Lec1（仓鼠卵巢细胞）的应用及培养操作步骤！

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一、背景

Lec1（仓鼠卵巢细胞）是一种特殊的细胞系，具有上皮细胞的形态，并且适应贴壁生长。这种细胞是从脯氨酸缺陷型的CHO（中国仓鼠卵巢）克隆Pro-5中挑选出来的能抗麦芽凝集素的突变株。由于Lec1缺乏称为GlcNAc-T1的糖基转移酶，因此N-连接的碳水化合物被阻断在Man5GlcNAc2Asn中间体。这一特性使得Lec1细胞在研究N-连接糖基化改变对内源糖蛋白或病毒感染、以克隆DNA转染产生的糖蛋白的功能和区隔化的影响方面非常有用。

在细胞培养方面，Lec1（仓鼠卵巢细胞）通常需要在特定的培养体系和条件下进行传代和培养。例如，它们可以在MEMα培养基中添加10%的FBS（胎牛血清）和1%的P/S（青霉素/链霉素）进行培养。对于传代，一般采用1:2的比例进行传代。此外，这些细胞也可以进行冻存和复苏，但需要使用适当的冻存条件和保存液，以确保细胞的活力和稳定性。

Lec1（仓鼠卵巢细胞）是一种重要的科研工具，特别适用于研究N-连接糖基化对细胞功能和病毒感染等方面的影响。通过使用这种细胞系，科学家们可以深入了解糖基化过程在生物体内的复杂作用，并为相关疾病的预防和治疗提供新的思路和方法。

二、Lec1（仓鼠卵巢细胞）培养操作

1)复苏Lec1（仓鼠卵巢细胞）：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)Lec1（仓鼠卵巢细胞）传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)Lec1（仓鼠卵巢细胞）冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

三、应用

Lec1（仓鼠卵巢细胞）可以用于金雀异黄素联合阿霉素对卵巢癌A2780细胞增殖和荷瘤裸鼠肿瘤生长的作用研究：

探讨金雀异黄素(genistein GEN)联合阿霉素(adriamycin ADR)对卵巢癌(Ovarian cancer)A2780细胞增殖和荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响及其机制。

方法：把卵巢癌A2780细胞和Lec1（仓鼠卵巢细胞）制成细胞悬液后,接种于SD品系裸鼠右后肢跟部皮下,制成卵巢癌裸鼠模型。实验分成4组进行:生理盐水组(裸鼠腹腔注射生理盐水0.2ml),金雀异黄素组(裸鼠腹腔注射c-myc GEN30mg/kg),阿霉素组(裸鼠腹腔注射ADR 20mg/m2),金雀异黄素联合阿霉素组(裸鼠腹腔注射c-myc GEN30mg/kg联合ADR 20mg/m2)。4周后处死裸鼠,剥取完整的肿瘤组织称重,并计算各组肿瘤抑制率。免疫组织化学方法检测c-myc在肿瘤细胞中的表达,免疫蛋白印记方法检测c-myc在肿瘤细胞中的表达量,四甲基噻唑蓝(Methy thiazoly1 tetrazolium,MTT)检测各组细胞的增殖能力,细胞黏附实验、细胞迁移(transwell)实验检测各组细胞的侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。

结果：肿瘤抑制率结果分析,与生理盐水组相比,金雀异黄素联合阿霉素治疗组、阿霉素组、金雀异黄素组,抑瘤率分别为(44.81±5.74)%,(38.45±4.25)%、(32.26±2.21)%差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学结果金雀异黄素联合阿霉素组、阿霉素组、金雀异黄素组均对c-myc表达,Western Blot检测显示与生理盐水组相比,联合治疗组、阿霉素组、金雀异黄素组c-myc表达量明显上调(P<0.05)。MTT方法检测显示空白对照组、GEN组、ADR组、GEN和ADR组,细胞活力分别为(100.0±0.0)%,(56.4±4.25)%、(59.26±2.21)%、(40.33±1.23)%。细胞粘附力检测GEN联合ADR组、ADR组、GEN组可降低A2780细胞的粘附力(P<0.05),而对Lec1（仓鼠卵巢细胞）细胞无影响。细胞迁移力实验检测显示GEN联合ADR组、ADR组、GEN组,细胞迁移率明显低于空白对照组(P<0.05)。流式细胞仪检测显示GEN联合ADR组、ADR组、GEN组,G0/G1期细胞数明显升高(P<0.05),S期细胞数明显降低(P<0.05),GEN联合ADR组、ADR组、GEN组细胞凋亡率明显高于空白对照组(P<0.05),且对Lec1（仓鼠卵巢细胞）细胞无促进细胞凋亡作用。

结论：

1、GEN联合ADR可抑制裸鼠体内卵巢癌细胞及抑制体外卵巢A2780细胞的增殖、细胞的侵袭能力,促进肿瘤细胞的凋亡，但对Lec1（仓鼠卵巢细胞）无效。

2、GEN联合ADR抑制卵巢癌A2780细胞的增殖、侵袭能力,促进细胞凋亡其机制为降低肿瘤细胞对c-myc的表达,影响c-myc蛋白参与调控的癌细胞增殖和转移过程。

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