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人B淋巴细胞白血病细胞的复苏与传代及冻存操作说明!

             人B淋巴细胞白血病细胞的复苏与传代及冻存操作说明! 细胞简介平台编号:Bio-67723 规格:1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息:EHEB 细胞名称:人B淋巴细胞白血病细胞EHEB产品规格:T25培养瓶x1;1.5ml冻存管x2细胞数量:1x10^6;1x10^6保存温度:37℃;-198℃运输方式:常温保温运输;干冰运输安全等级:1用途限制:仅供科研3类培养体系:DMEM高糖(HYCLONE SH30022.01)+10%FBS+1%三抗培养温度:37℃二氧化碳浓度:5%简介:人B淋巴细胞白血病细胞EHEB取自69岁女性供体。该细胞最初被认为是白血病细胞,但近年文献显示,该细胞可能是B淋巴细胞母细胞。注释:倍增时间38h用途:细胞系 注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准) 细胞复苏操作说明(针对冻存细胞)实验仪器:超净工作台 ,CO2 培养箱 ,倒置显微镜 ,水浴锅 ,离心机实验试剂:DMEM 培养基 ,胎牛血清 ,三抗实验材料:T25 细胞培养瓶 ,需复苏的细胞 ,移液枪 ,枪头 ,离心管实验步骤:1、从液氮罐中取出冻存管 ,直接浸入 37℃温水中 ,并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管 ,打开盖子 ,移液枪吸出细胞悬液 ,加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀。3、操作离心,调至 1000 转/分 ,时长 10 分钟4、弃去上清液 ,重悬离心管底部细胞沉淀,在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基,计数,调整细胞密度,接种培养瓶 ,37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液,继续培养。6、注意:冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中 细胞传代操作说明(贴壁细胞)实验仪器:超净工作台 ,CO2 培养箱 ,倒置显微镜 ,离心机实验试剂:DMEM 培养基 ,胎牛血清 ,0.25%胰酶 ,三抗实验材料:T25 细胞培养瓶 ,需传代的细胞 ,移液枪 ,枪头 ,离心管实验步骤:1、细胞于培养箱中 ,愈合度达到 80% ,可进行传代。2、按 T25 培养瓶计 ,吸出完全培养基 ,并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍 ,添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ,消化 2min(具体时间视细胞而定),后用完全培养基将细胞冲洗下来。 1000r/min 离心 10 min ,弃上清收集细胞,铺至 2 个 T25 培养瓶中培养,各添加 7ml 完全培养基。3、注意:消化时间不易过长,消化前血清成分务必去除干净,终止消化请用新鲜完全培养基,原瓶培养基不可继续使用(终止消化或传代)。  细胞传代操作说明(悬浮细胞)实验仪器:超净工作台 ,CO2 培养箱 ,倒置显微镜 ,离心机实验试剂:DMEM 培养基 ,胎牛血清 ,三抗实验材料:T25 细胞培养瓶,需传代的细胞,移液枪,枪头,离心管实验步骤:1、细胞于培养箱中,密度达到悬浮细胞传代标准(沉降后可铺满底面),可进行传代。2、按 T25 培养瓶计,吹打均匀,吸出完全培养基,1000r/min 离心 10 min,弃上清收集细胞,铺至 2 个T25 培养瓶中培养,各添加 7ml 完全培养基。3、注意:原瓶培养基不可继续使用(传代)。 细胞冻存操作说明实验仪器:超净工作台 ,CO2 培养箱,倒置显微镜,离心机实验试剂:DMEM 培养基 ,胎牛血清 ,0.25%胰酶 ,三抗 ,DMSO实验材料:T25 细胞培养瓶,需冻存的细胞,移液枪,枪头,离心管,冻存管,记号笔实验步骤:1、取待冻存的细胞(按 T25 计 )用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ,用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ,弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞,则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ,转放-20℃ 1.5~2 h ,再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ,并登记。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!

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2024.04.08

鼠伤寒沙门氏菌(不带荧光)的知识说明与注意事项!

                 鼠伤寒沙门氏菌(不带荧光)的知识说明与注意事项! 鼠伤寒沙门菌(S.typhimurium)属多价O抗血清的B群,也是一种临床较常见的沙门菌。鼠伤寒沙门菌是一种重要的人畜共患病原菌,其感染发病率居沙门菌感染的首位,约占人源沙门菌感染的40%~80%。多见于婴幼儿,可导致医院感染和暴发性食物中毒,病死率较高。 一、产品信息平台编号:Bio-110527 规格:2ml甘油管 拉丁属名:Salmonella Enterica Typhimurium SL1344 菌株名称:鼠伤寒沙门氏菌(不带荧光)用途:研究注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准) 二、基因型未知,请查阅相关文献 三、基本信息抗性:培养基:LB菌株类别:鼠伤寒沙门氏菌培养条件:30℃,有氧,LB保存方式:20%甘油,-20℃可冻存1年,1年后取出重新活化保种 四、注意事项1、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。本产品仅可用于实验室研究,不能用于动物,人体以及作为食品添加剂等用途。2、使用甘油菌时可不完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂布固体琼脂平板即可,也可完全融解后使用,但随着冻融次数的增加,菌株的活力会逐渐下降。 五、形态与染色革兰阴性细长杆菌  六、生化特征发酵葡萄糖,不发酵乳糖,TSI为K/A,动力阳性,H2S试验强阳性,脲酶试验阴性。 七、病理病因鼠伤寒沙门菌经胃入肠,在肠道内增殖,粘附于肠黏膜上皮细胞,进而侵入固有层,释放毒素,导致其充血、水肿、点状出血等急性炎症反应。病理特点主要是消化道呈现不同程度的充血、水肿、出血及灶性坏死,甚至形成较为广泛的浅表性溃疡,炎性细胞浸润。 八、治疗及预防鼠伤寒沙门菌感染的患儿一般都需要住院治疗。对胃肠炎型者,液体疗法是治疗的关键,并加强对症支持治疗。对呕吐、腹泻频繁的患儿要给予禁食,及时静脉补液以纠正脱水、酸中毒和电解质紊乱,可试用肠道微生态制剂,调节肠道正常菌群,一般无需抗菌治疗。但对于全身中毒症状较重,有持续高热及粘液血便的患者,可酌情给予抗菌药物。对败血症型及内脏损害型的患者,应在对症治疗的基础上,加强抗感染治疗。【预防】对患者或病原携带者应做到早发现、早隔离及早治疗。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务,对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位,都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务!也正因为此,北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系!

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2024.04.08

BV-173人外周血B细胞的运输与保存及使用方法!

                  BV-173人外周血B细胞的运输与保存及使用方法! 一、细胞简介平台编号:Bio-72763 规格:1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息:BV173 细胞名称:BV-173人外周血B细胞产品类别:人源细胞系生长特性:悬浮生长培养体系:1640+10%FBS传代方法:1:2传代细胞形态:上皮细胞样冻存条件:无血清细胞冻存液传代方法:1:2传代传代情况:2~3天换液培养体系:温度:37℃ ; 气相:空气,95%;CO2,5%细胞描述:本库的细胞仅用于科研工作,未经许可不得用于其他目的,使用者不得将本库细胞转让给第三者。冻存条件:无血清细胞冻存液用途:研究注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准) 二、细胞特性1)组织来源于实验动物的关节组织。2)细胞鉴定:Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ)免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式:长梭状,不规则细胞,贴壁培养。 三、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 四、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 五、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后,先打开外包装,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内,严格无菌操作,培养箱静置2-4小时。镜下观察:未超过80%汇合度时,可将瓶装的完全培养液收集至离心管中,加入6ml完全培养基,放入37℃、5%CO2孵箱培养;超过80%汇合度时,根据情况传代或者冻存,具体操作见细胞培养步骤。(注意发货的是密封培养瓶的话,放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松) 六、细胞培养步骤1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法二:可选择半数换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,进行离心收集,1000RPM条件下离心8-10分钟,去除上清,按冻存数量加入到冻存液中。PS:若客户收到2ml小管细胞,收到细胞后,用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内,严格无菌操作;将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿,加入5ml左右完全培养基混匀,放入培养箱过夜培养后查看细胞密度:若密度未超过80%,换液继续培养,视情况传代或者冻存。若密度超过80%,可直接进行传代(方法同上)。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!

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2024.04.07

ATCC 33669百脉根瘤菌的储存与培养及注意事项!

                  ATCC 33669百脉根瘤菌的储存与培养及注意事项! 百脉根根瘤菌是Mesorhizobium属的微生物,原产地为中国。主要用途为分类;研究;教学。 一、菌种简介平台编号:Bio-135429 规格:冻干物拉丁属名:Mesorhizobium Loti 中文名称:百脉根瘤菌分离基物:百脉根瘤拉丁名称:Mesorhizobium loti原产国:新西兰主要用途:研究培养基编号:78原始编号:NZP 2213培养温度(℃):28其他保藏中心编号:1.2559 =ATCC 33669 =DSM 2626培养时间(天):48-72h来源历史/保藏单位:需氧类型:好氧生物安全级别:BSL 1收藏时间:2022-05-31模式菌株:是注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准) 二、形态特征菌体形态为杆状;菌落圆形,隆起,表面光滑,边缘整齐,颜色为半透明白色,有鞭毛,可运动;与宿主共生时可固氮;胞外有粘液;胞内可积累PHB;化能异养,兼性好氧。 三、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油请置于-80℃。 四、培养条件1、培养基编号:营养肉汁琼脂2、培养基成分:蛋白胨 5.0g,牛肉浸取物 3.0g,NaCl 5.0g,琼脂 15.0g,蒸馏水 1.0L,pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入 5mg MnSO4・H2O,则有利于产生芽孢。推荐使用商品化成品培养基。3、需氧类型:好氧4、培养温度:60℃ 五、注意事项1、菌种常规培养时间:细菌 1-2 天,酵母 3 天,霉菌 5-7 天,大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接,不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养,如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失,我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作,带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 六、打管说明书1、安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒,将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热;立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位,使管壁破裂;再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养:用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀,可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态,延迟期较长,需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏(特殊除外)。6、冻干管打开后需一次用完,不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行,用完冻干管应灭菌处理后丢弃。9、如若有菌种复苏不活或者污染等情况,请在收到后 2 个月内联系,逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网,本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司,单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务!与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!

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2024.04.07

粪肠球菌在微生物生态中的角色和影响有哪些?

                   粪肠球菌在微生物生态中的角色和影响有哪些? 粪肠球菌是一种常见的肠道细菌,它在微生物界中扮演着重要的角色。粪肠球菌虽然通常被认为是致病菌,引发腹泻和肠道炎症,但它在微生物生态系统中的存在也具有一定的功能和作用。 粪肠球菌的益处 1、生态平衡:在肠道微生物群落中,粪肠球菌起着维持生态平衡的作用。它与其他肠道细菌共同组成了一个复杂的微生物群落,相互作用并共同完成肠道的生理功能。 2、耐受性:粪肠球菌在肠道中生存能力较强,对酸性环境和氧气条件较耐受,可以在肠道内稳定繁殖和存活。它的存在可以在一定程度上抑制其他病原菌的生长和繁殖,发挥一定的保护作用。 3、营养循环:与其他肠道细菌一样,粪肠球菌可以参与食物碳水化合物的降解和吸收,发挥有益的营养循环作用,保证身体对营养物质的吸收和利用。 粪肠球菌的潜在问题和挑战 1、致病性:粪肠球菌常常与引起感染和疾病的毒力因子相关联。在一些情况下,当微生物群落的平衡被破坏,如长期使用广谱抗生素、免疫系统功能低下等,粪肠球菌可迅速繁殖并释放毒素,导致肠道的炎症和损伤。 2、耐药性:粪肠球菌的耐药性问题也备受关注。长期或不适当的抗生素使用可以导致粪肠球菌的耐药性增加,这给治疗和控制感染带来了困难。 3、疾病传播:粪肠球菌可以通过粪便-口传播途径传播给其他人。因此,合理的卫生管理和个人卫生习惯对防止粪肠球菌感染具有重要意义。 对于粪肠球菌的管理和调控 1、抗生素使用:采取合理的抗生素使用策略,包括遵循医嘱、按照剂量和疗程使用、避免滥用和不当使用等,以减少对微生物群落的不利影响。 2、益生菌应用:益生菌在调节肠道微生物群落平衡方面起到积极作用,可以考虑适当应用于调节肠道菌群,抑制粪肠球菌的过度生长。 3、营养均衡:均衡饮食和营养摄入对于维持肠道健康和微生物群落平衡非常重要。适当增加膳食纤维和益生元的摄入,可以提供适合细菌增殖的糖类底物,有助于形成多样化的微生物群落,减少粪肠球菌的优势。 4、卫生管理:加强个人卫生和环境卫生的管理,正确处理粪便和废物,减少病原菌的传播风险。 5、宿主免疫响应:粪肠球菌的存在可以激活宿主的免疫系统,促进免疫反应的产生。这种免疫响应有助于对抗其他病原微生物的入侵,并维持肠道的稳定状态。 6、研究工具:粪肠球菌也被广泛用作在科学研究中的一种工具。由于其相对简单的基因组和易于培养的特性,粪肠球菌常被用作肠道微生物群落结构和功能的模型研究。 总结起来,粪肠球菌在微生物界中有着重要的作用。尽管粪肠球菌可引起疾病,但它在维持肠道微生物群落平衡、营养循环方面发挥着重要的作用。在管理和调控粪肠球菌时,需要合理使用抗生素、加强个人卫生和环境卫生管理、均衡饮食等。通过综合的措施,可以维护肠道健康和微生物群落的稳定,同时减少粪肠球菌感染的风险。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统,超低温冰箱,生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下,为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外,我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务,对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位,都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务!也正因为此,北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系!

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2024.04.07

莓实假单胞菌的培养方法与实验内容及使用范围!

                 莓实假单胞菌的培养方法与实验内容及使用范围! 莓实假单胞菌是微生物学术语。假单胞菌L (I',reruamanus)的种,可引起冷藏食品如奶油,禽蛋和肉腐败,主要用于教学,研究。 一、菌种简介平台编号:Bio-02547 提供形式:冻干物拉丁属名:Pseudomonas Fragi 中文译名:莓实假单胞菌拉丁学名:Pseudomonas fragi原始编号:NBRC 3458菌株来源:←IFO保藏人:周宇光直接来源国家:日本保藏时间:2/11/2003其他保藏编号:=ATCC 4973 =CCUG 556 =DSM 3456 =LMG 2191 =NCTC 10689=NRRL B-727=VKM B-898生物危害:四类模式菌株:模式菌株菌株用途:模式菌株培养温度:30℃培养基:0002    用途:模式菌株 注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准) 二、菌种的培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 三、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。  四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、保存方法1、传代保存法:培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法:该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法:①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法:①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 欢迎访问微生物菌种查询网,本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司,单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务!与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!

参数原理

2024.04.07

小鼠软骨细胞接收后的处理方法与培养步骤!

                     小鼠软骨细胞接收后的处理方法与培养步骤! 一、细胞简介平台编号:Bio-73842 规格:5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息:原代细胞 细胞名称:小鼠软骨细胞培养条件:原代细胞取组织现分用途:研究注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准) 二、细胞详述软骨细胞存在于关节软骨中,负责分泌II型胶原和其它类型的胶原以及非胶原的细胞外基质大分子。成软骨细胞的增殖和分化与脊椎动物骨架的发育有着密切的关系。软骨细胞能分泌和响应一系列的生长因子,包括IGF-1和IL1。体外培养的软骨细胞是研究软骨修复和关节炎病理的有用模型。 三、细胞特性1)组织来源于实验动物的关节组织。2)细胞鉴定:Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ)免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式:长梭状,不规则细胞,贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、细胞接受后处理方法1)收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。2)请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。3)弃去T25瓶中的培养基,添加 6ml本公司附带的完全培养基。4)如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。5)接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。 七、细胞培养操作1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。      1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。2.加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消化。  3.按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。4.将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。 下面 T25 瓶为类;1、细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆脱落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。2、4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻存管做好标识。3、将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 八、小鼠软骨细胞培养注意事项1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。2、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常,请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活力,请拍下照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。4、静置细胞贴壁后,请将细胞瓶内的培养基倒出,留 6~8mL 维持细胞正常培养,待细胞汇合度  80%左右时正常传代。5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件。6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和 Procell 技术部沟通交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。7、该细胞仅供科研使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!

参数原理

2024.04.07

链格孢属的生物特性与种级分类标准及注意事项!

                   链格孢属的生物特性与种级分类标准及注意事项! 链格孢属(Alternaria Nees)是全球分布最广,经济上重要的半知菌类真菌之一。95%以上的种类兼性寄生于植物上,引起多种植物病害,造成全球性的田间和产后巨大的经济损失,链格孢还会引起水果腐霉病。 一、菌种简介平台编号:Bio-66598 提供形式:冻干物/培养物拉丁属名:Alternaria Sp. 中文名称:链格孢属拉丁名称:Alternaria sp.来源历史:←湖南轻工研究院有限责任公司(6.277)收藏时间:2008/9/22资源归类编码:15151912101模式菌株:非模式菌株主要用途:研究特征特性:菌落质地呈绒状。基部菌丝白色,后变为青灰色,中心隆起有同心圆,反面青黑色。分生孢子梗透明或橄榄褐色,基部细胞稍大,顶端膨大呈截状,隔膜多,单生或束生。分生孢子近椭圆形或近矩形,橄榄褐色,表面有小刺,具横纵隔膜。生物危害程度:四类培养基编号:CM0077培养基名称:5 °Bé麦芽汁琼脂培养基成分:5°Bé麦芽汁 1.0L,琼脂 15.0g,自然pH。培养温度:28-30℃培养时间:5-7天需氧类型:好氧保存方法:真空冷冻干燥法共享方式:公益性共享;资源纯交易性共享;合作研究共享;资源交换性共享用途:研究; 注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准) 二、培养基PDA 三、生物特性营养菌丝分隔,在分生孢子梗上向顶发育产生典型的链状分生孢子,分生孢子梗和体细胞菌丝很相似,暗色的梨型分生孢子通常既有横隔又有纵隔。 链格孢属(Alternaria C. G. Nees)。菌丝细长,分枝,淡色至褐色,具隔膜,菌丝体大部分埋生,部分表生。分生孢子梗由菌丝顶端生成,或从菌丝侧生,或生于子座上,通常比菌丝粗,色深,简单或有时分枝,直或弯曲,单生或数根丛生。产孢细胞生于分生孢子梗及其分枝的顶端,顶部具一产孢孔,以内壁芽生孔生式(eb-tret)产孢,随着多次产孢作合轴式延伸,使分生孢子梗作膝状曲折,孢子脱落后留下清晰的孢痕,孢痕周边色深,中央色淡。分生孢子倒棒形、卵形、倒梨形、椭圆形或近圆柱形,与产孢细胞的接触面大,孢子基部钝圆形,脐部明显。孢身褐色、青褐色或黄褐色,具横、纵或斜的真隔膜,光滑或具疣、刺,分隔处无缢缩或缢缩,顶端无喙或延伸成喙。喙呈单细胞柱状,锥状或多细胞柱状或纤细的长丝状,较孢身色淡或近无色,简单或分枝。凡转变为次生分生孢子梗产孢者称为假喙,否则为真喙。孢子可连续产生次生分生孢子,形成长的或短的、分枝或不分枝的孢子链。 四、种级分类标准Neergaard(1945)等相继提出链格孢菌种级分类标准,张天宇等(1997)综合前人和他们研究结果,提出下列分类标准。第一,分生孢子是种级分类的主要依据,但其形态、大小等变幅很大,易受基质和其他培养条件的影响。因此,在观察描绘计量时应注意:尽量选用自然基质(标本)上长出的孢子,必须培养时可采用营养相对贫乏的PCA(马铃薯20g,胡萝卜20g,琼脂15g,水1000mL)或TWA+WS(水1000mL,琼脂15~20g,灭菌后的麦秆放于琼脂板上),在光暗交替条件下培养;选孢子个体发育充分,处于鼎盛时期的孢子,避免选用生长中的幼小孢子或过老畸形孢子;随机选择孢子避免有意多选大个或小个孢子,隔膜多或隔膜少的孢子,尽量客观地反映实际情况。分生孢子的基本形状为倒棒形、卵形或倒梨形,其形状虽有较大变化,但一个种绝大多数孢子形状是有特征性的,是种级分类有用标准。种内孢子大小变幅可以较大,相近种间孢子大小可能有交叉,但这一特征仍是分种的可靠性状和常用标准之一。横隔膜多少变幅较大,但纵、斜隔膜变幅较小,不同种之间孢子分隔数目,特别是纵、斜隔膜数目差别较大是一个有用的分种性状。分隔处是否隘缩也是一些种间区别的特征。孢子颜色是有一定的参考价值。孢子表面的纹饰很难用于种级分类。因为几乎所有链格孢属的种,都可形成表面有纹饰的孢子,或表面有纹饰和光滑的孢子可能出现在同一培养菌株中。孢子单生或成链着生,形成短链(2~5个孢子)或长链(5~10个孢子或更多),孢子链分枝与否,这是一个明显的在一定条件下相对稳定的特征,所以孢子成链特征是一类非常有用的属下分组和种级分类特征。孢子顶端有无喙及其形态是种级分类的有用标准。李多川等(1993)将链格孢属的喙部分为六个类型:无喙、单细胞假喙、柱状假喙、柱状真喙、锥状真喙、丝状真喙。第二,分生孢子梗的形态一般无种间特异性,其长度因基质和外界条件不同有较大变化,但其直径变化较小,可做为某些种间的区别特征。某些种的孢子梗常发生一次或数次分枝,也有一定的鉴别价值。第三,链格孢属中不同种间的菌丝特异性很小,在培养中有的可形成特征性的厚垣孢子,可作为区别一些种的鉴别特征。第四,不同种间在菌落形态、色泽和生长速度等常有一些差别,但作为种级鉴别特征意义不大。第五,自然寄主(基质),绝大多数链格孢种发生于植物性基质上,在自然条件下常发生于一定属或科的植物寄主上,即一定科、一定属植物上常被一定种的链格孢所寄生。少数种对基质的选择不严格,适应性广,表现腐生性强。链格孢中大孢子和长喙种类一般寄生性较强,引起症状特征明显,对寄主范围的选择性也较强。而小孢子种类对寄主范围偏宽。  五、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在2-8°C保存。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。 六、注意事项1)冻干首次活化,干粉要全部用完,不能预留,用0.3ml的培养液或无菌水溶解,接种在1-2支平板上,因冻干粉处于休眠状态,请勿接种多支平板,以避免因接种量不足而导致复苏不成功;或直接接种液体培养基,则试管斜面不超过5ml为宜。 经过冷冻干燥保藏,菌种处于休眠状态,复苏培养时可能会延迟生长,这时需较长的培养时间; 若您收到的是已复苏的培养物(非冻干菌),则可以直接用于您的实验,或根据需要转接培养;如有不明白之处,请务必先咨询我单位技术人员,避免不必要的损失;2)微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方,室温放置时间过长会导致菌种衰退;3)菌种操作应在无菌条件下进行;转种完毕,应经灭菌再做丢弃处理;4)应根据菌种状况及时转接,冻干菌种保藏时间通常为2-25年;5)菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和微生物菌种查询网联系。6)如若有菌种复苏不活或者污染等情况,请在收到菌钟后2个月内联系,逾期不予受理;7) 打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。8)西林瓶开封:用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部,在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖,注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞,用 75%酒精棉消毒瓶口部分,使用无菌吸管注入 0.5ml适宜的液体培养基复溶冻干粉末。9)安瓿瓶开封:用浸过75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍,并保持在火焰旁操作。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!

参数原理

2024.04.07

细胞凋亡-HOECHST染色试剂盒的应用及研究动态!

                细胞凋亡-HOECHST染色试剂盒的应用及研究动态! 一、背景 细胞凋亡-HOECHST染色试剂盒是一种经典的细胞凋亡检测方法。这种试剂盒采用Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)双染的方法,可以快速简便地检测细胞凋亡。 二、细胞凋亡-HOECHST染色试剂盒操作步骤 1、细胞样品的制备: ⑴贴壁细胞: ①小心收集细胞培养液到一个无菌离心管内备用。 ②用胰蛋白酶消化细胞至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时,加入前面收集的细胞培养液,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞。 ③收集上述细胞悬液到离心管内,4℃1000g离心3~5 min,使细胞沉到管底,小心吸取上清并丢弃,可留大约50μl培养液,以免吸走细胞。 ④加入约1ml提前预冷的PBS,重悬细胞,并转移至1.5ml无菌离心管,4℃1000g离心3~5min,使细胞沉到管底。 ⑤小心吸取上清并丢弃,可留大约50μl PBS,以免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。 ⑵悬浮细胞: ①4℃1000g离心3~5min,使细胞沉到管底,小心吸取上清并丢弃,可留大约50μl培养液,以免吸走细胞。 ②加入约1ml提前预冷的PBS,重悬细胞,并转移至1.5ml无菌离心管,4℃1000g离心3~5min,使细胞沉到管底。 ③小心吸取上清并丢弃,可留大约50μl PBS,以免吸走细胞,轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。 2、配制Cell Stain Buffer工作液:取适量Cell Stain Buffer(2×)与无菌去离子水或蒸馏水等比例混合,即为Cell Stain Buffer工作液,4℃保存备用。 3、重悬细胞:取上述收集好的0.1~1×106细胞,加入0.9ml Cell Stain Buffer工作液,重悬细胞沉淀。 4、Hoechst 33258/PI染色: ⑴一步法:加入5μl Hoechst 33258 Stain和5μl PI Stain,轻轻混匀,置于冰浴或4℃,孵育20~30min。 ⑵两步法: ①加入5μl Hoechst 33258 Stain,置于37℃水浴,孵育5~15 min ②置于冰水中冷却后,4℃1000g离心3~5 min,使细胞沉到管底,弃上层染色液。 ③加入0.9ml Cell Stain Buffer工作液,重悬细胞沉淀。 ④加入5μl PI Stain,置于冰浴或4℃,孵育20~30min。 5、细胞凋亡-HOECHST染色试剂盒检测与分析:用流式细胞仪在激发波长400~500nm检测蓝色荧光,在大于630nm处检测红色荧光,同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。如果使用荧光显微镜检测,检测前4℃1000g离心3~5min沉淀细胞,用PBS洗涤一次,再涂片观察红色荧光和蓝色荧光。对于贴壁细胞使用荧光显微镜检测,亦可不收集细胞,弃培养液后直接依次按照上述比例加入试剂(A)、试剂(B)、试剂(C),冰浴或4℃染色20~30min。染色后PBS洗涤一次,再在荧光显微镜下观察。 细胞凋亡-HOECHST染色试剂盒染色结果:在蓝色荧光对红色荧光的散点图上,正常细胞呈低蓝光/低红光,凋亡细胞呈高蓝光/低红光,坏死细胞呈低蓝光/高红光。 三、应用 细胞凋亡-HOECHST染色试剂盒可以用于甘草素诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其机制的研究: 甘草素抑制肿瘤细胞生长及诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究目的:探讨甘草素(liquiritigenin)对两株肿瘤细胞生长的抑制作用及对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用的影响。 方法:本研究采用体外培养人结肠癌Lovo细胞和人肝癌SMMC-7721细胞的方法,通过噻唑蓝(MTT)比色法观察甘草素对肿瘤细胞增殖的影响;Hoechst染色法和电镜观察甘草素诱导SMMC-7721细胞凋亡的形态变化;流式细胞仪检测甘草素诱导SMMC-7721细胞凋亡率的变化情况。 结果:甘草素对Lovo结肠癌细胞作用24、48和72h时各剂量组出现生长抑制作用,其最高抑制率分别为15.4%、57.1%和84.7%;对SMMC-7721肝癌细胞作用24、48和72h时,各剂量组都已出现生长抑制作用,最高抑制率分别达到85.6%、94.2%和91.3%,并呈现明显的剂量-效应关系。甘草素0.4mM作用SMMC-7721细胞12、24、48和72h,Hoechst染色观察可见细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染;透射电镜观察可见0.4mM甘草素作用细胞72h后,细胞染色质浓缩、空泡。流式细胞仪检测结果发现,甘草素可诱导SMMC-7721细胞凋亡,并呈时间-剂量效应关系,甘草素剂量为0.6mM作用24h后,即可引起23.52%的细胞发生凋亡。 结论:甘草素对人结肠癌Lovo细胞和人肝癌SMMC-7721细胞的生长均有抑制作用,其中对SMMC-7721肝癌细胞的生长抑制作用更加明显,并能诱导SMMC-7721肝癌细胞细胞凋亡。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务,对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位,都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务!也正因为此,北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系!

应用实例

2024.04.07

玫瑰色红球菌——用于养殖废弃物的分解和研究

                    玫瑰色红球菌——用于养殖废弃物的分解和研究 玫瑰色红球菌是1988年美国IGT(gas technology insti—tute)的Kilbane等第一次分离出的具有4S途径的玫瑰色红球菌。主要用于养殖废弃物分解。 一、菌种简介平台编号:Bio-02170提供形式:冻干物拉丁属名:Rhodococcus Rhodochrous 中文译名:玫瑰色红球菌拉丁学名:Rhodococcus rhodochrous原始编号:DL-1菌株来源:←江苏大学保藏人:崔恒林直接来源国家:中国保藏时间:7/1/2008生物危害:四类模式菌株:非模式菌株菌株用途:养殖废弃物分解培养温度:37℃培养基:0221    分离源:养殖垫料采集地点:镇江丹徒生态养殖场采集国家:中国用途:养殖废弃物分解 注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准) 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、菌种的培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一种)、原种(二种)和栽培种(三种)三。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备 ,其中(1)~(4)为孢子制备过程。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。放线菌孢子的培养基大多是采用麸皮或豌豆浸出液及无机盐与琼脂制成的。将斜面孢子接入扩大的扁瓶孢子培养基中,于28~37℃培养5~14天。所获得的大量孢子可直接作为种子罐(6)的种子。6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶(5)液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐(7)的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、培养及打管说明1、安瓿瓶开封:用浸过75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、菌株恢复培养:用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基,滴入安瓿管内,轻轻振荡,使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液,移植于1-2支建议的培养基试管中,并在建议的条件下培养。3、注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在6-10℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,需要连续两次继代培养才能正常生长4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。 六、保存方法1、传代保存法:培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法:该法较一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法:①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法:①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围广的微生物保存法。 欢迎访问微生物菌种查询网,本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司,单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务!与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!

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2024.04.07

维罗纳假单胞菌的培养方法与实验内容及注意事项!

                 维罗纳假单胞菌的培养方法与实验内容及注意事项! 一、菌种简介平台编号:Bio-33839 规格:培养物 拉丁属名:Pseudomonas Veronii 中文名称:维罗纳假单胞菌拉丁属名:Pseudomonas种名加词:veronii Elomari et al收藏时间*:2008-7-21原产国:中国资源归类编码:15131134101模式菌株:非模式菌株主要用途:研究;教学生物危害程度:四类致病对象:无分离基物:叶面采集地区:重庆云阳采集具体地点:马尾松次生林培养基信息:培养基编号: 141 培养基名称: BP琼脂培养温度:30资源保护类型:培养物保藏方法:定期移植法共享方式:资源交换性共享提供形式:斜面培养物实物状态:有实物用途:研究注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准) 二、形态特征该菌革兰氏阳性,兼性厌氧,接触酶阳性。最适生长温度为25℃,pH 7.0。在幼龄培养物中,为不规则杆状,到生长后期出现少量球形细胞,以一根或多根侧生鞭毛运动或不运动,不形成芽孢。在正常生长情况下可利用精、肝糖、乙酸、丙酮酸等为碳源物质。  三、培养基* 营养琼脂培养基(NA)* 胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA)* LB 培养基(以上三款培养基任选一种即可) 四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,酿酒酵母菌组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 七、注意事项1)冻干粉首次活化,干粉要全部用完,不能预留,用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液(即以上建议的培养基配方,不加琼脂)或者无菌水,滴入冻干管中,轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液,接种在培养基上(建议不超过 2 支平板或者斜面,若接种液体培养基,则试管液体不超过 5ml 为宜);2)经过冷冻干燥保藏,菌种处于休眠状态,复苏培养时可能会延迟生长,这时需较长的培养时间; 若您收到的是已复苏的培养物(非冻干菌),则可以直接用于您的实验,或根据需要转接培养如有不明白之处,请务必先咨询我单位技术人员,避免不必要的损失;3)微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方,室温放置时间过长会导致菌种衰退;4)菌种操作应在无菌条件下进行;转种完毕,应经灭菌再做丢弃处理;5)应根据菌种状况及时转接,冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年;6)菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活,请在收到后 2 个月内和微生物菌种查询网联系,逾期不予受理;7)打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。8)安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍,并保持在火焰旁操作。9)甘油管使用:使用本甘油菌时可以不用完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用,但随着冻融次数的增加,细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网,本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司,单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务!与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!

参数原理

2024.04.07

实验室各类微生物样品的取样方法及要求有哪些?

                 实验室各类微生物样品的取样方法及要求有哪些? 一、样品取样的要求 1)取样过程中应避免与水等环境的不良因素影响,防止样品被污染。 2)取样用具(如注射器、采血管、试管、探子、铲子、匙、取样器、剪子、样品袋等)必须是经过灭菌的。 3)对采集的样品一般要求随机取样。若怀疑最有可能受病原体污染或者带有病原体的样品,可以进行选择取样。 4)根据样品种类(如盒装、袋装、瓶装和罐装),应取完整密封的样品。如果样品很大,则需用无菌取样器取样;若样品是粉末,应边取边混合;若样品是液体的,通过振摇即可混匀;若样品是冷冻的,应保持冷冻状态(可放在冰内、冰箱的冷盒内或低温冰箱内保存),而非冷冻动物产品须保持在0℃~5℃中保存。 5)取样前或取样后应在盛装样品的容器或样品袋上立即贴上标签,每件样品必须标记清除(包括品名、来源、数量、取样地点、取样人及取样日期)。 6)获取有关取样产品的信息:如样品名称、批量大小、包装类型、包装容器体积、生产线、产品编号或控制号、批量号、标签内容、包装破损状况、产品存放地点或建筑物的基本情况等。 7)当客户对所规定的取样程序有偏离、添加或删节的要求时,应详细记录这些要求和相关的取样资料,并记入包含检测结果的所有文件中,同时告知相关人员。 8)当取样作为检测一部分时,实验室应有程序记录与取样有关的资料和操作。这些纪录应包括所用的取样程序、取样人的识别、环境条件(如果相关)、必要时有抽样地点的图示或其他等效方法,如果合适,还应包括取样程序所依据的统计方法。 二、食品微生物学的取样点 食品微生物的取样计划中常包括以下取样点:原料、生产线(半成品、环境)、成品、库存样品、零售商店、批发市场、进口或出口口岸。 原料的取样包括食品生产所用的原始材料、添加剂、辅助材料及生产用水等。 生产线样品是指食品生产过程中不同加工环节所取的样品,包括半成品、加工台面、与被加工食品接触的仪器面以及操作器具等。对生产线样品的采集能够确定细菌污染的来源,可用于食品加工企业对产品加工过程卫生状况的了解和控制,同时能够用于特定产品生产环节关键控制点的确定和HACCP的验证工作。另外还可以配合生产加工,在生产前后或生产过程中对环境样品(如地面、墙壁、天花板以及空气等)取样进行检验,以检测加工环境的卫生状况。 库存样品的取样检验可以测定产品在保质期内微生物的变化情况,同时也可以间接对产品的保质期是否合理进行验证。 零售商店或批发市场的样品的检测结果,能够反映产品在流通过程中微生物的变化情况,能够对改进产品的加工工艺起到反馈作用。 进口或出口样品通常是按照进出口商所签订的合同进行取样和检测的。但要特别注意的事,进出口食品的微生物指标除满足进出口合同或信用证条款的要求外,还必须符合进口国的相关法律规定。 三、不同样品的取样方法 1、预包装食品 ①直接食用的小包装食品:尽可能取原包装,直到检验前不要开封,以防污染。 ②桶装或大容器包装的液体食品:取样前应摇动或用灭菌棒搅拌液体,尽量使其达到均质;装入灭菌容器的量不应超过其容量的四分之三,以便于检验前将样品摇匀;取完样品后,应用消毒的温度计插入液体内测量食品的温度,并作记录。尽可能不用水银温度计测量,以防温度计破碎后水银污染食品;如为非冷藏易腐食品,应迅速将所取样品冷却至0℃~4℃。 ③桶装或大容器包装的固体食品:每份样品应用灭菌取样器从几个不同部位采取,一起放入一个灭菌容器内;注意不要使样品过度潮湿,以防食品中固有的细菌增殖。 ④桶装或大容器包装的冷冻食品:对于大块冷冻食品,应从几个不同部位用灭菌工具取样,使样品具有充分的代表性;在将样品送达实验室前,要始终保持样品处于冷冻状态。样品一旦融化,不可使其再冻,保持冷却即可。 2、生产过程中的取样 划分检验批次,应注意同批产品质量的均一性;如用固定在贮液桶或流水作业线上的取样龙头取样时,应事先将龙头消毒;当用自动取样器取不需要冷却的粉状或固定食品时,必须履行相应的管理办法,保证产品的代表性不被人为地破坏。 3、液体样品 通常情况下,液态食品较容易获得代表性样品。液态食品(如牛奶、奶昔、糖浆)一般盛放在大罐中,取样时,可连续或间歇搅拌(可使用灭菌的长柄勺搅拌),对于较小的容器,可在取样前将液体上下颠倒,使其完全混匀。较大的样品(100ml~500ml)要放在已灭菌的容器中送往实验室。实验室在取样检测之前应将液体再彻底混匀一次。 对于牛奶、葡萄酒、植物油等,常采用虹吸法(或用长形吸管)按不同深度分层取样,并混匀。如样品粘稠或含有固体悬浮物或不均匀液体应充分搅匀后,方可取样。 4、固体样品 依所取样品材料的不同,所使用的工具也不同。固态样品常用的取样工具有灭菌的解剖刀、勺子、软木钻、锯子和钳子等。面粉或奶粉等易于混匀的食品,其成品质量均匀、稳定,可以抽取小样品(如100g)检测。但散装样品必须从多个点取大样,且每个样品都要单独处理,在检测前要彻底混匀,并从中取一份样品进行检测。 肉类、鱼类或类似的食品既要在表皮取样又要在深层取样。深层取样时要小心不要被表面污染。有些食品,如鲜肉或熟肉可用灭菌的解剖刀和钳子取样;冷冻食品可在未解冻的状态下可用锯子、木钻或电钻(一般斜角钻入)等获取深层样品;全蛋粉等粉末状样品取样时,可用灭菌的取样器斜角插入箱底,样品填满取样器后提出箱外,再用灭菌小勺从上、中、下部位取样。 5、表面取样 通过惰性载体可以将表面样品上的微生物转移到合适的培养基中进行微生物的检验,这种惰性载体既不能引起微生物死亡,也不应使其增殖。这样的载体包括清水、拭子、胶带等。取样后,要使微生物长期保存在载体上,既不死亡又不增殖十分困难,所以应尽早的将微生物转接到适当的培养基中。转移前耽误的时间越长,品质评价的可靠性就越差。 6、厌氧微生物检验用样品的采取 取样检测厌氧微生物时,很重要的一点是食品样品中不能含有游离氧。例如在肉的深层取少量样品后,要避免使之暴露在空气当中。如只能抽取小样品,或需使用棉拭子取样时,就要用一种合适的转接培养基(如Stuart运送培养基)来降低氧的浓度。例如,如使用藻酸盐羊毛拭子取样后,就不能再放入原来的试管,而应放在盛有Stuart运送培养基的瓶中。棉拭子使用前要先用强化的梭菌培养基浸湿。 7、水样的采取 采集水样应注意无菌操作,以防止杂菌混入。取水样时,最好选用带有防尘磨口瓶塞的广口瓶。对于用氯气处理过的水,取样前在每500ml的水样中加入2ml的1.5%的硫代硫酸钠溶液。 在取自来水时,水龙头嘴的里外都应擦干净。再用酒精灯灼烧水龙头灭菌,然后把水龙头完全打开,放水5min~10min后再将水龙头关小,采集水样。这样的取样方法能确保供水系统的细菌学分析的质量,但是如果检测的目的是用于追踪微生物的污染源,建议还应在龙头灭菌之前取水样或在龙头的里边和外边用棉拭子涂抹取样,以检测龙头自身污染的可能性。 从水库、池塘、井、河流等处取水样时,用无菌的器械或工具拿取瓶子和打开瓶塞。应先将无菌取样器浸入水下1cm~15cm处(井水则在水下50cm深处采样),然后掀起瓶塞采集水样。流动水区应分别采取靠岸边及水流中心的水。如果不具备适当的取样仪器或临时取样工具,只能用手操作,但取样时应特别小心,防止用手接触水样或取样瓶内部。 8、空气样品的采取 空气的取样方法,有直接沉降法和过滤法。 在检验空气中细菌含量的各种沉降法中,平皿法是最早的方法之一,到目前为止,这种方法在判断空气中浮游微生物分次自沉现象方面仍具有一定的意义。平皿法就是将琼脂平板或血液琼脂平板放在空气中暴露一定时间,然后37℃培养48h,计算所生长的菌落数。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务,对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位,都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务!也正因为此,北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系!

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2024.04.07

小鼠睾丸间质细胞的背景与应用及培养操作步骤!

                  小鼠睾丸间质细胞的背景与应用及培养操作步骤! 一、背景 小鼠睾丸间质细胞是睾丸中的一种支持细胞,位于生精小管之间。它们的主要功能是提供营养物质和支持生殖细胞的发育和成熟。 小鼠睾丸间质细胞在小鼠睾丸中占据了大约40%的体积,并通过其长长的突起与生精小管相连。它们通过分泌多种生长因子、激素和其他物质来调节生精小管内生殖细胞的发育和成熟。 小鼠睾丸间质细胞还具有多种其他功能,包括: 维持生精小管的结构:Sertoli细胞通过分泌胶原蛋白和其他基质分子来维持生精小管的结构和稳定性。 支持精子的发育和成熟:Sertoli细胞通过分泌多种营养物质和激素来支持精子的发育和成熟。 保护生殖细胞:Sertoli细胞可以分泌一些抗炎和抗氧化物质来保护生殖细胞免受氧化应激和其他有害因素的损伤。 二、小鼠睾丸间质细胞培养操作 1)复苏小鼠睾丸间质细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm皿中,加入约8 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。 2)小鼠睾丸间质细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,弃去消化液,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基,轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心4 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。 3)小鼠睾丸间质细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例; a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 小鼠睾丸间质细胞可以用于线粒体分裂及自噬在镉致小鼠睾丸间质细胞凋亡中的作用机制: 以镉为受试物,选择雄性小鼠、原代小鼠睾丸间质细胞和睾丸间质细胞系TM3细胞作为研究对象,探讨镉是否通过调控线粒体的融合与分裂以及线粒体自噬等途径诱导睾丸间质细胞凋亡,为全面了解镉的男性生殖毒性机制提供新的证据。 镉诱导雄性小鼠睾丸间质细胞凋亡与自噬抑制的研究目的:在动物水平探讨氯化镉(Cadmium chloride,CdCl2)处理对小鼠睾丸间质细胞毒性的潜在机制。 方法:根据随机数值表将20只4周龄雄性C57BL/6小鼠随机分成四组,每组5只,分别以0、0.5、1.0和2.0 mg/kg/day浓度的CdCl2连续28天暴露,构建染镉动物模型。通过HE染色、精子计数和精子畸形率检测评估镉暴露后睾丸毒性。采用ELISA法、免疫组织化学法分别测定镉暴露后血清睾酮含量以及小鼠睾丸间质细胞数量。采用免疫荧光结合TUNEL染色分析小鼠睾丸中睾丸间质细胞的凋亡情况。使用透射电子显微镜和免疫荧光分别观察小鼠睾丸间质细胞内自噬体和LC3的变化。 结果:镉暴露后,2.0 mg/kg镉处理组小鼠体重从第二周开始下降(P 结论:镉暴露破坏了小鼠睾丸组织结构,导致精子数量减少、精子畸形率增加、睾酮含量降低,产生生殖毒性。同时,镉暴露诱导睾丸间质细胞发生凋亡以及调节睾丸间质细胞内的自噬水平。镉诱导线粒体过度分裂致小鼠睾丸间质细胞凋亡的机制目的:第一部分的研究结果表明,在动物水平镉诱导了小鼠睾丸间质细胞凋亡。以TM3细胞(小鼠睾丸间质细胞的模式细胞系)为研究对象,通过观察线粒体形态变化、线粒体分裂和融合蛋白表达、线粒体功能以及线粒体依赖性凋亡相关蛋白表达等指标,探讨镉暴露对TM3细胞凋亡的影响及可能的机制。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!

操作维护

2024.04.03

微生物实验室常用培养箱的维护和保养操作要点!

                 微生物实验室常用培养箱的维护和保养操作要点! 数显恒温振荡培养箱维护和保养: 1、准确地使用和注重仪器的保养,使其处于良好的工作状态,可延长仪器的使用寿命。 2、仪器在连续工作期间,每三个月应做一次定期检查;检查保险丝,控制组件及紧固螺钉,及是否有水滴,污物等落入电机和控制元件上。 3、传动部分的轴承在出厂前已填充了适量的润滑脂(1号钙-纳基),仪器在连续工作期间,每六个月应加注一次润滑脂,填充量约占轴承空间的1/3。 4、仪器常常期使用,自然磨损属正常现象。仪器在使用一年之后,若发现电机、压缩机有不正常的噪音;传动部分轴承磨损,皮带松动或出现裂纹,电控元件失效等故障,本企业将继承提供优质服务,予以协助处理。 5、压缩机应避免连续起动。  数显生化培养箱维护和保养: 1、每日观察培养箱温度是否符合规定。发现异常情况及时请专业人员修理。 2、箱内照明异常时要及时更换照明灯具。 3、发现加热(制冷)异常时检查加热炉丝(压缩机)是否损坏,损坏后及时修复。 4、及时清洁培养箱外卫生,保持洁净无尘。每周应用消毒水对培养箱内胆彻底清洁一次。每季度更换不同品种的消毒水,以免产生耐药菌种。 5、每年应对此设备进行一次性能验证。 6、使用该设备前认真检查电源电压与仪器要求是否相符。 7、设备不使用时,置各控制开关处于非工作状态,切断电源。  数显光照培养箱的维护和保养: 1、培养箱外壳应可靠接地。 2、培养箱要放置在阴凉、干燥、通风良好、远离热源和日晒的地方。放置平稳,以防震动发生噪音。 3、为保证冷凝器有效地散热,冷凝器与墙壁之间距离应大于100mm,箱体侧面应有50mm间隙,箱体顶部至少应有300mm空间。 4、培养箱在搬运、维修、保养时,应避免碰撞,摇晃震动,最大倾斜度小于45度。 5、仪器忽然不工作,请检查熔丝管(箱后)是否烧坏,检查供电情况。 6、本培养箱制冷工作时,不宜使箱内温度与环境温度之差大于25度。 7、光照时间可由“可编程时控器"自行编程、控制时间。编程方法请参照“可编程时控器"使用说明。 水套式二氧化碳培养箱日常维护保养: 由于该类仪器经常与水和气体接触,气体内的杂质可能会进入气路管道,造成机器无法正常工作。日常工作中需要从以下几方面进行保养:经常检查水套的水位,假如水位低就要加水;定期检查二氧化碳气瓶,不能让二氧化碳气瓶用空;检查二氧化碳的供气管道和接口有无漏气现象;定期给机器除尘,防止灰尘阻塞气道及电磁阀。 留意事项: 1、初次使用一定要加充足的去离子水或蒸馏水,盖上密封盖,以减少水套内水的蒸发。 2、在供电不稳定的单位,最好为其配备高性能稳压电器,以减少因电压不稳导致的故障。 3、在二氧化碳钢瓶上安装一个低压0~0.25Mpa的二氧化碳减压阀,使输出气压较稳,这样 4、可避免使用中因输入箱内二氧化碳压力过高。使二氧化碳控制阀长期处于工作状态而损坏。 5、在通电不做培养的情况下,应将温度设定为00C,将二氧化碳浓底设定为“0”。 6、使它们的控制阀处于不工作状态,从而避免控制阀长期处于工作状态而损坏。 7、门的温度要设置的比箱内温度高10C左右,以降低存取物品时箱内温度的波动. 振荡培养箱的维护保养: 1、仪器在连续工作期间,每三个月应做一次定期检查;检查保险丝,控制组件及紧固螺钉,及是否有水滴,污物等落入电机和控制元件上。 2、传动部分的轴承在出厂前已填充了适量的润滑脂,仪器在连续工作期间,每六个月应加注一次润滑脂,填充量约占轴承空间的1/3。 3、压缩机应避免连续起动 4、仪器经常期使用,自然磨损属正常现象。仪器在使用一年之后,若发现电机、压缩机有不正常的噪音;传动部分轴承磨损,皮带松动或出现裂纹,电控元件失效等故障,本企业将继续提供优质服务,予以协助处理。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统,超低温冰箱,生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下,为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外,我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务,对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位,都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务!也正因为此,北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系!

操作维护

2024.04.03

小鼠角膜上皮细胞的复苏与传代及冻存操作说明!

                   小鼠角膜上皮细胞的复苏与传代及冻存操作说明! 细胞简介平台编号:Bio-129568规格:1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息:TKE2细胞名称:小鼠角膜上皮细胞TKE2产品规格:T25培养瓶x1;1.5ml冻存管x2细胞数量:1x10^6;1x10^6保存温度:37℃;-198℃运输方式:常温保温运输;干冰运输安全等级:1用途限制:仅供科研3类培养体系:DMEM高糖(不含丙酮酸钠)+10%FBS+1%三抗培养温度:37℃二氧化碳浓度:5%简介:小鼠角膜上皮细胞TKE2取自CD-1雌性小鼠,贴壁培养,不规则形态。注释:倍增时间36h用途:细胞系注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准) 细胞复苏操作说明(针对冻存细胞)实验仪器:超净工作台 ,CO2 培养箱 ,倒置显微镜 ,水浴锅 ,离心机实验试剂:DMEM 培养基 ,胎牛血清 ,三抗实验材料:T25 细胞培养瓶 ,需复苏的细胞 ,移液枪 ,枪头 ,离心管实验步骤:1、从液氮罐中取出冻存管 ,直接浸入 37℃温水中 ,并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管 ,打开盖子 ,移液枪吸出细胞悬液 ,加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀。3、操作离心 ,调至 1000 转/分 ,时长 10 分钟4、弃去上清液 ,重悬离心管底部细胞沉淀 ,在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基,计数 ,调整细胞密度,接种培养瓶 ,37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液,继续培养。6、注意:冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中 细胞传代操作说明(贴壁细胞)实验仪器:超净工作台 ,CO2 培养箱 ,倒置显微镜 ,离心机实验试剂:DMEM 培养基 ,胎牛血清 ,0.25%胰酶 ,三抗实验材料:T25 细胞培养瓶 ,需传代的细胞 ,移液枪 ,枪头 ,离心管实验步骤:1、细胞于培养箱中 ,愈合度达到 80% ,可进行传代。2、按 T25 培养瓶计 ,吸出完全培养基 ,并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍 ,添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ,消化 2min(具体时间视细胞而定),后用完全培养基将细胞冲洗下来。 1000r/min 离心 10 min ,弃上清收集细胞,铺至 2 个 T25 培养瓶中培养,各添加 7ml 完全培养基。3、注意:消化时间不易过长,消化前血清成分务必去除干净,终止消化请用新鲜完全培养基,原瓶培养基不可继续使用(终止消化或传代)。  细胞传代操作说明(悬浮细胞)实验仪器:超净工作台 ,CO2 培养箱,倒置显微镜 ,离心机实验试剂:DMEM 培养基 ,胎牛血清 ,三抗实验材料:T25 细胞培养瓶,需传代的细胞,移液枪 ,枪头,离心管实验步骤:1、细胞于培养箱中,密度达到悬浮细胞传代标准(沉降后可铺满底面),可进行传代。2、按 T25 培养瓶计,吹打均匀,吸出完全培养基,1000r/min 离心 10 min,弃上清收集细胞,铺至 2 个T25 培养瓶中培养,各添加 7ml 完全培养基。3、注意:原瓶培养基不可继续使用(传代)。 细胞冻存操作说明实验仪器:超净工作台 ,CO2 培养箱 ,倒置显微镜 ,离心机实验试剂:DMEM 培养基 ,胎牛血清 ,0.25%胰酶 ,三抗 ,DMSO实验材料:T25 细胞培养瓶 ,需冻存的细胞 ,移液枪 ,枪头 ,离心管 ,冻存管 ,记号笔实验步骤:1、取待冻存的细胞(按 T25 计 )用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ,用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ,弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞,则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ,转放-20℃ 1.5~2 h ,再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ,并登记。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!

参数原理

2024.04.03

法氏假丝酵母的菌株培养与实验内容及保存方法!

                 法氏假丝酵母的菌株培养与实验内容及保存方法! 法氏假丝酵母是Candida属的微生物,原产地为中国。主要用途为研究;教学。 一、菌种简介平台编号:Bio-101870规格:冻干物拉丁属名:Candida Famata菌株名称:法氏假丝酵母收藏时间:1993/7/20原始编号:福建3-4资源归类编码:15151111103模式菌株:非模式菌株主要用途:研究;教学特征特性:非模式菌株。细胞圆形,椭圆形,多极芽殖;发酵葡萄糖,脲酶阴性,DBB反应阴性。在SDA上培养2d后涂片镜检,呈革兰阳性,但着色不均,菌体呈卵原形(2.5~4μm),薄壁。致病菌芯片研发中所选用的试验用菌种。生物危害程度:四类致病对象:无培养基编号:13培养温度:25-28℃注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准) 二、形态特征法氏假丝酵母,也被称为无名假丝酵母。属于隐球酵母科隐球酵母亚科假丝酵母属,可形成假菌丝、有隔的菌丝茁芽和厚垣孢子。假菌丝发达,呼吸作用氧化性或兼有发酵力。细胞圆形、卵形或长形。无性生殖为多边芽殖,形成假菌丝,也有真菌丝。  三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 六、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 七、保存方法1、传代保存法:培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法:该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法:①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法:①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 欢迎访问微生物菌种查询网,本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司,单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务!与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!

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2024.04.03

人胚肾上皮包装细胞的培养操作规程及其应用!

                   人胚肾上皮包装细胞的培养操作规程及其应用! 一、背景 人胚肾上皮包装细胞是在293细胞株上插入免疫缺陷病毒SV40 T-抗原基因后产生的高转染效率衍生株,广泛用于包装慢病毒,其转染效率比293细胞高很多,是研究基因功能的一个强大工具。 二、人胚肾上皮包装细胞培养操作规程 1、人胚肾上皮包装细胞培养基及培养冻存条件准备: 1)准备DMEM培养基(DMEM,GIBCO,货号11965-092),90%;胎牛血清,10%。 2)人胚肾上皮包装细胞培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)人胚肾上皮包装细胞冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。 2、人胚肾上皮包装细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)人胚肾上皮包装细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于贴壁细胞,传代可参考以下方法: 1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。 3.轻轻吹打后吸出,移入15ml离心管中,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养液后吹匀。 4.移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。 3)人胚肾上皮包装细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行,最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心,用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中。 三、应用 人胚肾上皮包装细胞可以用于NF-κB转录因子报告基因系统的构建优化及在筛选促TRAIL抗肿瘤药物中的应用: 从抑制TRAIL激活的促存活信号通路NF-κB角度着手,尝试增强TRAIL抗肿瘤的活性。 分为以下四个部分: 1)NF-κB转录因子报告基因系统的构建及优化; 2)利用该系统筛选能下调NF-κB表达量或抑制NF-κB活性的中药成分; 3)将2)中筛选出的中药成分与TRAIL联用,检测其对A549、COLO205等肿瘤细胞的杀伤效果; 4)对3)中中药成分促进TRAIL抗肿瘤活性机制进行初步探索。 研究方法与结果: 1、稳定表达NF-κB转录因子荧光素酶报告基因系统的构建及验证。 利用分子克隆的酶切、连接等基本操作,先将逆转录病毒载体pQCXIP原有的CMV启动子去除,再分别插入NF-κB增强子序列以及荧光素酶NanoLuc(NLuc)报告基因序列,构建了受转录因子NF-κB调控的荧光素酶NLuc报告基因表达载体pQCXIP-NF-κB-NLuc。将构建的pQCXIP-NF-κB-NLuc质粒与病毒包装质粒pVSVG一起用阳离子脂质体法转染人胚肾上皮包装细胞GP2-293细胞系制备相应的逆转录病毒,侵染人宫颈癌细胞系HeLa,通过嘌呤霉素筛选出表达相应抗性基因的阳性细胞,并进一步筛选出对NF-κB通路阳性刺激物TNFα最敏感的细胞克隆。该细胞株对TNFα的刺激呈现出浓度梯度、时间依赖性,表明受NF-κB转录因子调控的稳定表达NLuc荧光素酶的细胞系PP-NF-κB-NLuc-HeLa构建成功,可用于定量检测NF-κB的活化效果及筛选与NF-κB活化调控相关的药物等。 2、优化构建的荧光素酶报告基因系统检测方式。 在上述构建好的荧光素酶报告基因系统的应用过程中发现培养基的pH、培养基中的血清对NLuc荧光素酶的检测有影响,对于后续药物调控功能的检测存在不利影响,因此在初步确定了pH及血清的原因后,选取了NLuc荧光素酶发光强度较强及相对稳定的添加0.03%(V/V)Triton X-100的PBS缓冲液(PBST)作为Nluc酶的检测体系。 3、筛选下调NF-κB的中药成分。在成功完成了系统的构建及NLuc荧光素酶的检测体系优化后,利用该系统对36种中药粗提物或单体进行了检测,并初步筛选出了12种能降低NF-κB活性或下调NF-κB表达量的中药粗提物或单体,在排除了有强细胞毒性的、有相关与TRAIL联用抗肿瘤报道的、促肿瘤增殖的成分等之后,最终选取了QD6-4、SKN两种中药单体进一步研究其与TRAIL的联用的效果。 4、筛选到的中药单体与TRAIL联用对肿瘤的杀伤检测。细胞活力检测实验结果表明,两种单体分别与TRAIL联用作用于人肺癌细胞系A549及结直肠癌细胞系COLO205细胞后,QD6-4对这两个细胞系几乎无任何促进TRAIL抗肿瘤活性的作用,SKN对COLO205几乎无作用,但能显著增强TRAIL对A549的杀伤,且在SKN使用浓度为2-8μM时有协同效果。进一步的实验结果表明,SKN对人结直肠癌细胞系HCT116、人宫颈癌细胞系HeLa、人胰腺癌细胞系PANC-1细胞系也均表现出了促进TRAIL杀伤的效果,其中在使用浓度为2-8μM时对HeLa和PANC-1细胞的杀伤作用均表现出了协同效果,且对PANC-1细胞系的协同效果尤为明显。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!

应用实例

2024.04.03

收藏!真空包装食品菌落总数超标的危害与应对

                   收藏!真空包装食品菌落总数超标的危害与应对 百欧博伟生物:在食品工业中,真空包装技术被广泛应用,因为它能有效地延长食品的保质期。然而,近期的一项抽检报告却给我们敲响了警钟:部分真空包装食品的菌落总数超标,这无疑对消费者的健康构成了威胁。 菌落总数是评价食品卫生质量的重要指标之一,它反映了食品在生产、加工、储存过程中的卫生状况。菌落总数超标,意味着食品中细菌含量过多,可能引发食物中毒、腹泻等症状,对消费者的健康造成潜在威胁。 真空包装食品的菌落总数超标,主要原因可能包括以下几个方面: 一是生产过程中卫生控制不严格,如设备清洁不彻底、操作人员卫生意识差等; 二是包装环节未能完全隔绝外部环境,导致细菌侵入; 三是储存、运输过程中温度控制不当,加速了细菌繁殖。 面对这一问题,食品企业应采取以下措施: 1、严格控制生产过程的卫生条件:定期使用奥克-泰士消毒剂对生产设备进行彻底清洁和消毒,确保操作人员具备高度的卫生意识,严格执行手部清洁和消毒程序。 2、加强包装环节的质量控制:采用具备良好阻隔性能的包装材料,并在包装过程中确保密封性,以减少外部环境对食品的影响。 3、强化储存和运输环节的温度管理:建立严格的温度监控体系,确保食品在整个储存和运输过程中处于规定的温度范围内,防止因温度不当而引起的细菌繁殖。 4、建立完善的食品安全追溯体系:一旦发现食品质量问题,企业应能迅速追溯到问题源头,及时采取纠正措施,防止问题扩大。 5、加强与监管部门的沟通与合作:积极配合监管部门的抽检工作,及时了解食品安全标准和法规的更新动态,确保企业的生产和经营符合法律法规的要求。 6、创新技术和工艺:积极引进和研发新的技术和工艺,提高生产效率和产品质量,减少生产过程中的污染和细菌滋生。 7、加强员工培训和教育:定期对员工进行食品安全和卫生知识的培训和教育,提高员工的食品安全意识和操作技能。 综上所述,面对真空包装食品菌落总数超标的问题,食品企业应从多个方面入手,全面提升食品质量和安全水平。这不仅是企业社会责任的体现,更是对消费者健康和信任的尊重。让我们共同期待一个更加安全、健康的食品环境。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统,超低温冰箱,生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下,为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外,我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务,对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位,都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务!也正因为此,北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系!

应用实例

2024.04.03

微生物新菌种的采样与增殖及纯化与性能鉴定!

                   微生物新菌种的采样与增殖及纯化与性能鉴定! 百欧博伟生物:新的微生物菌种需要从自然生态环境中混杂的微生物群中挑选出来,因此必须要有快速而准确的新种分离和筛选方法。分离微生物新种的具体过程大体可分为采样、增殖、纯化和性能测定等步骤。 1、采样 根据筛选的目的、微生物分布情况、菌种的主要特征及其生态关系等因素,确定具体的时间、环境和目标物进行采样。 土壤是微生物的大本营,菜园和耕作层土壤是有机质较多的土层,常以细菌和放线菌为主;果园树根土层中,酵母菌含量较高;动植物残体及霉腐土层中,分布着较多的霉菌。此外,豆科植物根系土中,往往存在根瘤菌;河流湖泊的淤泥中能分离到产甲烷菌;油田和炼油厂周围土层中常见分解石油的微生物等。季节、表面的植被、温湿、通风情况、养分、水分、酸碱度和光照等都会影响土壤中的微生物分布,故在采土样时应予以重视。采土样地点选好后,用小铲子去除表土,取离地面5~15cm处的土样几克,盛于预先灭菌的牛皮纸袋中扎紧,并标明时间、地点和环境等情况,以备查考。 各种水体也是工业微生物菌种的重要来源,许多具有光合作用能力的微生物及兼性或专性厌氧微生物都能从各种水体中筛选得到。 2、增殖 一般采用增殖培养(又称富集培养)的方法,以投其所好和取其所抗的原则在培养基中添加特殊的养分或抗菌物质,使所需菌种的数量相对增加。其实质是使天然样品中的劣势菌转变为人工环境中的优势菌,便于将它们从样品中分离。 3、纯化 增殖培养得到的微生物培养物仍是一个各类微生物的混合体。为了获得某一特定的微生物菌种,必须进行微生物的纯化即纯培养。 常用的菌种纯化方法很多,大体可分为两个层次,一个层次较粗放,一般只能达到“菌落纯”的水平,从“种”的水平来说是纯的,其方法有划线分离法,涂布分离法和稀释分离法。 ①划线分离法,简便而快速,即用接种针挑取微生物样品在固体培养基表面划线,适当条件下培养后,获得单菌落。 ②涂布分离法,与划线法类似,用涂布棒蘸取培养液,或先将少量培养液滴在固体培养基表面,再用涂布棒在固体培养基表面均匀涂布。 ③稀释分离法所获得的单菌落更加分散均匀,获得纯种的概率较大。该法是将降至60℃左右的固体培养基与少量培养液(事先在培养液中加入无菌的玻璃珠搅拌打散细胞团,再经过滤处理,效果更佳。混匀后,再浇注成平板以获取单菌落。 另一层次是较为精细的单细胞或单孢子分离法,它可达到细胞纯即“菌株纯”的水平。这种方法的具体操作的方法很多,最简便的方法是利用培养皿或凹玻片等分离小室进行细胞分离。也可以利用复杂的显微操作装置进行单细胞挑取。如果遇到不长孢子的丝状菌,则可用无菌小刀切取菌落边缘稀疏的菌丝尖端进行分离移植,也可用无菌毛细管插入菌丝尖端,以获取单细胞。在具体的工作中,具体方法,应视微生物的实际情况和实验条件而定。 为了提高分离筛选工作的效率,除增殖培养时,应控制增殖条件外,在纯种分离时,也应控制适宜的培养条件,并选用特异的检出方法和筛选方案。 4、性能鉴定 菌种性能测定包括菌株的毒性试验和生产性能测定。若毒性大而且无法排除者应予以淘汰。尽管在菌种纯化中能获得大量的目标菌株,它们都具备一些共性,但只有经过进一步生产性能测定,才能确定哪些菌株更符合生产要求。 直接从自然界分离得到的菌株为野生型菌株。事实上,从自然界直接获得的野生型菌种往往低产甚至不产所需的产物,只有经过进一步的人工改造才能真正用于工业发酵生产。所以,我们常将这些自然界中直接获得的新菌株称为进一步育种工作的原始菌株或出发菌株。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务,对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位,都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务!也正因为此,北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系!

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2024.04.03

蜡样芽胞杆菌的培养方法及单层冻干管打管说明!

                   蜡样芽胞杆菌的培养方法及单层冻干管打管说明! 蜡状芽胞杆菌,菌落乳白色,圆形扁平,表面稍干燥,边缘不规则。菌体长杆状,1.8×4.0μm,孢囊微膨大,芽孢中生。具有处理养殖废水潜力。 一、菌种简介平台编号:Bio-61472提供形式:冻干物拉丁属名:Bacillus Cereus中文名称:蜡样芽胞杆菌拉丁名称:Bacillus cereus其他编号:ATCC14579来源历史:←天津科技大学(11292)收藏时间:2008/11/5原始编号:F4.5原产国:中国资源归类编码:15131311101模式菌株:非模式菌株主要用途:研究特征特性:革兰氏阳性菌,芽胞为椭圆形,孢囊不膨大,芽胞中生,不形成伴孢晶体,菌落为乳白色,粗糙,有皱折,圆形,波状,干燥,台状,不透明。产淀粉酶,酶活364 U。具体用途:产淀粉酶生物危害程度:四类培养基编号:CM0002培养基名称:营养肉汁琼脂培养基成分:蛋白胨 5.0g,牛肉浸取物 3.0g,NaCl 5.0g,琼脂 15.0g,蒸馏水 1.0L,pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O,则有利于产生芽孢。培养温度:37℃培养时间:18-24 小时需氧类型:好氧保存方法:真空冷冻干燥法共享方式:公益性共享;资源纯交易性共享;合作研究共享;资源交换性共享用途:研究;产淀粉酶注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准) 二、培养基*营养琼脂培养基(NA)*胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSA)*LB 培养基 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存;西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。  四、注意事项1)冻干首次活化,干粉要全部用完,不能预留,用 0.1-0.2ml 的培养液或无菌水溶解,接种在 2 个斜面上,因冻干粉处于休眠状态,请勿接种多支斜面或平板,以避免因接种量不足而导致复苏不成功;如有不明白之处,请务必先咨询我单位技术人员,避免不必要的损失;2)微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方,室温放置时间过长会导致菌种衰退;3)菌种操作应在无菌条件下进行;转种完毕,应经灭菌再做丢弃处理;4)应根据菌种状况及时转接,冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年5)菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和微生物菌种查询网联系。 五、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封:2、注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的,开启后必须一次使用完,不能留菌粉下次使用;另外,安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂,里面菌体为少数,复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上,否则可能造成复苏不成功;3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态,有时延滞期较长,如在说明书建议的培养时间还未长起来,请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间,直至菌种培养完成;有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长,一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏(特殊除外)。5、冻干管打开后需一次用完,不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!

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2024.04.03

ATCC BAA-664肠炎沙门氏菌肠炎亚种的生产工艺!

                 ATCC BAA-664肠炎沙门氏菌肠炎亚种的生产工艺! 一、菌种简介平台编号:Bio-136830规格:甘油/培养物拉丁属名:Salmonella Enterica Subsp.Enterica菌株名称:肠炎沙门氏菌肠炎亚种其他编号:ATCC BAA-664培养基:蛋白胨:10.0,牛肉粉:3.0,氯化钠:5.0,琼脂:15.0,pH值:7.3±0.1(25℃)传代方法:①准备上述平板2块;②安瓿管表面消毒后在安全柜中打开,用酒精灯灼烧顶部,后迅速滴上无菌水使之破裂,随后用镊子将其敲碎;③吸取0.5mL无菌水打入冻干管,充分溶解菌粉后,打入2块平板,200μL/个,涂布均匀;④将平板置于上述培养条件下培养,菌种长出即可使用。生长条件:37℃;18-24h;好氧培养时间:24-48 小时存储条件:2-8℃安全等级:2形态特征:菌落直径为2-4mm,圆形,边缘不整齐,不透明,正面黄色,颜色较浅,中间凸起,表面光滑,表面明亮,质地湿润,易挑起,G-(红),杆菌,纯度:纯分离基物:Maine, United States模式菌株:no应用领域:该菌株的 DNA 被 Pulsenet 系统中的实验室用作细菌病原体的脉冲场凝胶电泳 (PFGE) 分析的分子大小标准。 用途:研究注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准) 二、培养基* LB 培养基 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请放-20°C 保存。甘油请置于-80°C。  四、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,酿酒酵母菌组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。(2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。(3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 五、注意事项1)准备 1 支含有 5-10ml 的液体培养基的试管和 2 个平板;生物安全柜打开,用酒精灯灼烧顶部,后迅速滴上无菌水使之破裂,随后用镊子使其敲碎;吸取 0.5ml 液体培养基打入冻干管,充分溶解后重新打回液体试管中,混匀;吸取 0.2ml 菌悬液打入平板中,涂布均匀重复获得两个平板;将液体试管和平板全部置于要求的培养条件下培养。2)经过冷冻干燥保藏,菌种处于休眠状态,复苏培养时可能会延迟生长,这时需较长的培养时间; 若您收到的是已复苏的培养物(非冻干菌),则可以直接用于您的实验,或根据需要转接培养如有不明白之处,请务必先咨询我单位技术人员,避免不必要的损失;3)微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方,室温放置时间过长会导致菌种衰退;4)菌种操作应在无菌条件下进行;转种完毕,应经灭菌再做丢弃处理;5)应根据菌种状况及时转接,冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年;6)菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或者不活等情况,请在收到菌种后2 个月内联系,逾期不予受理;7)打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。8)安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍,并保持在火焰旁操作。9)甘油管使用:使用本甘油菌时可以不用完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用,但随着冻融次数的增加,细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网,本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司,单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务!与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!

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2024.04.03

人主动脉瓣膜间质细胞永生化的运输和保存及使用!

                 人主动脉瓣膜间质细胞永生化的运输和保存及使用! 一、细胞简介平台编号:Bio-116486规格:1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息:永生化细胞细胞名称:人主动脉瓣膜间质细胞永生化用途:(免疫荧光鉴定)注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准) 二、细胞详述主动脉瓣施半月瓣,位于左心室和主动脉之间,抑制射入主动脉的血液回流入左心室。主动脉瓣钙化可引起主动脉瓣狭窄关闭不全等,施导致老年退行性心瓣膜病的重要病理改变,其发病率随着年龄的增加而升高。有研究表明,瓣膜间质细胞向城固细胞样细胞表型转化有可能是主动脉瓣膜钙化的病理改变基础之一。该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。 三、细胞特性1)组织来源于人的正常主动脉组织。2)细胞鉴定:平滑肌肌动蛋白(α-SMA)或波形蛋白(Vimentin)免疫荧光染色为阳性。  3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式:长梭形、不规则细胞,贴壁培养。 四、推荐培养基我们推荐使用原代间质细胞培养体系作为体外培养原代主动脉瓣膜间质细胞的培养基。名称 体积 浓度 保存条件 原代间质细胞基础培养基 500ml 1× 4℃、避光 原代间质细胞培养添加剂 5ml 100× -20℃、避光 胎牛血清(FBS) 50ml 终浓度10% -20℃、避光 双抗(青霉素/链霉素,P/S) 5ml 100× -20℃、避光  五、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 六、产品使用          (1)本产品仅能用于科研(2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核(3)本产品未通过用于活体诊断的审核 七、注意事项1、收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100*,200*各一张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响,故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态,故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明,期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。5、客户在细胞培养过程中,有任何技术问题可以拨打技术售后服务我们随时给予解答。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!

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2024.04.03

微生物基础知识之微生物实验室的安全防护!

                    微生物基础知识之微生物实验室的安全防护! 1、培训与告之 实验室管理人员及实验人员必须了解相关工作有关的危险。对招收新职工、工作开始发生变化或使用新方法,启用新的设备时,这点尤为重要。所有工作人员,包括清洁和服务人员都要知道。需要进行口头和书面两种方式的通知。有关仪器必须要有字迹清楚其安全使用的书面说明。 2、标志 在进行致病性微生物工作的房间人口处必须要有警示标志。 实验室的房间必须以使与微生物有关的危险得以过免的方式装置,以使微生物的传播得到限制,房间还应便于清洁和消除污染.工作台必须由光滑的、耐消毒剂的材料制成。难以清洁的角落、弯头及管道应尽可能地避免污染。 3、防止空气污染 加热培养蒙或其它化学物质时,粉尘可扩做到空气中.这可给工作人员带来过敏反应或出现其它问题.因此,设计排风装置很重要,以至包括天平附近的抽风点。通常称量应按正确的安全规程进行。 4、有毒有害物防护 浓酸和碱及其它腐蚀性化学物质和毒性物质必须专门保存,尽可能锁存,以使它们引起的损害减至最低。 对实验室所用的所有化学物质,实验室必须有记述其危险及操作中可能的限制的产品表。 在所需的范围内工作人员必须使用人体防护装置,防护服、手套筹.使用安全设施是实验人员的职责污染了的防护员应尽快地更换,离开工作室时,必须脱去。 5、消除污染和废物的处理 实验室必须要有关于应如何消除溅出的微生物污染的书面说明。另外,对废物的处理,如用过的培养皿和打碎的玻璃器皿,应有固定的程序。所有被洗的物品在洗刷前均经高压灭菌,洗涤工受微生物感染的危险就可以尽可能避免。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统,超低温冰箱,生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下,为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外,我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务,对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位,都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务!也正因为此,北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系!

操作维护

2024.04.02

高压灭菌操作中常见错误的分析及解决方案!

                   高压灭菌操作中常见错误的分析及解决方案! 百欧博伟生物:高压蒸汽灭菌锅是微生物实验中必不可少的设备,在操作过程中常常会遇到灭菌失败的情况,或是灭菌锅内样品不能全部有效灭菌。今天就为大家介绍一下高压蒸汽灭菌锅在使用过程中的几点注意事项,希望能帮助大家做到有效灭菌。 一、热传递时间延迟 对于高压蒸汽灭菌锅来说,装载的物品数量越多,到达121℃的时间也越长,灭菌时间不够,导致灭菌不良。即热量传递会有时间延迟,高压蒸汽灭菌锅显示的温度为高压蒸汽灭菌锅腔体内温度,但锅内装载物品的达到设定温度要有一段时间的延迟,这样即会导致灭菌样品的有效灭菌时间不够。 因此,建议高压蒸汽灭菌锅内装载物品最多不超过锅容积的75%,如果装载量大的话要适当加长灭菌时间,大量液体灭菌时也需加大灭菌时间。 二、灭菌物品大小适宜、布局合理 为了达到灭菌的目的,锅内待灭菌物品应不要太紧太满,以利于蒸汽流通。体积过大蒸汽就不易穿透物品。最下层物品摆放尽量稀疏,因下层蒸汽量相对少,分压不够,往往造成灭菌不完全。因此摆放时注意上下交错叠放,使留有较多空隙,利于蒸汽穿透。如需要对较小物品灭菌时,应事先装在容器中,所选容器也应尽量小且浅,且有通气孔,若用过大、过深及不带孔的容器,蒸汽不易穿透。同时灭菌物品应尽量垂直放不要平放,切勿挤压。 三、灭必须充分排除冷空气 1、取出灭菌物,检查包装完整性; 2、指示带或化学指示卡是否能达到灭菌要求; 3、取出的灭菌物掉在地上、放错地方、沾水的,湿包视为受污染; 4、登记灭菌器使用记录表。 四、灭菌物卸载及检查 1、取出灭菌物,检查包装完整性; 2、指示带或化学指示卡是否能达到灭菌要求; 3、取出的灭菌物掉在地上、放错地方、沾水的,湿包视为受污染; 4、登记灭菌器使用记录表。 五、灭菌物登记 1、无菌物品应该和非无菌物品区分开来,分别放置,避免混淆; 2、各种消毒标记明确、完整、必须有名称、有效日期、责任人、核对者;标记不清、记录不全,均不得发放; 3、经高压灭菌后,无菌物品在传递过程中应保持清洁、干燥、无污染,消毒室车子(分为灭菌物品车、清洁物品车)每天用消毒液擦拭,并有标志。 六、无菌物品的存储 1、无菌室通风干燥,应向外排风。 2、按要求进行无菌室内环境、柜子、存放架的清洁及消毒; 3、进入无菌室应由相对固定专职人员,入室前要洗手、戴口罩、换鞋,严格无菌操作规程,其他人员不得入内。 4、无菌物品摆放: A.与天花板的距离≥50cm,便于空气流通,远离出风口及消防喷头; B.与地面距离≥20cm,降低灰尘污染,易于清洁; C.与墙距离≥5cm,避免靠近墙体滋生细菌; 5、无菌物品应分类放置,严格定位、标记清楚,按灭菌日期先后顺序使用; 6、每日巡检无菌包的灭菌日期及保存情况,过期或者受潮要重新包装灭菌。 七、无无菌物品发放 1、核对物品名称与实物是否相符; 2、标签有效期是否与实物包装材料相符; 3、双人核对后发放; 4、无菌物品一旦发出,严禁原路径返回。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统,超低温冰箱,生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下,为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外,我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务,对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位,都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务!也正因为此,北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系!

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2024.04.02

苍白空气芽胞杆菌——产耐温半乳甘露聚糖酶

                   苍白空气芽胞杆菌——产耐温半乳甘露聚糖酶 苍白空气芽胞杆菌是Aeribacillus属的微生物,原产地为中国。主要用于研究;生产;产耐温半乳甘露聚糖酶。 一、菌种简介平台编号:Bio-56494提供形式:冻干物拉丁属名:Aeribacillus Pallidus中文名称:苍白空气芽胞杆菌拉丁名称:Aeribacillus pallidus来源历史:←天津工业微生物研究所筛选收藏时间:1979-00-00原始编号:2008/2/3资源归类编码:15131311000模式菌株:非模式菌株主要用途:研究;生产特征特性:G+,菌体杆状,两端圆滑,单个或短链状排列,芽胞膨大,次级端生,无荚膜。菌落圆形,表面光滑,边缘薄,基本整齐,淡黄色。培养液混浊,无沉落物,无气味。发酵果糖、木糖、甘露糖和糊精。明胶液化,不产色素。V.P阳性,M.R.阴性,水解淀粉,不产H2S,牛奶反应微弱胨化,利用硝酸盐,好氧,温度生长范围45~65℃。具体用途:产耐温半乳甘露聚糖酶。生物危害程度:四类培养基编号:CM0002培养基名称:营养肉汁琼脂培养基成分:蛋白胨 5.0g,牛肉浸取物 3.0g,NaCl 5.0g,琼脂 15.0g,蒸馏水 1.0L,pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O,则有利于产生芽孢。培养温度:60℃需氧类型:好氧分离基物:长角羚动物粪便保存方法:真空冷冻干燥法共享方式:公益性共享;资源纯交易性共享;合作研究共享;资源交换性共享用途:研究;生产;产耐温半乳甘露聚糖酶。注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准) 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油请置于-80℃ 三、培养条件1、培养基编号:营养肉汁琼脂2、培养基成分:蛋白胨 5.0g,牛肉浸取物 3.0g,NaCl 5.0g,琼脂 15.0g,蒸馏水 1.0L,pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入 5mg MnSO4・H2O,则有利于产生芽孢。推荐使用商品化成品培养基。3、需氧类型:好氧4、培养温度:60℃ 四、注意事项1、菌种常规培养时间:细菌 1-2 天,酵母 3 天,霉菌 5-7 天,大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接,不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养,如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失,我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作,带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 五、打管说明书1、安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒,将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热;立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位,使管壁破裂;再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养:用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀,可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态,延迟期较长,需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏(特殊除外)。6、冻干管打开后需一次用完,不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行,用完冻干管应灭菌处理后丢弃。9、如若有菌种复苏不活或者污染等情况,请在收到后 2 个月内联系,逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网,本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司,单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务!与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!

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2024.04.02

弯曲假单胞菌的菌株培养与保存方法及打管说明!

                   弯曲假单胞菌的菌株培养与保存方法及打管说明! 弯曲假单胞菌是Pseudomonas属的微生物,原产地为中国。稍弯曲杆状,G-,需氧,异养。主要用途为分类;研究;教学。  一、菌种简介平台编号:Bio-18616提供形式:冻干物英文名称:Pseudomonas flectens中文名称:弯曲假单胞菌属名:Pseudomonas种名加词:flectens其它保藏中心编号:= 1.48来源历史:←中国微生物菌种查询网←中国科学院微生物所收藏时间:2004-10-20资源归类编码:15131134101模式菌株:非模式菌株主要用途:a:1:{i:0;s:4:研究;}生物危害程度:四类致病对象:无培养基编号1:0002资源保藏类型:a:1:{i:0;s:6:培养物;}保存方法:a:2:{i:0;s:14:真空冷冻干燥法;i:1;s:8:矿物油法;}共享方式:a:4:{i:0;s:10:公益性共享;i:1;s:16:资源纯交易性共享;i:2;s:12:合作研究共享;i:3;s:14:资源交换性共享;}注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准) 二、菌种的培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 三、培养及打管说明1、安瓿瓶开封:用浸过75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、菌株恢复培养:用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基,滴入安瓿管内,轻轻振荡,使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液,移植于1-2支建议的培养基试管中,并在建议的条件下培养。3、注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在6-10℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,需要连续两次继代培养才能正常生长4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。 四、保存方法1、传代保存法:培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法:该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法:①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法:①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!

参数原理

2024.04.02

TSCCA人舌鳞癌贴壁细胞系的培养操作及应用!

                  TSCCA人舌鳞癌贴壁细胞系的培养操作及应用! 一、背景 TSCCA人舌鳞癌贴壁细胞系是由湖北医科大学口腔医学院建立,细胞常规培养在RPMI+15%小牛血清的培养液中。TSCCa细胞系是被HELA污染的细胞系。 二、TSCCA人舌鳞癌贴壁细胞系培养操作 1)复苏TSCCA人舌鳞癌贴壁细胞系细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。 2)TSCCA人舌鳞癌贴壁细胞系细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3)TSCCA人舌鳞癌贴壁细胞系细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。 下面T25瓶为类; 1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。 2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识。 3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 TSCCA人舌鳞癌贴壁细胞系可以用于转染IL-18基因联合二萜生物碱对舌鳞癌细胞Tscca的增殖抑制与促凋亡作用: 构建白介素-18(IL-18)真核表达载体,通过转染技术将IL-18基因转染入TSCCA人舌鳞癌贴壁细胞系,同时分别加入不同浓度的二萜生物碱(DA),分别采用流式细胞术、MTT实验检测细胞凋亡与增殖抑制情况,最后通过检测Akt/p-Akt通路探究IL-18联合二萜生物碱对TSCCA人舌鳞癌贴壁细胞系可能凋亡机制。 方法: 1、根据Gen Bank中IL-18 DNA序列,设计并合成IL-18基因特异性引物; 2、提取人新鲜血液中单个核淋巴细胞(PBMC),提PBMC的总RNA,RT-PCR方法获得其c DNA,PCR扩增目的片段,构建PEGFPN3-IL-18真核表达质粒,经酶切和测序均鉴定正确后瞬时转染TSCCA人舌鳞癌贴壁细胞系细胞,荧光显微镜下观察质粒的转染效率; 3、DMSO溶解二萜生物碱,调整其浓度为0.2 mg/ml、0.4 mg/ml、0.6 mg/ml;4、MTT法及流式细胞术检测空白对照组(未处理Tscca细胞)、IL-18组(仅转染IL-18)、单独二萜生物碱组(分为0.2 mg/ml、0.4 mg/ml、0.6 mg/ml 3组)及联合组(分为IL-18+0.2 mg/ml、IL-18+0.4 mg/ml、IL-18+0.6 mg/ml 3组)对TSCCA人舌鳞癌贴壁细胞系生长的影响与细胞凋亡情况;5、Western blot实验检测各组细胞信号调节激酶Akt/p-Akt的蛋白水平,分析IL-18联合二萜生物碱是否在此条通路发挥一定作用从而抑制TSCCA人舌鳞癌贴壁细胞系的增殖。 结果: 1、成功构建PEGFPN3-IL-18真核表达质粒; 2、成功转染舌鳞癌细胞,且荧光镜下观察转染PEGFPN3-IL-18真核表达质粒的TSCCA人舌鳞癌贴壁细胞系细胞较未转染细胞凋亡增加; 3、二萜生物碱浓度为0.2、0.4、0.6 mg/ml时,随浓度增大TSCCA人舌鳞癌贴壁细胞系细胞凋亡增多,且均有p 4、IL-18与二萜生物碱联合对Tscca细胞作用48 h后,较单独使用二萜生物碱抑制作用明显,且呈浓度依赖性,均有p 结论: 1、二萜生物碱对TSCCA人舌鳞癌贴壁细胞系细胞有增殖抑制及促凋亡作用,且呈浓度依赖性; 2、IL-18联合二萜生物碱对TSCCA人舌鳞癌贴壁细胞系有协同抑制作用,且抑制作用较单独使用IL-18或二萜生物碱均较强; 3、IL-18联合二萜生物碱在抑制p-Akt的表达及活化这条信号通路上发挥一定作用从而抑制TSCCA人舌鳞癌贴壁细胞系的增殖并促进其凋亡。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!

应用实例

2024.04.02

洁净室微生物监测容易忽视的问题及解决方案!

                  洁净室微生物监测容易忽视的问题及解决方案!百欧博伟生物:目前国内各制药企业环境监测中微生物的监测方法大多依据GB/T 16293-2010医药工业洁净室(区)浮游菌的测试方法和GB/T 16294-2010医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法进行。以这两个国标来实施监测制药企业洁净室的微生物,对大多数生产普通制剂或API的厂家来说是没有问题的。 但是对于抗生素企业和部分制剂厂家来说,仅仅按照这两个国标推荐的两种培养基大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)和沙氏琼脂培养基(SDA)来监测洁净室的微生物则是不全面的。在抗生素生产企业,其洁净室内不可避免地混杂着一定量的抗生素粉尘,如果没有采取能够消除抗生素粉尘对微生物生存和生长的影响的措施,就采用国标的方法测试该环境中的微生物,得到的监测结果,不可避免的将是一个“假阴性”的结果;同样,部分药物的API对个别微生物也有不同程度的抑制或杀灭作用,要是不消除这类影响微生物生存和生长的环境因素,同样会得到“假阴性”的结果。 现在国内绝大多数制药企业环境监测中微生物取样的培养基是检验员人工制作,培养基灭菌,浇制平板,预培养后剔除污染的平板后置冷藏箱内待用,保存期限一般不超过3周。采用这样的方法进行环境监测微生物的取样,因为无法从根本上保证取样平板的无菌性,得到的监测结果不可避免的是一个“假阳性”的结果。 “假阴性”和“假阳性”两个结果都没有真实的还原洁净室内微生物的实际状况。取样测试的结果与洁净室内微生物实际状况出现了偏差。这样的结果如果发生的A级或B级区,由此产生的众多调查、重复测试等工作量,将会导致大量的经济损失。 “假阴性”和“假阳性”两个结果的产生,就是因为在环境监测微生物取样测试时忽视了这样两个问题,忽视了洁净环境中存在的抑菌成分;忽视了取样平板的无菌性。 一、洁净环境中的抑菌成分的消除 制药企业洁净环境中的抑菌成分主要有这样两大类:1、API;2、消毒剂残留。 1、API主要分为这样两部分:抗生素和部分API   消除抗生素粉尘的残留,采用的方法就是降解取样时落在培养基平板上的抗生素,在取样平板的培养基内添加一定量的酶,对于β-内酰胺类抗生素,添加β-内酰胺酶(即青霉素酶);对于头孢类抗生素,则添加头孢菌素酶。   而API的消除,则主要依据:“中国药典”2010年版 附录109页  附录XI J 表1:“常见干扰物中和剂或灭活方法”  中所对应的中和或灭活方法,还有一个方法就是借鉴相关产品微生物检验方法验证中所采取的中和或灭活方法来消除API的影响。 2、消毒剂残留   制药企业洁净环境每天都在使用消毒剂,怎样确定残留的消毒剂没有影响微生物的生长?选择什么样的培养基可以最大限度的衡量洁净室表面的微生物水平?理论知识告诉我们,卵磷脂、吐温-80组合后能够消除季胺类化合物(苯扎溴铵、苯扎氯铵等)消毒剂的影响;卵磷脂、吐温-80和L-组氨酸组合后能够消除醛类(甲醛、戊二铨等)和酚类(苯酚、间苯二酚等)消毒剂的影响;硫代硫酸钠能够消除卤素类消毒剂(碘伏、碘酒等)的影响等等。   现在,国外制药企业环境微生物监测时,用于洁净室表面取样的培养基大多为大豆酪蛋白+卵磷脂+吐温-80琼脂培养基(即TSAWLP)。选择这样的培养基就可以有效的降解可能残留在洁净室表面的消毒剂(主要是季胺类化合物消毒剂)的残留。 二、取样平板的无菌性   《中国药典》2010年版中对用于环境监测的培养基平板有明确的要求。用于环境监测的培养基须特别防护,最好要双层包装和终端灭菌,如果不能采用终端灭菌的培养基,那么在使用前应进行100%的预培养以防止外来的污染物带到环境中以避免出现假阳性的结果。[1]由此可见,在法规层面,对于制药企业洁净室环境中微生物测试的培养基提出了严格要求。要求在洁净室取样时采用无菌的预制培养基平板(即Ready to- use Culture Media Plate)取样。  事实上,国外众多的制药企业用于洁净环境测试的培养基平板,包括浮游菌、沉降菌取样的90mm普通平板和表面取样的55mm接触平板都是无菌的预制平板培养基。《中国药典》2010年版中对用于环境监测的培养基的要求就是出自USP 〈1117〉MICROBIOLOGICAL BESTLABORATORY PRACTICES  章节。  对比中国药典和USP两部药典在环境监测培养基的具体要求,USP还特别强调了预培养之后必须要进行的促生长试验(即Growth Promotion Testing),这里也凸显了USP在强调避免微生物测试结果“假阳性”的同时,更加关注的是微生物测试结果的“假阴性”。现代微生物检测领域,“假阴性”远比“假阳性”要可怕,制药企业洁净环境中微生物的检测,使用无菌预制平板培养基,不仅完全杜绝了测试结果的“假阳性”,同时也消除了“假阴性”的可能。也符合了中国GMP2010中大力提倡的风险管理的理念。 三、制药企业洁净环境微生物监测的解决方案    针对制药企业洁净环境微生物监测中忽视的问题,在设计一个洁净室的微生物监测方案时,应该着力避免这两个问题。在培养基中添加β-内酰胺酶或头孢菌素酶是一定要做验证的,就是要验证所添加酶或中和剂的种类和剂量能够完全降解掉环境中的抑菌因素,从而真实还原本企业生产环境中可能存在的微生物的真实水平。避免环境监测微生物“假阳性”或“假阴性”结果,另一行之有效方法就是采用无菌预制培养基平板(Ready to- use Culture Media Plate)取样。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统,超低温冰箱,生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下,为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外,我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务,对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位,都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获优质服务!也正因为此,北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系!

操作维护

2024.04.02

菌肥中有益微生物防治作物病害机制详解!

                     菌肥中有益微生物防治作物病害机制详解! 百欧博伟生物:在大自然中,有很多真菌和细菌。真菌和细菌的作用各不相同。真菌是一类具有细胞核和细胞壁的真核生物。在各类植物病害中,以真菌引起的病害最多,例如霜霉病、白粉病、锈病、黑粉病等等均由真菌引起。真菌也有对植物有益的一面,真菌可以参与植物残体的分解,把有机质矿化为植物可以利用的无机质,是地球上物质循环和生态平衡所不可缺少的要素。在微生物菌肥的应用上,有益活细菌是其中重要的组成部分。 真菌能够与植物共生,促进植物的生长;另外,有些真菌是一些植物病原微生物或昆虫的拮抗菌或寄生菌,可以用于植物病害的生物防治;最后,有些真菌可以分泌促进植物生长的营养物质或激素,也可以分泌一些排他的抗菌物质。虽然很多细菌、病毒、放线菌、原生线虫都可以引起植物病害,但是也有些细菌、病毒、放线菌对植物有益。以上提到的真菌、细菌、病毒、放线菌、原生线虫都是微生物范畴里的生物类。微生物一般是指我们人类肉眼看不到的,需要借助光学显微镜、电子显微镜等工具才能观察清楚的生物。例如,在光学显微镜下观察时,我们把处在营养生长阶段的真菌体称为真菌的营养体,大部分真菌的营养体为可分支的丝状体,分支的丝状体聚合在一起时称为菌丝体,如果是单根存在的丝状体则称为菌丝。真菌的营养生长到一定时期后就开始进入繁殖阶段,真菌的繁殖体也称子实体,主要由孢子构成。 真菌的菌丝体 在微生物界里,人们把在某一系统中对其他生命体有益的微生物称为有益微生物。本文里提到的有益微生物是指在农业生产系统中对植物体有益的微生物,包括有益真菌、有益细菌、有益放线菌、有益病毒、有益支原体等等。有益微生物防治植物病害机制是指利用有益微生物防治植物病害的原理。在实践生产过程中,利用有益微生物防治植物病害的机制主要有抗生作用、竞争作用、溶菌作用、寄生作用、捕食作用、交互作用等。有益微生物防治植物病害过程中,可能是某一防治机制起主要作用,也可能是多种机制共同作用。 1、抗生作用 抗生作用是指有益微生物代谢产生抗生物质可以抑制或杀死病原菌的现象。能产生抗生素的有益微生物有春日链霉菌、灰色链霉菌、金色链霉菌、吸水链霉菌等。春日链霉菌繁殖生长过程中产生春雷霉素,春雷霉素具有杀菌活性,能够抑制病原体蛋白质的合成,可以用于防治水稻、蔬菜和果树的真菌和细菌性病原体。灰色链霉菌可以分泌产生链霉素,该抗生素能够与30s核糖体亚单位结合,进而抑制病原微生物蛋白质合成,可以用于柑橘、蔬菜、核果等作物,防治细菌性穿孔病、细菌性腐烂病、细菌性溃疡病、细菌性枯萎病等病害。金色链霉菌能够分泌多抗霉素B、多抗霉素D等,多抗霉素B可以抑制真菌的细胞壁材料几丁质的合成,可以用于葡萄、辣椒、草莓、花卉等作物上,防治白粉病、灰霉病、褐斑病、枯萎病等病害;多抗菌素D也有杀菌活性,可以防治水稻纹枯病,也可以用在柑橘、苹果、梨等作用上防治溃疡病。吸水链霉菌可以合成分泌井冈霉素,促进海藻糖分解消化,引起病原体的菌丝体的前端生长发生异常,令菌丝体生长发育停止,可用于防治水稻纹枯病、蔬菜的猝倒病等。 2、竞争作用 竞争作用是指在同一系统中不同微生物间对生存所需营养和空间的竞争现象。竞争作用表现在营养竞争和空间竞争。营养竞争主要是对病原微生物所需要的水分、氧气和营养物质的竞争,在植物根际施用侧孢芽孢杆菌时,会使其很快定植植物根系附近,掠夺病原菌生长所需的营养物质从而使病原菌生长受到限制。空间竞争主要是对于浸染会点的竞争,黏附能力强的侧孢芽孢杆菌会与病原菌竞争植物细胞浸染位点,从而抑制病原菌对植物细胞的侵袭,形成保护屏障。尖孢镰刀菌也是一种具有竞争作用的真菌,其可以通过竞争作用防治镰刀菌引起的病害。 3、溶菌作用 溶菌作用是指病原微生物的细胞壁或细胞膜由于内在或外在因素的作用而溶解的现象。溶菌作用包括自溶和外溶两种方式。淡紫灰链霉菌产生的中生菌素对水稻纹枯病原菌、大白菜软腐病病原菌、茄科青枯病病原菌、柑橘溃疡病、柚子溃疡病等具有溶菌作用。枯草芽孢杆菌可以产生脂性的多肽,可以干扰病菌细胞膜,使细胞膜溶解,能够防治镰刀菌、链孢菌、曲霉菌等引起的病害,叶面喷施时,还可以防治茄科的灰霉病,以及草莓的白粉病。 4、寄生作用 寄生作用是指一种生物在另一种生物的体内或表面吸取营养物质而使对方受害的现象。具有寄生于病原微生物的体内或表面的有益微生物有真菌、细菌、放线菌、病毒等,如灰绿链霉菌。灰绿链霉菌可以在病原微生物的营养菌丝体上产生附着胞,附着胞再缠绕在病原微生物菌丝体上,并侵入其内吸收营养物质,即能使病原微生物的菌丝体畸形,又可以使其营养代谢异常,最终导致菌丝体破裂;灰绿链霉菌可以用来防治镰刀菌和细菌性病原体。 5、捕食作用 捕食作用是指一种微生物直接吞食或消解另外一种微生物的现象。土壤中的一些原生动物或线虫可以捕食真菌的菌丝和孢子以及细菌等,从而影响土壤中病原微生物的数量。吞食真菌的线虫大多是专门捕食真菌的,如燕麦滑刃线虫可捕食腐霉菌和疫霉菌。捕食线虫的真菌也可以寄生于线虫体内消解线虫,或者真菌的菌丝特化为菌环来套住消解线虫。例如厚垣轮枝孢菌(厚孢轮枝菌)通过附着胞可以吸附在线虫体外,再有附着胞产生侵入钉穿透线虫体表进入体内,消解并吸收其中的营养物质、进行繁殖;厚垣轮枝孢菌可以破坏线虫的卵,令虫卵不能孵化,停止繁殖。厚垣轮枝孢菌也能影响幼虫及雌性成虫的正常生理代谢,从而导致线虫死亡。 6、交互作用 交互作用,很多时候也成为诱抗作用。其是指预先接种一种对植物无害或危害的微生物诱导植物产生抗病性,使植物免受或少受后来病原体侵染危害的现象。例如利用非病原微生物的燕麦冠锈菌接种小麦叶片可以诱导小麦抵抗锈病菌的危害。淡紫灰链霉菌喷施于植物后,可以刺激植物体内的合成抗菌物质,进而提高植物的抗病能力。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务,对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位,都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务!也正因为此,北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系!

应用实例

2024.04.02

盐反硝化枝芽孢杆菌的储存与培养及打管说明!

                   盐反硝化枝芽孢杆菌的储存与培养及打管说明! 盐反硝化枝芽孢杆菌是Virgibacillus属的微生物,原产地为中国。厚壁菌门芽孢杆菌科细菌。主要用途为研究。 一、菌种简介平台编号:Bio-00094提供形式:冻干物拉丁属名:Virgibacilllus Halodenitrificans中文译名:盐反硝化枝芽孢杆菌拉丁学名:Virgibacillus halodenitrificans原始编号:DSM 10037菌株来源:←DSMZ保藏人:周宇光直接来源国家:德国保藏时间:10/8/2003其他保藏编号:=ATCC 49067生物危害:四类模式菌株:模式菌株菌株用途:模式菌株培养温度:30℃培养基:0502    分离源:硫化泉用途:模式菌株注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准) 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 6-10℃冷藏。  三、培养条件营养肉汁琼脂蛋白胨 10 克 NaCl 5 克蒸馏水 1000ml 牛肉提取物 3 克琼脂 15 克 pH=7.0 四、注意事项1、菌种常规培养时间:细菌 1-2 天,酵母 3 天,霉菌 5-7 天,大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前,建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态,延迟期较长,如在说明建议的培养时间还未长起来,请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间,直至菌种培养完成,有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长,一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养,如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失,我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时,在操作过程中应严格控制厌氧条件:制作培养基时,应使用厌氧螺口试管,并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气,使用者应保证菌种的安全存储和操作,带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org)。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂(应避免过多水蒸气影响菌种的复苏),用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml(建议勿超过 0.5ml)适宜的液体培养基(不添加琼脂),滴入管内,轻轻振荡,待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状,在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中(不超过 2 支,中国微生物菌种查询网提供的培养基配方中有琼脂,请务必做成试管斜面,配方中没有琼脂,试管中液体培养基不超过 5ml),并在建议的条件下静止培养。冻干管打开后需一次用完,不能留存。另外,安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂,里面菌体为少数,复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上,否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行,用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时,请务必记录好菌种的编号和制备批号,如若有菌种复苏不活或者污染等情况,请在收到菌钟后 2 个月内联系,逾期不予受理。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!

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