指状青霉的菌株培养与实验内容及打管说明！

                      指状青霉的菌株培养与实验内容及打管说明！

指状青霉是家养/栽培，属于指状青霉属。菌落绒状，暗黄绿色，后变橄榄灰，有特殊的香味；分生孢子梗短，帚状枝大而不规则；产孢瓶体在不同的高度上形成；分生孢子卵形至圆柱形。侵害柑橘果实，引起绿霉病。

一、菌种简介

平台编号：Bio-23799

规格：培养物

拉丁属名：Penicillium Digitatum

中文名称：指状青霉

拉丁属名：Penicillium

种名加词：digitatum (Pers.) Sacc.

收藏时间*：2007-9-28

来源历史：中国农业大学转

原产国：中国

资源归类编码：15151913115

模式菌株：非模式菌株

主要用途：研究；教学

特征特性：分生孢子梗无色，顶端具一至多次分枝，呈扫帚状。孢子梗具1～2个分枝，小梗中部稍宽，上下端稍细，呈细长纺锤形，其上串生分生孢子，分生孢子单胞，无色，卵圆形或圆柱形。

生物危害程度：四类

寄主中文名称：柑桔

致病对象：植物

分离基物：柑桔果实

采集地区：陕西 勉县

培养基信息：培养基编号: 14 培养基名称: PDA

培养温度：25

资源保护类型：培养物

保藏方法：定期移植法

共享方式：资源交换性共享

提供形式：斜面培养物

实物状态：有实物

二、菌种的培养

1、是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（种）、原种（二种）和栽培种（三种）三。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在定条件下，经过扩大培养成为具有定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。

6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量般在10%～20%。

三、实验内容

1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

四、保存方法

1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。

2、液体石蜡覆盖保存法：该法较种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。

3、悬液保存法：

①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。

②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。

4、载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。

五、培养及打管说明

1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。

2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3－－0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。

3、注意事项：菌种活化，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长。

4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。

5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。

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