皮肤成纤维细胞的培养和计数，你真的会吗？ 成纤维细胞（fibroblast）是疏松结缔组织的主要组成成分，它是由胚胎时期的间充质细胞分化而来的。 成纤维细胞能够分泌少量的细胞生长因子，也能合成和分泌胶原蛋白和弹性蛋白，生成诸如胶原纤维、弹性纤维和网状纤维等细胞外基质成分。 成纤维细胞容易培养，取材也非常便利，容易受基因修饰，所以它常常有不同的应用： 1）作为基因修饰的受体细胞应用于细胞核移植、基因表达等方面； 2）作为多种干细胞如胚胎干细胞（ES）和神经干细胞（NSC）等细胞培养的饲养层，其分泌的细胞因子可维持干细胞的未分化状态； 3）可作为研究机体内源性逆转录病毒体外和体内感染性的细胞模型； 4）利用成纤维细胞大量增殖的特性，可用于机体创伤修复包括一般创伤修复和骨创伤修复。 皮肤成纤维细胞培养 1、取材 采集机体皮肤，放入含有双抗（100U/mL青霉素和100U/mL链霉素）的无菌磷酸盐缓冲溶液（PBS），反复洗涤多次，剪除毛茬，去除血污、脂肪和结缔组织，保留真皮层，用眼科剪将皮肤剪成3~4mm的碎片。 2、原代培养 a.胰酶消化法：将皮肤组织块用眼科剪剪碎后，加入适量含有0.02%EDTA的0.25%的胰酶进行消化，置于37℃水浴锅内，每隔10min左右吹打摇晃一次，30min后，用100目过滤网滤掉组织块，将细胞悬液1000g离心5min，去除上清液，用培养液重悬细胞，再次离心重悬后，调整细胞密度至1~5×105个/mL，接种于75mL培养瓶内，放入37℃，5%CO2和饱和湿度的培养箱内进行培养，每2d换液1次。细胞培养液为含10%胎牛血清（FBS）和1%双抗的DMEM培养液。 b.组织块贴壁培养法：将细碎的组织块接种于75mL培养瓶内，均匀铺于瓶底，皮块之间相距1cm，翻转培养瓶，使瓶底向上，置于37℃，5%CO2和饱和湿度的培养箱内进行培养2h，使皮块略微干涸。之后，放正培养瓶，使瓶底向下，加入适量培养液，覆盖瓶底，放入培养箱内进行培养，每2d换液1次，并观察细胞贴壁情况。 3、传代培养 当细胞长到80%~90%汇合度时，开始进行传代培养。吸出培养瓶里的培养液，用已在37℃预热的无钙镁离子的PBS溶液（DPBS）里洗涤3次，去除细胞碎片和残余血清，然后用含0.02%EDTA的0.25%的胰酶在37℃消化2min，观察贴壁细胞变圆时，加入含胎牛血清的培养液终止消化，并用移液器吹打，使细胞脱落，吸取细胞悬液，1000g离心5min，重悬离心2次后，调整细胞密度至1~5×105个/mL，接种于培养瓶内继续培养。 4、细胞冻存 冻存液的配制比例为DMEM: FBS: DMSO=7:2:1。按照传代培养方法对细胞进行消化，离心，去上清液后，用冻存液重悬细胞，调整细胞密度为1~2×106个/mL，取1mL细胞悬液置于1.8mL冻存管内，密封冻存管，并标上细胞类型和冻存时间，将冻存管在4℃冰箱放置30min后，移入-20℃冰箱内1.5h，之后移入-80冰箱内过夜降温，最后将细胞置于液氮内，-196℃长期保存。 5、细胞复苏 将冻存管从液氮中取出，迅速投入到37℃水浴中，并反复摇动冻存管，使之复温，在超净工作台下吸出细胞悬液放入离心管理，1000g离心5min，弃上清，用培养液重悬后，再次离心重悬，调整细胞浓度为1×106个/mL，接种于培养瓶内，置于37℃，5%CO2和饱和湿度的培养箱内进行培养。 Countstar BF在细胞培养过程中的应用 在成纤维细胞培养过程中，不管是原代培养还是传代培养，不管是细胞冻存还是细胞复苏，以及后续的各种细胞实验，对细胞浓度和活率的检测都是最基础的工作，也是后续所有实验的前提。Countstar Mira BF全自动细胞分析仪是一款基于图像法检测，通过采集图像中的细胞信息，进行定量分析，可使用配套的Countstar细胞计数板及标准规格血球计数板对细胞进行自动分析。同时兼容3.5/6/10cm细胞培养皿，T25细胞培养瓶，及4槽或8槽腔室载玻片，对培养过程中的细胞生长状态进行监测分析。 细胞计数 细胞的原代培养，细胞的传代培养，细胞药理性检测，细胞增殖活性检测，细胞杀伤能力检测等各类实验的开展，都要清楚地知道细胞的浓度和细胞的活率，以方便我们更好地进行传代接种、处理样本。Countstar Mira BF利用图像识别原理，可得到如细胞浓度、细胞活率等结果，可同时计数5个样品，每个样品自动采集3-5个视野，保证数据的准确性。 汇合度分析 细胞汇合度是通过细胞占所培养的生长区域内的面积百分比来衡量，细胞汇合度常用来评估细胞的传代时机，及时把握时间，对维持细胞表型和培养质量至关重要。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 细菌、酵母、真菌、霉菌、放线菌常用培养基汇总！ 百欧博伟生物：自然界的微生物由于种类不同，它们对营养的需求也有差别，因此在菌种分离、保藏以及工业发酵中，都要根据该菌株对营养需求的特点来配制相应的培养基。 在科研生产上按所用原料不同，又可分两类：应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的，称为天然培养基；应用化学药品配成并标明成分的，称为合成培养基或综合培养基。含化学试剂的培养基，大多为合成培养基。由于液体培养基不适合长期保留，现已有公司改制成粉末。培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此保管时必须防潮、避光，置低温处保存。对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基)，较长时间的储存必须放在2~6℃的冰箱内。常见培养基有以下一些。 一、细菌培养基 配方一：牛肉膏琼脂培养基 牛肉膏0.03g，蛋白胨1.0g，氯化钠0.05g，琼脂1.5g，水100ml。在烧杯内加水100ml，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，置火上加热，待各组分溶解后，加人琼脂，不断搅拌以免粘底。待琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH为7.2~7.6，分装各试管，加塞，用高压蒸汽灭菌30 min备用。 配方二：肉汤培养基 取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250g，用刀剁成肉末，加人500ml蒸馏水和5g蛋白胨。煮沸，转文火炖2h，过滤，滤出的肉末干燥处理，滤液调pH为7.5左右。每支试管内加人10ml。肉汤和少量碎肉末，灭菌，备用。 配方三：根瘤菌培养基 葡萄糖10g，磷酸氢二钾0.05g，碳酸钙3g，硫酸镁0.02g酵母粉0.04 g，琼脂20g，水1000ml，1%结晶紫溶液1mL。先把琼脂加水煮沸溶解，再分别加入其他组分，搅拌溶解后，分装，灭菌，备用。 配方四：LB培养基 LB培养基的配方如下：胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L，酵母提取物(Yeast extract) 5g/L，氯化钠(NaCl) 10g/L， 另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH，使其达到7.4(该pH适合使用最广的原核表达菌种E.coli的生长)。 二、放线菌培养基 配方一：淀粉琼脂培养基(高氏培养基) 可溶性淀粉2g，硝酸钾0.1g，磷酸氢二钾0.05g，氯化钠0. 05g，硫酸镁0.05g，硫酸亚铁0.001g，琼脂2g，水100 mL。先把淀粉用5ml水调成糊状后，倒入95mL水，搅匀后加入其他药品，使其溶解。煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH为7.2~7.4，分装后灭菌，备用。 配方二：面粉琼脂培养基 面粉60g，琼脂20g，水1000mL。用水将面粉调成糊状，加水到500mL，文火煮30min。另取500mL水，放入琼脂，加热煮沸到溶解，把两液调匀，补充水分，调整pH到7.4，分装，灭菌，备用。 三、真菌培养基 配方一：萨氏(Sabouraud's)培养基 蛋白胨10g，琼脂20g，麦芽糖40g，水1000mL。先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40g麦芽糖(或葡萄糖)，搅拌，溶解后分装，灭菌，备用。本培养基可培养许多种类真菌。 配方二：马铃薯糖琼脂培养基 取200g切成小块，加水1000ml，煮沸30 min后，补足水分。在滤液中加入10g琼脂，煮沸溶解后加糖20g(用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖)，补足水分，分装，灭菌，备用。将该培养基的pH调为7.2~7.4，配方中的糖，如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。 配方三：豆芽汁培养基 黄豆芽100g，琼脂15g，葡萄糖20g，水1000mL。洗净黄豆芽，加水煮沸30min，用纱布过滤，滤液中加入琼脂，加热溶解后放入糖，搅拌溶解，补足水分到1000 mL，分装，灭菌，备用。将该培养基的pH调为7.2~7.4，可用来培养细菌和放线菌。配方四：豌豆琼脂培养基豌豆80粒，琼脂5g，水200 mL。取80粒干豌豆加水适量，煮沸1h，纱布过滤，在滤液中加入琼脂，煮沸溶解，分装，灭菌，备用。 四、酵母培养基 1、基础培养基 YPD 或YEPD：Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L)，又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖（YPD）琼脂培养基 配方：1% Yeast Extract（酵母膏），2% Peptone（蛋白胨），2% Dextrose (glucose)葡萄糖，（若制固体培养基，加入2%琼脂粉） 配制方法： （1）溶解10gYeast Extract（酵母膏），20gPeptone（蛋白胨）于900ml水中，如制平板加入20g琼脂粉 （2）加入20g Dextrose (glucose)（葡萄糖） （3）高压 115 度 15min 注：葡萄糖，yeast extract ，peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。葡萄糖可以过滤除菌，也可以115℃ 15min灭菌，(葡萄糖溶液灭菌后加入)。 2、基本培养基 配方一：NaAc 10g， (NH)2SO4 5g， NaHPO4 0.05g， MgSO4-7H2O 1g，维生素B 100ug，蒸馏水100mL，处理琼脂2g ，pH自然，121℃灭菌15min； 配方二：葡萄糖2%， KHPO4 0.0 1%， MgSO4 · 7H2O 0.05%，(NH)2S04，0.05% ，处理琼脂2%。蒸馏水配制，pH 6.0，121℃灭菌15min； 配方三：葡萄糖10g， NaCl 0.01g， (NH)2SO4 1g，微量元素母液1mL， K2HPO4 0.0125g，维生素母液1mL， KI 0.0001g， MgSO4·7H2O 0.05g， CaCl·2H2O 0.01g，蒸馏水1000mL。 pH 5.5~6.0，115℃灭菌25min； 微量元素母液：HPO4 1mL，ZnSO4·7H2O 7mg，CuSO4-5H2O 1mg， CaCl2-6H2O 5mg，蒸馏水 100mL。 维生素母液：烟碱酸 40mg，肌醇 200mg，泛酸 20mg，对氨基苯甲酸 20mg，核黄素 20mg，维生素B 40mg，生物素 0.02mg，吡哆醇 40mg，蒸馏水 100mL。 3、YNB培养基 YNB培养基由以下A、B、C三种溶液组成: A液，维生素混合液：维生素B 1000mg，烟酸 400mg，吡哆醇 400mg，生物素 20mg，泛酸钙 2000mg，核黄素 200mg，肌醇 10000mg，对氨基苯甲酸 200mg，无离子水 1000mL； B液，微量元素液：HBO4 500mL，MnSO4 ·7H2O 200mg，ZnSO4-7H2O 400mg， CuSO4-7H2O 40mg， FeCls•6H2O 100mg，Na2MnO3 200mg，无离子水 1000mL。 C液，其它无机盐液：KI 0.01mg，CaCl2-2H2O 0.01g，K2HPO4 0.015g，KH2PO4 0.085g，MgSO4·7H2O 0.05g，NaCl 0.01g，无离子水1000ml。 配制方法：取A液1mL、B液1mL、C液10mL、无离子水1000mL，混合，调pH为6.5，即成。说明：①配制YNB时，先分别将已灭菌分装的A、B液各1mL与C液10mL，在无菌条件下混合，再将已灭菌的(NH4)2SO4按0.05%的量加人到无离子水中，混匀即可。 注：配制糖发酵培养基时，方法同上，只是按2%浓度加入不同的糖液。 五、食用菌菌种培养基 配方一：马铃薯-蔗糖-琼脂培养基 20%马铃薯煮汁1000 mL，蔗糖20 g，琼脂18 g。马铃薯洗净去皮后，切成小块。称取小块200 g，加水1000 mL，煮沸20min后，过滤。 在滤汁中补足水分到1000 mL，即成20%马铃薯煮汁。在汁中加入琼脂和蔗糖，煮沸，溶解后，补足水分，分装，灭菌，备用。pH要求不严，可以不测定。 配方二：综合马铃薯培养基 20%马铃薯煮汁1000 mL，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5 g，葡萄糖20 g，维生素10 mg，1脂18g。先配制20%马铃薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各种组分，加热溶解后补足水分，调整pH到6，分装，灭菌，备用。该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。 六、蓝藻培养基 BG-11培养基 母液1: NaNO3，300mg/mL，NaCO3，4mg/mL； 母液2: MgSO4·7H2O 15mg/mL； 母液3: CaCl2·2H2O； 母液4:柠檬酸(CA) 1.2mg/mL，FeCA 1.5mg/mL，Na2EDTA 0.08mg/mL； 母液5: KHPO4 ·3H2O 8mg/mL: 母液6: HBO3 2.86mg/mL，MnCl-4H2O 1.81mg/mL，ZnSO4·7H2O 0.0222mg/mL ，NaMoO4·2H2O 0.03mg/mL，CusO4-5H2O 0.079mg/mL，Co(NO3)2·6H2O 0.0494mg/ml。 取母液1、2、3、4、5各5mL，取母液6 1mL，加蒸馏水至1000mL，调pH值为8。0.0 BG-11固体培养基含琼脂1% 。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   人骨髓基质细胞接收后的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-133754 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：HS-5 细胞名称：人骨髓基质细胞用途：STR鉴定正确 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特性1）来源：男  30岁 骨髓基质2）形态：上皮细胞样  贴壁生长3）含量：>1x106  细胞数4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装5）用途：仅供科研使用。 三、细胞的运输和保存干冰运输及复苏好存活细胞（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。                       五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备DMEM 培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

               以糖蜜为原料发酵生产酒精的：异常威克汉姆酵母 异常威克汉姆酵母是Wickerhamomyces属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；生产，具体用途为清香型白酒的酿制研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-63976 提供形式：冻干物拉丁属名：Wickerhamomyces Anomalus 中文名称：异常威克汉姆酵母拉丁名称：Wickerhamomyces anomalus来源历史：←四川省食品发酵工业研究设计院酒组(2.451)收藏时间：2007/2/9原始编号：3282原产国：中国资源归类编码：15151113000模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产特征特性：化能异养；嗜温；趋酸；兼性厌氧。5Be′麦芽汁琼脂30℃培养3天，菌落圆形、乳白色、有光泽、粘湿、全缘，3.0-6.8mm。细胞近球形、卵圆形、单个、少数双个，2.5-3.5×3.0-5.0?m。无性繁殖方式为多边芽殖；发酵葡萄糖、蔗糖、 棉子糖、麦芽糖、D-半乳糖、D-松三糖。同化葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、棉子糖、D-半乳糖、海藻糖、D-松三糖、乳酸；不同化菊芋糖、柠檬酸、琥珀酸、甘油、D-山梨醇、D-甘露醇、硫酸铵；不同化硝酸钾、盐酸乙胺。具体用途：以糖蜜为原料发酵生产酒精。生物危害程度：四类培养基编号：CM0077培养基名称：5 °Bé麦芽汁琼脂培养基成分：5°Bé麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，自然pH。培养温度：28-30℃需氧类型：好氧保存方法：真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：以糖蜜为原料发酵生产酒精。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征化能异养；嗜温；趋酸；兼性厌氧。5Be′麦芽汁琼脂30℃培养3天，菌落圆形、白色、表面放射状隆起、粘稠，2-4mm；卵形、腊肠形，单个、双个、多个2.5-5×4.25-6μm；假丝酵母型菌丝；无性繁殖方式为多边芽殖。  三、培养条件1、培养基编号：CM0077 5 °Bé麦芽汁琼脂2、培养基成分：5°Bé麦芽汁 1.0L（或用 MEB 代替），琼脂 15.0g，自然 pH。推荐使用商品化成品培养基。3、需氧类型：好氧4、培养温度：25℃ 四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,酿酒酵母菌组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 六、注意事项1、全部操作过程需在无菌条件下进行。2、每支安瓿的菌悬液最多只能接3-4支斜面，避免接种量太少不利于菌种生长。有些菌种经冷冻干燥后，需连续两次继代培养才能正常生长。3、要求在厌氧条件下培养的菌种，自开封后的全过程，均需按厌氧菌培养条件的要求处理。4、此安瓿管一次性使用完。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   微生物发酵的操作方法及应用领域范围有哪些？ 一、知识介绍 微生物发酵即是指利用微生物，在适宜的条件下，将原料经过特定的代谢途径转化为人类所需要的产物的过程。微生物发酵生产水平主要取决于菌种本身的遗传特性和培养条件。 发酵工程的应用范围医药工业，食品工业，能源工业，化学工业，农业：改造植物基因；生物固氮；工程杀虫菌生物农药；微生物养料。环境保护等方面。  二、发酵方法 微生物发酵过程根据发酵条件要求分为好氧发酵和厌氧发酵。好氧发酵法有液体表面培养发酵、在多孔或颗粒状固体培养基表面上发酵和通氧深层发酵几种方法。厌氧发酵采用不通氧的深层发酵。因此，无论好氧与厌氧发酵都可以通过深层培养来实现，这种培养均在具有一定径高比的圆柱形发酵罐内完成，就其操作方法可分为以下几种。 分批式操作：底物一次装入罐内，在适宜条件下接种进行反应，经过一定时间后，将全部反应物取出。 半分批式操作：也称流加式操作。是指先将一定量底物装入罐内，在适宜条件下接种使反应开始。反应过程中，将特定的限制性底物送入反应器，以控制罐内限制性底物浓度在一定范围，反应终止将全部反应物取出。 反复分批式操作：分批操作完成后取出部分反应系，剩余部分重新加入底物，再按分批式操作进行。 反复半分批式操作：流加操作完成后，取出部分反应系，剩余部分重新加入一定量底物，再按流加式操作进行。 连续式操作：反应开始后，一方面把底物连续地供给到反应器中，同时又把反应液连续不断地取出，使反应过程处于稳定状态，反应条件不随时间变化。  分批发酵法(batch fermentation) 分批发酵又称分批培养，发酵工业中常见的分批发酵方法是采用单罐深层分批发酵法。每一个分批发酵过程都经历接种、生长繁殖、菌体衰老进而结束发酵，最终提取出产物。这一过程在某些培养液的条件支配下，微生物经历着由生到死的一系列变化阶段，在各个变化的进程中都受到菌体本身特性的制约，也受周围环境的影响。只有正确认识和掌握这一系列变化过程，才有利于控制发酵生产。 分批发酵的特点是：微生物所处的环境是不断变化的，可进行少量多品种的发酵生产，发生杂菌污染能够很容易终止操作，当运转条件发生变化或需要生产新产品时，易改变发酵对策，对原料组成要求较粗放等。 分批培养过程微生物生长可分为：停滞（或调整）期、对数（生长）期、稳定期和衰亡期四个阶段。研究细胞的代谢和遗传宜采用生长最旺盛的对数期细胞。在发酵工业生产中，使用的种子应处于对数期，把它们接种到发酵罐新鲜培养基时，几乎不出现停滞期，这样可在短时间内获得大量生长旺盛的菌体，有利于缩短生产周期。在研究和生产中，常需延长细胞对数生长阶段。 补料分批发酵法(fed-batch fermentation) 补料分批发酵又称半连续发酵或半连续培养，是指在分批发酵过程中，间歇或连续地补加新鲜培养基的培养方法。与传统分批发酵相比，其优点在于使发酵系统中维持很低的基质浓度。低基质浓度的优点为：①可以除去快速利用碳源的阻遏效应，并维持适当的菌体浓度，使不致加剧供氧的矛盾；②避免培养基积累有毒代谢物。 补料分批发酵广泛应用于抗生素、氨基酸、酶制剂、核苷酸、有机酸及高聚物等的生产。 连续发酵法(continuous fermentation) 连续发酵又称连续培养，连续发酵过程是当微生物培养到对数期时，在发酵罐中一方面以一定速度连续不断地流加新鲜液体培养基，另一方面又以同样的速度连续不断地将发酵液排出，使发酵罐中微生物的生长和代谢活动始终保持旺盛的稳定状态，而pH值、温度、营养成分的浓度、溶解氧等都保持一定，并从系统外部予以调整，使菌体维持在恒定生长速度下进行连续生长和发酵，这样就**提高了发酵的生长效率和设备利用率。 开放式连续发酵 在开放式连续发酵系统中，培养系统中的微生物细胞随着发酵液的流出而一起流出，细胞流出速度等于新细胞生成速度。因此在这种情况下，可使细胞浓度处于某种稳定状态。另外，最后流出的发酵液如部分返回(反馈)发酵罐进行重复使用，则该装置叫做循环系统，发酵液不重复使用的装置叫做不循环系统。 封闭式连续发酵 在封闭式连续发酵系统中，运用某种方法使细胞一直保持在生物反应器内，并使其数量不断增加。这种条件下，某些限制因素在生物反应器中发生变化，最后大部分细胞死亡。因此在这种系统中，不可能维持稳定状态。封闭式连续发酵可以用开放式连续发酵设备加以改装，只要使用部分菌体重新循环。另一种方法是采用间隔物或填充物置于设备内，使菌体在上面生长，发酵液流出时不带细胞或所带细胞极少。 透析膜连续发酵是一个新方法，它是采用一种具有微孔的有机膜将发酵设备分隔，这种膜只能通过发酵产物，而不能通过菌体细胞。这样，将培养液连续流加到发酵设备的具有菌体的间隔中，微生物的代谢产物就通过透析膜连续不断地从另一间隔流出。在一些发酵过程中，当发酵液中代谢产物积累到一定程度时就会抑制它的继续积累，而采用透析膜发酵的方法可使代谢产物不断透析出去，发酵液中留下不多，因而可以提高产物得率。  三、应用领域范围 微生物发酵生产水平主要取决于菌种本身的遗传特性和培养条件。发酵工程的应用范围有： 医药工业，食品工业，能源工业，化学工业，农业：改造植物基因；生物固氮；工程杀虫菌生物农药；微生物饲料。环境保护等方面。 1、酒类 包括果酒、啤酒、白酒及其他酒均是利用酿酒酵母，在厌氧条件下进行发酵，将葡萄糖转化为酒精生产的。白酒经过蒸馏，因此酒的主要成分是水和酒精，以及一些加热后易挥发物质，如各种酯类、其他醇类和少量低碳醛酮类化合物。果酒和啤酒是非蒸馏酒，发酵时酵母将果汁中或发酵液中的葡萄糖，转化为酒精，而其他营养成分会部分被酵母利用，产生一些代谢产物，如氨基酸、维生素等，也会进入发酵的酒液中。因此，果酒和啤酒营养价值较高。 2、醋 食品店或超市出售的醋中，除了白醋是由化学合成的食品级醋酸勾兑的外，其他的则是由醋酸菌在好氧条件下发酵，将固体发酵产生的酒精转化为醋酸生产的。由于使用的微生物菌种或曲种的差异，在葡萄糖发酵过程中会产生乳酸或其他有机酸，因而使醋有不同的风味。 3、酱油 酱油生产以大豆为主要原料，其他有麦麸、小麦、玉米等，将上述原料经粉碎制成固体培养基，在好氧条件下，利用产生蛋白酶的霉菌，如黑曲霉进行发酵。微生物在生长过程中会产生大量的蛋白酶，将培养基中的蛋白质水解成小分子的肽和氨基酸，然后淋洗、调制成酱油产品。酱油富含氨基酸和肽，具有特殊香味。 4、酸奶 牛奶在厌氧条件下，由乳酸菌发酵，将乳糖分解，并进一步发酵产生乳酸和其他有机酸，以及一些芳香物质和维生素等；同时蛋白质也部分水解。因此，酸奶是营养丰富、易消化，少含乳糖，是适合于有乳糖不适应症者的优良食品。 5、醪糟 又称酒酿，是大米经蒸煮后，接种根霉，在好氧条件下，发酵生产的含低浓度酒精和不同糖分的食品。根霉在生长时会产生大量的淀粉酶，将大米中的淀粉水解成葡萄糖，同时利用部分葡萄糖发酵产生酒精。由于使用的根霉菌种不同，可以生产不同酒精度、不同甜度和不同香味的醪糟。 6、面包 面包均是利用活性干酵母（面包酵母）经活化后，与面粉混合发酵，再加入各种添加剂，经烤制生产的。面粉发酵后淀粉结构发生改变，变得易于消化、营养易于吸收。 糖果、饼干、果冻等添加了红曲色素，以调节色泽； 果汁、饼干、面包、点心、方便面等添加了黄原胶，起悬浮、稳定、增稠、改善口感、防止粘牙、延长储存期等作用； 各类罐头，包括蔬菜、水果、蘑菇、鱼类、肉类、蛋类罐头，香肠，包装奶等添加了乳链杆菌肽，以保鲜、防腐，保存营养和改善口感等； 各种果汁、啤酒和饮料中均需使用柠檬酸或乳酸作为酸味剂调节口味、口感； 饭店、食堂和家庭制作的菜肴中常加味精或肌苷，以增加鲜味。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    微生物生长曲线的特点与知识拓展及实践应用！ 一、知识简介 微生物生长曲线是以微生物数量（活细菌个数或细菌重量）为纵坐标，培养时间为横坐标画得的曲线。一般说，微生物（细菌）重量的变化比个数的变化更能在本质上反应出生长的过程。曲线可分为三个阶段即生长率上升阶段（对数生长阶段）、生长率下降阶段及内源呼吸阶段。 二、特点介绍 典型的微生物生长曲线包括四个时期：迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期。  1、迟缓期 特点：生长速率常数为零、菌体粗大、RNA含量增加、代谢活力强、对不良环境的抵抗能力下降。 成因：微生物刚刚接种到培养基之上，其代谢系统需要适应新的环境，同时要合成酶、辅酶、其他代谢中间代谢产物等，所以此时期的细胞数目没有增加。  2、对数期 特点：生长速率最快、代谢旺盛、酶系活跃、活细菌数和总细菌数大致接近、细胞的化学组成形态理化性质基本一致。 成因：经过调整期的准备，为此时期的微生物生长提供了足够的物质基础，同时外界环境也是最佳状态。  3、稳定期 特点：活细菌数保持相对稳定、总细菌数达到最高水平、细胞代谢产物积累达到最高峰、是生产的收获期、芽孢杆菌开始形成芽孢。 成因：营养的消耗使营养物比例失调、有害代谢产物积累、PH值EH值等理化条件不适宜。  4、衰亡期 特点:细菌死亡速度大于新生成的速度、整个群体出现负增长、细胞开始畸形、细胞死亡出现自溶现象。 成因：主要是外界环境对继续生长越来越不利、细胞的分解代谢大于合成代谢、继而导致大量细菌死亡。 三、生长与繁殖 微生物在适宜的环境条件下，不断地吸收营养物质，并按照自己的代谢方式进行代谢活动，如果同化作用大于异化作用，则细胞质的量不断增加，体积得以加大，于是表现为生长。简单地说，生长就是有机体的细胞组分与结构在量方面的增加。 单细胞微生物如细菌，生长往往伴随着细胞数目的增加。当细胞增长到一定程度时，就以二分裂方式，形成两个基本相似的子细胞，子细胞又重复以上过程。在单细胞微生物中，由于细胞分裂而引起的个体数目的增加，称为繁殖。在一般情况下，当环境条件适合，生长与繁殖始终是交替进行的。从生长到繁殖是一个由质变到量变的过程，这个过程就是发育。 微生物处于一定的物理、化学条件下，生长发育正常，繁殖速率也高；如果某一或某些环境条件发生改变，并超出了生物可以适应的范围时，就会对机体产生抑制乃至杀灭作用。 四、知识拓展 1、微生物曲线出现的前提条件 （1）只能用同一种细菌的子细胞群体的变化规律表达微生物的生长，若接种多种细菌则会发生种间竞争而不能测定一种微生物的生长规律。 （2）用液体培养基才能更方便地通过样品推测细菌总数。 （3）培养基的容积恒定才能反映出微生物生长规律与环境的关系 （4）在接种时要保证一定的接种量，才能缩短调整期。 2、增大接种量可以缩短调整期的原因 调整期的长短与菌种、培养条件等因素有关，增大接种量可以缩短调整期,实际上利用的生物的一种群体效应，也就是通过种内的相互关系(如种内互助)，使之更快地适应新环境，从而缩短调整期。像引进一种动物到新环境一样,如果引入少数个别的动物,那么就需要更长的适应时间甚至有可能无法生存;但如果引进的是一个种群,那么就会大大缩短适应的时间。另外，生物的生命活动也会影响环境，如果生物的数量多些，对环境的影响更大些，从而使环境变得更适合生物的生存,从而缩短调整期。 3、连续培养 过程及实质：在一个流动装置中，以定速度不断地添加新的培养基，同时以同速度不断放出老的培养基，以保证微生物对营养物质的需要，并排出部分有害代谢产物，使微生物保持较长时间的高速生长。实质是人为延长微生物生长的稳定期。 优点：缩短了培养周期，提高了设备利用率，便于自动化管理。  五、实践应用 根据微生物的生长曲线可以明确微生物的生长规律，对生产实践具有重大的指导意义。故根据对数期的生长规律可以得到培养菌种时缩短工期的方法：接种对数期的菌种，采用最适菌龄，加大接种量，用与培养菌种相同组成的培养基。有如，根据稳定期的生长规律，可知稳定期是产物的最佳收获期，也是最佳测定期，通过对稳定期到来原因的研究还促进了连续培养原理的提出和工艺技术的创建。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     塔宾曲霉的培养方法与实验内容及注意事项！ 塔宾曲霉的特征是具红褐至褐黑色的菌落，较长的分生孢梗茎和较小的分生孢子。主要用于研究和生产及酿造白酒。 一、菌种简介平台编号：Bio-66804 规格：冻干物拉丁属名：Aspergillus Tubingensis 中文名称：塔宾曲霉拉丁名称：Aspergillus tubingensis来源历史：←湖南轻工研究院(6.336)收藏时间：2008/12/3原始编号：XQ0739资源归类编码：15151913102模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产特征特性：菌落质地呈棉絮状。基部菌丝初为白色，后变为淡蓝灰色，反面淡蓝灰色。孢子囊梗匍匐生长，白色羊毛状，具伞房花序状分枝。孢子囊顶生，梨形，壁光滑。囊托漏斗形，孢囊孢子球形，无色。产糖化酶。具体用途：酿造白酒。生物危害程度：四类培养基编号：CM0015培养基名称：查氏琼脂(Czapek's Agar)培养基成分：蔗糖 30.0g，NaNO3 3.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 1.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.0～6.5。培养温度：28-30℃需氧类型：好氧保存方法：真空冷冻干燥法用途：酿造白酒。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基*查氏琼脂(Czapek's Agar)蔗糖 30.0g，NaNO3 3.0g，MgSO4・7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4・4H2O 0.01g，K2HPO4 1.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.0～6.5。  三、保藏条件安瓿瓶冻干菌种和培养物应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油保藏温度为-80°C;请勿长期置于室温。  四、培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后 2 个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 DMS114人小细胞肺癌细胞的应用与培养操作步骤！ 一、背景 DMS114人小细胞肺癌细胞是一种人小细胞肺癌(SCLC)细胞系，由美国国家癌症研究所(NCI)的模式识别和分类系统实验室(PMCL)开发。该细胞系最初是从一名患有广泛分布的小细胞肺癌的患者身上分离出来的。DMS114细胞可以表达EGF和CR3补体，表达HLA I类和II类抗原。DMS114细胞可以用于3D细胞培养和癌症研究。 DMS114细胞系具有高度增殖能力和快速生长速度的特点，因此在肿瘤研究中被广泛使用。此外，该细胞系还表现出对多种化学治疗药物的敏感性，包括顺铂、依托泊苷、长春新碱等。 由于DMS114细胞系的特殊性质，它被广泛应用于临床前的药物筛选和临床试验中。例如，一些针对小细胞肺癌的新药已经在该细胞系上进行了测试，以评估其疗效和安全性。 二、DMS114人小细胞肺癌细胞复苏、传代、冻存操作 （一）DMS114人小细胞肺癌细胞复苏 ①新制100mm平皿1个，含12mL上述培养液； ②冻存管从液氮或-80℃中取出，37℃水浴1~2min,待完全溶解后尽快移入安全柜复苏； ③用无菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，顺时针摇匀； ④放入（37℃，5%CO2）培养箱中，过夜换液，2-4天长满。 注意：建议复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩，避免冻存管处于温差较大情况下发生爆炸造成人员伤害。 （二）DMS114人小细胞肺癌细胞传代 将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入2mL（/100mm皿/T25瓶）胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA），在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约1min取出。传代用6mL培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可1:2传代。 （三）DMS114人小细胞肺癌细胞冻存 冻存则用3mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为3支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存。 三、应用 DMS114人小细胞肺癌细胞可以用于FGFR1调控FGFR1扩增型肺癌增殖、上皮间质转化和转移的机制研究： 研究FGFR1的激活是否以及怎样促进FGFR1扩增型肺癌的EMT和转移,阐明FGFR1促进FGFR1扩增型肺癌EMT和转移的分子机制,并探究该机制在肺癌FGFR1靶向治疗中的临床意义。 方法：首先,我们分别采用FGFR1的配体成纤维细胞生长因子2(Fibroblast growth factor2,FGF2)和短干扰RNAs(Short interfering RNAs,siRNAs)在FGFR1扩增型肺癌细胞系中激活和抑制FGFR1,运用CCK8、Western blot、qPCR、划痕实验、Transwell迁移侵袭实验、免疫荧光染色等方法,鉴定细胞增殖、EMT、迁移侵袭等能力是否变化,并探究此过程的分子信号通路。 其次,我们运用MEK/ERK抑制剂AZD6244和持续自主磷酸化突变体ERK2R67S质粒和慢病毒,体内体外研究FGFR1激活后是否通过下游ERK1/2的磷酸化调控Y染色体性别决定区相关HMG盒蛋白2(Sry(Sex determining region of Y chromosome)-related HMG box 2,SOX2)的表达。再次,我们运用慢病毒转染的方法构建SOX2过表达和沉默的稳转细胞株,研究FGFR1是否通过SOX2促进增殖、EMT和转移。 进一步,运用FGFR1扩增型肺癌细胞系、及SOX2过表达的稳转FGFR1扩增型细胞株和免疫缺陷小鼠构建皮下和原位肺癌移植瘤模型,给予FGFR1抑制剂AZD4547,观察体内抑制FGFR1信号通路对肿瘤生长、SOX2表达、EMT和肿瘤转移的影响,以及体内验证SOX2在FGFR1扩增型肺癌的增殖、EMT、转移中的重要作用。最后,我们分析了肺癌患者数据库中FGFR1和SOX2过表达对临床预后的影响。 结果：FGFR1的激活促进FGFR1扩增型肺癌细胞系H1581和DMS114的增殖、EMT和迁移侵袭,而抑制FGFR1可抑制这些过程。FGFR1激活后通过下游ERK1/2的磷酸化上调SOX2的表达,并且持续自主磷酸化突变体ERK2R67S质粒上调SOX2的作用不被FGFR1抑制剂AZD4547或MEK/ERK抑制剂AZD6244抑制。ERK2R67S慢病毒稳转细胞株在体内同样促进SOX2表达。过表达SOX2体内体外均可促进细胞增殖、EMT、迁移侵袭和转移,并且不被FGFR1抑制剂AZD4547抑制;相反,SOX2沉默的稳转细胞株中激活FGFR1不能促进这些过程。重要的是,在SOX2沉默的稳转细胞株中,激活FGFR1不能促进这些过程。在皮下和原位肺癌移植瘤模型中,抑制FGFR1抑制肿瘤生长、SOX2表达、EMT和肿瘤转移。肺癌患者中,高表达FGFR1与高表达SOX2正相关,并均与生存期短相关。 结论：研究新发现了FGFR1的激活通过下游ERK1/2的磷酸化上调SOX2的表达,并在体外和体内证实FGFR1-ERK1/2-SOX2轴促进FGFR1扩增型肺癌的增殖、EMT和转移。该研究对FGFR1靶向治疗具有重要临床意义。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                微生物检测基础知识之接种、分离纯化和培养技术！ 一、接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。 1、接种和分离工具 ①接种针 ②接种环 ③接种钩 ④玻璃涂棒 ⑤接种圈 ⑥接种锄 ⑦小解剖刀 常用的接种方法有以下几种： ⑴划线接种 这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。 ⑵三点接种 在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。 ⑶穿刺接种 在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。 ⑷浇混接种 该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45°c左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。 ⑸涂布接种 与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。 ⑹液体接种 从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。 ⑺注射接种 该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。 ⑻活体接种 活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。 2、无菌操作 培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。 (1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞。 二、分离纯化 含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物（mixed culture）。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养（pureculture）。在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多种。 1、倾注平板法 首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40-50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。 2、涂布平板法 首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。 3、平板划线法 最简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，最后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。 4、富集培养法 富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。 5、厌氧法 在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器，把这支试管放在沸水0浴中加热数分钟，以便逐出培养基中的溶解氧。然后快速冷却，并进行接种。接种后，加入无菌的石蜡于培养基表面，使培养基与空气隔绝。另一种方法是，在接种后，利用n2或co2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。有时为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离的样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。 三、培养 1、根据培养时是否需要氧气，可分为好氧培养和厌氧培养两大类。 ⑴好氧培养：也称“好气培养”。就是说这种微生物在培养时，需要有氧气加入，否则就不能生长良好。在实验室中，斜面培养是通过棉花塞从外界获得无菌的空气。三角烧瓶液体培养多数是通过摇床振荡，使外界的空气源源不断地进入瓶中。 ⑵厌氧培养：也称“厌气培养”。这类微生物在培养时，不需要氧气参加。在厌氧微生物的培养过程中，最重要的一点就是要除去培养基中的氧气。一般可采用下列几种方法： a.降低培养基中的氧化还原电位：常将还原剂如谷胱甘肽、硫基醋酸盐等，加入到培养基中，便可达到目的。有的将一些动物的死的或活的组织如牛心、羊脑加入到培养基中，也可适合厌氧菌的生长。 b.化合去氧：这也有很多方法，主要有：用焦性没食子酸吸收氧气；用磷吸收氧气；用好氧菌与厌氧混合培养吸收氧气；用植物组织如发芽的种子吸收氧气；用产生氢气与氧化合的方法除氧。 c.隔绝阻氧：深层液体培养；用石蜡油封存；半固体穿刺培养。 d.替代驱氧 用二氧气碳驱代氧气；用氮气驱代氧气；用真空驱代氧气；用氢气驱代氧气；用混和气体驱代氧气。 2、根据培养基的物理状态，可分为固体培养和液体培养两大类。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    生物安全柜的结构与分级及工作原理与原则！ 一、知识简介 生物安全柜(biological safety cabin.BSC)是能防止实验操作处理过程中某些含有危险性或未知性生物微粒发生气溶胶散逸的箱型空气净化负压安全装置。其广泛应用于微生物学、生物医学、基因工程、生物制品等领域的科研、教学、临床检验和生产中，是实验室生物安全中一级防护屏障中最基本的安全防护设备。 二、生物安全柜的工作原理 生物安全柜的工作原理主要是将柜内空气向外抽吸，使柜内保持负压状态，通过垂直气流来保护工作人员；外界空气经高效空气过滤器( high-efficiency particulate air filter, HEPA过滤器)过滤后进入安全柜内，以避免处理样品被污染；柜内的空气也需经过HEPA过滤器过滤后再排放到大气中，以保护环境。 三、生物安全柜的结构 生物安全柜一般由箱体和支架两部分组成。箱体部分主要包括以下结构： 1、空气过滤系统 空气过滤系统是保证本设备性能最主要的系统，它由驱动风机、风道、循环空气过滤器和外排空气过滤器组成。其最主要的功能是不断地使洁净空气进入工作室，使工作区的下沉气流(垂直气流)流速不小于0.3m/s，保证工作区内的洁净度达到100级。同时使外排气流也被净化，防止污染环境。 该系统的核心部件为HEPA过滤器，其采用特殊防火材料为框架，框内用波纹状的铝片分隔成栅状，里面填充乳化玻璃纤维亚微粒，其过滤效率可达到99.99%~100%。进风口的预过滤罩或预过滤器，使空气预过滤净化后再进入HEPA过滤器中，可延长HEPA过滤器的使用寿命。 2、外排风箱系统 外排风箱系统由外排风箱壳体、风机和排风管道组成。外排风机提供排气的动力，将工作室内不洁净的空气抽出，并由外排过滤器净化而起到保护样品和柜内实验物品的作用，由于外排作用，工作室内为负压，防止工作区空气外逸，起到保护操作者的目的。 3、滑动前窗驱动系统 滑动前窗驱动系统由前玻璃门、门电机、牵引机构、传动轴和限位开关等组成，主要作用是驱动或牵引各个门轴，使设备在运行过程中，前玻璃门处于正常位置。 4、照明光源和紫外光源位于玻璃门内侧以保证工作室内有一定的亮度和用于工作室内的台面及空气的消毒。 5、控制面板上有电源、紫外灯、照明灯、风机开关、控制前玻璃门移动等装置，主要作用是设定及显示系统状态。 四、生物安全柜的分级 按照NSF49标准，生物安全等级1级(P1)的媒质是指普通无害细菌、病毒等微生物；生物安全等级2级(P2)的媒质是指一般性可致病细菌、病毒等微生物；生物安全等级3级(P3)的媒质是指烈性/致命细菌、病毒等微生物，但感染后可治愈；生物安全等级4级(P4)的媒质是指烈性/致命细菌、病毒等微生物，感染后不易治愈。此标准将生物安全柜分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级，可适用于不同生物安全等级媒质的操作。 五、生物安全实验室选用生物安全柜的原则 当实验室级别为一级时一般无须使用生物安全柜，或使用Ⅰ级生物安全柜。实验室级别为二级时，当可能产生微生物气溶胶或出现溅出的操作时，可使用Ⅰ级生物安全柜；当处理感染性材料时，应使用部分或全部排风的Ⅱ级生物安全柜；若涉及处理化学致癌剂、放射性物质和挥发性溶媒，则只能使用Ⅱ-B级全排风(B2型)生物安全柜。实验室级别为三级时，应使用Ⅱ级或Ⅲ级生物安全柜；所有涉及感染材料的操作，应使用全排风型Ⅱ-B级(B2型)或Ⅲ级生物安全柜。实验室级别为四级时，应使用Ⅲ级全排风生物安全柜。当人员穿着正压防护服时，可使用Ⅱ-B级生物安全柜。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    JHH-7人肝癌细胞系的性质与用途及生产工艺！ 一、背景 JHH-7人肝癌细胞系是一种人肝癌细胞系，由日本千叶医科大学肝癌研究所建立。这种细胞系被广泛应用于肝癌研究，包括肝癌的发病机制、药物治疗、基因表达谱等方面的研究。 JHH-7细胞系具有稳定的生长特性和形态特征，可以通过传代培养不断增殖。这种细胞系可以作为体外模型来研究肝癌的生长和转移，也可以用于药物筛选和基因治疗等方面的研究。 HH-7人肝癌细胞系是一种人类肝癌细胞系，它是由人肝癌组织中分离出来的。这种细胞系在医学研究中被广泛使用，因为它可以用于研究肝癌的生物学特性、药物筛选和治疗等。 二、JHH-7人肝癌细胞系具有以下特点 形态特征：JHH-7人肝癌细胞系呈多边形或长方形，大小不一，通常有较多的突起和伪足。 生长特性：JHH-7人肝癌细胞系生长迅速，可以在体外培养条件下持续传代。 耐药性：JHH-7人肝癌细胞系对多种化疗药物具有耐药性，这使得它成为研究肝癌耐药性的重要工具。 表达谱：JHH-7人肝癌细胞系表达多种与肝癌相关的基因和蛋白质，如AFP、CEA、CK19等。 应用前景：JHH-7人肝癌细胞系在肝癌的诊断、治疗和预防方面具有广阔的应用前景。 三、JHH-7人肝癌细胞系细胞培养操作 1)复苏JHH-7人肝癌细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)JHH-7人肝癌细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)JHH-7人肝癌细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 四、应用 JHH-7人肝癌细胞系可以用于生物钟基因PER1调节脂质代谢对西黄丸抗肝癌效应的影响： 探究肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中生物钟基因PER1与脂质代谢的关系、综合评价西黄丸抗肝癌效应及生物钟基因PER1对西黄丸抗肝癌效应的影响。 方法： 1、生物钟基因PER1与HCC脂质代谢相关研究:通过RT-PCR及Western Blot实验检测课题组五种HCC细胞株(JHH-7人肝癌细胞系、HuH-7、HepG2、SMMC-7721、HLF)中生物钟基因PER1表达量。使用搭载PER1沉默慢病毒(shPER1#1#2#3)及搭载空载质粒慢病毒(PER1-NC)转染PER1表达量最高HCC细胞株,体外构建生物钟基因PER1沉默稳转株。验证转染效率后,提取实验组细胞mRNA,检测AMPK、SREBP-1、ACC1、SCD1的表达情况。油红O染色检测细胞内脂滴含量。CCK-8检测PER 1沉默后HCC细胞的增殖情况。为进一步探讨PER 1调控HCC脂质代谢的分子机制,设置空载质粒组(NC组)、PER1沉默组(shPER1组)、shPER 1+AMPK抑制剂组(Compound C组),使用Western Blot检测AMPK、p-AMPK、SREBP-1及其下游脂代谢关键酶类的蛋白表达水平。 2、西黄丸抗肝癌效应研究:采用50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、4 0 0μg/mL西黄丸萃取液作用于HCC细胞(JHH-7人肝癌细胞系、HuH-7、HepG2、SMMC-7721、HLF),CCK-8实验检测24h、48h、72h后450nm处OD值,并绘制细胞增殖曲线;集落实验检测西黄丸对HCC细胞的集落生成率的影响;划痕实验检测西黄丸对HCC细胞的迁移率的影响;Transwell迁移及侵袭实验检测西黄丸对HCC细胞侵袭转移能力的影响;流式细胞仪和Annexin-V/PI法检测西黄丸对HCC细胞凋亡率的影响。 3、生物钟PER1影响西黄丸抗肝癌效应研究:设置对照组、空载质粒组(NC组)、PER1沉默组(shPER1组),400μg/mL西黄丸萃取液作用于NC组及shPER1组。CCK-8、集落实验检测三组实验细胞增殖能力;划痕、Transwell实验检测三组实验细胞迁移及侵袭转移能力。 4、西黄丸调节生物钟基因PER1研究:选取生物钟基因PER1表达量最高及最低的两株HCC细胞(JHH-7人肝癌细胞系、HuH-7、HepG2、SMMC-7721、HLF),分别使用5 0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL西黄丸萃取液进行干预。提取实验组细胞mRNA及蛋白后,RT-PCR及Western Blot检测生物钟基因PER1的表达量。 结果：RT-PCR及Western Blot实验结果表明,HCC细胞株JHH-7人肝癌细胞系的PER1表达量最高,HLF的PER1表达量最低(P 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 菌落总数检测的传统检测方法与快速检测技术！ 百欧博伟生物：食品安全事件的频频发生，使得民众对食品安全问题越来越关注。为了确保食品安全，政府部门除了要出台相关法律法规外，更为重要的是要建立起更为科学的食品安全性的检测技术。规范的检测方法是有效保障食品安全的重要环节，它要求检验数据具有更高的准确度和可信度。食品中菌落总数反映了食品在生产过程中的卫生情况，体现食品被细菌污染的程度，是做出科学卫生评价的重要指标之一。本文主要对国标法微生物检测中菌落总数测定采用的传统方法即平板计数法的注意事项进行相关的分析，并着重介绍了快速检测技术在菌落总数检测中的应用。 一、传统检测方法 1、传统检测方法的流程图 2、注意事项 国标法测菌群总数是以检样中的细菌细胞和营养琼脂混合后，每个细菌细胞都能形成一个可见的单独菌落的假定为基础的。由于检验中采用37℃于有氧条件下培养(空气中含氧约20％)，因而并不能测出每g或mL检样中实际的总活菌数，厌氧菌、微嗜氧菌和冷营菌在此条件下不生长，有特殊营养要求的一些细菌也受到了限制，因此所得结果，只包括一群能在普通营养琼脂中发育、嗜中温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。国标法检测应注意以下问题： 2.1 所用器皿及稀释液 2.1.1 检验中所用玻璃器皿，如培养皿，吸管、试管等必须是完全灭菌的，并在灭菌前彻底洗涤干净，不得残留有抑菌物质。 2.1.2 用作样品稀释的液体，每批都要有空白对照。如果在琼脂对照平板上出现几个菌落时，要追加对照平板，以判定是空白稀释液，用于倾注平皿的培养基，还是平皿吸管或空气可能存在的污染。 2.1.3 检样的稀释液虽可用灭菌盐水或蒸馏水，但以用磷酸缓冲盐水特别是0.1％蛋白胨水为合适，因蛋白胨水对细菌细胞有更好的保护作用，不会因为在稀释过程中而使食品检样中原已受损伤的细菌细胞导致死亡。如果对含盐量较高的食品(如酱品等)进行稀释，则需采用蒸馏水。 2.2 样品稀释 2.2.1 检样稀释时,无菌称取(或量取)有代表性的样品25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌稀释液的玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，经充分振摇作成1:10的稀释液。制备10倍系列稀释的样品匀液时，每一步都应该摇匀试管或反复吹吸，使菌体能够尽量分散均匀。如系肉、鱼等固体样品，最好剪细于灭菌乳钵内与稀释液研匀，或与稀释液同置于灭菌均质器杯中，以8000-10000rpm速度搅拌1分钟，使做成均匀的1：10稀释液。对于像食醋或酸性饮料等酸度较高的样品，如果直接用原样液来检测菌落总数，结果会偏低甚至为0 ，只有严格按标准要求先用灭菌的20-30%碳酸钠溶液将其PH值调至中性后方可准确检测出菌落总数。 2.2.2 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，将上述1:10的检样稀释液再做成几个适当的10倍递增稀释液。即取1:10稀释液1mL与9mL稀释液混和做成1:100的稀释液，然后依次递增稀释，做成1:1 000、1:10000等稀释液。注意每递增稀释一次，必须另换1支1mL灭菌吸管，这样所得检样的稀释倍数方为准确。 2.2.3 从吸管筒内取出灭菌吸管时，不要将吸管尖端碰着其他仍留在容器内的吸管的外露部分；而且吸管在进出装有稀释液的玻璃瓶和试管时，也不要触及瓶口及试管口的外侧部分；因为这些部分都可能接触过手或其他沾污物。 2.2.4 在作10倍递增稀释中，吸管插入检样稀释液内不能低于液面2.5cm；吸入液体时，应先高于吸管刻度，然后提起吸管尖端离开液面，将尖端贴于玻璃瓶或试管的内壁使吸。管内液体调至所要求的刻度，这样取样较准确，而且在吸管从稀释液内取出时不会有多余的液体粘附于管外。    2.2.5 当用吸管将检样稀释液加至另一装有9mL空白稀释液的试管内时，应小心沿管壁加入，不要触及管内稀释液，以防吸管尖端外侧部分粘附的检液也混入其中。 2.3 平板接种与培养 2.3.1 将稀释液加至灭菌平皿内时，应根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2—3个适宜稀释度，分别在作1O倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移lmL稀释液加入皿内(从皿侧加入，不要揭去皿盖)，最后将吸管直立使液体流毕，并在皿底干燥处再擦一下吸管尖将余液排出，而不要吹出。每个稀释度应作2个平皿。 2.3.2 培养温度，应根据食品种类而定。肉、乳、蛋类食品用37℃培养，水产品用30℃培养。培养时间为48±2h。其他食品，如清凉饮料，调味品，糖果、糕点．果脯，酒类(主要为发酵酒)、豆制品和酱腌莱均系用37℃24±2h培养。培养温度和时间之所以有这种不同的区分，是因为在制定这些食品卫生标准中关于菌落总数的规定时，分别采用了不同的温度和培养时间所取得的数据之故。水产品因来自淡水或海水，水底温度较低，因而制定水产品细菌方面的卫生标准时，系用30℃作为培养的温度。 2.4 菌落计数 2.4.1 在进行菌落计数时，有一些样品的残渣会在视觉上与菌落混淆，因此，在进行计数时应该仔细分辨。菌落的形状相对规则，比较有光泽度，更饱满，而样品的残渣比较不规则，没有菌落的饱满度和光泽度。另外，还可向培养基中添加一定浓度的TTC，可以使菌落成红色，便于观测和计数，但TTC的浓度不宜过高，否则会抑制菌落的生长。 2.4.2 从温箱内取出平皿进行菌落计数时，应先分别观察同一稀释度的两个平皿和不同稀释度的几个平皿内平板上菌落生长情况。平行试验的2个平板与菌落数应该接近，不同稀释度的几个平板上菌落数则应与检样稀释倍数成反比，即检样稀释倍数越大，菌落数越低，稀释倍数越小，菌落数越高。 2.4.3 菌落计数所得结果，可分别按以下几种不同情况作报告。 2.4.3.1 若1个稀释度的平均菌落数在30—300之间，则将该菌落数乘其稀释倍数报告之。 2.4.3.2 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30—300之间，则视二者之比如何来决定。若其比值小于2，应报告其平均数。 2.4.3.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 2.4.3.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 二、快速检测新技术 1、3M测试片快速分析技术 1.1 3M测试片快速分析技术概念 3M测试片法是一种便捷可再生水化干膜，适用于细菌和真菌的计数。 1.2 检测步骤 只需三步就可实现快速准确的测定。(以大肠杆菌的为例) 1.3 结果判读 ①测试片中含有一种红色指示染剂可使菌落着色，计算所有红色菌落(不论其大小和颜色深浅均计算之)。 ②测试片上没有任何菌落生长。 ③有不多的菌落。 ④测试片菌落数适宜计数范围是25-250。 ⑤测试片面积约为20平方厘米，当菌落数超过250个，如5所示，为了估计菌落数，可选择其中一个或数个有代表性菌落的小方格(1cm2)，计算平均菌落数，再乘以20可得到整个测试片上的菌落数。 ⑥测试片上菌落太多而无法计数。 ⑦有很多高数量菌落，使整个生长区变粉色，应计录为菌落太多无法计数。 ⑧有时菌落分布出现不均衡，如8所示,这也记录为菌落太多无法计数。 ⑨测试片上的菌落,最先粗略一看是可计数的，然而，你密切注意到生长区边缘，能看到高密度的菌落，应记录为菌落太多无法计数。 1.4 测试片法特点 1.4.1 工作效率的极大提高 根据大量数据统计，使用 3M测试片技术， 可以提高实验室工作效率 118% 以上。劳动资源的最佳使用带来生产能力的提高，最终的效果就是效益的增加。 1.4.2 标准化的检测方法 品质稳定的快速测试片克服了传统的测试方法存在的由于使用不同批次的培养基，不同的配制条件，不同配制人员而导致的差异性。 1.4.3 国际化的认证方法 3M快速测试的方法得到包括 AOAC，AFNOR 在内的国际权威机构的认证，在全球许多国家也已获得官方机构的正式批准，从而可以确保检测结果的可靠性和在世界各地的广泛认可。 1.4.4 快速得到检测结果 对比传统的测试方法， 3M快速测试片缩短检测时间，使您在更短的时间内获得样品的测试结果，能更加迅速地采取有效的措施解决发现的问题。 1.4.5 方便进行HACCP 认证 由于检测速度快，检测项目全，准确性高。3M为食品生产工艺过程中关键控制点的监控提供了较为完整的系列产品，可以对包括生产线，生产设备和环境在内的各个环节进行全面的测试。 2、ATP法 2.1 ATP荧光法检测总菌落数原理 萤火虫会发光是由于它能合成将化学物质的化学能转变为光能的生物催化剂—荧光素酶、虫荧光素(D-luciferin)以及所有细胞生物都产生的生物能量物质—三磷酸腺苷（ATP）。在有氧的条件下，虫光素酶催化虫荧光素和ATP之间发生氧化反应，形成氧化荧光素并发出荧光，其生化反应式如下： 2.2 ATP法特点： 2.2.1 具有成本低，操作简单，响应速度快等特点， 2.2.2 微生物 ＡＴＰ 生物发光法在国外已被广泛地运用于食品中菌落总数的测定。 3、MTT法 3.1 MTT法检测原理 检测原理为活体微生物线粒体中含有琥珀酸脱氢酶，能使外源性MTT（噻唑蓝）还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。Formazan结晶形成的量与活菌数成正比。用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活菌细胞数量。 3.2 应用实例：巴氏消毒奶中活菌素快速检测 取巴斯消毒奶10mL ，至于无菌离心管中3000rpm离心5分钟，弃去上清。加入10mL无菌生理盐水洗涤离心管，再次3000rpm离心5分钟，弃去上清取出奶液基质。加入1mL生理盐水重悬底部的微生物，取0.2mL到96孔酶标板中，同时加入标准菌液做标准曲线，统一加入底物反应30分钟，读数。 3.3 该方法的特点：检测快速，灵敏度高。 4、流式细胞术 4.1 流式细胞术检测原理 检测原理：细胞经特异荧光素标记后，通过激光照射，产生特异荧光信号，通过对这些荧光信号的检测和定量计算出菌群总数。 4.2 特点：快速、便捷结果可靠、便于操作。 三、结语 菌落总数是微生物检测中最常见的项目，在检验的每一个环节都应该小心谨慎，精准操作，确保检测结果的准确度。国标法采用的平板计数法是我们最常用的检测方法，但是操作过程较为复杂，时间较长；而其他方法操作简便，省时，但是有的成本相对较高，并且有的只针对特定的食品种类。我们应该积极关注新的科学技术在检测方法中的应用，让检测更加精确、经济、便捷和可靠。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 SW837人结直肠腺癌上皮细胞的特点及培养操作！ 一、背景 SW837人结直肠腺癌上皮细胞是一种来源于人结肠癌的细胞系，常用于研究结肠癌的生物学特性、药物筛选和治疗策略。 二、该细胞系具有以下特点 来源：SW837细胞系来源于人结肠癌组织，经过多次传代和筛选，形成了一个相对稳定的细胞系。 形态特征：SW837细胞呈多边形或长条形，大小约为15-30微米，胞质丰富，核大而圆，核仁明显。 生长特性：SW837细胞生长迅速，传代周期约为24-48小时，可在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中稳定生长。 侵袭转移特性：SW837细胞具有较强的侵袭和转移能力，可通过Transwell小室实验等方法检测其侵袭和转移能力。 其他特性：SW837细胞还具有一定的增殖能力，可用作研究结肠癌细胞增殖相关疾病的模型。 三、SW837细胞系培养操作 1)复苏SW837细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)SW837细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)SW837细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 四、应用 SW837人结直肠腺癌上皮细胞可以用于MST1激活JNK/p53通路抑制线粒体自噬调控直肠癌细胞生长的研究： 本研究旨在探索MST1调控直肠癌细胞生长的机制。研究MST1对直肠癌细胞凋亡、增殖和迁移的影响是否通过干扰线粒体自噬来实现,并进一步探讨MST1影响线粒体自噬的分子机制,为靶向治疗直肠癌提供新策略。 研究方法：体外实验:明确MST1对直肠癌细胞系SW 837生物学行为的影响及可能机制。分三部分。 通过Western blots技术检测直肠癌细胞系SW 837和正常肠粘膜细胞FHC中MST1的表达情况。通过腺病毒转染技术,使SW 837中MST1水平显著上升,建立过表达MST1稳定细胞系。通过MTT法,TUNEL法、BrdU法和Transwell法分析MST1对直肠癌细胞凋亡、增殖和迁移的影响。通过Western blots技术检测凋亡、增殖和迁移相关蛋白的表达水平。 通过JC1染色,mPTP开放实验、Cyt-c免疫荧光以及ATP和ROS水平测定MST1对线粒体功能的影响。通过Western blots技术检测线粒体自噬相关蛋白,并利用线粒体和溶酶体的免疫荧光共染色分析MST1对线粒体自噬的影响。 利用线粒体自噬激活剂FCCP、JNK抑制剂SP600125(SP)和P53siRNA,通过Western blots技术、免疫荧光等方法来探讨MST1与线粒体自噬之间可能的信号通路。 体内实验：验证MST1在体内对裸鼠直肠癌细胞移植瘤生长的影响。将对照组SW 837和过表达MST1的SW 837移植到裸鼠腋部皮下,45天后处死,取出移植瘤,测量移植瘤体积和重量。通过Western blots、qRT-PCR方法检测移植瘤组织中JNK、Caspase 3和Caspase 9的表达情况及Cyclin D和Cyclin E的mRNA水平。同时对移植瘤组织进行HE染色和免疫组化分析。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     ATCC 10825粘液真杆菌的特点与优势及培养！ 黏液杆菌是Mucilaginibacter属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类；研究；教学。 一、菌种简介平台编号：Bio-80141 规格：Freeze-Dried 拉丁属名：Eubacterium Limosum 菌株名称：粘液真杆菌用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Eubacterium limosum (Eggerth) Prevot 拉丁名(ATCC? 10825?) 统一编号Deposited As Butyribacterium rettgeri Barker and HaasStrain Designations 菌株别名 32 of group A2Biosafety Level 生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Comments 注释 Referred to as the type strain of Butyribacterium rettgeriProduct Format 提供形式 freeze-driedPreceptrol? noType Strain 模式菌株 noMedium 培养基 ATCC? Medium 7: Actinomyces brothGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度 : 37.0℃Atmosphere 需氧情况 : AnaerobicName of Depositor 寄存人 HA BarkerReferences 参考文献 Barker HA, Haas V. Butyribacterium, a new genus of gram-positive, non-sporulating anaerobic bacteria of intestinal origin. J. Bacteriol. 47: 301-305, 1944. 三、形态特征细胞革兰氏染色阴性，兼性厌氧，杆状，约0.35C0.42×1.24C1.37微米。R2A平板上菌落为圆形、凸起、光滑、淡橙色。pH值在4～8.5之间，最佳值为6。生长在4-35℃（最佳温度30℃）。在R2A含0.1- 1%（w/v）NaCl生长，没有NaCl是最佳的。在R2A和营养琼脂培养基生长，但在麦康凯和LB琼脂上不长。过氧化氢酶和氧化酶阳性。硝酸盐还原阴性。不产生硫化氢。水解木聚糖、秦皮甲素和CM-纤维素是阳性的，但明胶不水解。有碱性磷酸酶、亮氨酸芳基酰胺、β-半乳糖苷酶、酸性磷酸酶和N-乙酰基-β-氨基葡糖苷酶活性，弱阳性缬氨酸酶，α-半乳糖苷酶、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶和类脂酯酶(C8)。主要的呼吸醌MK-7和主要脂肪酸为summed feature 3、iso-C15 : 0、C16 : 0、iso-C17 : 0 3-OH、iso-C17 : 1ω9c、C16 : 1ω5c。DNA G+C含量为40 mol%。  四、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 五、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 六、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                    胶质芽孢杆菌的特点及未来展望和应用前景！ 百欧博伟生物：随着全球渔业的发展和水产养殖规模的不断扩大，面临的问题也日益突显。水产养殖业常常面临疾病爆发、水质污染和饲料利用率低等挑战。在这样的背景下，胶质芽孢杆菌作为一种有益微生物，已经成为水产养殖业的关注焦点。 一、胶质芽孢杆菌的特点 胶质芽孢杆菌是一种革兰氏阳性细菌，具有良好的耐酸、耐盐能力，可在不利环境下存活。其还能够产生各种生物活性物质，包括有益酶类和抗菌肽等。这些特点为其在水产养殖中发挥作用奠定了基础。 1、水质改善 水质是水产养殖中的一个关键因素，而胶质芽孢杆菌在水体中可以起到一定的净化作用。胶质芽孢杆菌能够分解有机废物和非生物有机物，降解鱼类排泄物和残留饲料，促进水质中有机负荷的降解和循环利用。另外，胶质芽孢杆菌还能够抑制一些产氨菌和硫化物产生菌的生长，减少水体中有害化合物的积累。通过应用胶质芽孢杆菌，水质质量得到改善，提高了水产养殖动物的生长环境。 2、预防水产疾病 胶质芽孢杆菌通过竞争性排除和抑制病原微生物的生长，降低水产动物发病率，有效预防水产疾病的发生，降低养殖风险。 3、饲料添加剂 胶质芽孢杆菌作为饲料添加剂，在水产养殖中也有着广泛的应用。通过添加胶质芽孢杆菌到饲料中，可以改善饲料的消化利用率，提高水产养殖动物的生长性能。胶质芽孢杆菌能够分解饲料中的纤维素、淀粉和蛋白质等复杂成分，促进饲料的消化和吸收。此外，胶质芽孢杆菌还能够调节肠道菌群平衡，改善消化道健康状况，减少消化道疾病的风险。 4、疾病防控 胶质芽孢杆菌具有抗菌活性，对一些水产养殖中常见的致病菌有很好的抑制作用。将胶质芽孢杆菌引入水体中，可以降低水产养殖动物感染病原菌的风险，减少疾病的发生。研究表明，胶质芽孢杆菌能够产生抗菌物质，对一些耐药菌株也具有很好的抑制效果。 二、未来展望和应用前景 胶质芽孢杆菌作为一种生态友好的养殖利器，其在水产养殖业中的应用前景广阔。未来的研究应重点关注胶质芽孢杆菌的应用技术、剂量和适用种类等方面，并探索其与其他环境优化技术的联合应用，以进一步提高养殖效益和环境可持续性。 胶质芽孢杆菌作为一种有益微生物，在水产养殖业中具有广阔的应用前景。其在疾病防控、水质改善和饲料添加剂等方面的作用已被科学研究证实。合理应用胶质芽孢杆菌可以提高水产养殖动物的养殖效益，减少疾病发生风险，改善水质环境。然而，还需要进一步的研究来完善胶质芽孢杆菌的应用方法和推广策略，以进一步提升其在水产养殖业中的应用效果。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  184A1人乳腺上皮细胞系的应用及培养操作步骤！ 一、背景 184A1人乳腺上皮细胞系是一种常用的细胞系，被广泛应用于乳腺上皮细胞相关的基础研究和应用研究。以下是关于该细胞系的一些基本信息： 背景：184A1细胞系来源于一名女性乳腺癌患者的手术标本，并通过一系列的传代培养而建立。这些细胞形态上类似于正常的乳腺上皮细胞，但具有无限增殖的能力。 形态特征：上皮细胞样。 培养条件：通常需要在37°C、5%CO2和95%湿度的条件下进行培养，并使用特定的培养基进行营养支持。 用途：广泛用于研究乳腺癌的发生、发展、治疗和预防等方面，以及测试新的药物和治疗方法的效果。 二、184A1人乳腺上皮细胞系培养操作 1)复苏184A1人乳腺上皮细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)184A1人乳腺上皮细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)184A1人乳腺上皮细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 184A1人乳腺上皮细胞系可以用于趋化因子受体CCR7在乳腺癌细胞转移中的机制探讨： 利用RNA干扰技术,以乳腺癌细胞为研究对象,下调乳腺癌细胞系中的基因CCR7的表达对乳腺癌细胞转移的影响,并行蛋白质谱检测,研究沉默CCR7后哪些蛋白和信号分子参与CCR7的调控作用,对探讨CCR7与乳腺癌转移的内在机制,发现新的诊断标记物及治疗靶点具有积极的意义。 方法： 1、常规培养乳腺癌细胞系MDA-MB-231、4T1-luc、MDA-MB-361、T47D、MDA-MB-468、MCF-7、MCF10A、184B5、184A1人乳腺上皮细胞系、HCC1806、HCC1937、HCC1580、MCF10A,用q-PCR和Westen blot实验筛选出高表达CCR7的乳腺癌细胞系。 2、对筛选出来的乳腺癌细胞株进行转染,提取实验组(CCR7-siRNA)和对照组的总RNA和总蛋白,用q-PCR和Western blot检测干扰效果。 3、利用划痕实验和transwell小室迁移实验检测了siCCR7转染对乳腺癌细胞迁移的影响。 4、通过蛋白质谱结果筛选出差异表达蛋白,并用q-PCR验证参与CCR7的调控作用关键蛋白。 结果： 1、高表达CCR7的乳腺癌细胞系的筛选q-PCR结果显示:人乳腺癌细胞株T47D、HCC1500、SK-RB-3、BT474、MCF7的CCR7的mRNA表达水平较其他乳腺癌细胞株高。高表达CCR7的乳腺癌细胞系的筛选Western blot结果显示:CCR7在小鼠乳腺癌细胞株4T1-Luc、人乳腺癌细胞株T74D、MCF7中高表达,在部分乳腺癌细胞株中如MB231、MB468、HCC1937中有较高水平的表达。但是在正常乳腺细胞株如184B5、184A1人乳腺上皮细胞系和MCF10A中几乎无CCR7表达。最后我们选取MCF7及T47D乳腺癌细胞进行后续的实验。 2、T47D、MCF7细胞在经过siRNA处理后,通过q-PCR检测对T47D、MCF7乳腺癌细胞的沉默效应,结果显示CCR7-siRNA和CCR7-siRNA能非常有效地抑制T47D、MCF7细胞中内源性CCR7的mRNA水平的表达。Western blot得到相似的结果。 3、乳腺癌细胞系MDA-MB-231、4T1-luc、MDA-MB-361、T47D、MDA-MB-468、MCF-7、MCF10A、184B5、184A1人乳腺上皮细胞系、HCC1806、HCC1937、HCC1580、MCF10A划痕实验和transwell小室迁移实验结果均表明,与shLacZ组比,shCCR7C组和shCCR7D组乳腺癌细胞迁移能力变弱。 4、乳腺癌细胞系MDA-MB-231、4T1-luc、MDA-MB-361、T47D、MDA-MB-468、MCF-7、MCF10A、184B5、184A1人乳腺上皮细胞系、HCC1806、HCC1937、HCC1580、MCF10A通过蛋白质谱结果筛选出差异表达蛋白如下:EPHA2、PVR、SQSTM1、ANXA6、PTRF、ALDH3A2、EPCAM。并用q-PCR方法及Western blot方法验证沉默CCR7后ALDH3A2和PTRF可能参与CCR7的调控作用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      细菌革兰氏、芽孢和荚膜染色法及其注意事项！ 一、革兰氏染色法 （一）原理： 用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。 简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态，简单染色不能辨别细菌细胞的构造。革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。  （二）方法： 1、以酒精擦拭玻片，在酒精灯上干燥后，用接种环挑取一环灭菌的去离子水或生理盐水到载玻片上，挑取少量纯培养物在水滴上涂抺至均匀分散，将涂片在酒精灯火焰上灭活、固定。 2、滴加结晶紫染色液1-2滴，染1分钟，用去离子水轻轻水洗。 3、待干，滴加革兰氏碘液，作用1分钟，用去离子水轻轻水洗。 4、滴洗脱色剂（95%酒精），不时摇动玻片，直至无紫色脱落为止（约10～20秒），用去离子水轻轻水洗。 5、待干，滴加沙黄复染液，复染30秒。用去离子轻轻水洗，待玻片干燥后镜检。 6、油镜镜检。菌体呈紫色者为革兰氏阳性菌；呈红色者为革兰氏阴性菌。  （三）注意事项 1、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定。 2、染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。 3、选用幼龄的细菌。G+菌培养12h-16h，E.coli培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。 二、细菌芽孢染色法 （一）原理 细菌的芽胞具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽胞不着色（芽胞呈无色透明状）。芽胞染色法就是根据芽胞既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽胞染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽胞着色。当染芽胞时，菌体也会着色，然后水洗，芽胞染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽胞呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽胞，便于观察。 （二）方法 1、改良的Schaeffer和Fulton氏染色法 （1）制备菌液：加1-2滴无菌水于小试管中，用接种环从斜面上挑取2-3环的菌体于试管中并充分打匀，制成浓稠的菌液。 （2）加染色液：加5%孔雀绿水溶液2-3滴于小试管中，用接种环搅拌使染料与菌液充分混合。 （3）加热：将此试管浸于沸水浴（烧杯），加热15-20min。 （4）涂片：用接种环从试管底部挑数环菌液于洁净的载玻片上，做成涂面，晾干。 （5）固定：将涂片通过酒精灯火焰3次。 （6）脱色：用水洗直至流出的水中无孔雀绿颜色为止。 （7）复染：加蕃红水溶液染色5min后，倾去染色液，不用水洗，直接用吸水纸吸干。 （8）镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜观察。结果：芽胞呈绿色，芽胞囊和菌体为红色。 2、Schaeffer与Fulton氏染色法 （1）涂片：按常规方法将待检细菌制成一薄的涂片。 （2）晾干固定：待涂片晾干后在酒精灯火焰上通过2-3次。 （3）染色：  ①加染色液：加5%孔雀绿水溶液于涂片处（染料以铺满涂片为度），然后将涂片放在铜板上，用酒精灯火焰加热至染液冒蒸汽时开始计算时间，约维持15-20min。加热过程中要随时添加染色液，切勿让标本干涸。（加热时温度不能太高）。  ②水洗：待玻片冷却后 ，用水轻轻地冲洗，直至流出的水中无染色液为止。  ③复染：用蕃红液染色5min。 （4）水洗、晾干或吸干。 （5）镜检：先低倍，再高倍，最后在油镜下观察芽胞和菌体的形态。结果：芽胞呈绿色，菌体为红色。 （三）注意事项 1、供芽胞染色用的菌种应控制菌龄。 2、改良法在节约染料、简化操作及提高标本质量等方面都较常规涂片法优越，可优先使用。 3、用改良法时，欲得到好的涂片，首先要制备浓稠的菌液，其次是从小试管中取染色的菌液时，应先用接种环充分搅拌，然后再挑取菌液，否则菌体沉于管底，涂片时菌体太少。 三、细菌的荚膜染色法 （一）原理： 由于荚膜与染料间的亲和力弱，不易着色，通常采用负染色法染荚膜，即设法使菌体和背景着色而荚膜不着色，从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。由于荚膜的含水量在90%以上，故染色时一般不加热固定，以免荚膜皱缩变形。 （二）方法 推荐以下四种染色法，其中以湿墨水方法较简便，并且适用于各种有荚膜的细菌。如用相差显微镜检查则效果更佳。 1、负染色法： （1）制片：取洁净的载玻片一块，加蒸馏水一滴，取少量菌体放入水滴中混匀并涂布。 （2）干燥：将涂片放在空气中晾干或用电吹风冷风吹干。 （3）染色：在涂面上加复红染色液染色2-3min。 （4）水洗：用水洗去复红染液。 （5）干燥：将染色片放空气中晾干或用电吹风冷风吹干。 （6）涂黑素：在染色涂面左边加一小滴黑素，用一边缘光滑的载玻片轻轻接触黑素，使黑素沿玻片边缘散开，然后向右一拖，使黑素在染色涂面上成为一薄层，并迅速风干。 （7）镜检：先低倍镜，再高倍镜观察。结果：背影灰色，菌体红色，荚膜无色透明。 2、湿墨水法 （1）制菌液：加1滴墨水于洁净的载玻片上，挑少量菌体与其充分混合均匀。 （2）加盖玻片 放一清洁盖玻片于混合液上，然后在盖玻片上放一张滤纸，向下轻压，吸去多余的菌液。 （3）镜检：先用低倍镜、再用高倍镜观察。 结果：背景灰色，菌体较暗，在其周围呈现一明亮的透明圈即为荚膜。 3、干墨水法 （1）制菌液：加1滴6%葡萄糖液于洁净载玻片一端，挑少量胶质芽胞杆菌与其充分混合，再加1环墨水，充分混匀。 （2）片：左手执玻片，右手另拿一边缘光滑的载玻片，将载玻片的一边与菌液接触，使菌液沿玻片接触处散开，然后以30度角，迅速而均匀地将菌液拉向玻片的一端，使菌液铺成一薄膜。 （3）干燥：空气中自然干燥。 （4）固定：用甲醇浸没涂片，固定1 min，立即倾去甲醇。 （5）干燥：在酒精灯上方，用文火干燥。 （6）染色：用甲基紫染1-2min。 （7）水洗：用自来水轻洗，自然干燥。 （8）镜检：先用低倍镜再高倍镜观察。结果：背景灰色，菌体紫色，荚膜呈一清晰透明圈。 4、Tyler法 （1）涂片：按常规法涂片，可多挑些菌体与水充分混合，并将粘稠的菌液尽量涂开，但涂布的面积不宜过大。 （2）干燥：在空气中自然干燥。 （3）染色：用Tyler染色液染5-7min。 （4）脱色：用20%CuSO4水溶液洗去结晶紫，脱色要适度（冲洗2遍）。用吸水纸吸干，并立即加1-2滴香柏油于涂片处，以防止CuSO4结晶的形成。 （5）镜检：先用低倍镜再用高倍镜观察。观察完毕后注意用二甲苯擦去镜头上的香柏油。结果：背景蓝紫色，菌体紫色，荚膜无色或浅紫色。 （四）注意事项 1、加盖玻片时不可有气泡，否则会影响观察。 2、应用干墨水法时，涂片要放在火焰较高处并用文火干燥，不可使玻片发热。 3、在采用Tyler法染色时，标本经染色后不可用水洗，必须用20%CuSO4冲洗。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                      NRK（大鼠肾细胞）的特点与培养及应用！ 一、背景 NRK（大鼠肾细胞）是一种来源于正常大鼠肾脏的细胞系，常用于研究肾脏生物学、药物筛选、毒性测试以及病毒学研究。 二、NRK细胞系具有以下特点 来源：NRK细胞系是从正常大鼠肾脏组织中建立的，通过多次传代培养而形成稳定的细胞系。 形态特征：NRK细胞通常呈现成纤维细胞样的形态，呈梭形或多角形，细胞大小和形态可能会根据培养条件和细胞密度而有所变化。 生长特性：NRK细胞在适宜的培养条件下（如含有适量胎牛血清的DMEM培养基）可以稳定生长，具有较快的增殖速率。 应用：由于NRK细胞来源于正常的肾脏组织，它们常用于研究肾脏细胞的生理和病理过程，以及作为体外模型来评估药物的肾脏毒性。此外，NRK细胞也被用于研究病毒感染，尤其是那些能够感染肾脏细胞的病毒。 变异株：NRK细胞系有几个亚型，如NRK-49F和NRK-52E，这些亚型可能具有不同的特性和应用领域。 优势：NRK细胞系的优势在于它们相对容易培养，生长迅速，且能够代表正常肾脏细胞的特性，这使得它们成为研究肾脏相关疾病的理想模型。 三、NRK细胞系培养操作 1)复苏NRK细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)NRK细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)NRK细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 四、应用 NRK（大鼠肾细胞）可以用于肿瘤相关成纤维细胞NRK促进肺腺癌迁移侵袭作用及机制研究： 肿瘤相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblasts,CAFs)是肿瘤微环境(Tumor microenvironment,TME)中的主要成分。靶向CAFs治疗已成为肿瘤治疗中一种有前景的治疗方式。通过转录组学测序、综合生物信息学分析以及细胞、临床标本检测,我们发现CAFs高表达NRK(Nik-related kinase),并且我们进一步探究CAFs高表达NRK对肺腺癌细胞迁移侵袭的作用及相关机制,为靶向CAFs治疗提供新的潜在靶点。 方法： 1、收集肺腺癌新鲜手术标本,采用组织块贴壁培养法,分离CAFs、正常肺成纤维细胞(Normal Fibroblasts,NFs)。光学显微镜观察CAFs、NFs形态、蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)和免疫荧光(Immunofluorescence,IF)检测成纤维细胞标记物的表达,鉴定成纤维细胞。 2、收集培养CAFs、NFs细胞72小时后的无血清DMEM培养基,离心后取上清,得到CAF条件培养基(Cancer associated fibroblasts conditional medium,CAF-CM)和NFs条件培养基(Normal fibroblasts conditional medium,NF-CM)。检测CAF-CM、NF-CM对肺腺癌细胞(A549和H1299)增殖、侵袭、迁移的影响。 3、根据我们本次CAFs测序数据集,结合课题组前期CAFs基因芯片数据集,以及Array Express公共数据库肺腺癌CAFs差异基因数据集,通过韦恩图,寻找这三个数据集差异倍数(Fold Change,FC)的绝对值大于2,校正P值小于0.05的共有差异基因。最终得到10个交集差异基因(ZNF93、ZNF827、NRK、DPYSL4、HES4、LYPD6B、SETBP1、HMCN1、FCGBP、CFI)。q RT-PCR检测上述10个交集差异基因在CAFs的相对表达水平。q RT-PCR、WB、IF检测CAFs中NRK的表达水平。 4、采用免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)法,检测NRK在肺腺癌组织、癌旁组织的表达,分析NRK在肺腺癌的表达水平和临床病理因素的关系。 5、构建NRK干扰慢病毒载体和过表达质粒,在CAFs、NFs分别干扰、过表达NRK基因,q RT-PCR、WB检测干扰或过表达NRK的效果。6.收集干扰或过表达NRK的CAFs条件培养基(CAF-sh NRK-CM)、NFs条件培养基(NF-OE-CM)。检测CAF-sh NRK-CM、NF-OE-CM对A549、H1299细胞的迁移、侵袭的影响,ELISA检测条件培养基中CXCL5的变化。 6、划痕法、Transwell法、WB、IF检测干扰过或表达NRK对CAFs、NFs运动能力的影响、磷酸化Cofilin(p-Cofilin)蛋白表达水平的影响、F-actin的变化。 7、共培养实验观察干扰NRK对CAFs引导A549、H1299运动的影响。 结果： 1、光镜下可见,NFs、CAFs形态相似,呈纺锤形,CAFs细胞体积较NFs更大。WB和IF结果显示,NFs、CAFs均高表达细胞间质标志物波形蛋白(Vimentin),不表达上皮标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)。同时成纤维细胞标志物α-SMA、FAP-α的表达在CAFs高于NFs,差异具有统计学意义(P 2、与NF-CM相比,CAF-CM能够促进肺腺癌细胞(A549和H1299)增殖、迁移、侵袭,差异具有统计学意义(P 3、通过转录组学测序、综合生物信息学分析和q RT-PCR检测,我们发现NRK是10个交集差异基因中,在CAFs表达显著升高的上调差异基因,q RT-PCR、WB、IF结果显示,NRK主要在CAFs高表达(P 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   桃干枯壳蕉孢菌：用于该菌种群演化与流行学监测 桃干枯壳蕉孢菌是Leucostoma属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；教学，具体用途为植物病原物；用于该菌种群演化与流行学监测。 一、菌种简介平台编号：Bio-19857规格：培养物 拉丁属名：Leucostoma Persoonii 中文名称：桃干枯壳蕉孢菌拉丁属名：Leucostoma种名加词：persoonii (Nitschke) Höhn.收藏时间*：2007-7-15来源历史：西北农林科技大学林学院转原产国：中国资源归类编码：15151500000模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；教学具体用途：植物病原物；用于该菌种群演化与流行学监测。特征特性：核果黑腐皮壳菌Valsa leucotoma (Pers.) Fr.，无性态为核果壳囊孢Cytospora leucostoma Sacc.。分生孢子器埋生于子座内，扁圆形或不规则形，器内具多个腔室，有一共同的长孔口伸出寄主表皮外，大小536～637μm×101～168μm，内壁密生分生孢子梗。分生孢子梗单胞，无色，顶端着生分生孢子。分生孢子单胞，无色，香蕉形，略弯，两端钝圆，大小3.3～6.6μm×0.6～0.7μm。子囊壳埋生在子座内，球形或扁球形，大小300～360μm×250～356μm，有长颈，生物危害程度 ：四类寄主中文名称 ：桃致病对象：植物分离基物：桃树干基部采集地区：陕西宝鸡采集具体地点：植物园培养基信息：培养基编号: 14 培养基名称: PDA培养温度：25资源保护类型：培养物保藏方法：定期移植法共享方式：合作研究共享提供形式：斜面培养物实物状态：有实物用途：植物病原物；用于该菌种群演化与流行学监测。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征核果黑腐皮壳菌Valsa leucotoma (Pers.) Fr.，无性态为核果壳囊孢Cytospora leucostoma Sacc.。分生孢子器埋生于子座内，扁圆形或不规则形，器内具多个腔室，有一共同的长孔口伸出寄主表皮外，大小536～637μm×101～168μm，内壁密生分生孢子梗。分生孢子梗单胞，无色，顶端着生分生孢子。分生孢子单胞，无色，香蕉形，略弯，两端钝圆，大小3.3～6.6μm×0.6～0.7μm。子囊壳埋生在子座内，球形或扁球形，大小300～360μm×250～356μm，有长颈。 三、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油请置于-80℃。 四、培养条件1、培养基编号： 营养肉汁琼脂2、培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入 5mgMnSO4・H2O，则有利于产生芽孢。推荐使用商品化成培养基。3、需氧类型：好氧4、培养温度：28℃ 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 六、打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。9、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   M109小鼠肺癌细胞的复苏与传代及冻存操作说明！  细胞简介平台编号：Bio-129614 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：M109 细胞名称：小鼠肺癌细胞M109产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2细胞数量：1x10^6；1x10^6保存温度：37℃；-198℃运输方式：常温保温运输；干冰运输安全等级：1用途限制：仅供科研3类培养体系：DMEM高糖培养基（不含丙酮酸钠）+10%FBS+1%三抗培养温度：37℃二氧化碳浓度：5%简介：小鼠肺癌细胞M109取自雄性BALB/c，贴壁培养。用途：细胞系 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，水浴锅 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需复苏的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入 37℃温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管 ，打开盖子 ，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀。3、操作离心 ， 调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟4、弃去上清液 ，重悬离心管底部细胞沉淀 ，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基 ，计数 ，调整细胞密度，接种培养瓶 ，37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液，继续培养。6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中 细胞传代操作说明（贴壁细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中 ，愈合度达到 80% ，可进行传代。2、按 T25 培养瓶计 ，吸出完全培养基 ，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消 化 2min（具体时间视细胞而定） ，后用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10 min ，弃上清 收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。  细胞传代操作说明（悬浮细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。 细胞冻存操作说明实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需冻存的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管 ，冻存管 ，记号笔实验步骤：1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。 如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ，并登记。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    微生物检测培养基的细节问题及其制备方法！ 一、称取 用精度度0.01的电子天平称取培养基所需药品。先根据配方计算出配制一定量培养基所需各种成分药品的量，然后用天平准确称取。称量时用称量纸折叠成簸箕状盛放药品。 二、溶化 培养基放入烧杯或烧瓶中，慢慢加入少量所需水，边加入边用玻棒搅拌。如果培养基中不含有琼脂，培养基不需要加热；如果含有琼脂，则需要用电炉或者电热板等加热煮沸，完全溶解后，再补齐所需水，并搅拌均匀(如图3所示)。如果配制的培养基量很大，可用不锈钢锅加热溶化，可先用温水加热并随时搅动，防止焦化，如有焦化现象，配制的培养基就不能使用，要重新配制。 配制培养基时不可用铜或铁的容器溶化，因铜或铁制容器可能会使培养基中的铜和铁的含量超标，影响实验(培养基中铜含量大于0.3mg/L，细菌不宜生长，铁含量超过0.14mg/L，妨碍细菌产毒素)。对容易发生反应，产生沉淀的药品，要分开溶解，后加入培养基，如磷酸氢二钾和硫酸镁。 三、调pH 虽然培养基中含有缓冲物质成分，能使培养基的pH尽可能的保持在要求的范围内，但是配出的培养基若不符合要求，就要进行必要的调整。如果有已校准pH计，可用pH计，如果没有，可用精密的pH试纸，再根据需要用1 mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸(微调可用0.1氢氧化钠或0.1mol/L盐酸)调制所需的pH。培基的pH一般为7.4～7.6，也有酸性或碱性的。用氢氧化钠调整的需要高压灭菌的培养基，在调整pH时要调至高出所需0.1个～0.2个单位，因用氢氧化钠调整时，高压灭菌后，培养基的pH要降低0.1~0.2。如培养基中含有碳酸钙成分，可不pH。 四、过滤 配成的培养基，若无特殊要求，可省略此步。若有沉淀或浑浊需要澄清的：液体培养基可用油纸过滤，而固体培养基可用中间夹一薄层脱脂棉的双层纱布过滤。如果过滤法还不能达到澄清的要求，则可用蛋清澄清法，即培养基加热冷却到50~60℃，装入三角瓶内(不超过容量的二分之一)，按1000mL加人1个～2个鸡蛋的蛋清，用力摇晃3-5min，高压蒸汽灭菌121℃、20min，取出趁热过滤即可。 五、分装 配制好的培养基根据不同的用途分装在三角瓶、试管等容器中，分装试管，如果试管量很大，可用自动分液器，如果试管量少，可用漏斗分装。分装量不超过容器容积的三分之二。三角瓶以不超过容积的二分之一为宜；琼脂斜面以不超过试管长度的五分之一为宜，灭菌后，摆成的斜面为培养基量的三分之一，底层为三分之二的量为宜；半固体琼脂分装量为试管长度的三分之一；用来接种或保菌的高层琼脂，分装量为试管长度的四分之一或三分之一，用来接种厌氧菌的要达到三分之二；琼脂平板，内径为90mm的以13mL~15 mL为宜，内径70mm的平板为8mL~10 mL，制成的琼脂平板若表面水分较多，可将平板倒扣，放置在37℃培养箱内30min，干燥后再用。每批培养基应另外分装一小玻璃瓶(约20mL)与该批培养基同时灭菌，为测定该批培养基终pH。 六、灭菌 分装好的培养基应立即进行灭菌。灭菌的方法种类如下： 1、高压蒸汽灭菌法：大多耐热培养基都可用此法，小量分装时，用121℃，15min;灭菌量大时，用121℃，30min灭菌;含糖类的培养基只能113~115℃，15min灭菌，避免糖类遭破坏。 2、煮沸灭菌法：对含有不耐高温物质的培养基，可使用此方法。 3、过滤除菌：以过滤的方法除菌，用无菌操作技术，定量加入培养基。血液、抗生素可用无菌操作技术抽取，加入冷却到50℃左右的培养基中。培养基含有不耐热的物质时，可用此法。 对LST培养基进行灭菌时，有时发酵管内会有气泡。为防止发酵管内产生气泡，可以采取以下几项措施： 1、小倒管浸满培养基(不留气泡)后再加入到盛LST的试管中。 2、灭菌锅关闭放气阀前，将锅内气体排干净。 3、试管塞不要塞得太紧(使用硅胶塞的时候)，勿使用橡皮塞。 4、不要过早打开灭菌锅，要等灭菌锅内气压和温度都降到与室温一致或相差不大时再打开灭菌锅。 如果以上情况都做到还有气泡，可用水做培养基组的对照试验，若培养基组有气泡，而对照组没有气泡可确定是培养基自身的原因。 七、倒平板 灭菌融化的培养基冷却到50℃后，倒入无菌干燥的培养皿中。培养基的温度不能过高，否则容易在培养皿的内盖上形成太多的冷凝水；温度太低，培养基又容易凝固成块，无法制成平板。倒平板时，应在靠近酒精灯火焰进行，以免外界的杂菌落入平板内，左手拿培养皿，右手拿三角瓶的底部，用左手的小指和手掌部位把三角瓶的棉塞拔下，灼烧瓶口，用大拇指和食指把培养皿盖打开一条缝，至瓶口刚好伸入，倒入培养基，以铺满底为限，不超过培养皿高度的三分之一，迅速盖好盖，放在桌面上，轻轻地转动培养皿，使培养基分布均匀，冷凝后即可。 八、摆斜面 装在试管中的琼脂培养基，在灭菌完成后，趁热立即摆放在木棒(或玻璃棒)上，并成适当的斜度，冷却后，琼脂凝固即成斜面。斜面长度不用超过试管二分之一。 九、质量检查 培养基灭菌后仔细检查一遍，发现有破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染，都要丢弃，不能再用。并测定其终pH。还需进行无菌检查和效果检查。无菌检查是将灭菌后的培养基取1管(瓶)~2管(瓶)，37℃恒温培养1d～2d，确定无杂菌生长;效果检查是用标准菌株接种在相关的培养基上检查检查菌的生长、形态及生化情况，与已知情况相符。两种情况都合格，配制的培养基方可使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   柏氏血矛线虫PCR试剂盒的操作步骤与相关研究！ 一、背景 柏氏血矛线虫PCR试剂盒是一种用于检测柏氏血矛线虫的生物试剂，采用PCR技术进行检测。 柏氏血矛线虫PCR试剂盒可用于科研实验等领域，适用于检测柏氏血矛线虫。它具有即开即用、方便快捷的特点，用户只需要提供样品RNA模板即可进行检测。 柏氏血矛线虫是一种常见的寄生虫，寄生于牛、羊等家畜的消化系统中，对家畜的健康和生产性能产生负面影响。因此，柏氏血矛线虫的检测对于畜牧业的发展和动物疾病的防治具有重要意义。 柏氏血矛线虫PCR试剂盒是一种用于检测柏氏血矛线虫DNA的PCR试剂盒。 二、该试剂盒通常包括以下成分 PCR反应液：包括PCR缓冲液、dNTPs、引物、Taq聚合酶等。 标准品：用于定量检测柏氏血矛线虫DNA的浓度。 阴性对照：用于排除假阳性结果的可能性。 阳性对照：用于确认试剂盒的准确性和可靠性。 使用柏氏血矛线虫PCR试剂盒时，首先需要提取样本中的DNA，然后将提取的DNA加入到PCR反应液中进行扩增。通过检测扩增产物的荧光信号强度，可以确定样本中是否存在柏氏血矛线虫DNA。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，适用于临床诊断和流行病学调查等领域。 三、柏氏血矛线虫PCR试剂盒的操作步骤如下 1、样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。 2、DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。 3、PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。 4、PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。 5、结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在柏氏血矛线虫的感染。 四、应用 柏氏血矛线虫PCR试剂盒可以用于羊捻转血矛线虫ITS基因序列分析及其虫卵PCR检测方法的建立： 拟采用柏氏血矛线虫PCR试剂盒PCR技术,对陕西地区捻转血矛线虫分离株的内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)基因序列进行扩增、测序和分析,以了解ITS基因的遗传变异情况;根据捻转血矛线虫ITS2基因特点,设计特异性引物并对退火温度进行优化建立粪便虫卵PCR检测方法,将所建立柏氏血矛线虫PCR试剂盒PCR应用于临床奶山羊粪便样品中捻转血矛线虫卵的检测,并与粪便镜检结果进行对比,获得以下结果： 1、对采自陕西咸阳地区不同年份的44株捻转血矛线虫分离株,进行ITS基因位点的扩增、测序和分析。结果显示,捻转血矛线虫ITS1的长度为400或404 bp、种内变异率为0.0～3.6%,共27个类型,将其与参考序列比对发现存在16个碱基突变位点,ITS2的长度为231bp,种内变异率为0.0～6.9%,共20个基因类型,与参考序列比对发现共15个碱基突变位点。结果表明,陕西咸阳地区2015—2020年之间的羊捻转血矛线虫的ITS rDNA序列的种内变异率较小,且尚未出现种群的分化。种系发育进化树结果显示各国的分离株进化关系较近,且同一地区的不同分离株未汇聚在同一枝,初步分析表明,捻转血矛线虫的ITS基因的变异情况与不同的地理条件之间的相关性不明显,世界各地的捻转血矛线虫分离株之间存在较高的基因相似度。 2、基于特异性引物对(Hc.F、Hc.R)建立的柏氏血矛线虫PCR试剂盒PCR检测方法的特异性良好,能将捻转血矛线虫卵同其他常见线虫卵(细颈线虫、似血矛线虫、兰式毛尾线虫、尖尾线虫、网尾线虫、夏伯特线虫、蛇形毛圆线虫、粗纹食道口线虫、绵羊毛尾线虫等)特异性区分。PCR反应的最佳退火温度为53℃。在DNA模板含量较低(0.298 pg)时,仍能检出,表明其具有较高的灵敏性。85份奶山羊粪便样品,经粪便镜检共检出23份捻转血矛线虫阳性粪样(27.06%,23/85),利用特异性PCR镜检共检出38份捻转血矛线虫阳性粪样(44.71%,38/85),且镜检和PCR方法诊断结果一致性一般(Kappa=0.530)。综上所述,陕西咸阳地区的羊捻转血矛线虫的ITS rDNA基因序列的遗传进化程度较低。所建立的分子生物学方法能准确地将捻转血矛线虫卵从粪便样品中检测出,为临床检测捻转血矛线虫病提供了一种诊断方法。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    TH1小鼠调节T细胞系的应用及培养操作步骤！ 一、背景 TH1小鼠调节T细胞系是一种细胞系，来源于小鼠的调节T细胞，具有上皮细胞样的形态特征。这种细胞系通常在贴壁条件下生长，可以通过1:2-1:3的传代比例进行传代培养，每周换液2-3次。TH1小鼠调节T细胞系可以用于免疫学、药理学和毒理学等方面的研究，以了解调节T细胞在免疫应答、肿瘤发生和感染等方面的作用和功能。 TH1(辅助T细胞1型)是一种T细胞亚型，主要在细胞免疫反应中发挥作用。它们通过分泌干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)来激活巨噬细胞和其他免疫细胞。 TH1小鼠调节T细胞系是另一种T细胞亚型，它们的主要功能是抑制免疫反应，防止过度的免疫反应或自身免疫反应。 TH1小鼠调节T细胞系是指在特定的实验条件下，研究者试图在小鼠体内产生或调节的TH1和调节T细胞。这些实验通常是为了研究这两种细胞在特定疾病或条件下的功能和相互作用。 二、TH1小鼠调节T细胞系培养操作 1)复苏TH1小鼠调节T细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)TH1小鼠调节T细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)TH1小鼠调节T细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 TH1小鼠调节T细胞系可以用于针刺对RA小鼠Th1/Th2相关细胞分子和Foxp3表达的研究： 通过观察针刺对RA小鼠关节炎性症状的改善情况,检测针刺后RA小鼠外周血Treg细胞的表达及Th1、Th2细胞因子的分化状态,探讨针刺后Treg细胞对TH1小鼠调节T细胞系/Th2细胞分化格局的影响,以期为针刺改善RA关节炎的机理提供依据。 方法：将24只健康雄性Wistar小鼠随机分为空白组、模型组和针刺组。模型组、针刺组两组采用牛Ⅱ型胶原和弗氏佐剂制备类风湿性关节炎模型,空白组常规饲养。针刺组选取小鼠双侧的“肾俞”“足三里”穴运用毫针干预。每天毫针针刺30分钟,连续针刺6天为一疗程,共针刺3个疗程,每治疗一疗程结束后休息1天。余各组同针刺组束缚但不治疗。在造模前后、治疗前后,即(第1、14、21、42天)分别测量小鼠的体质量与足容积、并观测小鼠的关节炎症指数(AI)评分。取膝关节组织,用HE染色法,观察踝关节组织形态学的变化;采用联酶免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠外周血中TH1小鼠调节T细胞系、IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α的含量;用聚合酶链反应(PCR)实验方法,检测细胞中IL-2、IFN-γ、IL-4基因表达水平;用流式细胞术(FCM)检测针刺对Treg细胞标记分子Foxp3表达的影响。 结果： 1、小鼠体质量、足容积、AI评分及关节滑膜组织病理学变化:与空白组比较,模型组小鼠体质量减轻(P 2、RA小鼠外周血中TH1小鼠调节T细胞系、Th2相关细胞因子浓度及基因表达结果:与空白组比较,模型组外周血清中IL-2、TNF-α、IFN-γ浓度均增加,IL-4浓度降低(P0.05)。 3、RA小鼠外周血中Treg细胞标记分子Foxp3的表达结果:与模型组相比,针刺组CD4+CD25+Foxp3+阳性表达升高(P 结论： 1、针刺能改善RA小鼠关节炎性症状,能使小鼠体质量的增加,膝关节的红肿消退,AI评分降低,并能减少小鼠膝关节组织中炎性细胞的侵润和纤维组织的增生,改善滑膜的损伤和骨关节的破坏。 2、针刺可以降低小鼠血清中Th1炎症细胞因子含量及基因表达、提高Th2标志性细胞因子含量和Treg细胞标记分子Foxp3表达。由此推测,针刺可能通过刺激Treg细胞的表达,改善TH1小鼠调节T细胞系/Th2细胞的分化失衡,减轻膝关节的炎症反应。这可能是针刺治疗本病的机理组成部分之一。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   你知道实验室培养皿使用时的注意事项有哪些吗？ 培养皿使用的注意事项 1、使用前经过清洁消毒，培养皿清洁与否对工作影响较大，可影响培养基的酸碱度，若有某些化学药品的存在，会抑制细菌生长。 2、新购的培养皿应先用热水冲洗，再置于质量分数为1%或2%的盐酸溶液中浸泡数小时，使游离碱性物质除去，再用蒸馏水冲洗2次。  3、若要培养细菌，再用高压蒸气(一般6.8*105Pa高压蒸气)，120℃的温度下30min灭菌，置室温中干燥;或用干热灭菌，就是将培养皿置于烘箱内，温度控制在120℃左右的情况下维持2h，即可杀死细菌的芽孢。 4、经过消毒的培养皿才能接种培养使用;  5、平板培养时为何把培养皿倒置：  原因：培养时培养皿中会产生较多的水蒸气，水蒸气在皿盖上凝结会产生水滴，如果培养皿正置，水滴滴下会将菌落冲散，这样的话一个大菌落可能会分散开成为很多小菌落，对细菌的培养和计数都造成很大的麻烦。如果倒置的话，培养基在上，皿盖在下，水滴滴下不会滴到菌落上。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                NCI-H719细胞系人小细胞肺癌细胞的知识与应用！ 一、背景 NCI-H719细胞系|人小细胞肺癌细胞是一种人小细胞肺癌细胞系，建立于1973年。NCI-H719细胞系|人小细胞肺癌细胞生长特性为半贴壁，细胞传代方法为1:2-1:3传代，每周换液2-3次。需要注意的是，该细胞系需要在低温避光的环境下保存。 二、NCI-H719细胞系|人小细胞肺癌细胞培养操作 1)复苏NCI-H719细胞系|人小细胞肺癌细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)NCI-H719细胞系|人小细胞肺癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)人小细胞肺癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 NCI-H719细胞系|人小细胞肺癌细胞可以用于PIK3CA突变在非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药性产生中的作用机制研究： 目的： (1)利用靶向高通量测序技术筛选适合靶向治疗方案的晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)获益人群,同时探索通过靶向高通量测序技术获得的肿瘤突变负荷(Tumor mutational burden,TMB)是否可以作为免疫治疗预测标记物,分析靶向高通量测序技术作为临床动态监测和指导NSCLC患者靶向治疗和免疫治疗的可行性,从而为NSCLC患者快速精确及个体化治疗提供依据; (2)分析非小细胞肺癌患者中的PIK3CA突变类型与临床病理特征的相关性,同时分析PIK3CA与EGFR突变共存NSCLC患者接受表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(Epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)治疗预后情况,进一步揭示PIK3CA突变在晚期EGFR突变NSCLC患者预后的预测价值以及与EGFR突变耐药的相关性,为晚期NSCLC患者的有效治疗提供新的靶点,同时为对EGFR-TKIs产生耐药的晚期NSCLC患者的耐药逆转提供新的思路; (3)探讨PI3K/Akt通路抑制剂LY294002对EGFR-TKI原发性耐药的非小细胞肺癌细胞对厄洛替尼的敏感性的影响并分析其内在分子机制,为EGFR-TKIs联合PI3K抑制剂对逆转NSCLC的耐药性的临床治疗提供理论依据。 方法： (1)回顾性分析533例初诊和复发的非小细胞肺癌患者的临床病理资料,提取患者血液或肿瘤组织中的DNA并进行靶向高通量测序,靶向测序基因包括EGFR、TP53、ALK、ROS1、BRAF、KRAS、ERBB2、PIK3CA在内的34个常见肿瘤用药相关基因,使用卡方检验分析EGFR、BRAF、ALK、ROS1突变与临床病理特征相关性;利用生物信息学方法计算患者TMB值,免疫组织化学方法检测非小细胞肺癌患者肿瘤组织表面PD-L1表达水平,通过R软件3.5.3版本分析TMB与PD-L1表达水平的相关性;以TMB平均值为临界值将接受免疫治疗的非小细胞肺癌患者分为TMB高(TMB-H)和TMB低(TMB-L)两组,并采用Kaplan-Meier生存分析两组患者与无进展生存期(progression-free survival,PFS)关系,绘制生存曲线; (2)回顾性分析29例PIK3CA突变非小细胞肺癌患者临床病理特征,利用卡方检验分析不同PIK3CA突变类型与临床病理特征相关性。靶向高通量测序技术分析与PIK3CA突变共存的其他驱动基因突变类型,根据PIK3CA是否与EGFR共突变,将接受EGFR-TKI治疗的晚期非小细胞肺癌患者分为PIK3CA与EGFR共突变组和只有EGFR突变组,并采用Kaplan-Meier生存分析两组患者与无进展生存期(progression-free survival,PFS)关系,绘制生存曲线,分析PIK3CA突变是否影响EGFR突变非小细胞肺癌患者接受EGFR-TKI治疗效果; (3)通过MTT实验分析不同浓度LY294002和厄洛替尼对NCI-H460、NCI-H719细胞系|人小细胞肺癌细胞和NCI-H661的细胞生长增殖的影响,同时分析联合EGFR-TKI厄洛替尼和PI3K抑制剂LY294002对NSCLC细胞生长的抑制作用;利用流式细胞仪分析厄洛替尼或LY294002以及厄洛替尼与LY294002联合用药对NSCLC细胞NCI-H460、NCI-H719细胞系|人小细胞肺癌细胞和NCI-H661细胞凋亡的影响;提取厄洛替尼或LY294002以及厄洛替尼与LY294002联合用药处理后的NCI-H460和NCI-H661细胞的总蛋白,利用蛋白免疫印迹(Western Blot)技术检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白p70S6K和磷酸化p70S6K蛋白的表达水平。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   新买的菌株你知道怎么使用吗？注意事项有哪些？ PART.01菌种说明书 详细说明了菌种本身特性、生长条件以及形态特征等，提供了完整的培养方法。 PART.02菌株编号 “株”是我们常用菌种具体化的最小单位，即编号是唯一的；与我们通常所说的“种”不同的是，“种”是指一类菌，例如大肠杆菌，有很多株编号，它们都具有各自的特性。 PART.03拉丁名称 代表了菌种的种属，通常是唯一的。即我们通常所说的菌种，用拉丁名称来表示较为准确，如Escherichia coli 的中文名称为大肠杆菌，也叫大肠埃希氏菌。 PART.04中文名称 通常根据菌种本身特性或拉丁名称翻译而来。因此，部分菌种中文名称通常存在多种叫法，如“大肠杆菌”与“大肠埃希氏菌”或“枯草芽孢杆菌黑色变种”、“萎缩芽孢杆菌”、“深褐芽孢杆菌”等。 PART.05安全级别 根据对人体安全的潜在威胁按级别分为4级，可简单表述为：  1级：基本对人体不致病，一般超净台即可操作； 2级：对人体条件致病，并且可以有效治疗，不传染，需在二级生物安全柜操作； 3级：具有传染性，对人体致病，危害较大，可以有效治疗； 4级：极具传染性，对人体严重致病，目前无法提供有效治疗。 PART.06培养条件准备 提前准备好适宜的培养基，置于超净台或生物安全柜中备用。根据菌种的好厌氧等要求，准备对应的气体培养环境，确保能够提供菌株适宜的生长环境。 PART.07使用步骤 安瓿瓶冻干粉 1、准备1支5-10mL 液体试管培养基和2个平板，将安瓿管表面酒精消毒，转移至安全柜中； 2、用小砂轮或锉刀在管壁划圈，沿划痕处将安瓿管掰断； 3、吸取0.5mL液体培养基注入冻干管，充分溶解后全部吸取打回液体试管中，混匀； 4、分别吸取0.2mL菌悬液打入两个平板中，涂布均匀；  5、将液体试管和平板全部正置于指定培养条件下培养。 冻存管 1、准备1支5-10mL液体试管培养基和2个平板； 2、将冻存管置于水浴复溶，约1-2min全部复溶； 3、酒精棉擦拭冻存管外壁消毒，随后转移至安全柜操作； 4、旋开管盖，全部吸取注入液体培养基中，混匀； 5、分别吸取0.2mL 菌悬液打入两个平板中，涂布均匀； 6、将液体试管和平板全部正置于指定培养条件下培养。 试管斜面/平板 1、外壁消毒后，可直接使用； 2、若需增菌： a.细菌用接种环划取接种至液体试管培养增殖； b.霉菌用接种铲和接种锄切块正置于平板上静置培养或三角瓶液体摇床培养。 试管菌液： 1、外壁消毒后，可直接使用； 2、若需增菌，可吸取200μL涂板，或细菌5%（霉菌10%）接种量液体培养基增殖。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    米根霉的保藏条件与注意事项及打管说明！ 一、菌种简介米根霉(Rhizopus oryzae Went et Pr.Geerl.) 是中国药和酒曲中的重要霉菌之一。在土壤、空气及其他物质上亦常见。菌落疏松或稠密，最初白色后变为灰褐至黑褐色，匍匐枝爬行，无色。假根发达，指状或根状分枝。囊托楔形，菌丝形成厚垣孢子，接合孢子未见。发育温度30～35℃，最适温度37℃，41℃亦能生长。能糖化淀粉、转化蔗糖 ，产生乳酸、反丁烯二酸及微量酒精。产L(+)乳酸能力强，达70%左右。 二、产品信息平台编号：Bio-52589 规格：冻干物拉丁属名：Rhizopus Oryzae Went Et Prinsen-Geerligs 菌株名称：米根霉其他编号：M101培养基编号：14培养温度：25-28℃培养时间：5-7 天用途：做甜酒。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 三、培养基综合马铃薯培养基（PDA）20%马铃薯汁 1L 葡萄糖 20g MgSO4.7H2O 1.5g KH2PO4 3gVitanib B1 (硫胺素) Trace 微量约 8mg Agar (琼脂) 20g pH 自然20%马铃薯汁配制方法：马铃薯洗净去皮，取 200 克切成小块 , 加水 1000 毫升煮沸 20 分钟后滤去马铃薯块，将滤液补足 1000ml。  四、保藏条件安瓿瓶冻干菌种和培养物应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油保藏温度为-80°C;请勿长期置于室温。  五、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后 2 个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；7） 打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 六、打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。9、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   RMC-1大鼠视网膜MULLER细胞的培养操作规程！ 一、背景 RMC-1大鼠视网膜MULLER细胞系是一种来源于大鼠视网膜Müller细胞的细胞系，常用于研究视网膜疾病的发生机制、药物筛选和毒性评价等。该细胞系具有以下特点： 来源：RMC-1大鼠视网膜MULLER细胞系来源于大鼠视网膜Müller细胞，经过多次传代和筛选，形成了一个相对稳定的细胞系。 形态特征：RMC-1大鼠视网膜MULLER细胞系呈多边形或长条形，大小约为15-30微米，胞质丰富，核大而圆，核仁明显。 生长特性：RMC-1大鼠视网膜MULLER细胞系生长迅速，传代周期约为24-48小时，可在含有10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中稳定生长。 特异性标志物：RMC-1大鼠视网膜MULLER细胞系表达多种特异性标志物，如Ksp-cadherin、AQP1、AQP2、AQP3、AQP4、NHE3、Na-K-ATPase等，可用于鉴定其视网膜Müller细胞特性。 其他特性：RMC-1大鼠视网膜MULLER细胞系还具有一定的增殖能力，可用作研究视网膜疾病发生机制和药物筛选的模型。 二、RMC-1大鼠视网膜MULLER细胞系培养操作 1)复苏RMC-1大鼠视网膜MULLER细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)RMC-1大鼠视网膜MULLER细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)RMC-1大鼠视网膜MULLER细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 RMC-1大鼠视网膜MULLER细胞系可以用于非诺贝特对年龄相关性黄斑变性晚期视网膜纤维化的抑制作用及机制研究： 检测非诺贝特对AMD晚期视网膜纤维化的影响,并探讨其作用的分子机制。 方法：新生血管性AMD模型采用极低密度脂蛋白受体(Vldlr)敲除小鼠,细胞模型选择RMC-1大鼠视网膜MULLER细胞系。Vldlr-/-小鼠从2月龄开始分别喂食正常饲料或含非诺贝特饲料45天。RMC-1大鼠视网膜MULLER细胞系使用TGF-β2处理后分为溶剂组或非诺贝特酸组。用免疫印迹法和免疫荧光染色检测纤维化标记蛋白的表达来评估视网膜纤维化程度,包括波形蛋白,胶原蛋白,α-SMA和纤连蛋白。Masson染色检测胶原沉积。免疫印迹法检测TGF/Smad信号和Wnt信号激活情况。采用qRT-PCR、Western blot、免疫组化等方法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、结缔组织生长因子(CTGF)的表达。 结果：正常饲料组Vldlr-/-小鼠视杯中纤维化标志物Collagen-1、α-SMA和Vimentin表达增加,而这些纤维化标志物在非诺贝特饲料组的小鼠视杯中的表达明显减少。在正常饲料组小鼠视杯中纤维化相关信号通路TGFβ/Smad信号通路和Wnt信号通路中的关键蛋白p-Smad2/3和n-p-β-catenin表达明显升高,而这种升高在非诺贝特饲料组中被抑制。同时,这两条信号通路的下游基因CTGF的表达在正常饲料组中明显升高,而非诺贝特饲料组中相对减少。TGFβ2处理可以使RMC-1大鼠视网膜MULLER细胞系中TGFβ/Smad信号通路和Wnt信号通路激活,这两种信号通路的激活可以被非诺贝特酸抑制。同时,TGFβ2可以使Muller细胞GFAP和CTGF表达增加,使用非诺贝特酸处理后GFAP和CTGF的表达被抑制。结论:非诺贝特抑制视网膜纤维化通过抑制TGFβ/Smad信号和Wnt信号和减少CTGF在新生血管性AMD的释放。非诺贝特可能是一种潜在的治疗AMD纤维化的药物。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   丙酸蛛网菌PCR试剂盒的主要成分与应用研究！ 一、背景 丙酸蛛网菌PCR试剂盒是一种用于检测丙酸蛛网菌的PCR试剂盒。丙酸蛛网菌是一种常见的细菌，可以引起多种疾病，如肺炎、败血症等。 二、该试剂盒包含以下主要成分 PCR反应液：包含聚合酶、dNTPs、引物等，用于扩增丙酸蛛网菌的DNA。 阳性对照：含有已知的丙酸蛛网菌DNA，用于验证试剂盒的准确性和可靠性。 阴性对照：不含丙酸蛛网菌DNA，用于排除假阳性结果。 样品处理液：用于提取和处理样品中的DNA。 缓冲液：用于调节PCR反应液的pH值和离子强度。 其他辅助试剂：如Tris-HCl、EDTA、BSA等，用于调节反应条件和提高反应效率。 使用丙酸蛛网菌PCR试剂盒时，首先需要提取样品中的DNA，然后将其加入到PCR反应液中进行扩增。通过检测扩增产物的特异性，可以确定样品中是否存在丙酸蛛网菌的DNA。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，适用于临床实验室和研究机构对丙酸蛛网菌的快速检测和鉴定。 三、丙酸蛛网菌PCR试剂盒的操作步骤如下 1、样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。 2、DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。 3、PCR反应体系准备：根据丙酸蛛网菌PCR试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。 4、PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。 5、结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在丙酸蛛网菌的感染。 四、应用 丙酸蛛网菌PCR试剂盒可以用于蛛网菌属中分解钾的菌株： 从我国四川省汉源县富泉矿马桑树根际分离到一株能分解钾的菌株，该菌细胞为杆状，近球状。有时具有分支状菌丝，成对V形排列。基丝有分隔，断裂成杆状或球状小体，革兰氏阳性，不运动，兼性厌氧。菌落由初级分支菌丝体组成，灰白色，无气生菌丝，细胞壁含有二氨基庚二酸LL-DAP（左旋），甘氨酸、天门冬氨酸、半乳糖、葡萄糖，无特征性糖；细胞壁组分属Ⅰ型。发酵葡萄糖产生乙酸和异成酸。用原子吸收法测定可溶性钾，比对照增加49．5％，证明能分解钾。DNA中G＋C为63mol％。通过丙酸蛛网菌PCR试剂盒鉴定可归入蛛网菌属（Arachina），但又由于不产丙酸和分解钾故不同于该属唯一的丙酸蛛网菌（Arachinapropionica），因此，可能是一个新种，但由于缺少模式种，尚待进一步研究。另对该菌制剂进行了玉米、水稻的盆栽实验，结果说明经3号菌分解后的生物矿肥的速效钾提高6倍多。因此认为该菌株具有农业应用前景。 微生物菌种查询网在满足的不同企业的需要方面，站在了专业标准的前沿，有技术的支撑，有专业品质保证的可靠性标准，同时在整体的信息权威与市场相关服务配套方面，满足不同需求的客户，放心进行选择的需要。ATCC菌种有资源的界定，在工业企业中应用，对于相关的管理标准与技术性要求，也同样有较高专业的特色，所以从根本上来说，要保证有更可靠的实用意义，还必须要考虑的重点，就在于拥有专业权威的基础，可以带给实践菌种服务于生产很好的基础。

                     微生物基本知识：微生物的营养类型有哪些？ 百欧博伟生物：营养物质是生命活动的基础，微生物通过代谢与外界环境进行物质与能量交换，从环境中获得各种物质以合成细胞物质，提供生命活动所需的能量及在新陈代谢中起调节作用。营养过程是微生物生命活动的重要特征。 根据能源、碳源及氢供体性质的不同，一般可以将微生物营养类型分为以下四种： 1、光能自养型或称光能无机自养型 以CO2作为唯一或主要碳源，以光为生活所需的能源，能以无机物（如硫化氢、硫代硫酸钠或其他无机硫化物）作供氢体，使CO2还原成细胞的有机物。一般氢供体与其碳源的性质是一致的。该类型的代表是高等植物、藻类和少量细菌。 2、光能异养型 利用光为能源，利用有机物为供氢体，不能以CO2作为主要或唯一的碳源，一般同时以CO2和简单的有机物为碳源。如红螺菌科的细菌。 3、化能自养型 以CO2（或碳酸盐）为碳源，以无机物氧化所产生的化学能为能源，可以在完全无机的条件下生长发育。以氢气、硫化氢、二价铁离子或亚硝酸盐为电子供体，使CO2还原，如氢细菌、硫细菌、铁细菌和硝化细菌。 4、化能异养型 以有机化合物为碳源，以有机物氧化产生的化学能为能源。动物和大多数微生物（几乎全部真菌、大多数细菌和放线菌）都属于此类。绝大多数工业上应用的微生物都属于化能异养型。 化能异养型又可以分为寄生和腐生两种类型。①寄生型：寄居与另一生物体内或体表，从而摄取宿主细胞的营养以维持生命的现象。②腐生型：通过分解已死的生物或其他有机物，以维持自身正常生活的生活方式。实际上还存在既寄生又腐生的中间类型，可称为兼性寄生或兼性腐生。 微生物营养类型的一般以最简单的营养条件来区分。当微生物兼有两种营养类型时，光能先于化能，自养先于寄养，并通过添加“专性”或 “兼性”来描述营养可变性。比如，氢单胞菌为“兼性化能自养型”，红螺菌为“兼性光能异养型”。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！