三孢布拉氏霉的菌株培养与使用范围及注意事项！ 三孢布拉氏霉，属于毛霉目、笄霉科，拉丁名是Blakeslea trispora。三孢布拉氏霉菌丝体生长迅速，能生长成粗壮的长菌丝，为长管单细胞，无隔膜，具有多个细胞核，不能产生假根，为单细胞低等真菌。 一、菌种简介平台编号：Bio-115143 规格：冻干物拉丁文名：Blakeslea trispora菌种名称：三孢布拉氏霉培养基编号：157 培养温度：24-28℃培养时间：7-9 天用途：产β-胡萝卜素分离源：生理生化特征： 相关的培养基详细信息如下：培养基编号：157名称：ATCC Medium: 340 Rabbit Food Agar备注：兔子饲料(颗粒)　25.0 g 琼脂　15.0 g 蒸馏水　1000 ml 兔子饲料加水煮开，浸泡３０分钟后，用沙布过滤后加琼脂灭菌。用途：产Β-胡萝卜素（一公一母） 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基YpSs 培养基酵母提取物 4.0g 可溶性淀粉 15.0 克 K2HPO4 1.0gMgSO4.7H2O 0.5g 琼脂 15.0g 蒸馏水 1.0L 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存,西林瓶请置于-20°C 保存。请勿长期置于室温。  四、菌种的培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。  六、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支斜面或平板）； 经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。6）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖，注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入0.5ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  Lec1（仓鼠卵巢细胞）的应用及培养操作步骤！ 一、背景 Lec1（仓鼠卵巢细胞）是一种特殊的细胞系，具有上皮细胞的形态，并且适应贴壁生长。这种细胞是从脯氨酸缺陷型的CHO（中国仓鼠卵巢）克隆Pro-5中挑选出来的能抗麦芽凝集素的突变株。由于Lec1缺乏称为GlcNAc-T1的糖基转移酶，因此N-连接的碳水化合物被阻断在Man5GlcNAc2Asn中间体。这一特性使得Lec1细胞在研究N-连接糖基化改变对内源糖蛋白或病毒感染、以克隆DNA转染产生的糖蛋白的功能和区隔化的影响方面非常有用。 在细胞培养方面，Lec1（仓鼠卵巢细胞）通常需要在特定的培养体系和条件下进行传代和培养。例如，它们可以在MEMα培养基中添加10%的FBS（胎牛血清）和1%的P/S（青霉素/链霉素）进行培养。对于传代，一般采用1:2的比例进行传代。此外，这些细胞也可以进行冻存和复苏，但需要使用适当的冻存条件和保存液，以确保细胞的活力和稳定性。 Lec1（仓鼠卵巢细胞）是一种重要的科研工具，特别适用于研究N-连接糖基化对细胞功能和病毒感染等方面的影响。通过使用这种细胞系，科学家们可以深入了解糖基化过程在生物体内的复杂作用，并为相关疾病的预防和治疗提供新的思路和方法。 二、Lec1（仓鼠卵巢细胞）培养操作 1)复苏Lec1（仓鼠卵巢细胞）：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)Lec1（仓鼠卵巢细胞）传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)Lec1（仓鼠卵巢细胞）冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 Lec1（仓鼠卵巢细胞）可以用于金雀异黄素联合阿霉素对卵巢癌A2780细胞增殖和荷瘤裸鼠肿瘤生长的作用研究： 探讨金雀异黄素(genistein GEN)联合阿霉素(adriamycin ADR)对卵巢癌(Ovarian cancer)A2780细胞增殖和荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响及其机制。 方法：把卵巢癌A2780细胞和Lec1（仓鼠卵巢细胞）制成细胞悬液后,接种于SD品系裸鼠右后肢跟部皮下,制成卵巢癌裸鼠模型。实验分成4组进行:生理盐水组(裸鼠腹腔注射生理盐水0.2ml),金雀异黄素组(裸鼠腹腔注射c-myc GEN30mg/kg),阿霉素组(裸鼠腹腔注射ADR 20mg/m2),金雀异黄素联合阿霉素组(裸鼠腹腔注射c-myc GEN30mg/kg联合ADR 20mg/m2)。4周后处死裸鼠,剥取完整的肿瘤组织称重,并计算各组肿瘤抑制率。免疫组织化学方法检测c-myc在肿瘤细胞中的表达,免疫蛋白印记方法检测c-myc在肿瘤细胞中的表达量,四甲基噻唑蓝(Methy thiazoly1 tetrazolium,MTT)检测各组细胞的增殖能力,细胞黏附实验、细胞迁移(transwell)实验检测各组细胞的侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。 结果：肿瘤抑制率结果分析,与生理盐水组相比,金雀异黄素联合阿霉素治疗组、阿霉素组、金雀异黄素组,抑瘤率分别为(44.81±5.74)%,(38.45±4.25)%、(32.26±2.21)%差异均有统计学意义(P 结论： 1、GEN联合ADR可抑制裸鼠体内卵巢癌细胞及抑制体外卵巢A2780细胞的增殖、细胞的侵袭能力,促进肿瘤细胞的凋亡，但对Lec1（仓鼠卵巢细胞）无效。 2、GEN联合ADR抑制卵巢癌A2780细胞的增殖、侵袭能力,促进细胞凋亡其机制为降低肿瘤细胞对c-myc的表达,影响c-myc蛋白参与调控的癌细胞增殖和转移过程。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    临床实验室生物安全柜的选型及使用注意事项！ 1、生物安全柜的分级及功能 生物安全柜分为Ⅰ级（BSL-1）、Ⅱ级（BSL-2）和Ⅲ级（BSL-3）生物安全柜；BSL-2级生物安全柜又分为A型、B型、B2型、B3型。 生物安全柜其功能如下：BSL-1级生物安全柜可提供人员和环境的保护，但不提供对样本的保护，常被用作特殊的密封设备（如离心），或可能产生气溶胶的操作过程。BSL-2级生物安全柜可提供人员、环境和样本的保护，其中B2型为全排风式生物安全柜，没有空气在安全柜内循环，可同时提供基本的生物和化学防护。BSL-3级生物安全柜可提供人员、环境和样本的最大保护，用于操作四级生物安全水平的微生物或病原体。 2、生物安全柜的正确选型 实验室选择生物安全柜时应详细了解从事传染性微生物工作中的生物安全级别所包括的主要要素，根据给个人、环境、社会提供的保护情况选取不同级别的生物安全柜。 2.1 生物安全一级（BSL-1）：适合用于非常熟悉的病源，该病源不会经常引发健康成人疾病，对实验人员和环境潜在危险小，实验室没有必要和建筑物中的一般行走区分开，一般按照标准的分级生物操作在开放的实验室台面上开展工作。不要求一般也不使用特殊的抑制设备和设施（生物安全柜）。 2.2 生物安全二级（BSL-2）：适合于对人和环境有中度潜在危险的病源。与BSL-1的区别在于：①实验人员均应接受过病源处理方面的特殊培训，并由有资格的工作者指导。②进行实验时限制进入实验室。③对于污染的锐器应特别注意。④某些可能产生传染性气溶胶或飞溅物的过程应在生物安全柜中或其他物力抑制设备中进行，可选用Ⅰ、Ⅱ级生物安全柜。 2.3 生物安全三级（BSL-3）：应用于临床、诊断、教学、研究或者生产设施，在该级别中开展有关内源性和外源性病原的工作。若因暴露而吸入该病原会引发严重的可能致死的疾病。实验人员应在处理致病性的可能使人致死的病原方面受过专业训练，并由对该病原工作有经验的有资格的科学工作者监督。所有与传染源操作有关的步骤都在生物安全柜或其他物理抑制装置中进行，最好选用二级或二级以上生物安全柜，实验室需要特殊设计和施工，室内为负压。 2.4 生物安全四级（BSL-4）应用于对生命有高度危险的危险性病原或外源性病原。可通过气溶胶而致实验室感染或未知传染风险，且引起致命的有关病原，应选用三级生物安全柜及正压防护服，如SARS病毒对人或环境具有中度潜在危险，对携带该病毒的患者样本处理均应在生物安全二级（BSL-2 ）或二级以上实验室中进行，为了对操作人员和环境及样品均提供有效的保护，实验室应选用二级以上或全排风式生物安全柜（B2型）。 3、生物安全柜使用中应注意的问题 3.1 对人员的管理 3.1.1 只有经过培训和指导的实验室工作人员才能操作该设备，未经培训人员一律不能使用。 3.1.2 禁止非工作人员进入实验室，禁止工作人员在操作设备时吸烟以及处理隐性眼镜等。 3.1.3 工作人员操作完成后应如实填写《使用记录》。 3.2 对设备的管理 3.2.1 对生物安全柜采用单独供电，以免其他设备发生意外导致生物安全柜失效。 3.2.2 设备顶部通风口不能被任何东西覆盖以保证排气通畅。 3.2.3 设备出现报警时应停止使用，查明原因确保安全后再使用。如出现系统失效的讯号时，因空气不能被有效的过滤而不能继续使用该设备进行操作。 3.2.4 更换空气过滤器时应与厂家工程师联系，并进行更换，实验室工作人员不能私自进行更换，以免操作不当造成对周围人员和环境的污染。 3.2.5 用过的过滤器必须放在密闭的容器中，并在明确的位置注明其可能含有危险的微生物，引起注意并进行特殊处理。 3.2.6 新购置的生物安全柜在使用之前或维护重新移位以后必须由专业技术人员对生物安全柜的整体性能进行认证，每台生物安全柜应该至少每年进行一次测试和认证，以确保操作的安全。 3.2.7 生物安全柜性能测试应包括：送风气流的速度和送风量的测试，进口处进风速度测试，气流烟雾流型试验，空气过滤器渗透试验，安全柜泄露试验，电器漏电和接地电阻及极性试验，光照强度试验，振动试验，噪音水平试验，紫外线灯测试等。 3.3 工作前的准备 3.3.1 在开始工作前要让生物安全柜封机至少运行3-5分钟，使安全柜内的空气进行净化。 3.3.2 安全柜的工作台面、内壁和观察窗的内表面用消毒剂擦拭，再用无菌蒸馏水进行擦拭，以清除残余的消毒剂。 3.3.3 放到生物安全柜内的容器和材料的表面应以75%的酒精擦拭，以减少将环境的杂菌带到安全柜内。 4、操作中的注意事项 4.1 操作人员必须做好个人防护后才能进行生物安全柜的操作。 4.2 操作者先把手臂放入生物安全柜内大约一分钟，才能进行实验操作，这样可以使安全柜稳定并且能让气流清扫掉手臂表面的微生物污染。 4.3 所有的操作应该在距离前面的格栅四英寸里面的工作台面上进行，前面的格栅不能被任何物品阻挡。 4.4 所有的材料应该放在距离安全柜前面的格栅和后面工作台面边缘尽可能远的位置，容易产生气溶胶的设备（如搅拌器、离心机等），应该靠近安全柜的后部放置。 4.5 操作时的动作应该从工作台面的清洁区到污染区，一般是从左侧到右侧（习惯于左手操作的人员相反）。 4.6 在生物安全柜内如发生少量的喷洒时，应用污染清除吸收纸巾立即进行处理，并将使用过的纸巾放到生物危害包里，再用浸泡消毒液的毛巾立即进行擦拭消毒，如发生大量的溢出时，要求广泛的消毒，安全柜内的所有物品应该进行表面消毒，并拿出安全柜，使用消毒液的作用时间应维持在20-30分钟。 4.7 生物安全柜内禁止使用酒精灯，使用酒精灯进行消毒接种工具容易发生危险，应使用电子高温灭菌设备。 4.8 工作完成时所有容器和设备应进行表面消毒并拿出安全柜，对安全柜的台面、边缘、后壁和观察窗内侧进行擦拭、消毒。 4.9 工作人员离开实验室应摘下手套、脱下工作服并进行洗手。 总之：临床实验室（包括HIV实验室）是一个对人类具有一定危险的工作场所，保护临床实验室的安全和人员健康是防止环境污染的第一步和首要工作。生物安全包括生物安全设施、生物安全设备、良好的病原微生物学操作以及严格的管理，而实验室生物安全设备的投入是其中不可缺少的一个环节，了解生物安全级别及其相关知识，正确选择生物安全柜及明确操作中的注意事项对于实验室做好安全防护工作保护工作人员的安全和健康，具有重要意义。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     微生物基本知识：环境监测常见问题及解答！ 1、洁净室环境监测BCD级别的频次应该如何去定？如果修订该频次应该做哪些评估？ 答：B级应该按照A级区对待，因为B级是A级的背景区，C级D级中国GMP规定24个月做一次验证，欧盟规定12个月做一次，这指的是验证。如果是动态监测，环境监测分两个，一是微生物监测，二是尘埃粒子监测，对于CD级监测，可以一个季度一次，微生物一个月一次（GMP验证指南）。C级每月，D级每季度。 2、A级区需不需要测下游风速,下游风速的标准如何界定？ 答：A级区为单向流区域，一定要测风速。通常测风速应在高效下面20-30公分。至于下游的风速，没有法规要求。但是一定要根据生产环境当中确定，下游离高效出风口多远的距离，这个方面做一个评估（不是按照法规，一切都OK）。下游，物料暴露区域离A级层流有多远，监测应该如何去做。 3、无菌静态测试时，按照国标还是SO。非最终灭菌需要所有岗位都进行连续监测还是关键区域就可以？ 答：无菌静态测试，国标与SO是一致的，国标标准超过SO的（可能个别点有差异，大方向一致）。不是一定是物料暴露的区域，物料敞开的区域，连续监测的位置为B+A的环境区域。 4、空调系统再验证必须做静态？C+A或者D+A，比如整衣台，传递窗按A级标准执行吗？ 答：只要是验证，一定是静态。C+A或D+A不能称之为A级，充其量只能称为A级送风。在A级送风下想达到什么标准，制定该标准，但想达到A级几乎不现实。 5、B+A的生产中，背景区需要沉降，浮游，尘埃粒子都需要监测吗？表面微生物，地面需要采样吗？ 答：可以做，但不是必须要做。根据评估，要采样。如果做，注意方法，注意定好标准. 6、静态标准没有定，为什么实际还需要做？洁净室首次验证静态没有做微生物的监测项目。 答：静态测试，没有微生物的项目，怎么能判断该洁净室是否合格！一定要有，企业自己制定静态的标准。该标准必须低于动态标准。 7、洁净区多久不用，需要监测沉降，浮游，表面微生物？ 答：自净时间验证。例：洁净区空调停止运行十天，开启后，经过30分钟自净后，可达到该洁净区的设计要求。如果有该自净时间的验证，验证文件指导现场实践，就OK。 8、对于关键区和非关键区环境监测中的霉菌鉴定，现行法规是如何要求的？ 答：霉菌的鉴定要靠鉴定仪器；为何要鉴定，因为超标了。不超标，不用去鉴定。 9、空调系统验证，表面微生物取样点如何布置，需要很多点吗？这由验证时的数据过渡到日常监测的点，如何过渡？ 答：布点参照国标（房间的面积；洁净区级别）。不存在过渡的问题。验证是静态，验证合格证明该区域可以投入生产。生产产品时，该过程为动态。 例：静态时，设定监测50个取样点。监测合格，证明该区域达到设计要求。转入到动态时（生产产品时），不一定需要再监测该50个取样点。 动态取样点的设定原则：清洁的难易程度；物料暴露；人流，物流交叉；靠近回风口等。 10、浮游菌采样器得到的结果针对是每立方米还是每多少分钟？ 答：每立方米，按体积单位。评价一个洁净室的空气当中浮游菌是否超标以单位体积的衡量。 11、固体制剂沉降菌浮游菌表面微生物监测时，培养皿表面会掉落物料，菌落技术和微生物控制有什么关系？ 答：可能会沾到一些物料，没问题。但是，这个物料会不会影响微生物的生长。 例：生产头孢。培养皿沾到头孢，这个结果可信吗？ 什么是药品。药品都有活性成分，活性成分或多或少都会影响微生物的生长。是否影响，查微生物实验室中的方法学验证。在中国，最常见的为抗生素车间的环境监测应该如何做（此话题牵扯到环境监测培养基的适用性实验，有空再讲）。 12、SO14644,SO5没有要求5.0um粒子,GMP无菌附录确定又不少于1立方米。验证时，A级区悬浮粒子监测是否一定要采够1立方米？B级区可以按照一定的检测量可以缩小（690L）？ 答：虽然SO当中没有规定，没有规定5.0um的粒子，但在日常监测时，SO此组织，不是一个强制性的组织，它出版的所有文献，技术，不是强制执行的标准。各个SO的会员国可以参考执行。对企业来说，先把强制性的国标，GMP，药典当中的法规做到。如果还有能力，再参考执行其他的标准。 13、能否通过环境监测的年度数据回顾，趋势回顾，对C级区环境监测减少频率或者减少监测点？ 答：可以，没问题，这就是环境监测的目的所在，或者说是做年度回顾的重要内容。 例：很多企业在做年度回顾后，只是把年度回顾当做一个文件，做好后放到QA的架子上，对日常监测没有任何意义，对日常工作没有任何帮助。根据年度回顾，比如看到一个房间，这一年下来，几乎没有超标，监测结果特别好，可以做一个变更。监测频率放大，原本一个月一测，改为两个月一测，完完整整的走文件系统，走变更，可以执行。 14、对于口服液体制剂车间，空调系统验证要进行动态监测吗？ 答：GMP或药典当中，现在我国的趋势是无菌产品要求越来越高，对口服制剂相对来说，会把标准降的低一些。口服制剂跟无菌制剂的风险对比，是无法比拟的。 15、洁净区环境监测BCD频次如何定？ 答：GMP指南中有,可自行查询。 16、细胞培养，要求无菌，这个需要做培养基模拟？ 答：必须做。 17、隔离系统验证，A级有在线监测，但点位不是很多，A级动态与生产同步进行，为了避免离线监测影响产品，动态只能在线，行否？ 答：监测如果不影响产品的生产过程和影响产品的质量，包括工艺的时候，最好是动态监测。如果动态监测影响质量工艺，甚至可能出现，因为是在线监测，可能给产品的生产工艺带来额外的污染。这种时候，千万别做动态。监测是要配合我的工艺来监测它是否合格。动态监测的前提是不要影响产品的生产工艺。当然，最理想的是在线监测。因为只有在线，根据监测数据来评价产品的生产过程的环境，是最有说服力的。 18、现在很多企业都用SO14644的方法和指标，用国标的很少，问，两种都可以吗？ 答：建议采样国标。国标基本上是超SO。SO此组织，不是一个强制性的组织，它出版的所有文献，技术，不是强制执行的标准。各个SO的会员国可以参考执行。对企业来说，先把强制性的国标，GMP，药典当中的法规做到。如果还有能力，再参考执行其他的标准。 19、对于C级区月环境监测超标，可以通过复验合格说明环境受控吗？ 答：不可以。只要超标，一定要找原因，通过原因来评价，这个污染是否对产品造成影响，中国药典中，把所有药品的复验都删掉了，所以，复验这两个字，慎用。特别是对微生物的复验，不能说明任何问题。 20、C级区层流罩需要做动态监测吗？ 答：没听明白。 21、C级区长了一个霉菌,如何处理？ 答：如果不超标，没关系。但是，霉菌的出现，永远是大问题。因为，霉菌的污染跟霉菌的特点是相关的。细菌的分裂，是一分为二，二分为四，但霉菌的分裂是一变一千，一变一万。所以，对于霉菌的污染，一定要重视。如果出现一个霉菌,建议,彻底消毒。 22、口服隧道烘箱更换高效过滤器，需要监测沉降浮游表面微生物和捡漏吗？ 答：必须监测。 22、动态监测，浮游菌显示1，之后应该合理的评估对产品的影响吗？ 答：在什么级别下，生产什么产品。A级区，只要有1，一定是OOS伺候。 23、空调验证静态测试，必须监测沉降浮游表面微生物吗？ 答：必须监测。 24、动态监测风险评估由哪个部门做比较合适？ 答：单位组织架构。无法回答。风险评估，严格意义上来讲，应该有一个风险评估的团队，该团队是一个跨部门的组合，牵头的，毫无疑问是QA。 25、空调系统一直运行，没有现场生产，多长时间进行环境监测？ 答：很破费，没生产，还一直开着空调。 26、环境监测，各监测项目的警戒线一般采样什么方法来制定？ 答：验证指南。一般来说，年度数据的平均值来测定。对于新企业来说，按标准的二分之一，三分之一来制定。一般来说，警戒线是正态分布的数据，平均值+2倍的标准偏差。 27、动态监测高度，可以低于0.8米吗？ 答：具体多高，风险评估。但是不要动态监测的时候，拿着0.8米满世界跑，被检察官看到，一定是一个缺陷项。 28、对于取样间的洁净控制的动态和静态需要什么时候做，等同于生产吗？ 答：对，没错。取样间，根据产品性质的不同，分为无菌的取样和非无菌的取样。取样间洁净度的级别，也要按照正常的洁净室一样。第一，做年度验证。第二，做正常的清洁消毒和维护。第三，每次取样之前，一定要去监测。特别是对A级，无菌环境的监测。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                  高山类诺卡氏菌的培养方法与实验内容及注意事项！ 高山类诺卡氏菌是Nocardioides属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类；研究；教学。 一、菌种简介平台编号：Bio-03032 提供形式：冻干物拉丁属名：Nocardioides Alpinus 中文译名：高山类诺卡氏菌拉丁学名：Nocardioides alpinus原始编号：Cr7-14菌株来源：←University of Innsbruck, Austria保藏人：Rosa Margesin直接来源国家：奥地利保藏时间：9/26/2010其他保藏编号：=DSM 23325 =LMG 26053生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株；全基因组序列：FOKC00000000.1培养温度：20℃培养基：0908    分离源：冻土采集地点：阿尔卑斯山用途：模式菌株 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征高山类诺卡氏菌，菌丝体生长发育良好，多分枝，革兰氏阳性，好气，中温。菌丝体分基丝与气丝两种，基生菌丝纤细，直径0.5-0.8um,气生菌丝生长成薄层，直径0.6-1um，这两种菌丝体都生有横隔，并断裂成不规则的杆状和球状体，表面光滑。  三、保藏条件培养物和安瓿冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请放-20°C 保存。甘油请置于-80 度。  四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                人主动脉内皮细胞永生化的使用方法与注意事项！人主动脉内皮细胞（Human Artery Endothelial Cells）来源于成年人主动脉组织，其是组成主动脉腔面单层扁平上皮样细胞，大多呈梭形，它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力，调节血压，抗血栓形成等有重要作用，在高血压，心、脑血管疾病的发病机制中有重要病理生理学意义。 一、细胞简介平台编号：Bio-106129 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：永生化细胞 细胞名称：人主动脉内皮细胞永生化用途：（免疫荧光鉴定） 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述主动脉内皮细胞（aortic endothelial cells）组成了主动脉内壁，并持续受到血流剪切应力的影响。内皮细胞在切应力的作用下，分泌不同的内皮因子并进而影响血管收缩和生长。主动脉内皮细胞也调节细胞黏附分子的表达来控制和精确调节炎症反应和组织纤维化。体外培养的原代主动脉内皮细胞可有效地帮助研究者研究内皮功能失调的机理，动脉粥样化等疾病的发病机理以及发展新的治疗方法。该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。 三、细胞特性1)组织来源于人的正常主动脉组织。2)细胞鉴定：血小板-内皮细胞粘附分子（PECAM-1/CD31）或血管假性血友病因子（vWF）免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：上皮样，多角形细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  抗生素溶杆菌的特点与优势及微生物培养方法！ 抗生素溶杆菌是Lysobacter属的微生物，原产地为加拿大。主要用途为分类；研究，具体用途为模式菌株。  一、菌种简介平台编号：Bio-107294 规格：冻干粉 拉丁属名：Lysobacter Sp. 中文名称：抗生素溶杆菌拉丁名称：Lysobacter sp.来源历史：本组原始编号：2018zd0144301原产国：中国模式菌株：否生物安全级别：GR1培养基编号：2培养温度：28℃培养时间：24-48h需氧类型：需氧分离基物：**采集地：**保存方法：冷冻干燥管保藏用途：研究 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、菌种培养1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 五、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   猪骨髓B淋巴细胞永生化的运输与保存及使用！ 一、细胞简介平台编号：Bio-132466 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：永生化细胞 细胞名称：猪骨髓B淋巴细胞永生化用途：（免疫荧光鉴定） 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述B淋巴细胞简称B细胞是由骨髓中的造血干细胞分化发育而来。与T细胞相比，体积略大，B细胞受抗原刺激后。增殖分化出大量浆细胞，浆细胞合成和分泌抗体并在血液中循环。该细胞通过EBV转染形成永生化的B淋巴细胞系。注意事项：收到细胞后第一次传代建议1：2传代，充液培养基是维持培养基，不能用来培养细胞。 三、细胞特性1）组织来源于实验动物的正常骨髓组织。2）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。3）细胞生长方式：悬浮培养。4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性。5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。             七、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备DMEM培养基；优质胎牛血清，10%；2mM L-谷氨酰胺; 10mM HEPES; 双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例；1.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                      产红青霉的形态特征与产品优势及培养方法！ 产红青霉是Penicillium属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-66276 提供形式：冻干物拉丁属名：Penicillium Rubens 中文名称：产红青霉拉丁名称：Penicillium rubens来源历史：←黑龙江省轻工科学研究院(L115)收藏时间：2007/3/5原始编号：WH4258资源归类编码：15151913115模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：菌落青绿色，貌似青霉；分生孢子穗近圆形。具体用途：除光学仪器外的防霉试验菌种。生物危害程度：四类培养基编号：CM0015培养基名称：查氏琼脂(Czapek's Agar)培养基成分：蔗糖 30.0g，NaNO3 3.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 1.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.0～6.5。培养温度：25-28℃需氧类型：好氧保存方法：真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：除光学仪器外的防霉试验菌种。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征产红青霉，菌落质地绒状；边缘纯圆；菌落兰绿色；表面有规则放射状沟纹；有大量黄色渗出液。分生孢子梗发生于基质，孢梗茎具分隔，直径2.0-3.8μm，壁平滑；帚状枝两轮生或三轮生，偶有四轮生，常具有副枝1-2个，9.0-20×2.5-3.5μm；梗基每轮2-4个，8.0-13×2.0-3.0μm；瓶梗每轮3-6个, 披针状，5.5-9.5×1.5-2.3μm；分生孢子近球形或椭圆形，2.3-3.8×2.2-3.3μm，壁平滑。产氧化酶。  三、产品优势1、产品质量稳定，是为科研和生产提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装，冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法，保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序，确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业，疾控中心、质检局、出入境、药检局等等，得到广泛好评。 四、微生物培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤：a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 五、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  大鼠膀胱平滑肌细胞的分离方法与质量检测！ 一、产品信息平台编号：Bio-73682 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 细胞名称：大鼠膀胱平滑肌细胞培养条件：原代细胞取组织现分用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述膀胱是一个储尿器官,它是由平滑肌组成的一个囊形结构，位于骨盆内，其后端开口与尿道相通。膀胱与尿道的交界处有括约肌，可以控制尿液的排出。膀胱壁分为三层：即浆膜层、肌肉层和粘膜层。平滑肌细胞主要处于肌肉层，肌肉层中包含：1.逼尿肌：逼尿肌为膀胱壁层肌肉的总称，由平滑肌构成。分为三层，内外层为纵行肌，中层为环形肌。环状肌最厚，坚强有力。2.膀胱三角区肌：三角区肌是膀胱壁层以外的肌肉组织，起自输尿管纵肌纤维，向内、向下、向前扇状展开。向内伸展部分，和对侧肌彼此联合成为输尿管间嵴，向下向前伸展至后尿道部分，为贝氏(Bell)肌，另有一组左右肌纤维在三角区中心交叉成为三角区底面肌肉。逼尿肌收缩，可使膀胱内压升高，压迫尿液由尿道排出。在膀胱与尿道交界处有较厚的环形肌，形成尿道内括约肌。在括约肌收缩能关闭尿道内口，防止尿液自膀胱漏出。 三、细胞特性1)细胞来源于人正常膀胱组织。2)细胞鉴定：平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：长梭状细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、方法简介实验室分离的大鼠膀胱平滑肌细胞采用胰蛋白酶 - 胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。 七、质量检测实验室分离的大鼠膀胱平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 八、培养信息培养基     含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等产品货号    CM-R059换液频率    每2-3天换液一次生长特性    贴壁细胞形态    成纤维细胞样传代特性    可传5代左右；3代以内状态最佳消化液     0.25%胰蛋白酶培养条件    气相：空气，95%；CO2，5%大鼠膀胱平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用普诺赛配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  用于紫菜绿斑病病原菌的：柠檬假交替单胞菌  柠檬假交替单胞菌是Pseudoalteromonas属的微生物，原产地为中国。革兰氏阴性、好氧菌。主要用途为分类；研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-02684 提供形式：冻干物拉丁属名：Pseudoalteromonas Citrea 中文译名：柠檬假交替单胞菌拉丁学名：Pseudoalteromonas citrea原始编号：No.17菌株来源：←上海水产大学保藏人：马家军直接来源国家：中国保藏时间：4/24/2002生物危害：四类模式菌株：非模式菌株菌株用途：紫菜绿斑病病原菌培养温度：18℃培养基：0223    其他培养条件：3天分离源：绿斑病条斑紫菜采集地点：上海采集国家：中国用途：紫菜绿斑病病原菌 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。  三、培养条件【编号】 0223 【名称】 海水 2216 琼脂海水 2216 琼脂 55.1 g 蒸馏水 1.0 L Ph 7.4 四、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 六、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2 支，单位所提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    小鼠B淋巴瘤细胞的知识与应用及培养操作步骤！ 一、背景 WEHI-231，也被称为WEHI 231或WEHI231，是一种小鼠B淋巴瘤细胞系。这种细胞系源于BALB/c x NXB F1小鼠，通过矿物油注射诱导产生。WEHI-231细胞在生物医学研究中具有广泛的应用，特别是在肿瘤学、免疫学、药物筛选和细胞治疗等领域。 首先，WEHI-231（小鼠B淋巴瘤细胞）细胞系常被用作研究B细胞淋巴瘤的模型。由于其具有淋巴瘤的特性，这种细胞系可用于模拟人体B细胞淋巴瘤的发病过程，从而深入了解淋巴瘤的生物学特性、发病机制和治疗靶点。 其次，WEHI-231（小鼠B淋巴瘤细胞）细胞也常被用于药物筛选和细胞治疗研究。由于其具有较高的增殖能力和对多种药物的敏感性，这种细胞系可用于测试新药物对淋巴瘤细胞的细胞毒性、抗增殖作用或诱导凋亡的能力。此外，WEHI-231细胞还可作为基因转染的宿主细胞，用于研究基因治疗对淋巴瘤的治疗效果。 二、WEHI-231（小鼠B淋巴瘤细胞）细胞培养操作 1)复苏WEHI-231（小鼠B淋巴瘤细胞）细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)WEHI-231（小鼠B淋巴瘤细胞）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)WEHI-231（小鼠B淋巴瘤细胞）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 WEHI-231（小鼠B淋巴瘤细胞）细胞可以用于microRNA-29对器官移植排斥反应的调控作用及其机制研究： miR-29直接靶向PTEN影响PI3K/AKT通路调控B细胞AICD前面的实验,在转基因小鼠GS29来源的nave B细胞上证实了低表达miR-29能够促进B细胞的AICD。但原代B细胞体外难于存活,后续实验难于展开。故而先选用了公认的B细胞AICD体外模型,即体外以羊抗鼠anti-IgM刺激WEHI-231（小鼠B淋巴瘤细胞）细胞诱导AICD。转染microRNA-29a/b/c的mimics后WEHI-231（小鼠B淋巴瘤细胞）细胞的AICD明显降低,而转染inhibitor后WEHI-231细胞的AICD明显增强。这些实验再次证明了miR-29能够有效调控B细胞的AICD。 对targetscan网站提供的miR-29的1000多个靶点进行GO分析,发现这些靶点中有85个靶点涉及细胞存活与生长发育。再对这85个基因,进行keggpathway富集分析,选取选取couts比较高的四个pathway进行vanny分析,筛选出两个具有广泛作用的两个分子:PTEN与PIK3CA。而后,我们构建了PTEN、PIK3CA以及它们突变体的报告基因用于双荧光报告基因实验,验证靶点。 结果显示,miR-29能够直接靶向PTEN,抑制PTEN 3’UTR报告基因的活性。而对于PIK3CA的靶点验证未能得到证实。后续我们构建了PTEN的质粒和siRNA,分别进行过表达和干扰实验,进一步验证miR-29可通过PTEN调控WEHI-231（小鼠B淋巴瘤细胞）细胞的AICD。PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)基因一方面是个明星抑癌基因,另一方面其带有双重特异性磷酸酶,能够使PIP3(phosphatidylinositol-3,4,5-triphosphate,PIP3)脱磷酸化,最终抑制PI3K/AKT通路。而B细胞的AICD主要涉及三种信号,PLCγ,Ras和PI3K/AKT。故而,我们western蛋白印迹法检测了antagomir-29a-3p处理的WEHI-231细胞中p-AKT水平,发现p-AKT水平明显低于对照组。这一实验证实mir-29通过靶向PTEN影响PI3K/AKT通路。进一步研究,我们发现p-BAD水平明显降低;抗凋亡分子Bcl-2和Bcl-xl水平亦降低。以上结果显示,mir-29通过靶向PTEN抑制PI3K/AKT信号通路,导致AKT磷酸化水平降低,影响下游抗凋亡分子Bcl-2和Bcl-xl的表达,最终增强B细胞的AICD。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 唾液乳杆菌的保藏条件与注意事项及打管说明！ 唾液乳杆菌，salivarius种Lactobacillus属益生菌。刺激免疫细胞分泌抗过敏相关细胞激素浓度的唾液乳杆菌。是革兰氏染色阳性杆菌，不生成孢子，不具触酶、氧化酶及运动性，在好氧及厌氧环境均能生长，属于兼性异质发酸性菌株，葡糖代谢时不产生气体。 一、菌种简介平台编号：Bio-03532 提供形式：冻干物拉丁属名：Lactobacillus Salivariu 中文译名：唾液乳杆菌拉丁学名：Lactobacillus salivarius原始编号：JCM 1231菌株来源：←JCM保藏人：周宇光直接来源国家：日本保藏时间：5/8/1996其他保藏编号：=ATCC 11741 =BCRC 14759 =CCUG 31453 =CIP 103140 =DSM 20555 =LMG 9477 =NRRL B-1949.生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株培养温度：37℃培养基：0006    分离源：人唾液用途：模式菌株注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基MRS 培养基酪蛋白胨 10 克 牛肉膏 10 克酵母提取液 5.0 克 葡萄糖 20 克乙酸钠 5.0 克 柠檬酸二胺 2.0 克吐温 80 1.0 克 磷酸氢二钾 2.0 克七水硫酸镁 0.2 克 七水硫酸锰 0.05 克碳酸钙 20.0 克 琼脂 20.0 克蒸馏水 1.0 升 PH 6.8如果要配制液体培养基，则不用加入碳酸钙和琼脂 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。请勿长期置于室温。  四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2 支，单位所提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。4、另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。5、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。6、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。7、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌株后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  微生物实验室的菌株管理与相关概念及使用方法！ 百欧博伟生物：菌株是微生物实验室检验工作中不可缺少的重要生物资源，常用于培养基验收、试验对照、人员培训考核、方法确认等方面的质量控制。因此为了确保工作菌株的生物特性和纯度、实现工作菌株方便快捷的使用及溯源，菌种的相关管理工作在微生物实验室就显得尤为重要，按统一操作程序制备的菌株是微生物试验结果一致性的重要保证。今天小编就“微生物实验室菌株管理及使用”主题和大家做一个交流分享。 菌株管理及相关概念 1、几个概念 标准菌株：即0代菌种，是指从官方菌种保藏机构获得并至少定义到属或种的水平的菌株。实验室的标准菌株应有明确来源。 标准储备菌株：从国内或国外菌种保藏机构获得的标准菌株经过复活并在适宜的培养基中生长后，即为标准贮备菌株。 储存菌株：储存菌株通常从冻干或超低温保存的标准储存菌株进行制备。 工作菌株：标准储备菌株或储存菌株经继代培养后得到的菌株。工作菌株不可替代标准菌株。 标准培养物：标准菌株、标准储备菌株、工作菌株的统称。 商业派生菌株：即用型与标准菌株所有相关特性等效的可以溯源的商业衍生物。常见的有定量工作菌株。 2、标准菌株的获取 药品微生物检验用的试验菌应为有明确来源的标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效的可以溯源的商业派生菌株。 标准菌株应来自认可的国内或国外菌种保藏机构。中国药典2020版以及国标中涉及的菌株主要来自于两大菌种保藏中心：中国医学细菌保藏管理中心（CMCC）、美国标准菌种保藏中心（ATCC）。 菌株购买前需根据实验室检测需求制定采购计划，经审批后，向认可的国内或国外的菌种保藏机构购买标准菌株。标准菌株到达实验室后，菌种管理人应检查其名称、数量以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息填写记录（包括菌种名称、编号、数量、代数、来源、接收日期、接收人等），并将其贮存在规定温度的冰箱里。 3、标准菌株的复苏、复壮和保存 标准菌株的复苏、复壮或培养物的制备应按供应商提供的说明或按已验证的方法进行。复苏、复壮应选择营养成分丰富且全面的培养基（例如：TSA/TSB/NA/NB/SDB/SDA等），一般不使用选择性较强的培养基；特殊的一些菌株在普通的培养基上生长不好，可能还需添加生长因子。 标准储备菌株应进行纯度和特性确认。纯度确认包括：平板划线查看菌落形态、革兰氏染色、显微镜观察菌体形态等；关键特性确认可选择：特征生化反应确认、试剂盒鉴定、菌种鉴定仪鉴定等。需要注意的是，从开启、复苏、复壮到纯度和特性的确认，都应做好实验记录。 标准储备菌株保存时，可将培养物等份悬浮于抗冷冻的培养基中，并分装于小瓶中，药典建议采用低温冷冻干燥、液氮贮存、超低温冷冻（低于-30℃）等方法保存。低于-70℃或低温冷冻干燥方法可以延长菌种保存时间。菌种应设专人管理，菌种保藏的地点应采取一定的措施使非管理者不能轻易获取，例如加锁保管，双人保管等。 标准储备菌株可用于制备每月或每周1次转种的工作菌株。冷冻菌种一旦解冻转种制备工作菌株后，不得重新冷冻和再次使用。 从保藏机构获取的冻干菌种为0代菌种，每转接一次增加一代（1代是指将活的培养物接种到微生物生长的新鲜培养基中培养，任何形式的转种均被认为传代一次），工作菌株的传代次数应严格控制，不得超过5代，以防止过度的传代增加菌株变异的风险。 微生物菌种查询网在满足的不同企业的需要方面，站在了专业标准的前沿，有技术的支撑，有专业品质保证的可靠性标准，同时在整体的信息权威与市场相关服务配套方面，满足不同需求的客户，放心进行选择的需要。ATCC菌种有资源的界定，在工业企业中应用，对于相关的管理标准与技术性要求，也同样有较高专业的特色，所以从根本上来说，要保证有更可靠的实用意义，还必须要考虑的重点，就在于拥有专业权威的基础，可以带给实践菌种服务于生产很好的基础。

                铜绿假单胞菌的实验室检查与生化鉴定及预防方法！ 一、知识简介 铜绿假单胞菌(P.Aeruginosa)原称绿脓杆菌。在自然界分布广泛，为土壤中存在的最常见的细菌之一。各种水、空气、正常人的皮肤、呼吸道和肠道等都有此菌存在。本菌存在的重要条件是潮湿的环境。 二、生物学特性 铜绿假单胞菌是一种常见的条件致病菌，属于非发酵革兰氏阴性杆菌。菌体细长且长短不一，有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。菌体的一端有单鞭毛，在暗视野显微镜或相差显微镜下观察可见细菌运动活泼。 铜绿假单胞菌为专性需氧菌，最适生长温度为25~30℃，特别是该菌在4℃不生长而在42℃可以生长的特点可用以鉴别。在普通培养基上可以生存并能产生水溶性的色素，如绿脓素(pyocynin)与带荧光的水溶性荧光素(pyoverdin)等。在血平板上会有透明溶血环。 该菌含有O抗原(菌体抗原)以及H抗原(鞭毛抗原)。O抗原包含两种成分：一种是其外膜蛋白，为保护性抗原；另一种是脂多糖，有特异性。O抗原可用以分型。 三、实验室检查 1、标本来源 采自不同感染部位的各种标本，包括血液、尿液、痰标本、脓汁、穿刺液等。还包括来自医院环境中的各种标本如水、空气、物体表面采样等。 2、染色镜检 为革兰阴性杆菌，菌体大小(1.5~5.0)um×宽(0.5~1)um，细长且长短不一，有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。菌体的一端有单鞭毛，无芽胞，无荚膜。 3、分离培养 本菌生长对营养要求不高。对有正常菌群存在的临床标本或来自环境中的标本应接种选择性培养基如麦康凯琼脂培养基(MAC)；对无正常菌群存在的临床标本如血液、脑脊液、穿刺液等可接种普通全营养型培养基（如TSA、PCA、营养琼脂）或血琼脂培养基、铜绿假单胞菌培养基。普通琼脂培养基上生长18~24h可以见到扁平、湿润的菌落，该菌所产生的带荧光的水溶性青脓素与绿脓素相结合将使得培养基呈亮绿色;在血琼脂平板上生长时可以见到在菌落的周围有溶血环，菌落呈金属光泽;在铜绿假单胞菌培养基上呈蓝绿色或者红褐色菌落，365nm紫外灯下显荧光。如果是在液体培养基中则呈浑浊状生长，在液体表面形成菌落，而在培养基底部的细菌生长不良。 4、生长实验 铜绿假单胞菌在4℃不生长而在42℃可以生长。 四、生化鉴定 分型 (1)噬菌体分型：所应用的噬菌体现有24株，分型率达90%。 (2)血清学分型：利用O抗原进行分型，可分20个血清型。 (3)质粒指纹图分析：此项技术是对同种细菌的不同株进行同源性分析的一种方法。根据细菌携带质粒的情况进行分析。 五、临床意义 铜绿假单胞菌为条件致病菌，是医院内感染的主要病原菌之一。患代谢性疾病、血液病和恶性肿瘤的患者，以及术后或某些治疗后的患者易感染本菌。 常引起术后伤口感染，也可引起褥疮、脓肿、化脓性中耳炎等。本菌引起的感染病灶可导致菌血症和败血症。烧伤后感染了铜绿色假单胞菌可造成死亡。本菌普遍存在，而多在潮湿环境。铜绿假单胞菌是存在于人类中最常见的一种假单胞菌。该菌通常伴随毒力较强的细菌存在于病灶中，但偶尔也可单独引起暴露于外部的组织感染。感染通常发生于医院内，洗涤槽、防腐溶液和贮尿容器中常可发现这种细菌。通过医护人员可将病菌传给病人，特别在灼伤和新生儿重症监护室，是重要的医院内病原菌。 六、临床症状 （一）败血症  铜绿假单胞菌败血症多继发于大面积烧伤、白血病、淋巴瘤、恶性肿瘤、气管切开、静脉导管、心瓣膜置换术及各种严重慢性疾病等的过程中。本菌引起的败血症约占革兰阴性杆菌败血症的第三至第四位，病死率则居首位。其临床过程与其他革兰阴性杆菌败血症相似，除早产儿及幼儿可不发热外，病人可有弛张热或稽留热，常伴休克、成人呼吸窘迫综合征 (ARDS)或弥散性血管内凝血 (DIC)等。皮肤出现坏疽性深脓疱为其特征性表现，周围环以红斑，皮疹出现后48～72小时，中心呈灰黑色坏疽或有溃疡，小血管内有菌栓，将渗液涂片革兰染色或培养易找到细菌。皮疹可发生于躯体任何部位，但多发于会阴、臀部或腋下，偶见于口腔粘膜，疾病晚期可出现肢端迁徙脓肿。 （二）呼吸道感染  原发性铜绿假单胞菌肺炎少见，常继发于宿主免疫功能受损后，尤其易发于原有肺部慢性病变基础上，如：慢性支气管炎、支气管扩张、气管切开、应用人工呼吸机后，X线表现为两侧散在支气管肺炎伴结节状渗出阴影，极少发生脓胸。 （三）心内膜炎  常发生于原有心脏病基础上，心脏手术、瓣膜置换术后，细菌常接种于伤口缝线上或补缀物上，也可发生在烧伤或有药瘾病人的正常心脏瓣膜上。炎症可发生在各个瓣膜，但以三尖瓣为多见。如果抗生素延迟应用，有赘生物生长及左心瓣膜病变，则预后较严重，药物治愈率低，最好的治疗是及早进行手术切除赘生物和异物。 （四）尿路感染  铜绿假单胞菌是医院内泌尿道交叉感染的常见菌，占院内感染尿路分离菌的第二位，留置导尿管是截瘫病人获得感染的诱因。其他如：神经原膀胱、尿路梗阻，慢性尿路感染长期应用抗菌治疗易致铜绿假单胞菌感染。40%的铜绿假单胞菌败血症的原发病为尿路感染。 （五）中枢神经系统感染  铜绿假单胞菌脑膜炎或脑脓肿常继发于颅脑外伤、头和颈部肿瘤手术后，或耳、乳突、鼻窦感染扩散蔓延，腰穿术或脑室引流后。粒细胞缺乏、严重烧伤则为铜绿假单胞菌败血症过程中迁徙至脑部的危险因素。临床表现与其他细菌性中枢感染相同，但预后较差，病死率在60%以上。 （六）骨关节感染  主要由于败血症的血行迁徙或来源于邻近组织感染病灶，老年人复杂性尿路感染及泌尿生殖系手术或器械操作，可致多发性椎体骨髓炎。近年来报道，注射海洛因者常致颈椎骨髓炎。临床过程无甚特殊，较少疼痛感，预后不良。 （七）眼科  本菌是角膜溃疡或角膜炎的常见病原菌之一，常继发于眼外伤或农村稻谷脱粒时角膜擦伤后。铜绿假单胞菌污染了隐形眼镜及镜片液是本菌感染眼睛的另一种重要方式。感染发展迅速，48小时内可波及全眼，应予紧急处理，否则易造成失明。 （八）耳、乳突及鼻窦感染  游泳后外耳道的pH 环境因水进入而偏碱性，有利于铜绿假单胞菌生长，造成外耳道炎。精尿病伴血管病变者，偶可发生铜绿假单胞菌所致慢性无痛恶性外耳道炎，如果不及时治疗，后果较差。本菌所致的中耳炎及乳突炎常继发于恶性外耳道炎或急性中耳炎，有糖尿病或其他疾病时，铜绿假单胞菌可通过血管鞘而引起颅内感染。 （九）皮肤软组织感染  败血症病人可继发红斑坏疽性皮疹、皮下结节、深部脓肿、蜂窝织炎等皮损。烧伤创面、褥疮、外伤创口及静脉曲张溃疡面上，经常可培养出铜绿假单胞菌。 （十）消化道感染  铜绿假单胞菌可在消化道任何部位产生病变，常见于婴幼儿以及肿瘤化疗致粒细胞低下的免疫缺损者，可引起婴幼儿腹泻及成人盲肠炎或直肠脓肿。消化道铜绿假单胞菌感染亦是败血症的重要入侵门户之一。 七、耐药性 铜绿假单胞菌的耐药机制异常复杂，主要与以下因素有关: ①细菌产生抗菌活性酶，如β-内酰胺酶、氨基糖苷钝化酶等。 ②细菌改变抗菌药物作用的靶位，如青霉素结合蛋白(PBPs)、DNA旋转酶等结构发生改变，从而逃避抗菌药物的抗菌作用。 ③外膜通透性降低。 ④生物膜形成。 ⑤主动泵出系统等等。 其中主动泵出系统在铜绿假单胞菌多重耐药机制中起着主导作用。 实验证明，治疗铜绿假单胞菌的临床感染，以复合青霉素类、三或四代头孢菌素、三或四代喹诺酮类等药物为好。但临床抗感染的经验证明，单一抗生素对大多数G-杆菌尤其是铜绿假单胞菌的治疗是不理想的，因其很快就会出现耐药株，从而导致治疗失败，故此，NCCLS以及许多权威的专业人士早已主张联合用药。 亚胺培南对此菌的敏感性虽然很高，但由于它易致二重感染，有文献报导其耐药菌和霉菌进驻发生率可高达3.2%和8.0%，同时它又是诱导酶产生的良好诱导剂，加上异常价格昂贵，故此，亚胺培南作为治疗混合感染的二线用药可能会更合理。 由于广谱抗生素、激素以及免疫抑制剂的广泛使用，铜绿假单胞菌对多种抗生素快速产生耐药性在临床抗感染的一线战场己是不争的事实，对NCCLS推荐的一线用药，如庆大霉素、头孢噻甲羧肟、哌拉西林等亦早己产生不同程度的耐药性，这就使得临床的抗感染治疗显得越来越困难。故此，临床上还应加强消毒防御，控制感染发生，同时，应更为合理地科学地使用抗生素，并应在药敏试验结果指导下进行抗感染治疗。 第三代头孢菌素中的头孢他啶是经典的抗铜绿假单胞菌药物，但随着耐药菌株的迅速增加，一些对铜绿假单胞菌活性增强或对耐药菌株有效的第四代头孢菌素(如马斯平)以及第四代喹诺酮(如天坤)均已经陆续涌现，且有相当部分品种已用于临床，这对临床抗感染治疗无疑是个好消息。而今，含儿茶酚取代基的第四代头孢菌素是开发研究的热点，有被称为"第五代"之势。其中GR69153、LB10522、Ro9-1428、Ro09-1227和RU-59863对铜绿假单胞菌的抗菌作用更强且对耐药菌株更有效，体外活性更为出色，远强于头孢他啶。 细菌生物膜(biofilm)在铜绿假单胞菌感染中广泛存在，是导致抗菌治疗失败的重要原因之一。大环内酯类抗生素自身几乎没有抗铜绿假单胞菌的活性，但能抑制生物膜的形成，调节免疫，增强吞噬细胞的吞噬作用，抑制铜绿假单胞菌的一些毒性因子而增强其他抗铜绿假单胞菌药物的活性，改善疗效。研究发现，红霉素、克拉霉素、阿奇霉素和罗红霉素能有效抑制生物膜形成，短期联合头孢他啶等抗铜绿假单胞菌药物后就可明显改善临床疗效(如克拉霉素5d方案)，其中以阿奇霉素抑制作用最强。 总之，为了提高抗菌治疗效果，应经常监测本地区及本单位的病原菌对抗菌药物的敏感性及其耐药特性，并根据药敏试验有针对性地合理地选用抗菌药物，且在临床实践与研究中探讨抗感染的药物组合和开发新的抗感染药物。同时，改善卫生条件，严格执行消毒隔离制度，防止耐药菌的交叉感染，控制医院感染的发生率，也是一项非常重要的工作。 八、预防 积极治疗原发病，缩短住院时间；医院必须严格消毒病房、器械、敷料，医务人员及护理员勤洗手，认真执行无菌操作；对携带多药耐药病菌者进行接触隔离以防引起医院感染。注意个人防护，勤洗手，提高机体免疫力，避免与铜绿假单胞菌感染患者接触，有皮肤创面是应及时消毒处理。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   COLO320 DM人结直肠腺癌细胞的培养操作规程！ 一、细胞简介平台编号：Bio-106209 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：COLO320 DM 细胞名称：COLO320 DM人结直肠腺癌细胞细胞用途：仅供科研使用。     用途：(STR鉴定正确) 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特性1）来源：器官：结肠 肿瘤分期：Dukes氏Ｃ型 疾病：结直肠腺癌2）形态：半贴壁半悬浮3）含量：>1x106 个/mL4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装 三、细胞的运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。        四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。 五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备RPMI-1640（推荐的培养基）；优质胎牛血清，10%；双抗1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）培养基补加到6ml。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。维持细胞密度在1 x 105 到2 x 106 /mL，每2到3天换液，换液可通过添加几毫升新鲜培养基或离心之后去上清液，添加新培养基重悬培养。收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时，用移液枪吸取少量培养基轻吹瓶底部，取上清，可使用血球计数板计数。2、4min ，1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度1-2xE6/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      木糖氧化无色杆菌的培养方法与实验内容及注意事项！  木糖氧化无色杆菌是Achromobacter属的微生物，原产地为中国。菌落小而平、透明、白色、表面湿润、边缘整齐、生长较快，革兰氏阴性。主要用途为研究；教学。  一、菌种简介平台编号：Bio-115334 规格：甘油/培养物 拉丁属名：Achromobacter Xylosoxidans 中文名称：木糖氧化无色杆菌拉丁名称：Achromobacter xylosoxidans来源历史：CGMCC收藏时间：2020-09-16 00:00:00.0原始编号：1000原产国：美国模式菌株：否生物安全级别：一级其它保藏中心编号：CGMCC 1.3848培养基编号：2培养温度：30℃培养时间：24-48h需氧类型：好氧分离基物：**采集地：**保存方法：冷冻干燥管保藏用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基* 营养琼脂培养基（NA）* 胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）* LB 培养基（以上三款培养基任选一种即可） 三、保藏条件培养物和安瓿冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请放-20°C 保存。甘油请置于-80 度。  四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

               施氏假单胞菌：活性污泥组成菌株，用于污水处理 施氏假单胞菌是革兰氏阴性、无芽孢的短杆状。菌落淡黄色，边缘不规则，表面有褶皱、湿润、半透明，好氧，化能异养。可以以100ppm对硝基苯酚为唯一碳源生长，24h内降解率90%。最适生长温度为28℃。 一、菌种简介平台编号：Bio-56714 提供形式：冻干物拉丁属名：Pseudomonas Stuzeri 中文名称：施氏假单胞菌属名：Pseudomonas种名加词：stuzeri来源历史：←大连化学物理研究所生物技术部收藏时间：2010.9.16原始编号：DEH130资源归类编码：15131134101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究具体用途：活性污泥组成菌株，用于污水处理。特征特性：菌落为不规则梭形，凸起状，表面粗糙，浅黄色。Genbank注册号 FJ713780。    生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：海绵组织采集地：中国大连市培养基：胰胨-大豆胨琼脂 40.0g，蒸馏水 1.0L。培养温度：28℃资源保藏类型：培养物保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：10430用途：研究；活性污泥组成菌株，用于污水处理。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基*营养琼脂培养基（NA）*胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSA）*LB 培养基 三、保藏条件冻干菌种应在 2-8°C 保存,斜面菌种 15-20℃，15-20 天转一次。  四、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用 0.1-0.2ml 的培养液或无菌水溶解，接种在 2 个斜面上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面或平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。 五、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    中国仓鼠肺成纤维细胞的应用及培养操作步骤！ 一、背景 V79是一种来自中国仓鼠肺部的成纤维细胞系，被广泛用于生物医学研究，特别是在细胞生物学、遗传学、毒理学和放射生物学等领域。这些细胞具有贴壁生长的特性，可以在适当的培养基中迅速繁殖。 由于其较高的繁殖能力和对培养条件的适应性，V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞经常被选作实验室研究的模型系统。在细胞生物学研究中，V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞可用于研究细胞周期、细胞分裂、细胞凋亡等基本生物学过程。在遗传学和基因工程研究中，这些细胞可用于基因转染、基因敲除和基因表达调控等实验。在毒理学研究中，V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞可用于评估化学物质、药物、辐射等外界因素对细胞的毒性作用。在放射生物学研究中，V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞对辐射的敏感性使其成为研究辐射损伤和修复机制的理想模型。 此外，V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞还可用于药物筛选和细胞治疗等应用研究。例如，在药物筛选中，V79细胞可用于测试新药物的细胞毒性、抗增殖作用或细胞保护作用。在细胞治疗中，尽管V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞本身不是用于治疗目的的细胞类型，但它们可以作为细胞培养的饲料层或共培养系统来支持其他细胞类型的生长和分化。 二、V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞培养操作 1)复苏V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞可以用于PM2.5中的矿物粉尘对V79细胞毒性研究： 选取PM2.5中矿物主要成分方解石、钠长石、石英、绢云母等粉尘，将四种矿物粉尘分别作用于中国仓鼠肺细胞（Chinese Hamster LungCell，V79细胞），研究其对细胞产生的毒性作用，探讨其产生毒性作用的相关机制。 方法： （1）采用X射线荧光光谱分析法测定原矿物样品化学组成，经激光粒度分析仪分析四种矿物粉尘粒径分布。 （2）实验组选取处于对数生长期的V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞，调整细胞浓度后分别加入50、100、200、400μg/ml的四种矿物粉尘悬液，设置阴性对照组加入相同剂量的细胞培养液，继续培养24h后。用噻唑蓝（MTT）实验检测细胞增殖情况，比较各组细胞的存活率。 （3）瑞氏-吉姆萨(Wright-Giemsa)染色，油镜下观察各组细胞形态改变，计数微核细胞千分率。 （4）彗星实验（SCGE）检测各组细胞DNA的损伤程度。每种浓度随机选取100个细胞彗星图像，CASP彗星分析软件分析彗星图像，以尾矩(OTM)作为分析指标。 （5）直线相关分析方法分析V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞存活率同微核率、尾矩（OTM）值相关性。 （6）酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组细胞上清液中白细胞介素-6（IL-6）含量，分析矿物粉尘产生毒性作用的相关机制。 结果： （1）实验所选用矿物粉尘石英、绢云母、钠长石的化学组成成分中所含二氧化硅（SiO2）含量最高，而矿物粉尘方解石所含氧化钙（CaO）含量最高；四种矿物粉尘经检测其平均粒径均 （2）同对照组相比较，四种矿物粉尘均能影响V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞存活率，随矿物浓度的增高，细胞存活率降低，细胞存活率与矿物粉尘的浓度呈现剂量-效应关系；与矿物钠长石、方解石相比较，矿物石英、绢云母导致细胞存活率下降更加明显。 （3）随着四种矿物粉尘浓度的增加，细胞微核率均有增加，其微核率从大到小顺序为：绢云母＞石英＞钠长石＞方解石。各粉尘组在400ug/ml的高浓度时，其微核率同阴性对照组比较，均具有统计学意义（P （4）四种矿物粉尘对V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞的DNA损伤呈现剂量-效应关系，矿物粉尘浓度越高，DNA损伤越明显。钠长石、石英和绢云母高浓度暴露组的细胞OTM值与阴性对照组比较，具有统计学意义（P （5）暴露在不同矿物粉尘中的细胞存活率的变化同细胞微核率的变化均呈现负相关，细胞存活率的变化同细胞OTM值的变化同样均呈现负相关。 （6）四种矿物粉尘均能使V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞培养液上清液中的IL-6含量升高，其中石英和绢云母暴露组浓度升至100μg/ml及以上，其IL-6含量与阴性对照组比较，差异有统计学意义（P 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    大鼠T淋巴细胞接收后的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-132468 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶  细胞信息：原代细胞 细胞名称：大鼠T淋巴细胞细胞用途：大鼠T淋巴细胞注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述T淋巴细胞来源于骨髓的多能干细胞，骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。T细胞是相当复杂的不均一体、又不断在体内更新、在同一时间可以存在不同发育阶段或功能的亚群，按免疫应答中的功能不同，可将T细胞分成若干亚群：辅助性T细胞（Helper T cells,Th）、抑制性T细胞（Suppressor T cells,Ts）、效应T细胞（Effector T cells,Te）、细胞毒性T细胞（Cytotoxic T cells,Tc）、迟发性变态反应T细胞（Delayed type hypersensitivityT cells,Td）、放大T细胞（Ta），、原始的或天然T细胞（Naive T cells）、记忆T细胞（Memory T cell,Tm）。T细胞是淋巴细胞的主要组分，它具有多种生物学功能，如直接杀伤靶细胞，辅助或抑制B细胞产生抗体，对特异性抗原和促有丝分裂原的应答反应以及产生细胞因子等，T细胞产生的免疫应答是细胞免疫，细胞免疫的效应形式主要有两种：与靶细胞特异性结合，破坏靶细胞膜，直接杀伤靶细胞；另一种是释放淋巴因子，最终使免疫效应扩大和增强。 三、细胞特性1)细胞来源于外周血。2)细胞鉴定：CD3免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：悬浮培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输。收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、大鼠T淋巴细胞接受后处理1)收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。2)请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。3)弃去T25瓶中的培养基，添加 6ml本公司附带的完全培养基。4)如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。5)接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。 六、大鼠T淋巴细胞培养操作1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。2.加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。  3.按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。4.将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面 T25 瓶为类；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 七、大鼠T淋巴细胞培养注意事项1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。2、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。4、静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细胞汇合度 80%左右时正常传代。5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 Procell 技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。7、该细胞仅供科研使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      指状青霉的菌株培养与实验内容及打管说明！ 指状青霉是家养/栽培，属于指状青霉属。菌落绒状，暗黄绿色，后变橄榄灰，有特殊的香味；分生孢子梗短，帚状枝大而不规则；产孢瓶体在不同的高度上形成；分生孢子卵形至圆柱形。侵害柑橘果实，引起绿霉病。 一、菌种简介平台编号：Bio-23799 规格：培养物 拉丁属名：Penicillium Digitatum 中文名称：指状青霉拉丁属名：Penicillium种名加词：digitatum (Pers.) Sacc.收藏时间*：2007-9-28来源历史：中国农业大学转原产国：中国资源归类编码：15151913115模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；教学特征特性：分生孢子梗无色，顶端具一至多次分枝，呈扫帚状。孢子梗具1～2个分枝，小梗中部稍宽，上下端稍细，呈细长纺锤形，其上串生分生孢子，分生孢子单胞，无色，卵圆形或圆柱形。生物危害程度：四类寄主中文名称：柑桔致病对象：植物分离基物：柑桔果实采集地区：陕西 勉县培养基信息：培养基编号: 14 培养基名称: PDA培养温度：25资源保护类型：培养物保藏方法：定期移植法共享方式：资源交换性共享提供形式：斜面培养物实物状态：有实物 二、菌种的培养1、是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（种）、原种（二种）和栽培种（三种）三。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在定条件下，经过扩大培养成为具有定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量般在10%～20%。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。 五、培养及打管说明1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3－－0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。3、注意事项：菌种活化，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长。4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    ATCC 23755 氧化葡萄糖酸杆菌 百欧博伟生物 氧化葡萄糖酸杆菌是Gluconobacter属的微生物，原产地为美国。主要用途为分类；研究；教学。 一、菌种简介平台编号：Bio-82109 规格：Freeze-Dried拉丁属名：Gluconobacter Oxydans 菌株名称：氧化葡萄糖酸杆菌用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Gluconobacter oxydans (Henneberg) De Ley 拉丁名(ATCC? 23755?) 统一编号Deposited As Acetobacter mesoxydans Frateur Strain Designations 菌株别名 NCIB 6426 [NCTC 6426; 11] Biosafety Level 生物安全等级 1 Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country. Product Format 提供形式 freeze-dried Preceptrol? no Type Strain 模式菌株 no Comments 注释 Taxonomy Medium 培养基 ATCC? Medium 1: Mannitol Agar/Broth Growth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 26.0°C Name of Depositor 寄存人 NCIMB Chain of Custody 来源国家 ATCC References 参考文献 Bousfield EG, et al. Oxidation of glycerol by Acetobacter species. J. Inst. Brew. 53: 258-262, 1947. Gillis M, De Ley J. Intra- and intergeneric similarities of the ribosomal ribonucleic acid cistrons of Acetobacter and Gluconobacter. Int. J. Syst. Bacteriol. 30: 7-27, 1980. 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                 MDCC-MSB-1鸡淋巴瘤细胞的特性及运输与保存！ 一、细胞简介平台编号：Bio-53903 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：MDCC-MSB-1 产品简称：MDCC-MSB-1中文名称：鸡淋巴瘤细胞细胞数量：1*10^6组织来源：--形态特征：--生长方式：悬浮背景描述：--培养条件：89%1640+10%FBS+1%双抗,气相：空气，95%；二氧化碳，5%；温度：37℃换液频率：--传代比例：--冻存液配方：90%FBS+10%DMSO安全性：BSL-1供应限制：仅供科研运输方式：常温运输（T25培养瓶）细胞用途：仅供科研使用。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特性1）来源：鸡淋巴瘤2）形态：淋巴母细胞3）含量：>1x106 个/mL4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装 三、细胞的运输和保存使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。                 四、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备DMEM培养基(GIBCO,货号12800017，添加NaHCO3 1.5g/L，0.05mM β-巯基乙醇)，85%；优质胎牛血清，10%，鸡血清，5%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   AtT20（小鼠垂体瘤细胞）的培养操作及应用！ 一、背景 AtT20是一种来源于小鼠垂体腺瘤的细胞系，常用于研究垂体腺瘤的生物学特性、药物筛选和治疗策略。该细胞系具有以下特点： 来源：AtT20细胞系来源于小鼠垂体腺瘤组织，经过多次传代和筛选，形成了一个相对稳定的细胞系。 形态特征：AtT20细胞呈多边形或长条形，大小约为15-30微米，胞质丰富，核大而圆，核仁明显。 生长特性：AtT20细胞生长迅速，传代周期约为24-48小时，可在含有10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中稳定生长。 激素分泌特性：AtT20细胞具有垂体腺瘤的典型激素分泌特性，如生长激素、促甲状腺激素等，可用于研究垂体腺瘤相关的激素分泌异常。 其他特性：AtT20细胞还具有一定的增殖能力，可用作研究垂体腺瘤细胞增殖相关疾病的模型。 二、AtT20细胞系培养操作 1)复苏AtT20细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)AtT20细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)AtT20细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 AtT20可以用于丙戊酸钠联合替莫唑胺对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20、GT1-1凋亡的促进作用及其机制研究： 探讨替莫唑胺联合丙戊酸钠对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20、GT1-1增殖的抑制作用以及凋亡的促进作用,并探讨其可能的分子机制。 方法： 1、细胞培养:小鼠垂体腺瘤细胞AtT20、GT1-1培养于含10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的DMEM/High Glucose培养基中,放置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养,视细胞生长状态,间隔约1-2天半量换液一次,3天左右1:3传代一次。取对数生长期的细胞进行实验。 2、TMZ与VPA对AtT20、GT1-1细胞增殖的影响。取对数生长期的AtT20、GT1-1细胞,将细胞分为(1)AtT20细胞TMZ组:向细胞中分别加入不同浓度(0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2mM)TMZ,并分别培养24、48、72h;(2)AtT20细胞VPA组:向细胞中分别加入不同浓度(2、4、8、16、32、64mM)VPA,并分别培养24、48、72h;(3)GT1-1细胞TMZ组:向细胞中分别加入不同浓度TMZ(浓度同前),并分别培养24、48、72h;(4)GT1-1细胞VPA组:向细胞中分别加入不同浓度VPA(浓度同前),并分别培养24、48、72h,通过CCK-8法检测TMZ与VPA各自对AtT20、GT1-1细胞增殖的影响。 3、TMZ与VPA联合应用对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20、GT1-1细胞活性的影响。取对数生长期的AtT20、GT1-1细胞,将细胞分为(1)对照组(加入等量完全培养基);(2)TMZ组(加入1.6mMTMZ);(3)VPA组(加入16mMVPA);(4)TMZ+VPA组(加入1.6mM TMZ以及加入16mM VPA)。药物处理72h后,通过LDH法检测TMZ与VPA联合应用对AtT20、GT1-1细胞活性的影响。 4、TMZ与VPA联合应用对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20、GT1-1细胞凋亡的影响。取对数生长期的AtT20、GT1-1细胞,按照上述分组,分别给予完全培养基、TMZ以及VPA,药物处理72h后,通过TUNEL染色、流式细胞计数检测TMZ与VPA联合应用对AtT20、GT1-1细胞凋亡的影响;通过Hoechst 33258染色检测TMZ与VPA联合应用对AtT20、GT1-1细胞形态学的影响。 5、TMZ与VPA联合应用对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20、GT1-1细胞凋亡影响的分子机制。取对数生长期的AtT20、GT1-1细胞,按照上述分组,分别给予完全培养基、TMZ以及VPA,药物处理72h后,通过Western blot检测TMZ与VPA联合应用对AtT20、GT1-1细胞cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、Bax、Bcl-2、AIF、cleaved PARP、p53等凋亡相关蛋白表达水平的影响。 结果： 1、TMZ与VPA对AtT20、GT1-1细胞增殖的影响。CCK-8法检测结果显示:TMZ、VPA分别作用于AtT20、GT1-1细胞后,细胞增殖与对照组相比明显抑制且具有统计学意义(p 2、TMZ与VPA联合应用对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20、GT1-1细胞活性的影响。LDH法检测结果显示:TMZ、VPA分别作用于AtT20、GT1-1细胞后,细胞活性与对照组相比明显降低且具有统计学意义(p 3、TMZ与VPA联合应用对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20、GT1-1细胞凋亡的影响。TUNEL染色、流式细胞计数结果显示:TMZ、VPA分别作用于AtT20、GT1-1细胞后,细胞凋亡水平与对照组相比显著升高,结果具有统计学意义(p 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                潮湿纤维单胞菌的微生物培养方法及使用注意事项！ 潮湿纤维单胞菌是Cellulomonas属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类；研究；教学。具体用途为利用纤维素能力较强。 一、菌种简介平台编号：Bio-04796 规格：冻干物拉丁属名：Cellulomonas Uda 中文译名：潮湿纤维单胞菌拉丁学名：Cellulomonas uda原始编号：372-24D菌株来源：←中国科学院上海植物生理研究所保藏人：淡家林直接来源国家：中国保藏时间：4/21/1978生物危害：四类模式菌株：非模式菌株菌株用途：利用纤维素能力较强培养温度：30℃培养基：0036    用途：利用纤维素能力较强 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基* 营养琼脂培养基（NA）* 胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）* LB 培养基（以上三款培养基任选一种即可） 三、保藏条件安瓿瓶冻干菌种和培养物应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油保藏温度为-80°C;请勿长期置于室温。 四、微生物培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤：a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间；若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后 2 个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   大鼠肺大静脉内皮细胞的分离方法与质量检测！ 一、产品信息平台编号：Bio-73635 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 细胞名称：大鼠肺大静脉内皮细胞组织来源：肺静脉组织培养条件：原代细胞取组织现分产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞简介大鼠肺大静脉内皮细胞分离自肺大静脉组织；肺大静脉在用肺呼吸的脊椎动物中，把动脉血由肺送回心脏的静脉，是唯一一个静脉里流动脉血的血管。左右1对，共4条，两条连接右肺，两条连接左肺。肺静脉异位引流是指肺静脉未能直接与左心房连接，而与右心房或体静脉系统连接的先天性心血管异位。肺静脉淤血性肺动脉高压，是由于肺静脉内血液淤滞而引起的肺动脉高压。正常情况下，肺循环具有血压低、阻力小和顺应性大的特点，肺动脉压力高低取决于单位时间内肺动脉血流量和肺血管的阻力，要维持肺循环的低压、低阻的状态，必须保证整个肺循环系统的畅通无阻，血液顺利地由肺动脉经毛细血管进入肺静脉，再入左心室，经过左心室收缩进入体循环，才能避免肺动脉内压力升高。细胞呈多边形鹅卵石状排列；该细胞在维持血管内外的动态平衡、合成和分泌细胞因子和介质、维持凝血和纤溶的动态平衡中起重要作用。 三、方法简介实验室分离的大鼠肺大静脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。 四、质量检测实验室分离的大鼠肺大静脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 五、培养信息包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%） 培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 换液频率 每2-3天换液一次 生长特性 贴壁 细胞形态 内皮细胞样 传代特性 可传2-3代 消化液 0.25%胰蛋白酶 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 大鼠肺大静脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    微生物实验室的设备控制和程序及操作方法！ 微生物检验常用需监控的设备和仪器： 1、培养箱（生化培养箱或CO2培养箱等）、干燥箱、高压灭菌锅、净化工作台、pH计、 冰箱，（低温冰箱或冷柜）温度计、紫外灯、显微镜、离心机、天平。 2、小计量容器 3、微生物测定仪器、微生物检定仪器、空气采样器、酶标仪专用等。 一、高压灭菌锅的温度控制 高压灭菌锅：生物指示菌法（常用）、化学变色纸片及高压灭菌锅温度计等方法进行检测。 生物指示菌法是一种高压灭菌锅的效果显示法。 高压灭菌锅由专人按作业指导书操作，并做好每一次的作业记录。 高压灭菌锅使用时，内置物品不能太多，单位体积内的内容物（每瓶内的培养基）不能太多。同时应注意内容物不同耐受温度。总的暴露时间最好不要超过45min。 高压灭菌锅日常工作记录应包含以下信息：高压灭菌的材料、开始时间、压力/温度、取出时间、高压灭菌胶带的颜色变化（日常常用无菌培养代替）。 高压灭菌锅温度波动范围：110，115和121±2℃。 高压灭菌锅校准周期一般在半年。 二、干燥灭菌箱温度控制 干燥灭菌箱日常工作记录中应包括以下信息：开始的时间、到达灭菌温度时的时间、取出的时间（或关闭时间）。 干燥灭菌箱的温度校准；用参考温度计进行温度测试。 干燥灭菌箱温度要求与精确度：160±5 ℃或180 ±5 ℃。前者为灭菌2h，后者为30min。 干燥灭菌箱校准时间一般为一年。 三、培养基配制用蒸馏水的控制 对于蒸馏水器来说：按设备说明，定期清洁离子交换器和更换离子交换材料。 检测要求：西欧标准为微生物检验用蒸馏水的特定电导率＜0.5ms/m；细菌数＜50CFU/ml。我们的国家标准要求电导率≤25μS/cm，菌落总数不超过1000CFU/mL。 检测频率：1次/每月。 蒸馏水定点供应，并做好相应的质量控制，记录检测结果。 四、天平的管理 天平放置要求：无振动、无气流影响及水平台面上。 天平要有使用及运行检查记录。 天平作为计量仪器是列入国家强制检定的范围，一般1次/年进行检定。 运行检查频率按运行计划或按产品（天平生产厂家）给出的标准重量单位进行对照。 五、pH计 pH计使用前应用标准液进行校准。 缓冲液使用有效期：PH4.00 约6个月； PH7.00 约6个月； pH9.00 约6个月； pH计的维护：电极外表的定期清洗；电极敏感性检测及极性恢复。 六、净化工作台的控制 水平流净化工作台工作区域，要求洁净度为100级。空气沉降30min，细菌数＜1CFU/皿。垂直流净化工作台，细菌数＜0.49CFU/皿。 净化工作台运行检查频次：1次/月主要是细菌沉降检测。 净化工作台高效过滤膜一般为一年更换一次，并同时进行粒子与细菌沉降检测。 七、紫外线灯的控制 检测方法：仪器测试法和生物测试法。前者是通过专用仪器检测紫外灯管发射的紫外光强度。国家消毒技术规范中表明在距离照射下方垂直1米处，要求其强度为大于90uW/cm2。 生物测试法：采用一定的菌培养物，经一定比例稀释，菌量控制在200-250个/0.5ml，涂布平板在紫外灯光下照射，2min，同时设置普通光源的对照组，后置37℃48h，计算其杀灭率。要求杀灭率达99%。 八、显微镜的控制 显微镜应制定作业指导书，日常维护记录及自校记录。 显微镜应置于无振动，避免灰尘，防潮等要求的环境。 九、其它微生物检测专用仪器的控制 细菌鉴定仪、酶标仪等设备，工作中常用阳性对照检测其功能正常性。 仪器的检定则按有关的部门检定或按自校作业指导书进行。 仪器的使用登记、校准计划、校准记录等文件存档。 仪器专人使用、操作者应取得相应的岗位培训合格，持证上岗。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    微生物杀虫剂的特点与分类及其他杀虫细菌！ 百欧博伟生物：利用微生物防治害虫至少已有百年的历史，近年来“以菌治虫”的研究更受世人重视。已知的杀虫微生物近 1 600 种，包括细菌、真菌、病毒、立克次氏体和原生动物，其中主要的是细菌、真菌和病毒。但至今，真正实用的杀虫微生物种类并不多，还有一些正在发掘和研究中。  一、微生物杀虫剂的特点与分类   微生物杀虫剂选择性强，可以避免对人、畜和害虫天敌的毒害，害虫对微生物杀虫剂的抗药性也不易发生，可以解决和缓和由于大量施用化学农药而造成的多种不良后果。但利用微生物杀虫剂也有它不利的一面，由于它选择性较强，这对同时发生几种害虫的防治具有局限性。微生物杀虫剂的杀虫效果往往受环境条件的明显制约，如真菌制剂在干旱条件下则很难发挥作用。另外，微生物杀虫剂作用的发挥需要一个时间过程，即有个害虫受侵染发病的过程，所以效果迟缓，必须选择适宜的防治时间才能获得有效防治效果。  按杀虫微生物的主要特点，可分为两类，一类是能杀死害虫的生物毒素，如苏云金杆菌等，它们被敏感害虫吞食，或由其他途径侵入虫体后，敏感害虫中毒死亡。另一类是敏感害虫的传染性病原体，敏感害虫被感染后发病，并成为传染源扩散，使敏感害虫流行病害。例如白僵菌、金龟子乳状病杆菌和各种昆虫病毒等等。   二、苏云金杆菌及其他杀虫细菌   苏云金杆菌（ Bacillus thringiensis Berliner ）是以分离地德国的苏云金（ Thuringen ）命名的。1909 年德国苏云金地方的一个面粉厂，发现一批染病的地中海粉螟（ Anagasta kuhniella ）幼虫，由柏林纳（ Berliner ）首先分离出这种细菌，1915 年命名为苏云金杆菌。1930 年以后，开始用于防治农业害虫。我国于 1950 年引进苏云金杆菌，以后又相继分离出杀螟杆菌、青虫菌、松毛虫杆菌和 140 杆菌等。   苏云金杆菌（ Bacillus thuringiensis ）是 G + 的好氧性芽孢杆菌，营养体大小 (1.0~l.2) m m × (3.0~5.0) m m ，两端钝圆，周生鞭毛能运动，少数无鞭毛，单个或 2~5 个细胞成链状。营养体长到一定阶段，细胞内含物出现浓缩凝聚现象，随后在细胞的一端逐渐形成椭圆形或圆形的芽孢，在另一端则出现一个，两个或多个菱形或正方形等不同形态的晶体，称为伴孢晶体，大小约 0.6 m m × 2.0 m m 。苏云金杆菌对营养条件要求不高，能利用多种碳源、氮源。生长最适温度 28 ℃ ~30 ℃，适宜酸碱度中性。培养时要求通气。   苏云金杆菌在蛋白胨、牛肉膏、琼脂培养基上形成的菌落呈圆盘状、直径 lmm 左右，颜色灰白而湿润，边缘不整齐，表面无光泽，有较粗糙且均匀的放射状皱纹。不同变种菌落形态有差异，如青虫菌、杀螟杆菌、松毛虫杆菌菌落则表面光滑。   根据不同菌株的鞭毛抗原 (H 抗原 ) 、酯酶图形及生化特性的差别，可将苏云金杆菌区分为若干亚种。  苏云金杆菌产生的毒素主要是伴孢晶体，又称δ - 内毒素。它是一种蛋白质晶体，完整的伴孢晶体并无毒性，当它被敏感昆虫的幼虫吞食后，在肠道碱性条件和酶的作用下，伴孢晶体能水解成毒性肽，毒性肽分子量大小依变种的不同而不同。   对伴孢晶体毒素敏感的昆虫种类主要有鳞翅目、双翅目和鞘翅目的幼虫，但并不是这三目中的所有种都敏感。当敏感幼虫吞食含伴孢晶体和芽孢的混合制剂后，在肠道中被水解产生的毒性肽很快发生毒性，幼虫停止取食，麻痹，进一步作用使中肠的上皮细胞遭受破坏，芽孢侵入血腔，并在那里萌发和繁殖，使幼虫患败血症，同时肠液也进人血腔使血液 pH 值上升（ 6.8~ 8.0 ），幼虫全身瘫痪，虫体软化、腐烂、发黑，最终死亡。  一些苏云金杆菌的变种还可分泌一种水溶性的苏云金素，又称β - 外毒素，由于它能忍耐 121 ℃（ l5min ）的高温和对家蝇幼虫有毒性，故又称热稳定外毒素或蝇毒素。苏云金素是广谱毒素，对较多目的昆虫有毒性。此外苏云金杆菌还有产生卵磷脂酸 C 、几丁质酶、叶蜂毒素等多种有毒效的成分。  苏云金杆菌类的生产，我国主要采用液体发酵工业化生产的方法。工业产品每 ml 活孢子数应达到 100 亿以上，晶体和孢子的比例越大表示晶体毒素含量高，质量好。活芽孢数和毒力不一定相关。   苏云金杆菌制剂的使用，可以喷雾、喷粉、泼浇，也可制成毒土或颗粒剂。一般常用浓度为每 ml 菌液含 500 万 ~5000 万活孢子。在农林、贮粮和环卫害虫中，应用苏云金杆菌制剂防治菜青虫、小菜蛾、稻苞虫、稻纵卷叶螟、棉造桥虫、玉米螟、茶毛虫、烟青虫、松毛虫、避债蛾、银度谷螟、米蛾、蚊等，已取得显著效果。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  蜂房小甲虫PCR试剂盒的特点与应用及操作步骤！ 一、背景 蜂房小甲虫PCR试剂盒是一种用于检测蜂房小甲虫的生物试剂，具有高特异性、高灵敏度和高重现性等特点。 蜂房小甲虫PCR试剂盒通常包括引物、酶、DNA模板等反应成分，以及PCR仪等反应设备。使用时，将待测样本加入试剂盒中，按照说明书上的操作步骤进行PCR反应，最终得到检测结果。 蜂房小甲虫（Aethina tumida）是蜂群的寄生虫。它的成虫和幼虫以蜂子、蜂蜜和蜂花粉为食,导致幼蜂死亡、蜂蜜发酵及巢脾被破坏。小甲虫加速破坏蜂巢,使成年蜜蜂逃逸。其损害程度可能取决于气候条件等因素,相比温度和湿度较低的地区,蜂房小甲虫在较高的温度和高湿度下的危害一般更大。蜂蜜提纯设备也是蜂房小甲虫潜在的繁殖场所,一旦蜂房小甲虫出现在这种设备中,这种危害会更严重。从卵发育到成虫,蜂房小甲虫需要3~12周,周期长短取决于湿度、温度和食物供应。成虫飞行时所到之处,所有规模的蜂群都会被侵扰，因此蜂房小甲虫的快速检测具有重要的意义。 二、使用蜂房小甲虫PCR试剂盒进行检测的具体操作步骤如下 1、准备样品：将待测样本进行预处理，如DNA提取、纯化等步骤，以便后续的PCR反应。 2、设计引物：根据蜂房小甲虫的特异性基因序列，设计一对引物，用于PCR反应的扩增。 3、配置反应液：将PCR反应液进行配置，包括DNA模板、引物、dNTPs等反应成分。 4、设定PCR仪程序：根据试剂盒说明书上的设定程序，将PCR仪进行设定，如循环次数、反应温度等。 5、进行PCR反应：将配置好的反应液加入PCR仪中，按照设定的程序进行PCR反应。 6、分析结果：在PCR反应结束后，对结果进行分析，如出现特异性的扩增产物，则可判断样本中存在蜂房小甲虫的DNA。 三、应用 蜂房小甲虫PCR试剂盒可以用于中华豆芫菁基因组测序分析及EchiCYP72与斑蝥素合成的相关性验证： 开展了中华豆芫菁的全基因组测序,通过比较基因组学分析,获得了芫菁科特有并在中华豆芫菁中显著扩张的基因家族;从全基因组水平分析了可能与斑蝥素合成及转运相关的基因家族,进一步筛选了芫菁科特有的细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP450),并对1个芫菁科特有的CYP450(EchiCYP72)进行了与斑蝥素合成相关性的验证。 主要研究结果如下： (1)中华豆芫菁全基因组测序与比较基因组分析通过PacBio三代测序平台对中华豆芫菁进行高通量测序,得到151.88 Mb的基因组数据并绘制了基因组草图(GC含量为33.08%,contig数量为870条,N50长度为659.43 Kb,最长的scaffold为5.89 Mb),注释得到12,520个高质量编码蛋白基因。使用BUSCO软件对中华豆芫菁基因组完整性评估,结果显示基因组完整度、重复率、缺失率分别为98.7%、2.9%、0.9%。比较基因组分析和富集分析的结果显示发现气味受体(Odorant receptor)、CYP450等45个基因家族发生了显著的扩张。通过对以往研究的分析,发现CYP450家族与斑蝥素的生物合成有很大的相关性。 (2)芫菁科特有CYP450和蜂房小甲虫PCR试剂盒的鉴定与分析鉴定了赤拟谷盗(Tribolium castaneum)蜂房小甲虫(Aethina tumida)、光肩星天牛(Anoplophora glabripennis)、米象(Sitophilus oryzae)、中欧山松大小蠹(Dendroctonus ponderosae)、马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)、白蜡窄吉丁虫(Agrilus planipennis)等7种不产生斑蝥素的甲虫和眼斑沟芫菁(Hycleus cichorii)、大斑沟芫菁(Hycleus phaleretus)、中华豆芫菁等3种芫菁科昆虫的CYP450,共得到899个CYP450(其中包含116个中华豆芫菁的CYP450)。通过本地双向Blast得到25个芫菁科特有的CYP450,分别属于CYP4亚族和CYP3亚族的CYP6和CYP9。发现芫菁科昆虫特有的CYP450中仅有EchiCYP72基因属CYP9,且前人未曾验证过CYP9与斑蝥素合成的相关性。 (3)EchiCYP72基因与斑蝥素合成相关性的验证为了验证EchiCYP72基因与斑蝥素合成的相关性,利用蜂房小甲虫PCR试剂盒RT-q PCR技术确定该基因在中华豆芫菁雄虫不同时期和不同组织的表达量,并通过RNAi技术结合RT-q PCR和气相色谱仪检测了干扰该基因后对斑蝥素合成的影响。结果显示注射该基因的ds RNA后显著抑制了EchiCYP72基因的表达,干扰效率可达74.05%以上,最高为94.04%,且1d、3d、5d、7d后的斑蝥素含量分别被抑制了49.12%、31.67%、40.59%、60.59%,说明该基因与斑蝥素的合成存在较强的相关性。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     解淀粉芽孢杆菌在水产养殖中的作用与应用！ 解淀粉芽孢杆菌是一种常见的益生菌，饲养密度高、水质管理、疾病传播等问题常常困扰着养殖业。近年来，解淀粉芽孢杆菌的应用在水产养殖中引起了广泛的关注。 1、生物制剂 解淀粉芽孢杆菌可以被制成生物制剂，用于水产养殖中的病害防治。它具有抗菌作用，可以有效对抗一些对水产动植物有害的病原菌，如细菌、真菌和病毒等。 2、水质改善 解淀粉芽孢杆菌能够降解水体中的有机物，包括未消化的饲料和排泄物等。它可以促进水体中氮、磷等有益元素的循环利用，降低水体的氨氮和亚硝酸盐含量，改善水质，减少养殖环境中的有害物质积累。 3、促进生长 解淀粉芽孢杆菌具有产生植物生长激素的能力，可以促进水生植物的生长，提高水产养殖动物的饲料利用率和生长速度。它还可以增强养殖动物的免疫力，减少疾病的发生。 4、饲料添加剂 解淀粉芽孢杆菌可以作为一种饲料添加剂，添加到饲料中，改善饲料的消化吸收率和抗菌能力，提高水产养殖动物的饲料转化率。 5、生物饵料添加剂 解淀粉芽孢杆菌可用作一种生物饵料添加剂，用于增加水产养殖动物的食欲和促进消化吸收，有利于提高鱼类、虾类等水生动物的生长率和产量。 6、水产养殖废水处理 解淀粉芽孢杆菌可作为一种生物处理剂，用于处理水产养殖废水，降解废水中的有机物，减少废水对水体的污染。 7、生态平衡维护 解淀粉芽孢杆菌在水产养殖系统中的应用有助于维护生态平衡，通过调节水体中的微生物群落结构，抑制有害微生物的生长，减少养殖环境中的病害发生，保持水产生态系统的健康状态。 解淀粉芽孢杆菌在水产养殖中的应用为解决养殖业面临的挑战提供了一种可行的解决方案。它能够有效防治疾病、提高消化吸收、改善养殖环境和提高抗逆性，在水产养殖中的应用具有广阔的前景。需要注意的是，在使用过程中需要结合实际情况进行综合考量，遵循科学的使用方法和指南，确保养殖环境的健康和水产养殖的可持续发展。此外，建议在使用解淀粉芽孢杆菌前，咨询专业的养殖技术人员或相关领域的专家，以获取针对具体养殖场景的建议和指导。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！