。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议PBS多洗几次。NO.3细胞具体消化时间是多久？每个客户用的胰酶活力及消化步骤、试剂都是不一样的，不能完全规定消化时间，以实际消化效果和客户经验为准。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 伯克利邦氏孔菌的形态特征与培养方法及实验内容！ 伯克利邦氏孔菌是Bondarzewia属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；教学。 一、菌种简介平台编号：Bio-20821规格：培养物拉丁属名：Bondarzewia Berkeleyi中文名称：伯克利邦氏孔菌拉丁属名：Bondarzewia种名加词：berkeleyi (Fr.) Bondartsev & Singer收藏时间*：2008-11-26来源历史：北京林业大学转原产国：中国资源归类编码：15151700000模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；教学特征特性：担子果一年生，有柄，通常多个莲花状叠生，菌管木材色,软木栓质;菌丝系统二体系；所有的隔膜无锁状联合；担孢子球形或近球型，无色，厚壁，具明显的短刺，大小为6.1~7.1 × 5.7~6.2微米。 生物危害程度：四类寄主中文名称：阔叶树致病对象：无分离基物：子实体采集地区：海南乐东采集具体地点：尖峰岭培养基信息：培养基编号: 14 培养基名称: PDA培养温度：25资源保护类型：培养物保藏方法：定期移植法共享方式：资源交换性共享提供形式：斜面培养物实物状态：有实物 二、形态特征担子果一年生，有柄，通常多个莲花状叠生，菌管木材色,软木栓质;菌丝系统二体系；所有的隔膜无锁状联合；担孢子球形或近球型，无色，厚壁，具明显的短刺，大小为6.1~7.1 × 5.7~6.2微米。  三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

               LoVo（人结肠癌细胞）的培养操作方法与注意事项！ 一、细胞简介平台编号：Bio-73085规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：LoVo细胞名称：LoVo（人结肠癌细胞） 种属：人 年龄（性别）：男；56岁 组织来源：直结肠腺癌，转移位置：左锁骨上区 生长特性：贴壁 细胞形态：上皮细胞样 背景描述：LoVo细胞是于1971年从诊断为结肠腺癌的56岁男性白人的一个转移到左锁骨上区的肿瘤结节建系而来。癌基因检测表明，LoVo细胞C-myc、K-ras、H-ras、N-ras、Myb、sis和fos的表达呈阳性；癌基因N-myc的表达未做检测。LoVo细胞在裸鼠中能成瘤，与107细胞联合皮下接种5只裸鼠21天后全部成瘤。LoVo表达肿瘤特异的核基质蛋白蛋白CC-3和CC-4。 生长培养基：Ham's F-12K＋10% FBS＋1% P/S培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃用途：(STR鉴定正确)注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特性1）细胞来源于人手术胰腺癌组织。2）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。3）细胞生长方式：长梭形，贴壁培养。 三、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 四、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 五、细胞的培养步骤1、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。（1）弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。（2）加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。（3）按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。（4）将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。2、细胞复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   ATCC 43336 胸膜肺炎放线杆菌 百欧博伟生物 胸膜肺炎放线杆菌（, APP）曾被命名为Haemophilus parahaemoelyticus、胸膜肺炎嗜血杆菌（Haemophilus pleuropneumoniae）。后来因该菌在形态、生化特性及DNA同源性方面与李氏放线杆菌（Actinobacillus Lignieresii）关系密切，于1983年被归入，正式命名为胸膜肺炎放线杆菌。 一、菌种简介平台编号：Bio-72847规格：Freeze-Dried拉丁属名：Actinobacillus Pleuropneumoniae菌株名称：胸膜肺炎放线杆菌用途：ATCC原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Actinobacillus pleuropneumoniae (Shope) Pohl et al. 拉丁名(ATCC? 43336?)统一编号Deposited As Haemophilus pleuropneumoniae ShopeStrain Designations 菌株别名 SD-1Application 用途 Respiratory researchIsolation 分离基物 Lung of pig, South DakotaBiosafety Level 生物安全等级 2Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedPreceptrol? noType Strain 模式菌株 noComments 注释 Carries plasmid pVM105, which confers resistance to ampicillin and sulfadiazine by coding for ROB-1 beta-lactamase, and pVM104, which confers resistance to streptomycin and sulfadiazineMedium 培养基 ATCC? Medium 1533: GC agar (ATCC Medium 814) with 10 mcg/ml ampicillinGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 37.0℃Atmosphere 需要情况: 5% CO2Name of Depositor 寄存人 AA MedeirosChain of Custody 来源国家 ATCC Isolation 分离基物 Lung of pig, South DakotaReferences Medeiros 参考文献 AA, et al. An animal source for the ROB-1 beta-lactamase of Haemophilus influenzae type b. Antimicrob. Agents Chemother. 29: 212-215, 1986. PubMed: 3487284 Hirsh DC, et al. Plasmid-mediated antimicrobial resistance in Haemophilus pleuropneumoniae. Am. J. Vet. Res. 43: 269-272, 1982. PubMed: 7046533。 三、预防治疗APP为革兰氏阴性小球杆菌，有时呈线状或多形性。有荚膜或不完全荚膜。不形成芽孢。有鞭毛，具运动性。过去通常认为APP是无鞭毛的，03年E Negrete-Abascal等人在journal of bacteriology上发表的《Flagella and Motility in Actinobacillus pleuropneumoniae》就明确APP有鞭毛蛋白，且根据其宿主、温度和寄生部位具有不同的运动性。有菌毛，直径约0.5nm～2nm，长度约60nm～450nm。本菌为兼性厌氧菌，且营养要求较高。初次分离时应供给5%～10%CO2，且最适合生长的培养基为巧克力琼脂平板和绵羊血琼脂平板。根据APP生长是否需要烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（Nicotinamide Adenine Dinucleotide, NAD），分为两个生物型，即生物I型（NAD依赖菌株）和生物II型（非NAD依赖型）。根据APP表面荚膜多糖和脂多糖抗原性的不同，又分为15个血清型。其中APP1型又分为1a和1b 两个亚型，APP5型又分为5a和5b两个亚型(Jolie et al, 1994; Alain et al, 2001; Blackall et al, 2002)。生物I型包括1～12型和15型，生物II型包括13型和14型。各血清型之间的交叉保护性不强，其中1、4和6型之间及3、6和8型之间有交叉反应，可能与这些血清型有相似的细胞结构有关。生物I型菌初次分离培养时，在血琼脂平板上难以生长或不生长，而需在培养基上划一条金黄色葡萄球菌线，其产生的较多NAD可供APP生长需要。37℃ 培养24h后，在葡萄球菌附近可形成表面光滑、圆形、稍突起、边缘整齐、针尖大小的菌落，呈明显的ß-溶血，这一现象被称为“卫星现象”。生物II型菌初次分离时则可在血液琼脂平板上生长，37℃培养24h后，同样呈ß-溶血。而APP在金黄色葡萄球菌ß-溶血素周围产生一个不断增大的溶血区，越靠近划线的菌苔，溶血区越大，形似杯状，这一现象称为CAMP现象。许多试验数据已证明生物II型菌的毒力低于生物I型菌。Dom.p等应用气管内注射接种感染法，比较生物I型菌（血清型2、3、9）和生物II型菌的毒力。结果表明，接种生物I型菌的仔猪在12h内出现急性临床症状，36h后全部死亡。而接种生物II型菌的仔猪有30%的仔猪无临床症状，其余仔猪出现与生物I型相同症状。另外，Jacobsen等（1996）用气雾感染模型也证实产生相同病变的生物I型菌（血清型2、5、6）的最低菌数为104cfuml，而生物II型菌则为109 cfu/ml。尽管生物I型APP的12种血清型都能引起严重发病和死亡，但其毒力有明显的差异，主要是由CPS、LPS成分和Apx毒素类型不同造成的。一般来说，分泌ApxI的血清1、5、9、10和11型比其他血清型毒力强，最常见于严重爆发、高死亡率和严重的肺脏病变。其他血清型的毒力较弱，死亡率也较低。血清3型和6型的毒力通常被认为很低 。APP的毒力因子很多，包括荚膜多糖、脂多糖、外膜蛋白、转铁结合蛋白、蛋白酶、溶血外毒素、粘附因子和菌毛等，其中溶血外毒素是引起宿主肺部病变的最主要因素。APP是一种条件致病菌，对外界环境的抵抗力不强，于60℃ 15min即可死亡。日光、干燥和一般化学消毒剂于短时间内即可杀灭。在干草和秸秆上的生存时间不超过5d。该菌对氟苯尼考、头孢拉啶、甲氧苄啶、头孢噻呋等抗菌药敏感，对链霉素、青霉素、红霉素、氟哌酸、卡那霉素和复方磺胺等药物不敏感。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                   鸡败血支原体PCR试剂盒的培养操作步骤及应用！ 一、背景 鸡败血支原体PCR试剂盒是一种用于检测鸡败血支原体的PCR(聚合酶链式反应)试剂盒。鸡败血支原体是一种常见的细菌病原体，可引起鸡的呼吸道、肠道和生殖系统感染，导致严重的经济损失。 该试剂盒通过PCR技术检测鸡败血支原体的DNA，具有高灵敏度和特异性。使用时，首先需要提取鸡样本中的DNA，然后将提取的DNA加入到PCR反应体系中进行扩增和检测。如果样本中存在鸡败血支原体的DNA，则会显示出阳性结果。 鸡败血支原体PCR试剂盒广泛应用于家禽养殖业中，可以帮助养殖户及时发现和控制鸡败血支原体感染，减少疾病的传播和损失。同时，该试剂盒也可以用于科学研究中，帮助研究人员深入了解鸡败血支原体的生物学特性和致病机制。 二、鸡败血支原体PCR试剂盒是一种用于检测鸡败血支原体的实验工具。试剂盒具有以下特点： 即开即用，用户只需要提供DNA模板。 引物经过精心优化，专一性强，只扩增鸡败血支原体，与其他病原没有交叉反应。 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。 PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。 三、鸡败血支原体PCR试剂盒的操作步骤如下： 1、样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。 2、DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。 3、PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。 4、PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。 5、结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在鸡败血支原体的感染。 四、应用 鸡败血支原体PCR试剂盒可以用于鸡败血支原体黏附素GapA的表达及基因靶向载体的构建： 鸡败血支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)能引起鸡及其它禽类的慢性呼吸道疾病(Chronic respiratory disease,CRD)和火鸡传染性窦炎(Infectious sinusitis),该病广泛分布于世界上所有养禽的国家,且常继发或并发新城疫、传染性支气管炎等其他呼吸道传染病,造成巨大的经济损失。MG感染和寄生最重要的步骤是牢固地黏附在呼吸道黏膜固有层。因此,为了深入研究MG致病机制,本研究对MG主要黏附素GapA的相关免疫特性进行探索,并成功构建MG通用型转座载体和oriC可复制型载体用于MG基因靶向缺失研究。 1、鸡败血支原体强弱毒株gapA基因的克隆及序列测定本研究通过鸡败血支原体PCR试剂盒RT-PCR和PCR扩增MG不同毒力毒株的gapA基因N端序列,测定各基因片段序列,并比较其在转录水平、翻译水平和序列之间的差异性。 结果表明：gapA基因存在于一个大型的mRNA转录产物中,与licA、mgc2、crmA三个基因同在一个基因簇中;不同毒株之间,gapA基因N端存在明显的差异,GapA的90～290aa之间即为GapA的高变区。而对于Rhigh,常出现在多个位置插入有单一“A”的现象,如:第105位、385位和910位,导致随后的基因序列移码成TAA终止子,致使翻译提前终止;而对于ts-11株,gapA N端的第142nt处由“C”突变为“A”,形成TAA密码子,致使翻译提前终止。而强毒株Rlow、S6、DC9604和弱毒株F、6/85均能编码gapA基因全长,编码大约110～120kD左右的蛋白。这几个毒株之间的区别在于:GapA的N端100300aa之间存在高变区。这为GapA的表达和抗体制备奠定了基础。 2、鸡败血支原体Rlow株GapA氨基端(GapAN)的高效表达本研究通过鸡败血支原体PCR试剂盒PCR扩增GapA蛋白N端多肽(98322aa)(GapAN)和C端(882aa-1115aa),分别连入pGEX-6P-1载体,转化BL21(DE3),经IPTG诱导,结果发现GapAN获得高效表达;而GapA C端未能成功表达。将GapAN亚克隆入pFAST-Bac1载体中,转座DH10Bac细菌,通过转染Sf9细胞,获得GapAN的重组杆状病毒。抗GapAN的多抗利用IFA检测,结果显示:GapAN成功地在杆状病毒中高效表达。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  食品厂洁净区出现霉菌污染的原因分析及解决方法！ 百欧博伟生物：食品厂的洁净区是指为了保持食品质量和安全，在生产过程中需要对食品及其生产环境进行控制的区域。这些区域需要采取一系列措施，如清洁卫生、消毒、空气净化等，以控制污染源和微生物的生长和繁殖。根据食品生产的要求和洁净度的不同，洁净区可以划分为不同的级别，如一般洁净区、无菌洁净区和超净洁净区等。 食品厂洁净区为什么会出现霉菌污染？ 食品厂洁净区出现霉菌污染的原因是多方面的。其中，最主要的原因是洁净区内的湿度和温度控制不当。在潮湿的环境下，霉菌就容易生长和繁殖。此外，洁净区内的空气净化系统也可能存在问题，如过滤器失效、风道漏风等，从而使得空气中夹带有大量的霉菌孢子。 洁净区的排水系统也是霉菌污染的一个重要来源。如果排水系统不畅，积水处长时暴露于环境中，就会导致霉菌的滋生。 洁净区内的人员和设备也是不可忽视的因素。工作人员的带入物、使用的工具以及洁净服等都可能成为霉菌的传播媒介。 食品厂洁净区的霉菌如何彻底清除？ 要彻底清除食品厂洁净区的霉菌，我们需要采取一系列综合措施。 1、要合理控制洁净区的湿度和温度，保持室内通风良好，防止潮湿和高温的环境出现。 2、要定期检查和维护空气净化系统，确保其正常运行，并及时更换失效的过滤器。 3、要加强对洁净区排水系统的管理和维护，保持排水畅通，避免积水的出现。 4、洁净区内的工作人员和设备也需要进行有效的管理和控制。工作人员应该严格遵守卫生规定，避免带入物污染洁净区。使用的工具和设备也应该进行彻底的清洗和消毒。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  常用的杀灭和抑制微生物的化学方法有哪些？ 百欧博伟生物：能抑制、杀死微生物的化学因素种类较多，用途也相当广泛，主要可以分为表面消毒剂、防腐剂、化学治疗剂。 1、化学表面消毒剂 凡是用于杀死微生物的化学药品都称为化学消毒剂，种类较多，主要如下： （1）乙醇 杀菌机理是其脱水作用、溶解细胞膜脂和进人蛋白质的肽键空问结构，引起蛋白质变性。70%~75％是乙醇消毒的最佳浓度。主要用于物体的表面和皮肤的消毒。 （2）甲醛 杀菌机理是它能破坏蛋白质的氢键，并能与氨基结合，从而造成蛋白质变性。杀菌效果较好，对营养体和孢子都有作用。工厂和实验室常采用甲醛熏蒸进行空间消毒。 （3）来苏儿（2%煤酚皂） 石炭酸（苯酚）能使蛋白质变性，并能损伤细胞膜，因而是较好的消毒剂。石炭酸的水溶性较差，通常将它与皂液和煤油混合，增加其溶解度，这种混合液称为来苏儿。常用于物体表面、地面和皮肤等消毒。 （4）过氧化氢 3%的过氧化氢也是一种皮肤伤口消毒剂。杀菌机理是利用其氧化性使蛋白质活性基团被氧化而失活。 （5）过氧乙酸 是一种高效、速效、广谱和无毒的化学杀菌剂。0.001%浓度的过氧乙酸水溶液能在10min内杀死大肠杆菌。适用手塑料、玻璃制品、棉布、人造纤维等制品的消毒，也适用于果蔬和鸡蛋等食品表面的消毒。 （6）红汞 属于重金属，它能与蛋白质的巯基结合，使蛋白质变性失活。医学上常用于皮肤伤口的消毒。 （7）硝酸银 属重金属，能造成蛋白质变性沉淀。医学上用于皮肤和眼睛等部位的消毒。 （8）氯、次氯酸钠、漂白粉（次氛酸钙） 杀菌机理是它们的氧化性破坏细胞膜和酶蛋白的结构，从而造成菌体死亡。可用于环境消毒和空间消毒。 （9）二氧化氯杀菌能力强、效果持续时间长和用量省，尤其是水体经其消毒后，不会残留有毒物质。广泛用于生活用水和污水的消毒处理，也适用于食品加工和养殖业中的消毒、灭菌、防腐、保鲜、除臭和漂白等。 （10）碘酒2.5%的碘溶解于酒精中，可做皮肤消毒剂。其杀菌机理是利用碘与蛋白质中的酪氨酸发生卤化反应，而使蛋白质失活。 （11）新洁而灭 新洁而灭是季胺类，属阳离子表面活性剂亡。对微生物的营养细胞有杀灭作用，但对芽孢杆菌仅有抑制作用。它与菌体表面结合，破坏膜结构，并能使蛋白变性。其稀溶液对人体无刺激，不污染衣物，性质较稳定，易于保存，应用较广，以0.01%做创面消森，以0.1%做皮肤和器械等的消毒。 （12）龙胆紫（结晶紫染料） 结晶紫染料能与蛋白质的羧基结合，造成蛋白变性，达到杀菌的目的。2%～4%的结晶紫溶液也是较好的皮肤伤口消毒剂。 （13）硫磺粉 硫磺燃烧产生SO2，S02与水结合形成H2SO3，在菌体表面夺取氧成为H2SO4，从而致使菌体脱氧死亡。常用于厂区消毒。 2、防腐剂 防腐是利用物理和化学的手段，完全抑制霉腐微生物的生长繁殖，防止食品等发生霉变的措施。此时，微生物并没有被杀灭，而只是妥到抑制。用于抑制体外微生物生长的化学药品称为防腐剂，实际上，小剂量的消毒剂也就是防腐剂。如酱油中的苯甲酸钠，饮料和化妆品中的山梨酸钠都是良好的防腐剂。 3、化学治疗剂 利用具高度选择毒力的化学物质来抑制宿主体内病原微生物的生长繁殖，甚至杀灭，达到治疗疾病的目的。主要有抗代谢类药物、抗生素和中草药等。 （1）抗代谢类药物  有些化合物在结构上与生物体所必需的代谢物很相似，以至于可以和特定的酶结合，从而阻碍酶的功能，干扰代谢的正常进行，这些物质称为抗代谢物。若用于疾病的治疗，可以称为抗代谢类药物。磺胺类药物是典型的抗代谢类药物 （2）抗生素 抗生素是许多生物的生命活动过程中产生的一类次级代谢产物或其人工衍生物，它们在很低浓度时就能抑制或影响其他种类生物的生命活动。抗生素可通过抑制细胞壁的合成、改变细胞膜的通透性、抑制蛋白质或核酸的合成等反应机理抑制或杀死微生物。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  人胆囊上皮细胞的特点与应用及培养操作步骤！ 一、背景 人胆囊上皮细胞是胆囊内壁的细胞，主要负责分泌黏液和吸收胆汁中的水分和电解质。胆囊是一个小型的囊状器官，位于肝脏下方，与肝脏通过胆管相连。胆囊的主要功能是储存和浓缩胆汁，以帮助消化脂肪。 二、人胆囊上皮细胞具有以下特点 形态特征：人胆囊上皮细胞呈多角形或长方形，具有多个突起，核较大，核质比高。 生长特性：人胆囊上皮细胞具有较强的增殖能力，可以在体外培养并传代。 功能特性：人胆囊上皮细胞具有分泌黏液和吸收胆汁中的水分和电解质的功能。此外，它们还参与胆汁的合成和分泌调节。 人胆囊上皮细胞在医学研究中具有重要应用价值。例如，可以通过体外培养人胆囊上皮细胞，研究其分泌功能、增殖特性以及与疾病的关系。此外，还可以利用人胆囊上皮细胞进行药物筛选和毒性评价等实验。 三、人胆囊上皮细胞培养操作 1)复苏人胆囊上皮细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)人胆囊上皮细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)人胆囊上皮细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 四、应用 人胆囊上皮细胞可以用于纳米细菌对人胆囊结石形成的影响和机制探讨： 在成功分离、培养人胆囊上皮细胞的基础上，研究纳米细菌对人胆囊上皮细胞的侵袭作用。 方法：寻找适宜的方法和合适的体外生长条件，行体外分离、培养及鉴定人胆囊上皮细胞。然后将实验分为两组，第一组将纳米细菌菌株Se90和人胆囊上皮细胞爬片混合培养，第二组为胆囊上皮细胞爬片空白对照组。光镜下观察不同浓度纳米细菌攻击后人胆囊上皮细胞的形态学变化；使用四唑盐(MTT)比色试验检测被攻击后细胞的存活和生长情况；使用免疫荧光染色观察不同时间点纳米细菌于上皮细胞的空间位置关系；透射电镜下观察被纳米细菌攻击后的胆囊上皮细胞超微结构的改变。 结果：使用钝性刮擦法，置于含20％胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5％CO2、饱和湿度的二氧化碳培养箱内，成功地进行了人胆囊上皮细胞的分离和体外原代培养，并理想贴壁，制作了细胞爬片。纳米细菌菌株Se90与人胆囊上皮细胞爬片混合培养后，光镜下观察不同浓度纳米细菌侵袭细胞爬片后的情况。随着时间推移，被攻击的胆囊上皮细胞逐渐出现水肿，分离，随后细胞破碎，胞核溶解消失，此过程中未发现明显凋亡小体形成。 将纳米细菌和胆囊上皮细胞爬片混合培养，检测不同时间含不同浓度纳米细菌混合培养液的上清液中四唑盐(MTT)的值，比较48和72、小时MMT结果，稍高浓度组(OD=0.02)吸光度值均明显低于低浓度组的吸光度值(P＜0.01)；在72小时低浓度组(OD=0.005)比对照组吸光度低，比较差异具有显著性(P＜0.01)，而在48小时该组与对照组比较，差异无显著性。 免疫荧光染色显示，纳米细菌可以在较短时间内进入胆囊上皮细胞中，且随着时间的推移，进入胆囊上皮细胞内的细菌逐渐增多，直至进入汇集于胞核。在电镜下观察细胞超微结构发现，胆囊上皮细胞受到纳米细菌攻击以后，细胞表面丰富的微绒毛减少，细胞内线粒体肿胀明显，严重情况下细菌侵入细胞内部，造成细胞破裂坏死。 结论：适宜的方法和条件能有效进行胆囊上皮细胞的体外原代培养；纳米细菌可以在短时间内迅速进入胆囊上皮细胞并对其产生损伤作用，产生从大体形态到超微结构的一系列改变；且细菌浓度越高，作用时间越长，造成的损伤越严重；较短时间内(48小时内)被攻击的胆囊上皮细胞大部分的死亡方式是坏死而不是凋亡。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 食品生产用水菌落总数超标的原因及预防措施！ 百欧博伟生物：食品生产过程中的水质控制是确保食品安全和品质的关键因素。然而，近期一些食品生产企业发现，食品生产用水菌落总数超标现象，这给食品安全带来了重大隐患。 一、食品生产用水菌落总数超标的原因 1、水源污染：一些食品生产企业的水源可能来自受污染的河流、湖泊或地下水，这些水源中的细菌和微生物含量较高，从而导致生产用水菌落总数超标。 2、水处理设备不足或老化：一些食品生产企业可能没有足够或适当的水处理设备，无法有效地去除水中的细菌和微生物，或者设备老化导致处理效果不佳。 3、储水设施不洁：食品生产企业的储水设施如果不洁或维护不良，可能导致细菌和微生物在水中滋生，从而使得菌落总数超标。 4、人员操作不当：员工在取水、加水或设备操作过程中，如果未按照规范操作，可能使得水中的细菌和微生物含量增加，从而导致菌落总数超标。 二、解决食品生产用水菌落总数超标的措施 1、优化水源选择：食品生产企业应优先选择清洁、无污染的水源，如纯净水、蒸馏水等，以降低水中细菌和微生物含量。同时，应定期对水源进行检测，确保其质量符合标准。 2、更新或维护水处理设备：食品生产企业应定期检查和更新水处理设备，以确保其能够有效地去除水中的细菌和生物膜等微生物。对于老化的设备，应及时维修或更换。 3、改善储水设施卫生状况：食品生产企业应定期清洁和维护储水设施，防止细菌和微生物在水中滋生。同时，应定期对储水设施进行消毒处理，确保水质安全。 4、规范人员操作：食品生产企业应加强员工培训，确保他们在取水、加水或设备操作过程中严格按照规范操作，避免因操作不当导致水中的细菌和微生物含量增加。 5、建立完善的质量管理体系：食品生产企业应建立完善的质量管理体系，明确规定水质检测的频率、方法及标准，确保水质的稳定性和安全性。同时，应将水质检测结果记录在案，以便日后追溯和审查。 6、开展新技术研究与应用：以提高水质处理的效率和效果；通过奥克泰士新型的消毒方法，以减少水中细菌和微生物的数量等。 食品生产用水菌落总数超标是当前食品生产企业面临的一个重要问题。为了解决这一问题，企业需要从水源选择、设备消毒杀菌维护、储水设施卫生、人员操作等多个方面进行改进和完善。这些措施的实施我们可以有效降低食品生产用水菌落总数超标的风险保障食品安全，降低企业经济损失。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！