法氏假丝酵母的菌株培养与实验内容及保存方法！

                 法氏假丝酵母的菌株培养与实验内容及保存方法！

法氏假丝酵母是Candida属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；教学。

一、菌种简介

平台编号：Bio-101870

规格：冻干物

拉丁属名：Candida Famata

菌株名称：法氏假丝酵母

收藏时间：1993/7/20

原始编号：福建3-4

资源归类编码：15151111103

模式菌株：非模式菌株

主要用途：研究;教学

特征特性：非模式菌株。细胞圆形，椭圆形，多极芽殖；发酵葡萄糖，脲酶阴性，DBB反应阴性。在SDA上培养2d后涂片镜检，呈革兰阳性，但着色不均，菌体呈卵原形（2.5～4μm），薄壁。致病菌芯片研发中所选用的试验用菌种。

生物危害程度：四类

致病对象：无

培养基编号：13

培养温度：25-28℃

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、形态特征

法氏假丝酵母，也被称为无名假丝酵母。属于隐球酵母科隐球酵母亚科假丝酵母属，可形成假菌丝、有隔的菌丝茁芽和厚垣孢子。假菌丝发达，呼吸作用氧化性或兼有发酵力。细胞圆形、卵形或长形。无性生殖为多边芽殖，形成假菌丝，也有真菌丝。

三、产品特点

1、菌种功能明确、品种稳定、应用；

2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压；

3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境；

4、复活迅速,可在短期内成为优势种群；

5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境；

6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。

四、产品优势

1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。

2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。

3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。

4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。

五、培养方法

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。

6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。

六、实验内容

1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

七、保存方法

1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。

2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。

3、悬液保存法：

①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。

②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。

4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。

5、常用的冷冻保存法：

①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。

②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。

③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。

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