稀释平板计数法的实验原理与方法！一、实验目的了解稀释平板计数的原理，掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法，认识细菌、放线菌、霉菌的菌落特征。二、实验原理稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。三、实验器材   1．活材料：苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）菌剂。2．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（附录三、1）3．器材：90ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、lml无菌吸管、天平、称样瓶、记号笔、玻璃刮铲等。四、实验方法1．样品稀释液的制备  准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20 min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液（图22-1）。图22-1  平板计数法中样品的稀释和稀释液的取样培养用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10-7、10-8、10-9稀释度，测定土壤细菌数量时，采用10-4、10-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，采用l0-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，采用10-2、10-3、10-4稀释度。2.平板接种培养  平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。（1）混合平板培养法  将无菌平板编上10-7、10-8、10-9号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-9稀释液各1ml放入编号10-9的3个平板中，同法吸取10-8稀释液各lml放入编号10-8的3个平板中，再吸取10-7稀释液各lml放入编号10-7的3个平板中（由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换）。然后在9个平板中分别倒入已融化并冷却至45—50℃的细菌培养基(图22-2)，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。至长出菌落后即可计数。（2）涂抹平板计数法  涂抹平板计数法与混合法基本相同，所不同的是先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上（每个编号设三个重复）。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀（图22-3），每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上20—30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。五、实验作业：将实验结果填入下表中计算结果时，常按下列标准从接种后的3个稀释度中选择一个合适的稀释度，求出每克菌剂中的含菌数。（1）同一稀释度各个重复的菌数相差不太悬殊。（2）细菌、放线菌、酵母菌以每皿30—300个菌落为宜，霉菌以每皿10—100个菌落为宜。选择好计数的稀释度后，即可统计在平板上长出的菌落数，统计结果按下式计算。混合平板计数法：每克样品的菌数=同一稀释度几次重复的菌落平均数×稀释倍数涂抹平板计效法：每克样品的菌数=同一稀释度几次重复的菌落平均数×10×稀释倍数北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 微生物盲样检测的一般过程及方法！一、明确盲样检测目标；首先要清楚检测哪类微生物：1、根据病原菌的致病部位：肠道致病菌、呼吸道致病菌等。2、何类产品的微生物：食品中微生物、化妆品中微生物、水质中微生物等。 二、审核盲样性状：根据盲样性状制订检测方案，如：液体、固体、附着于载体上、产品(食品、化妆品、水等)。混合菌(一般为1~3株菌，不同种类，它们之间为不同比例)还是单一菌？ 三、制订检测要点：1、涂片染色、镜检：1）、判定染色反应：革兰氏染色、抗酸染色、芽胞染色、鞭毛染色等。2）、菌体形态：球菌（分散状、成堆状、链状、成双状）、杆菌：（长杆菌、短杆菌、粗杆菌、细杆菌、链杆菌、弯曲杆菌等）。2、培养：1）、根据作业指导书，选择分离培养用培养基及增菌培养用培养基，从增菌培养管中挑取增菌液，进行增菌及分离培养。2）、根据盲样检测目标、盲样性状、染色镜检等信息，选择分离培养用培养基及增菌培养用培养基，进行增菌及分离培养。 3、挑取可疑菌落进行纯培养：参照从染色镜检的信息、选择菌落等，从培养基上选择不同菌落形态、色泽、光滑、湿润程度、边缘状态等。进行纯培养。 4、生物化学试验：根据菌落特点、染色镜检等信息，选择生物化学反应试验。如：可疑为肠道致病菌，选择三糖铁培养基进行初筛，然后进行全面生物化学试验等。可疑为金黄色葡萄球菌，进行血浆凝固酶试验等。 5、血清学试验：根据菌落形态、染色镜检、生物化学试验等，选择诊断血清分群、分型。 四、综合分析：根据菌落形态、染色镜检、血清学试验、生化试验或分子生物学检测等，判定盲样中微生物的种类名称。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    食品中吊白块的快速检测方法！一、检测意义吊白块又称雕白块，学名为甲醛次硫酸氢钠。工业上用作印染剂、有机物的脱色和漂白剂等，由二氧化硫、甲醛、烧碱、锌粉而合成。吊白块具有恶臭，在食物中分解成甲醛、次硫酸氢钠和二氧化硫后恶臭消失，毒性仍在。二、适用范围本方法适用于粉丝、米粉、腐竹、面粉、馒头、面条、竹笋、年糕、白糖等食品中吊白块的快速检测。三、实验器材吊白块快速检测试剂盒四、实验步骤取 2 ～ 3 克剪碎的样品于试管或器皿中，加入一倍量的水，浸泡 5 ～ 10 分钟，取 1ml 浸泡上清液至 1.5ml 离心管中，加入 1 滴 1 号试剂，再加入 2 滴 2 号试剂，盖盖混匀，1 分钟后，加 2 滴 3 号试剂，混匀，放置 3 分钟后观察溶液颜色变化情况。五、结果判定样品溶液无变化或与空白溶液实验结果相同为阴性结果，样品溶液出现橙色为阳性结果。但凡加入了吊白块的食品，其二氧化硫都会超标。因此，当样品出现吊白块阳性结果时，可检测样品中二氧化硫含量，如果二氧化硫含量大于 0.2g/kg时，可进一步判定样品中加入了吊白块。六、储藏条件与有效期试剂常温保存，有效期 1 年。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   纤维素酶的种类、发酵工艺及应用！纤维素酶cellulase 是酶的一种，在分解纤维素时起生物催化作用，利用真菌纤维素酶成为提高畜禽生产性能和饲料利用率的重要措施之一。细菌、真菌、动物体内等都能产生纤维素酶。一般用于生产的纤维素酶来自于真菌，比较典型的有木酶属(Trichoderma)、曲霉属（Aspergillus）和青霉属(Penicillium）。产生纤维素酶的菌种容易退化，导致产酶能力降低。纤维素酶在食品行业和环境行业均有广泛应用。在进行酒精发酵时，纤维素酶的添加可以增加原料的利用率，并对酒质有所提升。由于纤维素酶难以提纯，实际应用时一般还含有半纤维素酶和其他相关的酶，如淀粉酶（amylase）、蛋白酶（Protease）等 纤维素酶种类繁多，来源很广。不同来源的纤维素酶其结构和功能相差很大。由于真菌纤维素酶产量高、活性大，故在畜牧业和饲料工业中应用的纤维素酶主要是真菌纤维素酶。一、真菌纤维素酶的种类自然界中很多真菌都能分泌纤维素酶。由许多具有高协同作用的酶组成，习惯上，将纤维素酶分成三类： 内切葡聚糖酶(Cx )、外切葡聚糖酶(C1 )、β一葡萄糖苷酶(βG )。1、C1-酶：这是对纤维素最初起作用的酶，它破坏纤维素链的结晶结构，起水化作用。即C1-酶是作用于不溶性纤维素表面，使结晶纤维素链开裂、长链纤维素分子末端部分游离，从而使纤维素链易于水化。2、Cx-酶：这是作用于经C1-酶活化的纤维素、分解β-1，4键的纤维素酶。主要包括内切-1,4-β-葡聚糖酶和外切-1,4-β-葡聚糖酶。前者是从高分子聚合物内部任意位置切开β-1,4键，主要生成纤维二糖、纤维三糖等。后者作用于低分子多糖，从非还原性末端游离出葡萄糖。3、β-葡萄糖苷酶：即为将纤维二糖、纤维三糖及其它低分子纤维糊精分解为葡萄糖。上述三种纤维素酶在分解纤维素时，任何一种酶都不能裂解晶体纤维素，只有三种酶共同存在并协同作用时，才能完成水解过程。二、纤维素酶菌种选育菌种选育是纤维素酶生产的基础性工作，国内外许多专家进行了大量研究，为了生产高质量的纤维素酶产品，王家林等（1996）在吸收国内外经验的基础上，先后引进了绿色木霉木10、绿色木霉Sn-91014、康氏木霉NT-15、黑曲霉XX-15A，在此基础上，采用了紫外线、特定电磁波辐射、线性加速器，亚硝基胍等物理、化学的诱变方法，获得了高产菌株NT15-H、NT15-H1、XT-15H、XT-15H1。其中木霉NT-15H固体培养活力经轻工部食品质量监督检测中心南京站检测表明，滤纸活力为3670u/g, C1-酶活力24460u/g，Cx-酶活力1800u/g，已达到国际先进水平。此菌种在工厂化生产中性能稳定。张苓花等（1998）采用康氏木霉W-925，J-931，经过浓度为2%硫酸二乙酯和紫外线（15W、30cm、2min）复合诱变后，得到了产酶活性高的Wu-932菌种，该菌种CMC糖化力达到2975，滤纸糖酶活性为531，比出发菌W-925分别提高了81%。化工部饲料添加剂技术服务中心王成书等（1997）采用该中心的里氏木霉A3先进行紫外线和亚硝基胍复合诱变后，将处理过的孢子接种于纤维双层平板上，30℃培养5-8天，15℃放置7-10天，挑选透明圈直径和菌落直径比较大的单菌落进行三角瓶固态发酵再筛选，得到了产纤维素酶活力很高的里氏木霉91-3菌株。纤维素酶菌种易退化，退化后其产酶力明显降低，其原因可能有三个方面：①经诱变筛选的菌种发生回复突变。②自然负突变。③菌种长时间低温斜面保藏，会在分生孢子上长出次生菌丝，而次生菌丝所形成的分生孢子生命力弱，这可能是菌种退化的主要原因。为了避免纤维素酶菌种退化，张苓花等（1998）报道，采用砂土管保藏菌种。即将过筛洗净的砂子与土以3：2比例混合分装在试管内，用1kg/cm2压力灭菌30分钟共三次，将欲保存的斜面菌种制备成1000ml孢子悬浮液，每个砂土管注入0.5ml，摇匀，放入盛有无水CaCl2真空干燥器内保存。经测定，在所测的121天内，酶的活性基本不变；酶活性下降50%的时间，由常规方法的60天延长至160天，明显地减缓了菌种退化速度。三、发酵工艺纤维素酶的生产工艺主要有两种，即固体发酵和液体发酵，其工艺如下(见下页)：1、影响产酶量和活力的因素：影响纤维素酶产量和活力的因素很多，除菌种外，还有培养温度、pH、水分、基质、培养时间等。这些因素不是孤立的，而是相互联系的。张中良等（1997）采用均匀设计Cl12(1210)，以绿色木霉（T.ViriclePers.expr）为菌种，研究了影响产纤维素酶的五大因素对产酶量和活力的作用，认为基质粗纤维含量为40%、初始pH7.5、加水4倍、在26-31℃条件下培养45h可获得zuida产酶量26mg/g和CMC酶活力20mg/g·h。王成华等（1997）也研究了其诱变筛选的里氏木霉91-3的产酶条件，结果表明该菌种以7：3的秸秆粉和麦麸，另添加4%硫酸铵、0.4%磷酸二氢钾、0.1%硫酸镁为zuijia培养基，28-32℃为适宜培养温度，30℃为zuijia温度，4%为zuijia接种量，96h到达发酵高峰。张苓花等（1998）研究了以康氏木霉W-925为出发菌，经诱变后得到的Wu-932纤维素酶高产菌的zuijia发酵条件。结果表明，以1：2的麦麸和稻草粉为培养基，5%的接种量，稻草粉碎平均长度3-5mm，初始pH4-5，温度在28-35℃，发酵时间72h为zuijia发酵条件。2、污染菌的控制：在用康氏木霉发酵生产饲用纤维素酶中，普遍存在一种俗称的“白毛菌”污染。污染后轻者酶活性下降，重者发酵失败。为此，研究控制发酵污染意义很大。张苓花等（1998）研究“白毛菌”的菌落特征、来源、生长和生理特征及控制方法，找到了一种与康氏木霉Wu-932呈共生关系，而与“白毛菌”呈竞争性抑制关系的热带假丝酵母菌J-931。利用此菌进行混合发酵，可有效地控制“白毛菌”的污染。其微生态关系如下：四、纤维素酶在畜禽生产中的应用常见的畜禽饲料如谷物、豆类、麦类及加工副产品等都含有大量的纤维素。除了反刍动物借助瘤胃微生物可以利用一部分外，其它动物如猪、鸡等单胃动物则不能利用纤维素。国内外利用真菌纤维素酶成为提高畜禽生产性能和饲料利用率的重要措施之一。中国微生物菌种查询网专业为各企事业单位，科研院所，各级学校提供微生物菌种产品查询、购买服务！网站主要提供的产品：质控菌种，标准菌种，中国微生物菌种4万多株，细胞系/株1万多株其中金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌（大肠杆菌），沙门氏菌，黑曲霉，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，链球菌，白色念珠菌，志贺氏菌等为常用菌株。

                 微生物生长曲线的检测方法有哪些？一、生长量测定法⒈体积测量法：又称测菌丝浓度法。通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。⒉称干重法：可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10-20%。在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1-5次，进行干燥。干燥可用烘箱在105 ℃或100℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40C下进行真空干燥。称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（activity dry yeast, ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。⒊比浊法：微生物的生长引起培养物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时，可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。将侧臂插入光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长情况，而不必取菌液。该法主要用于发酵工业菌体生长监测。如我所使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计，在波长600nm 处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.Coli的生长及诱导时间。⒋菌丝长度测量法：对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度，或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管，到入合适的培养基，卧放，在开口的一端接种微生物，一段时间后记录其菌丝生长长度，借此衡量丝状微生物的生长。二、微生物计数法⒈血球计数板法:血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，中央有一短横沟和两个平台，两嵴的表比两平台的表面高0.1 mm，每个平台上刻有不同规格的格网，中央0.1 mm面积上刻有400个小方格。通过油镜观察，统计一定大格内微生物的数量，即可算出1毫升菌液中所含的菌体数。这种方法简便，直观，快捷，但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子进行计数，并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数。⒉染色计数法：为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数，而直接用血球计数板法又无法区分死细胞和活细胞的不足，人们发明了染色计数法。借助不同的染料对菌体进行适当的染色，可以更方便的在显微镜下进行活菌计数。如酵母活细胞计数可用美蓝染色液，染色后在显微镜下观察，活细胞为无色，而死细胞为蓝色。⒊比例计数法：将已知颗粒（如霉菌孢子或红细胞）浓度的液体与一待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合，在显微镜视野中数出各自的数目，即可得未知菌液的细胞浓度。这种计数方法比较粗放。并且需要配制已知颗粒浓度的悬液做标准。⒋液体稀释法：对未知菌样做连续十倍系列稀释，根据估计数，从最适宜的三个连续的10倍稀释液中各取5毫升试样，接种1毫升到3组共15只装培养液的试管中，经培养后记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查z大或然数表MPN（most probably number）得出菌样的含菌数，根据样品稀释倍数计算出活菌含量。该法常用于食品中微生物的检测，例如饮用水和牛奶的微生物限量检查。⒌平板菌落计数法：这是一种最常用的活菌计数法。将待测菌液进行梯度稀释，取一定体积的稀释菌液与合适的固体培养基在凝固前均匀混合，或将菌液涂布于已凝固的固体培养基平板上。保温培养后，用平板上出现的菌落数乘以菌液稀释度，即可算出原菌液的含菌数。一般以直径9cm的平板上出现50-500个菌落为宜。但方法比较麻烦，操作者需有熟练的技术。平板菌落计数法不仅可以得出菌液中活菌的含菌数，而且同时将菌液中的细菌进行了一次分离培养，获得了单克隆。⒍试剂纸法：在平板计数法的基础上，发展了小型商品化产品以供快速计数用。形式有小型厚滤纸片，琼脂片等。在滤纸和琼脂片中吸有合适的培养基，其中加入活性指示剂2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，无色）待蘸取测试菌液后置密封包装袋中培养。短期培养后在滤纸上出现一定密度的玫瑰色微小菌落与标准纸色板上图谱比较即可估算出样品的含菌量。试剂纸法计数快捷准确，相比而言避免了平板计数法的人为操作误差。⒎膜过滤法：用特殊的滤膜过滤一定体积的含菌样品，经丫叮橙染色，在紫外显微镜下观察细胞的荧光，活细胞会发橙色荧光，而死细胞则发绿色荧光。⒏生理指标法：微生物的生长伴随着一系列生理指标发生变化，例如酸碱度，发酵液中的含氮量，含糖量，产气量等，与生长量相平行的生理指标很多，它们可作为生长测定的相对值。⒐测定含氮量：大多数细菌的含氮量为干重的12.5%，酵母为7.5%，霉菌为6.0%。根据含氮量×6.25，即可测定粗蛋白的含量。含氮量的测定方法有很多，如用硫酸，过氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas测N2气法。Dumas测N2气法是将样品与CuO混合，在CO2气流中加热后产生氮气，收集在呼吸计中，用KOH吸去CO2后即可测出N2的量。⒑测定含碳量：将少量（干重0.2-2.0 mg）生物材料混入1毫升水或无机缓冲液中，用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在100 C下加热30分钟后冷却。加水稀释至5毫升，在580nm的波长下读取吸光光度值，即可推算出生长量。需用试剂做空白对照，用标准样品做标准曲线。⒒还原糖测定法：还原糖通常是指单糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通过还原糖的测定可间接反映微生物的生长状况，常用于大规模工业发酵生产上微生物生长的常规监测。方法是，离心发酵液，取上清液，加入斐林试剂，沸水浴煮沸3分钟，取出加少许盐酸酸化，加入Na2S2O3临近终点时加入淀粉溶液，继续加Na2S2O3至终点，查表读出还原糖的含量。⒓氨基氮的测定：方法是，离心发酵液，取上清液，加入甲基红和盐酸作指示剂，加入0.02N的NaOH调色至颜色刚刚褪去，加入底物18%的中性甲醛，反应数刻，加入0.02N的使之变色，根据NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根据培养液中氨基氮的含量，可间接反映微生物的生长状况。⒔其他生理物质的测定：P，DNA，RNA，ATP，NAM（乙酰胞壁酸）等含量以及产酸，产气，产CO2（用标记葡萄糖做基质），耗氧，黏度，产热等指标， 都可用于生长量的测定。也可以根据反应前后的基质浓度变化，最终产气量，微生物活性三方面的测定反映微生物的生长。如我所在BMP-2的发酵生产上，随时监测溶氧量的变化和酸碱度的变化，判断细菌的长势。三、商业化快速微生物检测法微生物的检测，其发展方向是快速，准确，简便，自动化，当前很多生物制品公司利用传统微生物检测原理，结合不同的检测方法，设计了形式各异的微生物检测仪器设备，正逐步广泛应用于医学微生物检测和科学研究领域。例如：1、抗干扰培养基和微生物数量快速检测技术结合解决了传统微生物检测手段不能解决的难题，为建立一套完整的抗干扰微生物检测系统奠定了坚实的基础。中科院广州分院合作产业处提供的抗干扰微生物培养基，新型生化鉴定管，微生物计数卡，环境质量检测试剂盒等，可方便的用于多项检测。2、BACTOMETER 全自动各类总菌数及快速细菌检测系统可以数小时内获得监测结果，样本颜色及光学特征都不影响读数，对酵母和霉菌检测同样高度敏感原理是利用电阻抗法（IMPEDANCE TECHNOLOGY）将待测样本与培养基置于反应试剂盒内，底部有一对不锈钢电极，测定因微生物生长而产生阻抗改变。如微生物生长时可将培养基中的大分子营养物经代谢转变为活跃小分子，电阻抗法可测试这种微弱变化，从而比传统平板法更快速监测微生物的存在及数量。测定项目包括总生菌数，酵母菌，大肠杆菌群，霉菌，乳酸菌，嗜热菌，革兰氏阴性菌，金黄色葡萄球菌等。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     金黄色葡萄球菌的检测方法！金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》，允许金葡菌限量存在。今天我们主要来了解一下它的检测方法。一、材料与方法1、材料①培养基：7.5%NaCl肉汤培养基，血琼脂平板培养基（按常规方法制作）②试剂：7.5%NaCl肉汤培养基，革兰氏染色，血琼脂平板，Baird-Parker琼脂平板，生理盐水，兔血浆（1：4）③器材：温箱，显微镜，天平，均质器，载玻片，L型涂片棒，三角瓶，刻度吸管，平皿，试管及试管架，研磨，1ml注射器，④实验动物：健康的小白鼠2、方法待检样品25g+225ml 灭菌生理盐水　　│　　┌─────┴─────┐　　直接计数法 增菌培养方法　　↓　↓　　Baird-Parker琼脂平板 7.5%NaCl肉汤培养基　　↓　↓　　血平板 血平板　　└─────┰─────┘　　↓　　┌─────┰─────┰──────┐　　↓　↓　↓　↓　　涂片染色镜 溶血观察　动物接种试验 血浆凝固试验　　└─────┴──┯──┴──────┘　　↓　　报告二、实验步骤1、样品的采集称取25g火腿肠，切碎搅匀（用灭菌研钵研磨），置于250ml 锥形瓶中，加入225ml 灭菌生理盐水，制成1：10样品混悬液，混匀后作用20分钟，随机取10ml 离心。2、增菌及分离培养①增菌培养方法：吸取5ml上清液，接种于7.5%NaCl肉汤培养基内，置于（37±1℃）恒温箱中培养24h，划线接种入血平板，（37±1℃）恒温箱中培养24h。②直接计数方法：吸取上述悬液，进行10倍递增稀释，根据样品污染情况，选择不同浓度的稀释液各1ml，分别加入3个Baird-Parker琼脂平板，每个平板的接种量分别为0.3ml、0.3ml、0.4ml。用灭菌L型涂布棒涂布整个平板，置于（37±1℃）恒温箱中培养24h。之后分别对3个平板上生长的周围有浑浊带的黑色菌落进行计数。转接入血平板，（37±1℃）恒温箱中培养24h。3、涂片、染色与镜检将纯培养的未知菌涂片，革兰氏染色，显微镜观察。4、生化实验①触酶试验在载玻片上滴1滴3%的过氧化氢，调取纯化的细菌放在过氧化氢中观察变化。30s内产生大量气泡者为阳性，不产生气泡者为阴性。②血浆凝固酶试验吸取1：4新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养24h的2①中的肉汤培养液0.5ml，摇荡均匀，放入（37±1℃）恒温箱中培养，每0.5h观察一次，观察6h，检查是否出现凝固。将试管倾斜或倒置时，呈现凝块状，可判定为阳性，同时以已知阳性葡糖球菌和阴性肉汤作为对照。5、动物感染实验用无菌生理盐水将2①中血琼脂板上纯化的菌落洗下后，以0.5ml/只腹腔注射入小白鼠体内，同时用灭菌生理盐水注射入另外的小白鼠体内，以做对照，分别在相同条件饲养，观察其症状。对感染试验出现症状或死亡的小白鼠进行剖检，并采集病料，进行分离。三、结果与分析1、培养特性及形态特征①培养特性在37℃条件下，需氧与厌氧培养的血液营养琼脂平板均长出光滑、湿润、隆起，约1mm大小的金黄色菌落，并且有β溶血现象。②镜检结果显微镜下观察该菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄串状，也有个别2个或3个球菌相连。根据菌落形态、镜检结果怀疑该菌为葡萄球菌。2、菌落计数报告将直接计数法试验中的3个平板中疑似黑色葡萄球菌的金黄色菌落数相加，乘以血浆凝固酶试验阳性数，除以5，在乘以稀释倍数，即为每克样品中金黄色葡萄球菌数量。3、动物感染试验只注生理盐水的小白鼠没有任何变化：接种分离菌的小白鼠在9h内死亡。将死亡的小白鼠剖检采集病料，进行细菌分离和生化试验，得到与原分离菌。“金球菌”列为“极重要质量项目”金黄色葡萄球菌因思念、三全、湾仔码头事件而引发标准争议，在2011年12月21日实施的速冻食品新国标中，金黄色葡萄球菌从原来“不得检出”变为“限量检出”，但这一检测标准的改变并不代表可以忽略金黄色葡萄球菌的危害性。在市质监局征集意见而公示的抽检项目中查询到，对包括速冻水饺、汤圆、包子、花卷、馒头、南瓜饼、八宝饭等在内的速冻米面食品，仍然计划把金黄色葡萄球菌列入A类检验项目，并标注为“极重要质量项目”，同时速冻米面食品的沙门氏菌也是A类检验。速冻食品“金球菌”可限量检出中国现行《速冻预包装面米食品卫生标准》（GB19295－2003）规定金黄色葡萄球菌等致病菌不得检出。而卫生部于2012年12月21日实施的《速冻面米制品食品安全国家标准》，将金黄色葡萄球菌检测由定性转向定量，规定每批产品抽检5个样品中，至多只能有1个样品每克生制品中检出的金黄色葡萄球菌含量在1000至10000个之间。 欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     微生物检验的任务和意义！微生物检验是基于微生物学的基本理论，利用微生物试验技术，根据各类产品卫生标准的要求，研究产品中微生物的种类、性质、活动规律等，用以判断产品卫生质量的一门应用技术。它是以技能操作为主的学科。各类产品从原料、加工、储藏、运输、销售等各个环节，都会受到环境中微生物的污染，不同来源的微生物可通过各种途径污染暴露于环境中的各类产品，并在其中生长繁殖引起变质，影响产品的特性，甚至产生毒素、造成食物中毒、疾病传播等后果。因此，许多产品在生产、销售或使用之前必须对其进行微生物学检验。微生物学检验是产品卫生标准中的一个重要内容，也是确保产品质量和安全、防止致病菌污染和疾病传播的重要手段。微生物检验的基本任务包括以下几个方面。(1)研究各类产品的样品采集、运送、保存以及预处理方法，提高检出率。(2)根据各类产品的卫生标准要求，选择适合不同产品、针对不同检测目标的z佳检测方法，探讨影响产品卫生质量的有关微生物的检测、鉴定程序以及相关质量控制措施；利用微生物检验技术，正确进行各类样品的检验。(3)正确进行影响产品卫生质量的有关微生物的快速检测方法、自动化仪器的使用，并认真进行检验结果的分析和试验方法的评价。(4)及时对检验结果进行统计、分析、处理，并及时准确地进行结果报告。(5)对影响产品卫生质量及人类健康的相关环境的微生物进行调查、分析与质量控制。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

          大肠菌群平板计数法的证实试验与注意事项！大肠菌群是经常用来衡量食品卫生情况的重要指标，绝大部分食品都会要求检测的项目。在食品微生物实验室里，大肠菌群和菌落总数的检测频次应该是zuigao的，但检测过程中总会有一些小问题困扰着大家，以下来讲解一下大肠菌群平板计数法的注意事项。一、方法选择相比于MPN计数法，平板计数法更适用于大肠菌群含量较高的食品。但大肠菌群多少算是含量较高呢？国标里没有明确规定，但通常认为，产品大肠菌群以100CFU/g（mL）为界，超过这个含量一般认为是含量较高。但具体什么时候选用平板计数法进行大肠菌群的检测，大部分情况还是要看你的产品执行的标准。假如产品标准要求大肠菌群含量的单位为CFU/g（mL），那必须选用平板计数法。若是/g(mL)或者MPN/100g(mL)，就应选择MPN计数法，MPN法具体选用哪版国标此处不再赘述。因此，根据自己产品的情况选择适当的检测方法。二、培养基的要求平板计数法使用的培养基为结晶紫中性胆盐琼脂培养基，简称VRBA。无论是国标，还是培养基的使用说明中都明确表示，VRBA是不需要进行灭菌的，煮沸2min即可使用。特地点出这一点是因为很多朋友都在问VRBA的灭菌条件，对不灭菌的培养基不信任，害怕出现检测异常，那是因为这些小伙伴们对其中的原理不清楚。大肠菌群的定义是在一定培养条件下能够在发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，因此大肠菌群是不能形成芽孢的，在VRBA培养基煮沸的过程中，即使有大肠菌群存在也会被杀灭，所以从培养基带入污染的可能性是没有的。当然盛装培养基的容器是需要进行灭菌的，以免容器引入污染。另外，VRBA是一种选择性的培养基，含有的结晶紫对革兰氏阳性菌有比较强的抑制作用而对革兰氏阴性菌几乎没有作用，而且平板培养产生的菌落还需要进行复发酵的验证，因此VRBA培养基就不需要进行灭菌了。但值得注意的是，VRBA需要现配现用，配制出的培养基应当在3h之内使用完毕。三、稀释度的确定国标中要求选择2-3个适宜的连续稀释度。什么样的稀释度是合适的呢？这要根据计数来决定。计数环节要求选择菌落数在15CFU-150CFU的平板进行计数，因此培养后菌落数在这个范围内的稀释度就是适宜的稀释度。实验室经常检测的产品的大肠菌群的水平检测人员可以预计的，但是对盲样，我们能做的只有根据实际情况多检测几个稀释度了。这里需要提一句，液体样品的检测稀释度可以包括原液。四、证实试验需要从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10个菌落的挑取全部的典型和可疑菌落进行BGLB肉汤管验证。这里挑取的菌落也是应当有选择的，典型菌落和可疑菌落的比例应当与平板上培养的两种菌落的比例相同或相近，这样能够降低检测过程中的误差。五、计数的报告报告过程是很多朋友存在疑问的地方，因为平板计数法的结果报告需要结合培养基菌落数和复发酵验证两方面进行计算。存在疑问的情况主要有以下几种：1.所有稀释度都不在计数范围内怎么办？这种情况一般都是zuidi稀释度的平板都小于15CFU，这种情况就是以zuidi稀释度的平板菌落数乘以验证试验的比例来计算。例如10倍稀释的两个平板上菌落数分别为10、8，菌落数为10的平皿挑取10个菌落复发酵中有8个菌落产气，菌落数为8的平皿挑取8个菌落复发酵中有7个菌落产气，则计算过程是这样的：(10*8/10+8*7/8)/2*10=75CFU/g（mL）。2.连续两个稀释度的四个平皿的菌落数都在计数范围内怎么办？这个需要参考菌落总数检测国标里7.1.2里的公式计算。我们需要先计算每个平皿的验证后的菌落数，再代入公式计算即可。例如10倍稀释度两个平皿菌落数为120和125,100倍稀释度两个平皿的菌落数为17和16，经过复发酵验证产气的管数分别为7、8、8、8，则我们先计算每个平皿上的菌落数分别为120*7/10=84,125*8/10=100,17*8/10=13.6（我们计14），16*8/10=12.8（我们计13），然后将84、100、14、13四个数代入公式：（84+100+14+13）/（2+0.2）*10=959，结果应报告960CFU/g（mL）。3.只有一个稀释度的一个平皿的菌落数在计数范围，其他均不在计数范围怎么办？这样我们只需要复发酵验证这一个平皿即可，根据这一个平皿的菌落数进行报告。例如10倍稀释度两个平皿菌落数为160和142,100倍稀释度两个平皿的菌落数为12和13，则我们只需要从菌落数为142CFU的平皿里挑取10个菌落进行复发酵验证即可，假如共有7支发酵管阳性，则应计算142*7/10=99.4，结果报告99CFU/g（mL）。其实只要是平板菌落计数的相关问题，我们都应按照GB 4789.1-2016里要求的结果与报告要求进行计算和报告即可，无论那种情况，都是万变不离其宗的。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                       肺炎支原体的培养方法！肺炎支原体（M.Pneumonia）是人类支原体肺炎的病原体。支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主，有时并发支气管肺炎，称为原发性非典型性肺炎。主要经飞沫传染，潜伏期2～3周，发病率以青少年zuigao。临床症状较轻，甚至根本无症状，若有也只是头痛、咽痛、发热、咳嗽等一般的呼吸道症状，但也有个别死亡报道。一年四季均可发生，但多在秋冬时节。症状：支原体肺炎突出表现为阵发性刺激性咳嗽。肺炎支原体感染人体后，经过2~3周的潜伏期，继而出现临床表现，约1/3的病例也可无症状。它起病缓慢，发病初期有咽痛、头痛、发热、乏力、肌肉酸痛、食欲减退、恶心、呕吐等症状。发热一般为中等热度，2~3天后出现明显的呼吸道症状，突出表现为阵发性刺激性咳嗽，以夜间为重，咳少量黏痰或黏液脓性痰，有时痰中带血，也可有呼吸困难、胸痛。发热可持续2~3周，体温正常后仍可遗有咳嗽。支原体肺炎患者虽然自感症状较重，但胸部体检一般无明显异常体征。鼻部轻度鼻塞、流涕，咽中度充血。耳鼓膜常有充血，约15%有鼓膜炎。颈淋巴结可肿大。约10%~15%bingli发生少量胸腔积液。除呼吸系统的表现外，支原体肺炎可伴发多系统、多器官损害。皮肤损害可表现为斑丘疹、结节性红斑、水疱疹等。胃肠道系统可见呕吐、腹泻和肝功损害。血液系统损害较常见溶血性贫血。中枢神经系统损害可见多发性神经根炎、脑膜脑炎及小脑损伤等。心血管系统病变偶有心肌炎及心包炎。支原体肺炎患者胸部X线检查变化很大，病变可很轻微，也可很广泛。体征轻微而胸片阴影显著，是本病特征之一。血常规检查白细胞高低不一，大多正常，有时偏高。支原体肺炎的临床表现和胸部X线检查并不具特征性，单凭临床表现和胸部X线检查无法做出诊断。若要明确诊断，需要进行病原体的检测。目前，国内支原体肺炎的诊断主要依靠血清学检测。分离培养方法：1、支原体固体培养基接种法转动拭子将标本液体尽量挤出，用无菌滴管吸1-2滴接种在平皿上盖好，用L棒涂抹或倾斜转动平皿使标本均匀分布，置37°C孵育。2、支原体半固体培养基接种法混种法：在制备半固体培养基时，培养基加热溶化，温度降至50°C时，添加动物血清、酵母浸液及青霉素后混匀，待冷却至37-40°C时，用无菌滴管吸取标本0.5-1ml加入培养基中，充分混匀，凝固后置37°C孵育。3、穿刺接种法：方法同细菌接种法。结果观察绝大多数支原体为兼性厌氧，少数在含10% CO2和相对湿度80-90%的大气环境中生长良好。支原体生长缓慢，多数于3-4d长出菌落，少数于1-2w方长出典型菌落，在平皿固体培养基上生长的菌落呈"油煎蛋"状，边缘不整齐。常用培养基及配方：一、心汤复合培养基配方牛心汤1000ml蛋白胨10g氯化钠5ml酵母提取液10ml无菌马血清200ml1.25%醋酸铊溶液20ml青霉素200IU/ml。二、糖酵解培养基（肺炎支原体培养基）1、配方一：基础培养基 70ml马（或牛血清） 20ml25%酵母浸液 10ml0.4%酚红 0.5ml1%醋酸铊 2.5ml青霉素10000IU/ml 5.0ml调pH 7.82、配方二：PPLO 21g（商品化买）酵母粉 6g（OXIDE）马血清 200ml（可用小牛血清代替）L-半胱氨酸 0.3g葡萄糖 10g1%酚红 4mlAMP 若干（0.1-0.2g，醋酸铊有毒性，可不加）调pH 7.5-7.6欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 细胞的冻存方法、步骤及注意事项！细胞越来越受广大科研者的喜爱，但细胞不像人们想象中那么强大，在培养复苏等过程中稍有不慎就不可能导致它的死亡。而且它必须是是在无污染的条件下培养，复苏才能保证实验效果。在此百欧博伟生物技术为您详细总结细胞的正确冷冻保存方法、保存详细步骤，相关注意事项如下：一、保存方法（主要有两个）：（1）传统方法：冷存管置于4℃10分钟→ -20℃30分钟→ -80℃16～18小时（或隔夜）→液氮槽vaporphase长期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 （2）程序降温：利用已设定程序的等速降温机以-1～-3℃/分钟之速度由室温降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。 二、步骤： （1）冷冻前一日前更换半量或全量培养基，观察细胞生长情形。 （2）配制冷冻保存溶液（使用前配制）：将DMSO加入新鲜培养基中，*后浓度为5～10％，混合均匀，置于室温下待用。（3）依细胞继代培养之操作，收集培养之细胞，取少量细胞悬浮液（约0.1ml）计数细胞浓度及冻前存活率。（4）离心，去除上清液，加入适量冷冻保存溶液，使细胞浓度为1～5×106cells/ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。 三、注意事项： （1）欲冷冻保存之细胞应在生长良好（logphase）且存活率高之状态，约为80–90％致密度。细胞冻存前应保证细胞的活力好，无污染 （2）冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。（3）一定要保证DMSO的浓度是10%，冻细胞要舍得用进口的DMSO（4）注意冷冻保护剂之品质。DMSO应为试剂级等级，无菌且无色（以0.22micron　FGLP　Telflon过滤或是直接购买无菌产品，如Sigma D-2650），以5～10ml小体积分装，4℃避光保存，勿作多次解冻。Glycerol亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。（5）慢冻,快解冻。细胞在 -15 度左右胞内形成结晶对细胞损伤，缓慢降温有助于减少损伤，故放入 -20 度冰箱中冻存可实现缓慢降温较为方便，保存时间过久会影响细胞活力。中国微生物菌种查询网专业提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                         菌种的保藏方式有哪些？营养体菌丝体保藏的菌种，营养生长不能很旺盛，生长速度不能非常快，培养基营养成分丰富，温度较高，生长速度快的菌种，衰老速度也快，衰老的菌丝作菌种保藏时，保藏后菌丝复活程度较差，生长势也不好，菌种容易退化。营养体保藏的菌种，培养基营养成分应略贫乏，含水量和培养温度应稍低些，这样，菌丝生长速度较慢，生长势也不会太旺盛，菌丝衰老速度也慢。今天小编主要为大家介绍几种菌种的保藏方式。1、斜面菌种低温保藏培养基：一般菌种用PDA培养基。葡萄糖18g，马铃薯（去皮）200g ，琼脂20g ，水1000ml，PH自然。特殊菌种用特殊培养基。接种：接种保藏菌种用的菌种，菌丝应健壮。用前端的菌丝作接种材料。接种时要防止火焰高温、消毒药液对菌种的伤害。培养：应以适宜温度或略低于最快生长温度的温度培养。蘑菇、香菇菌种应在22度左右温度培养，灵芝等高温菌种应在25度左右温度培养，培养时试管表面用8层厚的纱布或薄棉被覆盖，避光。保藏菌种质量要求：菌丝生长整齐，菌丝长到培养基面积2/3时。保藏方法：用牛皮纸或硫酸纸将试管棉花塞包好，放在清洁的小木盒中。木盒上注明菌种的名称、菌名、保存日期、经手人姓名，再放在4度中保藏。保藏菌种的冰箱不要经常开启，保持温度稳定。2、斜面菌种液体石蜡油保藏石蜡没保藏是用灭菌并除去水分的液体石蜡油灌入母种试管中，使菌体与空气隔绝，以降低其生命活动水平，并阻止水分散失的方法来保藏。石蜡油保藏，油层下氧含量低，菌丝呼吸水平极低，培养基营养消耗速度极慢，菌种不易老化、退化，可较长时间保藏。石蜡油保存分石蜡油灭菌、脱水处理、灌石蜡油、封口等几个步骤。3、基质培养基菌种的保藏基质培养基保存是用原种、生产种的培养基保存菌种。基质培养中有丰富的迟效性养分，菌丝会分解培养基中复杂养分边利用生长。培养基本方与正常原种相同，但培养料应稍坚实。培养料的含水量应比生产用培养料含水量低2%左右。培养基较坚实，含水量较低，可降低菌丝生长速率，降低培养基中空气含量、降低呼吸强度，从而延缓衰老。4、蒸馏水保存蒸馏水保存菌种的原理目前还不清楚，可能是食用菌菌丝细胞壁较坚牢，游离水不能大量进入菌丝细胞内；蒸馏水中无营养成分，因此菌丝新陈代谢极慢，从而延缓衰老。蒸馏水也可用斜面菌种保存。保藏时，在超净台中，用接种钩、接种铲将斜面菌种切割成米粒大小，然后把米粒大小的斜面菌种称许在蒸馏水保藏管中，每管放7--8粒菌种，其余操作方法和液体菌球相同保藏。5、液氮超低温保存液氮内的温度为-196度，在-136度——-196度下，食药用菌菌丝生长、呼吸、新陈代谢处于完全停止状态，菌丝不会衰老，从而能使菌种保存很长时间而不退化。液氮超低温保藏菌种，需要有液氮罐、菌种保存管和保存液。常用PDA培养基菌种或麦粒培养菌种。保存容器可用冻存管或安瓿管。保种程序：（1）培养菌种（2）菌种中加入保存液（3）预冷（4）放入液氮罐6、营养液保藏法营养液配制：马铃薯汗约900ml，葡萄糖16g,磷酸二氢钾0.3g，硫酸镁0.15g，z后补加蒸馏水使总容积到1000ml。每一12mm×16mm的试管中灌入营养液5ml，用棉塞塞管口，在111kPa蒸汽压下灭菌40分钟。冷却后，在超净台中移入待保存的菌种，菌种在移入前，先用接种钩将其分割成绿豆粒大小，每管移入7--8粒，同时用灭菌过的软木塞或橡皮塞更换棉塞，然后放入4度左右冰箱中保存。保存期间菌丝还会微量生长，可在液面形成菌膜，并向管壁上方生长，一般可保存2--3年。7、生理盐水保藏法先在试管中加入生理盐水，用棉塞塞住管口，在152kPa蒸汽压下灭菌40分种。冷却后，在无菌箱中，将斜面菌种切割成绿豆粒大小，并移置灭过菌的生理盐水管中，每管放7--8粒。菌种放入生理盐水管中，每管放7--8粒。菌种放入生理盐水管中后，用灭过菌的软木塞或橡皮塞塞好管口，再放入4度左右冰箱中。该法可保存1年左右。好了，关于菌种的保藏方式，小编今天就讲到这里，你还有什么需要补充的吗？快来联系我吧！除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                胎牛血清的定义与成份及主要功能！胎牛血清定义：采自胎牛的血清。含有多种生长因子，常用于体外细胞培养。胎牛血清成份：1、性状、外观 浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。 　　2、蛋白质含量 3.5%～5.0%（ w/v） 　　3、血红蛋白含量 ≤ 0.02%（ w/v） 　　4、无菌检验　阴性 　　5、支原体检验　阴性 　　6、细菌内毒素 ≤5（EU/ml） 　　7、牛腹泻病毒 阴性 　　8、大肠杆菌噬菌体 阴性 　　9、支持细胞增殖（Sp2/0-Ag14）　生长曲线（接种浓度）增殖浓度≥2.5×106 个/ml 　　细胞倍增时间 ≤15h 　　克隆率 ≥85%胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。 　　显然，胎牛血清是品质的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分少。胎牛血清功能：牛血清是细胞培养中用量的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。 　　1、提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。 　　2、提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。 　　3、有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。 　　4、是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。 　　5、起酸碱度缓冲液作用。 　　6、提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。中国微生物菌种查询网专业提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   染色的基本原理、方法及注意事项！百欧博伟生物 涂片及染色是微生物学的基本技术，也是观察细菌最简单且行之有效的方法。通常情况下，由于细菌个体较小，较透明或半透明，如未经染色往往不易观察识别。因此借助于染色法可使细菌着色，与视野背景形成鲜明对比，从而易于在显微镜下进行观察。 简单染色法即只用一种染料对涂片进行染色，该法简便易行，适用于菌体的一般形态观察。通常情况下由于细菌菌体多带负电荷，易和带正电荷的碱性染料结合而被染色，因此常用碱性染料进行简单染色，如美蓝、碱性复红、结晶紫、孔雀绿、番红等。所有的苯胺染料，均可用来做简单染色法的染色剂。在进行染色之前的制片过程是影响染色结果好坏的关键性步骤。 制备细菌染色片一般要经过涂片、固定、染色、水洗、干燥等步骤(见下图),然后用显微镜，甚至油镜观察。(一)涂片取一干净的载玻片，滴加一小滴蒸馏水于载玻片中央。按无菌操作要求，接种环经灼烧灭菌，待冷却后用接种环从菌种试管斜面上(培养皿表面)挑取少量培养物(不要挑破培养基),置于载玻片上的水滴中，与水混合并轻轻涂布成直径约1cm左右的均匀薄层。操作完成后，接种环要再经灼烧灭菌，放归原处。 (二)干燥将涂片于室温中自然干燥或者置于酒精灯火焰高处，微热烘干。切记不能直接在火焰上烘烤，以免菌体烤焦变形，影响对菌体的观察。 (三) 固定涂片标本面向上，快速通过酒精灯火焰外焰2次~3次，进行标本固定。固定的目的在于杀死细菌以固定其细胞结构；保证菌体牢固地粘附在载玻片上，染色或水洗时不至于脱落；同时改变菌体对染料的通透性，有利于着色，增强染色效果。固定时，以载玻片背面加热处触及皮肤而不觉过烫为宜(一般不超过60 ℃ )。 (四)染色标本玻片水平放置，滴加1滴~2滴染色液，使染色液完全覆盖涂片区域，染色时间视不同标本和染料的性质而定。 (五)水洗染色到一定时间后，倾去染液，斜置玻片， 自玻片上端用自来水冲洗至流下的水无色为止；或将玻片置于玻片架上，用洗瓶倾注水流进行水洗。注意冲洗水流不宜过急、过大，同时要避免直接冲在涂片处，导致涂片受损。 (六)干燥、镜检自然晾干，或用吸水纸吸去玻片上的多余水分后再晾干，但要注意勿将菌体抹掉。完全干燥后，用显微镜甚至油镜检查。 注意事项：(1)载玻片要清洁无油污，否则菌液不易涂开。涂片时取培养物宜少，培养物涂层宜薄，涂层过厚则不易观察细菌形态。(2)干燥和固定时，玻片不能直接在离火焰很近的位置上烘烤，否则会破坏细菌形态并使之变形，影响观察结果。(3)观察时如需用到油镜，油镜检查前玻片应完全干燥，观察后要将油镜用擦镜纸等彻底擦拭干净。

                       食品卫生微生物学检验总则！《食品卫生微生物学检验总则（GB 4789.1-2016）》本标准代替食品安全国家标准《食品微生物学检验总则（GB4789.1-2010）》。本标准与GB4789.1-2010相比，主要变化如下：增加了附录A,微生物实验室常规检验用品和设备；修改了实验室基本要求；修改了样品的采集；修改了检验；修改了检验后样品的处理；删除了规范性引用文件。一、范围本标准规定了食品微生物学检验基本原则和要求。本标准适用于食品微生物学检验。二、实验室基本要求(一)检验人员1、应具有相应的微生物专业教育或培训经历，具备相应的资质，能够理解并正确实施检验。2、应掌握实验室生物安全操作和消毒知识。3、应在检验过程中保持个人整洁与卫生，防止人为污染样品。4、应在检验过程中遵守相关安全措施的规定，确保自身安全。5、有颜色视觉障碍的人员不能从事涉及辨色的实验。(二)环境与设施1、实验室环境不应影响检验结果的准确性。2、实验区域应与办公区域明显分开。3、实验室工作面积和总体布局应能满足从事检验工作的需要，实验室布局宜采用单方向工作流程，避免交叉污染。4、实验室内环境的温度、湿度、洁净度及照度、噪声等应符合工作要求。5、食品样品检验应在洁净区域进行，洁净区域应有明显标示。6、病原微生物分离鉴定工作应在二级或以上生物安全实验室进行。(三)实验设备1、实验设备应满足检验工作的需要，常用设备见A.1。2、实验设备应放置于适宜的环境条件下，便于维护、清洁、消毒与校准，并保持整洁与良好的工作状态。3、实验设备应定期进行检查和/或检定(加贴标识)、维护和保养，以确保工作性能和操作安全。4、实验设备应有日常监控记录或使用记录。(四)检验用品1、检验用品应满足微生物检验工作的需求,常用检验用品见A. 2。2、检验用品在使用前应保持清洁和/或无菌。3、需要灭菌的检验用品应放置在特定容器内或用合适的材料(如专用包装纸、铝箔纸等)包裹或加塞，应保证灭菌效果。4、检验用品的储存环境应保持干燥和清洁，已灭菌与未灭菌的用品应分开存放并明确标识。5、灭菌检验用品应记录灭菌的温度与持续时间及有效使用期限。(五)培养基和试剂培养基和试剂的制备和质量要求按照GB4789.28的规定执行。(六)质控菌株1、实验室应保存能满足实验需要的标准菌株。2、应使用微生物菌种保藏专门机构或专业权威机构保存的、可溯源的标准菌株。3、标准菌株的保存、传代按照GB4789.28的规定执行。4、对实验室分离菌株(野生菌株)，经过鉴定后，可作为实验室内部质量控制的菌株。三、样品的采集(一)采样原则1、样品的采集应遵循随机性、代表性的原则。2、采样过程遵循无菌操作程序,防止一切可能的外来污染。(二)采样方案1、根据检验目的、食品特点、批量、检验方法、微生物的危害程度等确定采样方案。2、采样方案分为二级和三级采样方案。二级采样方案设有n、c和m 值，三级采样方案设有n、c、m和M 值。n：同一批次产品应采集的样品件数；c：最大可允许超出m值的样品数；m：微生物指标可接受水平限量值(三级采样方案)或zuigao安全限量值(二级采样方案)；M：微生物指标的zuigao安全限量值。注1：按照二级采样方案设定的指标，在n个样品中，允许有≤c个样品其相应微生物指标检验值大于m值。注2：按照三级采样方案设定的指标，在n个样品中，允许全部样品中相应微生物指标检验值小于或等于m值；允许有≤c个样品其相应微生物指标检验值在m值和M 值之间；不允许有样品相应微生物指标检验值大于M 值。例如：n=5，c=2，m=100CFU/g，M=1000CFU/g。含义是从一批产品中采集5个样品，若5个样品的检验结果均小于或等于m值(≤100CFU/g)，则这种情况是允许的;若≤2个样品的结果(X)位于m值和M值之间(100CFU/g1000CFU/g)，则这种情况也是不允许的。3、各类食品的采样方案按食品安全相关标准的规定执行。4、食品安全事故中食品样品的采集：a) 由批量生产加工的食品污染导致的食品安全事故，食品样品的采集和判定原则按采样方案的2、3执行。重点采集同批次食品样品。b) 由餐饮单位或家庭烹调加工的食品导致的食品安全事故，重点采集现场剩余食品样品，以满足食品安全事故病因判定和病原确证的要求。(三)各类食品的采样方法1、预包装食品（1）应采集相同批次、独立包装、适量件数的食品样品，每件样品的采样量应满足微生物指标检验的要求。（2）独立包装小于、等于1000g的固态食品或小于、等于1000mL的液态食品，取相同批次的包装。（3）独立包装大于1000mL的液态食品，应在采样前摇动或用无菌棒搅拌液体，使其达到均质后采集适量样品，放入同一个无菌采样容器内作为一件食品样品；大于1000g的固态食品，应用无菌采样器从同一包装的不同部位分别采取适量样品，放入同一个无菌采样容器内作为一件食品样品。2、散装食品或现场制作食品用无菌采样工具从n个不同部位现场采集样品，放入n个无菌采样容器内作为n件食品样品。每件样品的采样量应满足微生物指标检验单位的要求。(四)采集样品的标记应对采集的样品进行及时、准确的记录和标记，内容包括采样人、采样地点、时间、样品名称、来源、批号、数量、保存条件等信息。(五)采集样品的贮存和运输1、应尽快将样品送往实验室检验。2、应在运输过程中保持样品完整。3、应在接近原有贮存温度条件下贮存样品,或采取必要措施防止样品中微生物数量的变化。四、检验(一)样品处理1、实验室接到送检样品后应认真核对登记，确保样品的相关信息完整并符合检验要求。2、实验室应按要求尽快检验。若不能及时检验,应采取必要的措施,防止样品中原有微生物因客观条件的干扰而发生变化。3、各类食品样品处理应按相关食品安全标准检验方法的规定执行。(二)样品检验按食品安全相关标准的规定进行检验。五、生物安全与质量控制1、实验室生物安全要求应符合GB19489的规定2、质量控制（1）实验室应根据需要设置阳性对照、阴性对照和空白对照，定期对检验过程进行质量控制。（2）实验室应定期对实验人员进行技术考核。六、记录与报告1、记录检验过程中应即时、客观地记录观察到的现象、结果和数据等信息。2、报告实验室应按照检验方法中规定的要求，准确、客观地报告检验结果。七、检验后样品的处理1、检验结果报告后，被检样品方能处理。2、检出致病菌的样品要经过无害化处理。3、检验结果报告后，剩余样品和同批产品不进行微生物项目的复检。八、附录A微生物实验室常规检验用品和设备A.1 设备A.1.1 称量设备：天平等。A.1.2 消毒灭菌设备：干烤/干燥设备,高压灭菌、过滤除菌、紫外线等装置。A.1.3 培养基制备设备：pH 计等。A.1.4 样品处理设备：均质器(剪切式或拍打式均质器)、离心机等。A.1.5 稀释设备：移液器等。A.1.6 培养设备：恒温培养箱、恒温水浴等装置。A.1.7 镜检计数设备：显微镜、放大镜、游标卡尺等。A.1.8 冷藏冷冻设备：冰箱、冷冻柜等。A.1.9 生物安全设备：生物安全柜。A.1.10 其他设备。A.2 检验用品A.2.1 常规检验用品：接种环(针)、酒精灯、镊子、剪刀、药匙、消毒棉球、硅胶(棉)塞、吸管、吸球、试管、平皿、锥形瓶、微孔板、广口瓶、量筒、玻棒及L形玻棒、pH 试纸、记号笔、均质袋等。A.2.2 现场采样检验用品：无菌采样容器、棉签、涂抹棒、采样规格板、转运管等。中国微生物菌种查询网

                           无菌检查法的相关知识！一、无菌检查法的起源与静脉输液的起源和应用相关1665年，欧洲勃兰登堡侯国御医约翰西吉斯蒙德埃尔斯霍尔茨发表了《新灌药法及其方式方法》1831年，修霍乱肆虐，苏格兰医生赖特用大量煮沸过的食盐水静脉输注，大部分人获救的同时，赖特也发现了“注射热”随着显微镜的发明和微生物的发现，开始有了对输液产品无菌检查的研究。二、无菌检查的相关概念定义：用于药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。性质：是有关药品安全的一种定性试验根据培养基中是否有微生物生长判断结果影响因素：环境、人员、用品无菌性、检验数量、检验量、培养基适用性、方法适用性、培养条件等。局限性：微生物污染不均匀，检验方法局限。三、无菌检查的局限性如果因灭菌不完全或产品密封系统出现偏差，一个批次中有10%的产品受到微生物污染，从该批次中取一个成品样做无菌检查，那么存在两种可能，取到一个无菌样，或者取到一个染菌样，取到无菌样的概率p=0.9，取到无菌样的概率q=0.1(p+q)n=1   即   （0.9+0.1）1=1.0该事件中，无菌检查通过率为90%。如果从这个批次中取2个染菌样，1个无菌样，1个染菌样。即（p+q）2=p2+2pq+q2=1           分别把p=0.9和q=0.1代入p2=0.81 取到2支无菌样的概率q2=0.01 取到2支染菌样的概率2pq=0.18 取到1支无菌样和1支染菌样的概率该事件中，无菌检查通过率为81%通过无菌检查的概率：pn=(1-q)n 无菌是根据概率的原则判断的。从给定批号的所有产品中存在被污染产品的概率得出判断无菌测试本身并不是设计用于保证产品无菌或产品已灭菌。产品的无菌保证是通过灭局工艺或无菌工艺的验证得来的。无菌测试适用于药典要求无菌的药物成分，配置剂或制剂。然而，合格结果仅说明在测试条件下受检的样品中未发现微生物污染。中国微生物菌种查询网专业提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    微生物培养基中蛋白胨的作用！蛋白胨是一种外观呈淡黄色的粉剂，浓缩干燥而成的浅黄色粉末，具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好物理性状。可配制各种微生物培养基。一般来说，用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白(酪蛋白、肉类)和植物蛋白(豆类)两种。蛋白胨当中不仅含有丰富的氨基酸，特别是含硫氨基酸较多，而且含有更多的细菌生长需要的维生素和其它生长因子。是生物制药发酵及各种培养基制备的基础原材料。在培养基当中它起的主要作用是提供氮源。蛋白胨的用途：实验室用作培养基，培养细菌。食品中用作提高蛋白含量。用于饲料中显著降低了饲料厂的生产成本，是饲料行业中蛋白源不足的良好佳品。胰酪蛋白胨是一种优质蛋白胨，亦称胰酶蛋白胨或称胰蛋白胨。该蛋白胨系采用酪蛋白经胰酶消化后，浓缩干燥而成的浅黄色粉末，具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好物理性状。可配制各种微生物培养基。酪蛋白胨是用酪蛋白经胰酶水解精制而成，色泽呈淡黄色或白色。月示胨采用精蛋白为基质，经特殊水解提取制备的干燥粉末，营养极为丰富，可做多种培养基的基础。大豆蛋白胨是是用大豆为基质，采用新工艺提取而成的淡黄色粉末，含有多种营养成份，适合做微生物培养用原料。专门用于培养链球菌、肺炎球菌、布氏杆菌等，营养丰富，也可用做工业化生产的发酵原料。牛肉蛋白胨用新鲜精牛肉，采用zuixin工艺精致而成在培养基当中它起的主要作用是补充蛋白胨以及其它氮源的营养不足。多价胨采用先进生物提取工艺精致而成，为淡黄色干燥粉末，营养极为丰富，可做多种培养基的基础。适合奈瑟氏菌、沙门氏菌属等生长。骨蛋白胨系蛋白质分解产物，如将牛肉、酪蛋白、牛奶粉、白明胶、大豆蛋白、丝蛋白、血纤维蛋白等为原料，经不完全的水解工艺所得的产物。市售产品以淡黄至棕黄色粉剂为主。其分子量约2000左右。不同来源的蛋白质和不同的水解条件，其水解物中组成可千差万别。所以胨往往是一个复杂的多肽混合物。可溶于水，过热不凝固，在饱和硫酸铵中不发生沉淀但可为蛋白质沉淀剂所沉淀。可用作微生物和动物细胞培养基、特种功能性食品和化妆品的配料，也有用作啤酒等产品的稳定剂。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                        食用菌培养基的配制方法！1、培养基的分类①按成分不同分类天然培养基：指以天然物质为培养原料的培养基。常用的有马铃薯、豆芽汁、麦芽汁、玉米粉、麦麸、清糠、牛肉膏、蛋白胨、棉籽壳、木屑等。一合成培养基：用化学药物配制而成的培养基，一般见于研究性的培养基。如实验某种食用菌能利用哪种碳源，就选用各种有关的化学药材，分别制成各种培养基，观察实验菌种的生长情况。半合成培养基：以天然材料和化学药物混合配制而成的培养基。②按菌种扩大形式分类母种培养基：即常用的斜面培养基。广州等地介绍用枝条代替斜面培养基，这种枝条培养基也属母种培养基。原种培养基：即一般食用菌生产中的原种瓶子培养基。用于母种扩大培养。栽培种培养基：与原种培养基同。③按物理性状分类液体培养基；固体培养基；半固体培养基。2、配制方法①容器准备。食用菌生产中常用的容器为试管（制母种用），瓶子、塑料袋（制原种、栽培种用）。玻璃容器准备：玻璃容器最好先用肥皂粉泡水洗涤（使用过的试管zuihao煮沸处理）。若容器中附着有机物、油垢等，应先用去污粉擦洗。对旧的玻璃容器，特别是已染菌的容器，应先在漂白粉液中浸泡，然后用清水冲洗。一些早已洗净而过久堆放的瓶子，使用前，最好用1/1000-1/5000的高锰酸钾液处理。棉塞的做法与要求，先扯一块够大的棉花，拿在左手中。然后，以右手顺序多次将棉花铺于左手中的diyi、二、三……层棉花上。要求每次加入的棉花均比前一次小，且每层的棉花四周基本扯成圆形。已通过拇食两指圆圈的前端，成为表面光滑，且较坚硬的棉塞。然后，用左手将尚露在拇食两指圆圈表面的棉花转折成光滑且较坚硬的棉塞另一头。并将此头塞入试管或瓶内，塞紧即成为两头光滑无褶皱的棉塞。棉塞应两头要光滑，特别是进入容器内的这一头，更应光滑无褶缝；棉塞的大小要与容器口的大小相吻合，不可太紧，亦不可太松；棉塞的2/3应塞入容器内，1/3留在容器口外。采用高压灭菌的应选用聚丙烯塑料袋，采用常压灭菌的可选用聚乙烯塑料袋。塑料袋的大小可根据生产的要求进行选择。现在有专业工厂可为各食用菌栽培单位提供不同规格的塑料袋。为节约开支，也可自制。②配制方法母种培养基：配方为马铃薯（去皮）20%、葡萄糖2%、琼脂2%、水适量。制法是选不出芽、不烂的优质马铃薯，洗净去皮，按需要量称取（有芽的要将芽挖掉）。将称好的马铃薯切成薄片，放入铝锅中，按20克马铃薯加100毫升水的比例加入清水。加热煮沸，维持20分钟。用四层纱布过滤，取其汁液。称取琼脂，先在水中泡浸洗净后加入马铃薯的汁液中，继续加热溶化。加入规定量的葡萄糖，并用热水补足到规定水量。按各种菌种对pH的要求范围，将上述培养基用5%的稀盐酸或5%的氢氧化钠溶液调节。趁热迅速将上述培养基试管，装量约为试管长度的1/5。注意管口不要沾上培养基。清洁试管口，塞上棉塞（棉塞松紧要适度，塞入试管的长度约为棉塞全长的2/3）。将塞好棉塞的试管直立，盖上牛皮纸，以粗线扎好。灭菌结束后取出，趁热将培养基放成斜面（即先在桌上放一木条，然后将试管一头搁在木条上，试管底靠桌子，使试管成一斜向。此时，可见管内培养基向上倾斜，应掌握整个培养基斜面长度不超过试管总长度的一半）。冷却凝固后即成斜面培养基，供母种接种用。有条件的，应对上述斜面进行无菌测定，检验灭菌是否彻底。方法是选取几支已灭菌的斜面，放入30℃左右恒温箱中培养3-5天。若未见斜面上长出杂菌，即可使用。原种、栽培种培养基：一般食用菌的原种和栽培种培养基的配方及配制方法基本一致。其配方为杂木屑78%、糠20%、蔗糖1%、石膏1%、水适量。制法是选取无芳香味的、干燥无霉变的木屑，筛去木片、木条。取定量米糠先与定量石膏拌匀，然后加入木屑中充分拌匀。将蔗糖加入水中，溶解后加入木屑料中拌和，再加入适量清水。要求手紧握料时，指缝间有水而不下滴为度。装瓶（或装入塑料袋）时，以特制的扁弯铁钩压实木屑料，但不宜过紧，一般以瓶子倒悬而料不掉出为度（装料高度以达瓶肩为宜）。可将料已压实的瓶子口倾入清水中，转动瓶子，洗除瓶肩上沾住的木屑及外壁的木屑。待瓶口水迹稍千后，塞上棉塞，再包上牛皮纸或塑料薄膜（聚丙烯）。目前，不少地区采用玉米粒为原料，制作原种和栽培种。实践证明，此法具有生长速度快，发菌旺盛的特点。较麦粒种制作更简便，成品率也较麦粒种高。从节约用粮角度出发，玉米属粗粮，故比以细粮小麦制种更为妥当。制法是将玉米粒以水浸泡24小时以上，冬季zuihao能放在较暖的环境下浸泡，夏天浸泡时间可适当缩短。捞起已浸泡好的玉米，放入锅内加水煮熟，要求煮到食之无生腥味、质软而韧为度。将煮熟后的玉米置于纱布上，吸去表面水分后立即装瓶，每瓶不宜装料过多，一般1公斤干玉米可装六瓶种（750克蘑菇瓶）。装好玉米的瓶口，塞上棉塞，并以牛皮纸包扎，于20磅压力下，灭菌1小时，或在常压条件下，煮沸后再保持6小时以上沸腾。然后，取出冷却到30℃左右，送入接种箱，行抢温接种。北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得zui优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     如何提高食品微生物检验质量？百欧博伟生物 食品微生物检验是国家技术发展的产物，直接关系着人们的身体健康，尤其在生活水平提高的今天，人们对食品的安全越来越重视，对食品微生物检验质量要求也越来越高，相关技术人员就需对食品微生物检验工作加以重视，保证采取有效措施提高检验质量，为食品微生物检验的发展奠定良好基础。 目前，食品微生物检验技术还存在较多不足之处，多种食品微生物无法根据相关需求进行检验，从而为食品微生物检验工作带来一定难度。虽然国家已对此类技术提出了一定的标准，但在实际应用过程中，仍存在检验质量问题，阻碍了国家食品行业的发展。一、食品微生物检验内容1.食品污染程度指标菌的检验食品污染程度指标菌的检验是食品微生物检验技术人员对大肠菌群类的细菌总群、大肠菌群等进行检验，在一定程度上评价出饮用水的安全性，进而达到一定的检验要求。同时，微生物检验人员要注意此类菌群在水与食品中含量标准的不同。2.检验多种致病菌检验多种致病菌是食品微生物检验技术人员必须要对食品中的金黄色葡萄球菌等进行检验，在此基础上，食品微生物检验人员还要对其进行定量检验，为其研究奠定良好基础。二、食品微生物检验工作特点食品中所含有的微生物种类较多，其检验工作环境复杂，所以对采集样品的要求较高。在食品微生物检验过程中，相关检验人员必须对其特点进行分析，提高对采集样品的要求。diyi，检验人员必须对食物中含有的病原型微生物进行检验，并且进行统计。第二，食品微生物检验人员要对微生物进行定期检查，避免食品中出现工业微生物。第三，对可导致人类中毒的微生物进行检验。第四，检验人员对可使食品出现腐败现象的微生物进行检验。总之，食品微生物检验人员在执行工作期间，接触的微生物种类非常多，因此，相关检验人员必须对其加以重视，保证采集出有利于提高食品安全性的检验样品。此外，在食品微生物检验时，检验人员要注意到食品中微生物检验与医学微生物检验的区别，这体现出食品检验工作具有快速性的特点。由于食品中所含的微生物较多，对其产生影响的因素也有很多，为能提高其检验质量，必须要对以下几点工作加以重视。1.检验人员的专业素质在食品微生物检验期间，要提高检验人员的工作质量，就不能单一地凭借检验仪器执行工作，由于整个食品微生物检验过程中，都需检验人员具有良好的分析能力与判断能力，所以食品微生物检验人员要掌握一定的技术原理，并严肃对待检验工作，保证提高工作质量。同时，食品微生物检验企业还要为工作人员提供定期的培训机会，对检验人员进行专业知识培训，使其掌握先进的检验知识与检验技术。此外，国家还要推行食品微生物检验法律法规，要求检验人员在考取资格证书后才能上岗工作。2.食品微生物检验环境食品微生物检验工作是在专门的实验室中进行的，不仅可避免出现污染现象，还能防止出现检验人员感染病原菌的问题。因此，食品微生物检验部门要对检验环境加以重视。首先，要科学、合理地对实验室进行布局，选择污染程度低的区域，并保证不会对检验人员的安全造成威胁，如操作区域与办公区域要相互分离。其次，要对检验环境进行清洁与消毒，检验工作产生的废弃物要统一处理，避免出现病原菌散布现象。3.食品微生物的采样工作食品微生物检验中的采样工作是最为重要的，相关检验人员必须对以下几点加以重视。首先，检验人员要重视采样工具与容器的选择，应选择耐消毒灭菌的材料，使其更好地应用于食品微生物检验作中，进而提高检验效率。其次，在食品微生物检验工作实施前，相关检验人员要对检验工具与容器进行清洗灭菌，在灭菌处理后，要存储在干燥的地方，避免造成不利影响。zuihou，在每件检验样品封口后，食品微生物检验人员要在样品上贴标签，并做好记录，采样的样品不可少于需要样品数量的3倍，从而提高其检验效率。4.食品微生物检验报告食品微生物检验人员要重视检验报告，根据国家相关标准进行准确的检验评估，在评估后，为保证检验报告质量，相关检验人员还要对检验报告进行复查，为报告质量的提高提供有力支持。三、结语食品微生物检验人员在进行检验工作的过程中，必须对检验质量加以重视，保证创新自身检验方式，开发新型检验技术，使检验质量向着更好的方向发展。中国微生物菌种查询网专业提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    污水处理菌种产品的优点及方法！百欧博伟生物 近年来，随着国内城市不断发展，人们生活环境的不断提高，随之产生了很多城市垃圾堆积如山，生活污水随意进行排放，这些来源于居住建筑和公共建筑产生的城市生活污水是居民日常生活中排出后未经处理的废水。生活污水如果不经过处理直接排放的话，会含有大量的有机物和病原微生物等主要污染物。城市生活污水中的有机物极易产生大量的恶臭气味，如果有害细菌和病原体以生活污水中有机物为营养大量繁殖的话，可导致多种传染病蔓延流行。目前城市污染一般有两种方法：一种是用传统的化学药剂，一种是使用现在比较流行的微生物污水处理菌种来治理城市生活污水。微生物菌种治理污水早在上世纪八十年代国外都已经开始采用了，当时，由于发达国家水污染问题日益突出，所以针对性的产生了许多新兴的污水处理系统工艺和方法。其中用微生物菌种外源投加的方法来强化污水处理系统中生化段的污泥活性和处理性能，这一方法一经提出，便以其“无次生二次污染、原位处理、调试周期短、操作便捷”等优势性饱受好评。自1998年初期起，随着国内对环境的日益重视，我国从日本、台湾等地区开始尝试带进部分微生物菌种，然而初期由于外来菌种无法适应我国多变的气候、地理、气温等条件，所以收效甚微。但是随着国内生物技术的不断探索，近年来，在国内部分企业的不断探索和优化下，适应我国水质的菌种应运而生，从而给我国高度重视的污水处理带来了新的变革。污水处理是一个看似简单实际做起来非常复杂的事情，在污水生化细菌培养中，虽然就是去除COD，降解氨氮，去除总氮，降总磷，但是实际操作中如果有一项操作出现问题就会导致出水指标不达标，而且寻找到问题也是非常的困难。根据城市生活污水中有机物高及难处理的特点，洛阳欧科拜克生物公司采用微生物菌种研制出了污水处理菌种，可以有效减少生活污水中的有机物和氨氮含量，微生物菌种投放之后会迅速繁殖，在生活污水中形成优势菌群来有效抑制处理和杀灭有害细菌和病原体。相比于传统的生化处理工艺，采用我公司的微生物菌种，见效更快，效果更佳，尤其是对减少污泥产量和去除臭气方面的优势更加明显。在微生物研发生产技术上，我公司拥有源自日本科研技术，在国内采用了优势微生物，对其进行驯化培养，使之更快适应当地环境，突破目前大部分微生物产品适应性差和存活率低的现状。能够显著提升系统内氨氮的去除效率，快速启动与恢复生化处理系统；迅速提高系统的抗冲击能力，使系统运行的更稳定；快速补全系统中所缺的细菌数量，繁殖速率仅需30min一代。我公司污水处理菌种主要原料为乳酸菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、酵母菌、硝化菌、光合细菌、载体等。有效活菌数超过100亿/克，广泛适用于禽畜养殖污水除臭、化粪池除臭、富营养污水处理、生活污水处理、工业污水处理等。污水处理菌种可缩短发酵周期，即快速启动新建或季节性变化的污水系统的硝化作用；可以高温硝化，即能在7℃-40℃环境中有效存活并代谢生长、硝化；可以起到杀菌、除臭，维护污水系统中的硝化作用；当生化池中存在不利硝化的因素或没有硝化作用时，可重新投加菌种来恢复。每袋本产品，加1kg红糖、100kg无菌水，在30℃左右的环境中密封4-8小时，菌液即可激活成功。污水处理菌种产品优点：1、高效去除COD,解决COD不达标问题本产品作为diyi代菌种，通过微生物纯培养法技术进行培养，经过10多道制作工序制作而成，“体格”健壮，以有机物为食物，快速分解污水中的有机物，降低污水中COD的含量。2、高效降解氨氮（NH4-N），解决氨氮不达标问题本产品中还有高密度、经过特殊驯化的硝化细菌，可将污水处理爆气池中的氨氮转化为硝态氮，快速降解污水中氨氮。3、高效降解总氮（TN），解决总氮不达标问题本产品中含有高密度、经特殊驯化的反硝化细菌，在缺氧环境下，快速将硝态氮分解为氮气、二氧化碳和水，快速降低污水中总氮的含量。4、高效提升处理效率，解决污水处理效率低问题本产品去除率高达98%，投加至污水处理系统中，可加强菌群数，快速形成生物膜，快速提升污水处理系统去除COD、氨氮、总氮等 指标的处理效率。5、快速恢复系统正产运行，解决系统受冲击恢复难的问题本产品一日可见效，挂膜快，当污水处理系统受有毒物质冲击，投加本产品可快速补充微生物数量，快速恢复污水处理系统达标运行。6、有效解决出水水质不稳定的难题投加本产品可增加污水系统中菌种种类、数量，为系统中增加优势菌，促进系统内菌群的生产和稳定，可提升污水处理系统稳定性，保证出水达到在污水处理系统中的曝气池及BAF滤池内投加。先配置菌种液，再投入系统中，能大大的缩短循环的时间。根据不同类型的废水，工艺、浓度、废水量决定投加量。根据实际的进水情况，出水的效果，做出定时的补给增减用量。随着我国水处理标准的日益严苛，督察力度的逐渐加大，以前被忽略的总氮氨氮总磷问题被重新提到台面上。各大市政污水处理厂，各企业的污水处理系统都将面临提标的问题。所以说，微生物污水处理菌种投加技术是未来污水处理市场的大势所趋。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                      银耳菌种分离实验的目的与步骤！一、实验目的1．了解混合类型菌丝的概念；2．掌握银耳菌种分离的方法；3．学会银耳耳木分离的具体方法步骤。二、实验材料长有银耳的段木若干根、锯条、解剖刀、接种镊子、斜面培养基、75%的酒精棉球、培养皿、0.1%升汞水、手表、纱布、酒精灯、接种箱等。三、实验步骤1．选一根生长银耳的朵大肉厚且密的耳木一根。2．用锯条将最理想的一段耳木锯下，切成若干1. 5～1. 2cm薄片。3．用酒精棉球擦拭耳木1～2次后，放在0.1%升汞水中，置于接种箱内。4. 30s后，在接种箱内把耳木取出，放在无菌水中冲洗数次，再用无菌纱布和棉球吸干耳木上的水分。5．用无菌刀片（刀片在酒精灯上灼烧灭菌）将耳木劈成火柴梗大小的棒。6．将整理好的耳木棒，按无菌操作的要求，接人事先准备好的试管培养基上，及时贴上标签。7．从接种箱内将接种好的试管取出，放到23～25℃条件下培养（实验告一段落）。8．观察菌种萌发生长情况。3d后进行观察，若没有杂菌感染，斜面上的小耳木上可长出纤细的菌丝。并逐渐延伸到培养基上。5～7d后，培养基的表面出现浅灰色的斑纹。约20d，小耳木棒上便长出白色的菌丝，并逐渐分泌出白色或浅黄色的水珠；分离实验即告成功。中国微生物菌种查询网专业为各企事业单位，科研院所，各级学校提供微生物菌种产品查询、购买服务！网站主要提供的产品：质控菌种，标准菌种，中国微生物菌种4万多株，细胞系/株1万多株其中金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌（大肠杆菌），沙门氏菌，黑曲霉，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，链球菌，白色念珠菌，志贺氏菌等为常用菌株。

              乳酸菌在动物生产中的应用研究现状！ 百欧博伟生物 随着《饲料和饲料添加剂管理条例》（国务院令第609 号）的施行，以及新《新食品安全法》的即将实施，国家将进一步加大从政治层面规范企业生产的力度，尤其是对饲料添加剂、药物添加剂使用的监管。因此，如何在提高产品的安全性与品质的同时降低成本，成为畜禽养殖者及饲料加工企业在新形势面临的一大考验。这同时使饲料添加剂的选择和应用成为关键。以乳酸菌为代表的微生态制剂，具有保持动物肠道微生物平衡、防止疾病、促进生长、提高饲料转化率、改善畜禽饲养环境等功效，日益成为各大饲料加工企业和畜禽养殖业关注的焦点。本文主要阐述了乳酸菌的作用及其在畜禽生产中的应用研究现状，并对乳酸菌制剂的应用前景提出了展望。在饲料中添加抗生素，对预防动物疾病、促进动物生长、提高饲料报酬、提高畜禽产品产量等方面发挥了积极的作用。但抗生素的长期使用，会使病原菌产生耐药性, 导致抗生素用量增加，造成动物消化道微生态失去平衡, 引起内源性感染，而且抗生素在畜产品中残留会导致人类的免疫力发生变化而严重影响健康。所以, 早在1992 年瑞士就禁止使用饲用抗生素；欧盟1999 年起通过立法禁止抗生素作促生长剂使用。因此, 在畜禽饲料中用乳酸菌等微生态制剂部分替换抗生素作为饲料添加剂，有望解决抗生素残留和动物耐药等问题，对畜牧业发展有着不可估量的作用。一、乳酸菌及其作用乳酸菌是一类能够分解乳糖、葡萄糖等碳水化物, 生成乳酸、醋酸等有机酸的细菌。据不完全统计，乳酸菌现有43 个属，主要有乳酸杆菌属(Lactobacillus)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、链球菌属(Streptococcus)、明串珠球菌属(Leuconostoc)、肠球菌属(Enterococcus)、乳球菌属（Lactococcus) 等。其中乳酸杆菌属在畜禽生产中允许使用的较多。我国农业部发布的《饲料添加剂品种目录（2013）》中公布可用于养殖动物的乳酸杆菌有5 种：嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、德式乳杆菌乳酸亚种（原名乳酸乳杆菌）、植物乳杆菌及德式乳杆菌保加利亚亚种（原名保加利亚乳杆菌）。作为益生菌的乳酸菌绝大多数不仅对动物和人无毒、无害、无副作用；而且具有促进和调控肠道健康的益生特性，同时具有增加营养、改善和促进免疫代谢的能力, 以及降血压、降血脂、抗肿瘤等功能。⒈改善胃肠道功能，防治胃肠疾病健康动物消化道内存在着百种以上的微生物，它们作为一个整体彼此相互依存、相互制约，共同维持着消化道内的微生态平衡和动物的机体健康。微生物群的平衡对动物机体的健康非常重要，而乳酸菌能够调节这种微生态平衡，增加正常菌群数量，有效抑制病原菌的繁殖生长，使动物健康得到保障。试验证明，乳酸菌制剂对一些胃肠道疾病具有较好的疗效，如病毒性腹泻、细菌性腹泻、便秘、肠炎等。同时，乳酸菌在肠道内产生的乳酸和醋酸，可降低肠道pH 值，抑制肠道致病菌如痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、弯曲杆菌等的生长。乳酸菌还可产生细菌素、类细菌素样物质、有机酸等抑菌物质。细菌素是一类选择性作用于细菌靶细胞的抗菌物质，可有效阻止链球菌、葡萄球菌及梭状芽孢杆菌等腐败性细菌的增殖，抑制有害物质的产生，维持动物肠道健康。⒉增强机体免疫力，提高抗病力乳酸菌以某种免疫调节因子来刺激肠道免疫应答反应，也可提高机体的抗体水平及巨噬细胞活性，增强免疫力。乳酸菌提高畜禽机体的免疫功能主要是通过促进机体的细胞免疫、体液免疫等方式来实现。乳酸菌制剂能增强单核吞噬细胞及多形核白细胞的活力，这对提高宿主免疫力具有重要意义。大量的研究结果表明，乳酸菌能干预调节细胞免疫，乳酸菌、双歧杆菌能阻断许多微生物的入侵和黏附。体液免疫是以特异性抗体起主要作用的免疫应答反应。乳酸菌同样具有激活淋巴细胞、刺激抗体产生等与体液免疫相关的功能。冯少敏等人研究特异乳酸菌（Lb-f）剂量依赖性提高小鼠抗绵羊红细胞凝集素抗体滴度, 具有增强机体体液免疫功能的作用。另外，乳酸菌可以有效地降低因大肠炎造成的肠道通透性的改变并促进肠菌群恢复平衡状态。⒊增加营养，促进生长乳酸菌在畜禽机体内可产生各种消化酶而有助于消化，也可降解饲料中的某些抗营养因子从而提高饲料转化率。乳酸菌通过发酵，利用消化道内未消化的碳水化合物，在小肠中产生短链脂肪酸；进入大肠后被大肠黏膜吸收，为宿主提供可利用的能量储备。⒋抑制胆固醇吸收，降血脂血压适量服用乳酸菌制剂可有效降低血液胆固醇的含量，减少心血管疾病的发病率。Gilliland 等（1985）用噬酸乳杆菌进行了降低体内和体外胆固醇的试验研究。结果，观察到培养液中的胆固醇含量明显降低，而乳酸菌体细胞内的胆固醇含量却增加了，证明嗜酸乳杆菌对胆固醇具有同化作用。体外试验证明，乳酸菌产生的胆盐水解酶可以把结合胆酸分解为游离胆酸，而游离胆酸可以和胆固醇形成复合物沉淀下来。乳酸菌在降低机体胆固醇的同时，也可降低甘油三脂，使高密度脂蛋白HDL 升高，从而起到降低血脂、血压的作用。另外，乳酸菌本身及其代谢产物还能产生抗肿瘤活性。推测机理可能是：乳酸菌可以降解或吸附致癌物质；改善肠道微生物群落，阻止肠内致癌物的形成；增强宿主的免疫系统，产生抗突变的物质；改善肠道生理生化环境等[9]。如肠道内一些细菌分泌的酶类，如偶氮还原酶、β- 葡糖苷酸酶、硝基还原酶、β-葡糖酶等，可使致癌物前体转化为致癌物，肠道菌内的乳酸菌可抑制这些酶的活性，降低了肿瘤发病率。二、乳酸菌在动物生产中的应用研究现状近年来，人们对乳酸菌的营养价值和功能活性的认识和研究不断深入，随着生物技术的飞速发展，益生乳酸菌因其功能特性研究和开发，将会得到越来越广泛的应用。在动物生产中，作为生物菌添加剂乳酸菌具有提高饲料利用率，增加精肉含量；抑制肠道有害菌，预防动物疾病；改善畜禽饲养环境等特点。⒈乳酸菌在家畜生产中的应用防止仔猪腹泻病的发生是养猪的关键。哺乳仔猪主要以吸吮母乳为主，母乳中含有大量乳糖。当其发生腹泻时，乳酸菌可将乳糖转化为乳酸，因而降低了肠道pH 值，抑制了大肠杆菌的生长。随着早期断奶技术的推行，生产效益得到明显提高的同时，又给养殖户带来了早期断奶仔猪抵抗力下降等诸多新问题。研究证实，乳酸菌制剂能明显提高断奶仔猪的生产性能。Etleva 等用植物乳杆菌、发酵乳杆菌和粪肠球菌组成的复合乳酸菌拌料饲喂断奶仔猪结果表明，复合乳酸菌显著增加了断奶仔猪的日增重和末重。⒉乳酸菌在家禽生产中的应用许多研究发现，乳酸菌制剂的添加可引起动物消化酶活性的提高，有利于营养物质的消化、吸收和转化，增强机体的物质代谢和营养转化，进而促进了家禽的生长性能或产蛋性能。乳酸菌对家禽生产性能的影响主要有提高家禽日增重，降低家禽料重比和提高家禽的成活率。谭善杰在植物性乳酸菌饲养肉鸭试验报告中指出，饲料中添加植物性乳酸菌，可有效地提高生产水平和饲料利用率，降低饲养成本，提高经济效益；可减少疾病的发生；出栏成活率也明显提高。徐子涵等在乳酸菌对雏鸡生长性能和小肠黏膜组织形态的影响试验中，证明不同剂型乳酸菌可以提高雏鸡的平均日增重，并且对小肠肠道黏膜的组织形态有一定的改善，可以增加小肠绒毛高度，减少隐窝深度进而影响营养物质的吸收。杭柏林等（2008）添加植物乳杆菌和粪链球菌的各试验组肉鸡的胸腺指数、法氏囊指数、脾脏指数均大于对照组，且试验组各指数与对照组鸡相比，除个别组外均差异显著，表明植物乳杆菌和粪链球菌这2 株乳酸菌可促进肉鸡胸腺、脾脏和法氏囊的发育。⒊乳酸菌在水产养殖中的应用乳酸菌代替抗生素在水产养殖中的应用主要体现在水质改良、治疗疾病以及对水产动物免疫等方面。抗生素作为抗菌促生长的药物在水产动物的频繁使用造成了水环境的污染，并且长此以往，还会对以这些水赖以生存的动物和人构成威胁。以饲料形式饲喂的乳酸菌一部分可以在肠道内定植，大部分则通过粪便排泄到水中，从而使水体中乳酸菌的数量升高成为优势菌。这样不仅可通过竞争性抑制作用明显抑制肠道和水体的弧菌，而且还可通过直接的化学作用和间接的促进微生物的反硝化作用消除水体中的亚硝酸盐，起到净化水质的效果。肠炎是水产养殖整个过程中都会随时爆发的疾病，其致病菌为肠型点状气单胞菌和温和单胞菌。此外，弧菌也是海水养殖动物的主要病原菌，存在于水体和肠道中，为条件致病菌。为了避免疾病爆发，养殖户会在饲料中添加抗生素，长期服用一方面会使肠道菌群失调加重肠炎，另一方面有可能产生耐药菌株使治疗更加艰难。有研究显示，乳酸菌对肠道细菌如气单胞菌引起的肠炎和腹泻具有一定的预防和保护作用。乳酸菌调节肠道菌群的能力取决于其在肠道中的定值能力、定值位点和定值后的代谢产物。乳酸菌对水产动物的免疫调节功能主要是通过加强水产动物肠黏膜屏障功能及其免疫功能发挥作用。三、乳酸菌在动物生产中的应用前景农业部颁发的《2014 年畜牧业工作要点》27 条中，有5 条是关于加快建设现代饲料生产体系的。其中第9 条为“规范饲料和饲料添加剂行政审批”；第10 条为“全面推进饲料生产全程质量安全管理制度”；第11 条为“完善饲料质量安全监测计划”；第13 条为“加强饲料产业发展指导与服务”，对“瘦肉精”的专项整治也继续组织开展。由此我们不难看出，国家对饲料安全及食品安全的重视程度。另外，通过《饲料添加剂品种目录》近年来对药物添加剂的删减及对饲料微生物添加剂的大幅增加，我们可以看到微生态制剂所肩负的安全使命及其发展前景。在微生态制剂中，乳酸菌的促生长能力和促免疫能力都是最强的，这也是乳酸菌成为用于动物饲料添加剂的微生态制剂宠儿的最主要方面。现在中国很多养殖企业提倡大规模集约化养殖场，规模化程度越高，废弃物的排放越集中，因而养殖场三废的处理也是养殖业发展的关键。如缺少关注的猪场废气处理，尤其是氨浓度及硫化氢的偏高，损伤猪的呼吸道黏膜，导致发病率的增加及饲料转化率的降低。《2016 年畜牧业工作要点》中也提到要“研究和推广高效、经济、适用的畜禽养殖粪污综合利用模式”。在这些方面，乳酸菌制剂也将发挥其不可估量的作用。

               实验室中常用的化学分离与提纯方法！提纯是指将混合物净化除去其杂质，得到混合物中的主体物质，提纯后的杂质不必考虑其化学成分和物理状态。混合物的分离方法有许多种，但根据其分离本质可分为两大类：1、化学分离法；2、物理法； 下面就混合物化学分离及提纯方法归纳如下：一、分离与提纯的原则1.引入的试剂一般只跟杂质反应；2.后续的试剂应除去过量的前加的试剂；3.不能引进新物质；4.杂质与试剂反应生成的物质易与被提纯物质分离；5.过程简单，现象明显，纯度要高；6.尽可能将杂质转化为所需物质；7.除去多种杂质时要考虑加入试剂的合理顺序；8.如遇到极易溶于水的气体时，要防止倒吸现象的发生。 二、概念区分清洗：从液体中分离密度较大且不溶的固体，分离沙和水； 过滤：从液体中分离不溶的固体，净化食用水；溶解和过滤：分离两种固体，一种能溶于某溶剂，另一种则不溶，分离盐和沙； 离心分离法：从液体中分离不溶的固体，分离泥和水； 结晶法：从溶液中分离已溶解的溶质，从海水中提取食盐；分液：分离两种不互溶的液体，分离油和水；萃取：加入适当溶剂把混合物中某成分溶解及分离，萃取水溶液中的碘；蒸馏：溶液中分离溶剂和非挥发性溶质，海水中取得纯水；分馏：分离两种互溶而沸点差别较大的液体，液态空气中分离氧和氮；石油的精炼；升华：分离两种固体,其中只有一种可以升华，分离碘和沙；吸附：除去混合物中的气态或固态杂质，活性炭除去黄糖中的有色杂质。 三、分离和提纯常用的化学方法1.加热法：当混合物中混有热稳定性差的物质时，可直接加热，使热稳定性差的物质分解而分离出去。如，NaCl中混有NH4Cl，Na2CO3中混有NaHCO3等均可直接加热除去杂质。2.沉淀法：在混合物中加入某种试剂，使其中一种以沉淀的形式分离出去的方法。使用该方法一定要注意不能引入新的杂质。若使用多种试剂将溶液中不同微粒逐步沉淀时，应注意后加试剂的过量部分除去，zuihou加的试剂不引入新的杂质。如，加适量的BaCl2溶液可除去NaCl中混有的Na2SO4。3.酸碱法：被提纯的物质不与酸碱反应，而杂质可与酸碱反应，用酸碱作除杂试剂。如用盐酸除去SiO2中的CaCO3，用氢氧化钠溶液除去铁粉中的铝粉等。4.氧化还原反应法：如果混合物中混有还原性杂质，可加入适当的氧化剂使其被氧化为被提纯物质。如将氯水滴入混有FeCl2的FeCl3溶液中，以除去FeCl2杂质；同样如果混合物中混有氧化性杂质，可加入适当的还原剂使其被还原为被提纯物质。如将过量的铁粉加入混有FeCl3的FeCl2溶液中，以除去FeCl3杂质。5.转化法：不能通过一次达到分离目的的，需要经过多次转化，将其转化成其它物质才能分离，然后再将转化的物质恢复为原物质。如分离Fe3＋和Al3＋时，可加入过量的NaOH溶液，生成Fe(OH)3和NaAlO2，过滤后，再加入盐酸重新生成Fe3＋和Al3＋。在转化的过程中尽量减少被分离物质的损失，而且转化物质要易恢复为原物质。6.调节pH法：通过加入试剂来调节溶液的pH，使溶液中某组分沉淀而分离的方法。一般是加入相应的难溶或微溶物来调节。如，在CuCl2溶液中含有FeCl3杂质，由于FeCl3的水解，溶液是酸性溶液，就可采用调节pH的方法将Fe3＋沉淀出去，为此，可向溶液中加入CuO、Cu(OH)2、CuCO3或Cu2(OH)2CO3。7.电解法：利用电解原理来分离提纯物质，如，电解精炼铜，就是将粗铜作阳极，精铜作阴极，用含铜离子的溶液作电解液，在直流电的作用下，粗铜中比铜活泼的杂质金属失去电子，在阴极只有铜离子得到电子析出，从而提纯了铜。 中国微生物菌种查询网是一家拥有独自科研力量,实验团队及研发团队的高科技高品质的生物技术工程公司，主要提供色谱耗材、色谱仪器、固相萃取装置、化学试剂、样品瓶、氘灯、标准品、微生物技术、菌种保藏服务以及ATCC产品代理等产品及服务！欢迎广大客户来询！

              大肠埃希氏菌初步生化试验与鉴定方法！大肠埃希氏菌初步生化试验与鉴定方法一、初步生化试验在CT-SMAC 和改良CHROMagar O157 显色琼脂平板上挑取5 个～10 个典型或可疑菌落，分别接种TSI 琼脂，同时接种MUG-LST 肉汤，并用已知MUG阳性的大肠埃希氏菌株做对照，于36℃±1℃培养18h～24h。必要时进行氧化酶试验和革兰氏染色。在TSI 琼脂中，典型菌株为斜面与底层均呈黄色，产气或不产气，不产生硫化氢（H2S）。置MUG-LST 肉汤管于长波紫外灯下观察，MUG阳性的大肠埃希氏菌株应有荧光产生，大肠埃希氏O157:H7/NM 无荧光；对分解乳糖且无荧光的菌株，在营养琼脂平板上分纯，于36℃±1℃培养18h～24h，并进行下列鉴定。二、鉴定⒈血清学试验在营养琼脂平板上挑取分纯的菌落，用O157:H7 标准血清或O157 乳胶凝集试剂作玻片凝集试验。对于H7 因子血清不凝集者，应穿刺接种半固体琼脂，检查动力，经连续传代3 次，动力试验阴性，H7 因子血清凝集阴性者，确定为无动力株。⒉生化试验用API20E 生化鉴定试剂盒或VITEK-GNI+检测卡，按照生产商提供的使用说明进行。大肠埃希氏菌O157:H7/NM 生化反应特征见表。⒊生化试验 特征反应三糖铁琼脂 底层及斜面呈黄色，H2S 阴性山梨醇 阴性或迟缓发酵靛基质 阳性MR-VP MR 阳性，VP 阴性氧化酶 阴性西蒙氏柠檬酸盐 阴性赖氨酸脱羧酶 阳性（紫色）鸟氨酸脱羧酶 阳性（紫色）纤维二糖发酵 阴性棉子糖发酵 阳性MUG 试验 阴性（无荧光）动力试验 有动力或无动力微生物菌种查询网专业为各企事业单位，科研院所，各级学校提供微生物菌种产品查询、购买服务！网站主要提供的产品：质控菌种，标准菌种，中国微生物菌种4万多株，细胞系/株1万多株其中金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌（大肠杆菌），沙门氏菌，黑曲霉，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，链球菌，白色念珠菌，志贺氏菌等为常用菌株。

             细胞株说明书、细胞增殖与细胞生长曲线！一、细胞株说明书细胞株或细胞系在首次引进时，需要查阅正规的培养物保藏中心的有关细胞株系的编号或产品号。如恶性黑色素瘤A375细胞株，在ATCC(TheAmericanTypeCultureCollection，美国典型培养物保藏中心）的保藏号为CRL-1619。从各地权威保藏中心购买引进的细胞株都应该配套有对应的细胞株说明书，内容包括细胞株的寄存者（最初建立株系的负责人）、培养时所用培养基和血清的要求、是否贴壁生长或悬浮生长、建株来源组织细胞种类、繁殖条件（培养条件：培养基种类、血清添加量、其他添加物、CO2浓度、培养温度等）、传代要求（传代时机、传代比例等）、冻存条件（冻存液组方、冻存温度）等。在引进前要充分了解该细胞株的说明书内容，尤其要熟知细胞株的繁殖条件、传代要求和冻存条件等事项。二、细胞增殖典型培养条件下的动物细胞、人类细胞，会正常进行细胞分裂，日渐增加细胞数量。可增殖细胞是细胞具有良好活性的特征。增殖也是细胞固有的属性之一，不同细胞株的增殖周期不同，多数培养细胞的增殖周期或细胞周期是20-24h。哺乳动物细胞的分裂是二分裂，如果是20-24h分裂一次，那么细胞生长克隆的细胞数与培养天数（n)的关系可以表达为2n-1，如此，第1、2、3、4天的细胞个数分别为1、2、4、8、16。对于静态悬浮细胞培养，依据此关系，通过镜检独立的细胞克隆，计数平均每个独立细胞克隆的细胞个数，则非常容易知道是哪天进行的接种培养。三、细胞生长曲线（一）概述在营养物质一定的体外培养体系中，无菌培养条件下，动物细胞的生长状况和生长速度与接入的细胞密度有关系。描述细胞生长的连续变化中细胞密度与培养时间的关系，往往用细胞生长曲线表示，包括迟缓期、对数生长期、稳定期和衰退期（图9-7)。正确的生长曲线描述，依赖正常的培养条件和无菌操作，并且需要熟练的细胞计数操作。细胞生长曲线是以细胞密度为纵坐标、累计培养时间为横坐标作图描绘的折线图，也可以直接以细胞密度作纵坐标、累计培养时间为横坐标在半对数表上作图描绘的折线图。若每隔24h测定细胞密度，可用天（d)作累计培养时间单位，若隔12h或更短时间测定细胞密度，建议使用小时（h)作累计培养时间单位。作为细胞生长曲线观察用的培养物，在后续培养过程中，不得改变培养体系即培养液的体积，要确保培养条件的稳定。需要换液时采用定量换液方法操作，使用同样体积的新鲜培养液替代废弃培养液，不干扰细胞团，不取出细胞。培养条件包括温度、CO2浓度、趋饱和湿度，一般要求37℃、5%CO2浓度、相对湿度90％以上的条件下进行哺乳动物细胞培养。（二）生长曲线对于哺乳动物细胞培养的意义典型的生长曲线包括迟缓期、对数生长期、稳定期和衰退期这4个时期。生长曲线也是细胞株具有的特有属性，不同细胞株的生长曲线图形不完全一致。日常培养的细胞株用于某种目的前，zuihao预先培养以便观察其细胞生长曲线，了解该细胞株的合理接种密度。(1)当接种细胞密度足够高时，将不出现典型的迟缓期或迟缓期很短，并且到达衰退期的累计培养时间最短。进行细胞药理或细胞毒理试验时，预培养的细胞接种密度往往控制在1×105-2×105/ml范围，以便在加载供试药物时，所培养的细胞处于对数生长期并已形成单层或接近单层。(2)当接种细胞密度合理时，会出现典型的迟缓期，并且到达衰退期的累计培养时间比较短。正因为如此，进行传代培养、原代培养、扩大培养时，一般细胞培养时都要控制接种密度在2×104-5×105/ml范围。(3)当接种细胞密度太低时，会出现很长的迟缓期，很难观察到对数生长期、稳定期和衰退期，要观察到衰退期的累计培养时间非常长。在依赖哺乳动物细胞培养进行生物制品生产的过程中，尤其需要避免此种细胞密度下的接种培养，以免造成不必要的经济损失和时间浪费。微生物菌种查询网专业提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

              艰难梭菌知识简介及其几种检测方法！ 1、艰难梭菌简介艰难梭菌又叫“艰难梭状芽孢杆菌”，最早发现于上世纪30年代，是造成医院感染和住院病患腹泻的常见细菌。普通人群中约有3%的人的肠胃中都有这种细菌，在正常情况下，该细菌受制于人体内的其他细菌，不会危害人体健康。但对于长期或是大量服用抗生素的病人而言，这种细菌是可怕的，甚至是致命的。这是由于药物破坏了人体肠胃中各种菌类之间的平衡，所以容易导致“艰难梭菌”感染。就“艰难梭菌”本身而言，其致命性并不高，在0.6%到1.5%之间，但由于感染该细菌通常会伴随伪膜性结肠炎的出现，一旦出现这种情况，死亡率就会猛增到35%到50%。而且，与所有的细菌一样，“艰难梭菌”会通过突变产生新的变种，而这些变种细菌的毒性和对人体的危害性、致命性通常也更强。 2、艰难梭菌的传统检测方法所有艰难梭菌菌株皆表达抗原谷氨酸脱氢酶，但是艰难梭菌分为产毒菌株和不产毒菌株两种。仅产毒菌株分泌毒素A和毒素B。毒素A和毒素B都可以导致艰难梭菌相关疾病的发生。艰难梭菌的检测主要是通过对疑似bingli的粪便中毒素的检测完成。直接粪便毒素测定包括细胞毒素测定（CTA）和酶免疫测定（EIA）。CTA中毒素B的检测被认为是艰难梭菌检测的金标准。CTA涉及到将培养的细胞暴露到有或者没有抗毒素存在的排泄抽提物中。如果排泄物样本是艰难梭菌阳性，则对没有经过抗毒处理的培养细胞有毒害作用。艰难梭菌也可以通过在厌氧条件下培养而被检测。这种方法具有很高的灵敏度，但是也很耗费时间，需要超过三天的时间。另外，这种方法不能区分产毒菌株和非产毒菌株。利用EIA对细菌培养分离株进行进一步测试，主要是鉴定艰难梭菌菌株是否产毒。传统实验室的C.diff测验都是根据以下三种方法中的一种或者结合几种进行的：细胞培养测定中的细胞毒素检测； 艰难梭菌毒素A、肠毒素、或者毒素A和毒素B的酶免疫测定（EIA）检测； 艰难梭菌的厌氧培养。⑴细胞培养测定中的细胞毒素检测过滤的粪便抽提物加到微量滴定板上处于生长的健康的单层细胞中，培养48h。如果样本中存在细胞毒素（一般是艰难梭菌毒素B），将会导致单层细胞聚集，脱离板（称为细胞病变效应，CPE）。非特定细胞毒素的鉴别是通过加入向第二个孔（孔内有病人的粪便抽提物）加入特定的抗毒素（实际上是培育一种相似的微生物C. sordellii）。只有起始的CPE是由于艰难梭菌毒素B引起的，在相应的孔中抗毒素才会阻止CPE。一般认为，细胞毒素中和（CTN）测定是实验室检测中最灵敏和精确的，但是存在两个主要的缺点：出结果的速度不够快，从而影响了及时的临床诊断；这种方法需要专业的技术和连续的组织培养。 ⑵艰难梭菌毒素A、肠毒素、或毒素A和毒素B的酶免疫测定（EIA）检测一些商业产品通过检测在主要存在于有生长力的艰难梭菌细胞的一种蛋白质，叫谷氨酸脱氢酶（GDH），结合毒素检测。因为粪便中的毒素易分解，特别是如果在转移到实验室的过程中经过耽误，毒素测验很可能会错误地成阴性，然而GDH是相当稳定的，通常可以表明微生物的存在。这种方法的缺点包括缺乏灵敏性，一些菌株毒素的改变使得不能被商业化产品检测出来；一些无毒素的艰难梭菌也可分泌出GDH（假阳性结果）；一次进行这些检测的费用；如果EIA测验是成批进行以提高工作流程和成本效益，将会使周转时间延长。⑶艰难梭菌的厌氧培养培养是所有检测中最灵敏的方法。但是必须进行二次检测以判断产物毒素是否存在，因为非毒性菌株还是比较常见的。这就延长了出结果的周转时间。另外，艰难梭菌的芽孢是极其坚固的，但是有生长力的形式却比较脆弱，必须维持厌氧环境以使其恢复生长。一种特殊的介质——环丝氨酸-头孢西丁果糖琼胶（CCFA），必须在厌氧环境下储存并培养48h，以达到zuijia的恢复。因为培养技术的困难和结果输出的延迟，在相对很少的检测性实验室中会对艰难梭菌进行培养。早先的研究区分疾病通常包括在内镜检查术下宏观观察粘膜的外观，通过组织病理学比较（假膜是由剥落的细胞组成的白色或者黄色粗糙的物质构成），或者在结肠粘膜的活体组织上观察到的的微观病变。目前这种有扩散性的检测在今天已经几乎不被利用了，实验室测验是检测的主要模式。这使得测验和标准的选择至关重要。最近已经有文献报道了采用两步方法后的更好的结果：对微生物本身非常灵敏的检测，首先利用EIA检测GDH，紧接着对细胞毒素和中和的二次检测。因为在所有病人的粪便标本中的艰难梭菌，对GDH的快速检测将都是阳性的，不管毒素的性质是否已经在运输过程中分解，这种方法是最灵敏的。粪便在其最初的检测中被认为是阴性的，即可立刻被报告时阴性的。因为diyi个样本是最有价值的。看护者可以进行其他的检测方法，并使得改变抗生素疗法决定的立即必要性得到阻止。实验室必须继续进行细胞毒素测定，这使得周转时间增加，或者培养和毒素测验的时间增加。然而，两步方法是最有效的。 ⑷传统检测方法面临的困境无论是CTA还是艰难梭菌培养都需要耗费大量时间和劳动力 。艰难梭菌检测时间的延长将导致拖延对艰难梭菌阳性个体的治疗；鉴定为假阳性可能导致使用抗生素应对个体艰难梭菌感染。这也可能导致个体被误诊为艰难梭菌感染，而与真正艰难梭菌阳性病人共用同一间病房。目前，一个更加致命的抗氟喹诺酮的限制性核酸内切酶B1族艰难梭菌菌株在世界很多地方已经被越来越多地检测出来。这种新型菌株是通过其产物双毒素（CDT）及毒素A和毒素B抑制剂基因位点tcdC的部分缺失加以区别的。由于与新克隆相关的增加的致病率和死亡率，病菌的检测迫在眉睫，因为甲硝唑的效力逐渐下降，万古霉素应该尽可能地避免使用，甚至新的含益生菌的治疗方法已经流行起来。内科医生确实需要一种更加可信和效率的检测。3、艰难梭菌的快速检测方法目前市场上有很多艰难梭菌快速检测方法，其中以Meridian Premier C. difficile Toxin A+B ELISA, TechLab Tox A/B Quik Chek, TechLab Toxin A/B II, ImmunoCard Toxin A&B的检测效果相对较好。ImmunoCard Toxin A&B testzuida化地缩短了检测时间，整个过程为16-24分钟。另外，这种测验是一个单项测验EIA，可能在临时检测的应用上是实用可行的。其他的快速检测方法需要自动板阅读设备、板清洗机、离心机或者一些消耗品（如不包括在检测试剂盒在内的准备试剂盒等）。大多数的研究都强调，需要更加缜密的方法如CTA或者厌氧培养等，以确认快速检测的结果。另外，快速检测可以用来作为鉴定艰难梭菌阳性个体的初步的筛选方法，可以减少在艰难梭菌感染检测的延误。但是这些快速检测普遍存在灵敏度低和阳性预测值率等缺点。因此，临床上迫切需要一种快速灵敏的艰难梭菌检测方法。 4、艰难梭菌分子生物学检测方法目前的有研究表明，利用分子学方法进行艰难梭菌检测更有效。 Peterson 等评价了real- time PCR检测是利用引物以毒素B基因的一段保守区域为靶点。 由于所有产毒菌株都携带毒素B（有些缺少毒素A），这被视为是产毒菌株的很好的替代标记。这个研究是分两个阶段进行。diyi阶段是将送到实验室的618个艰难梭菌检测标本，进行普通的EIA测验与PCR测验比较。与结合毒素测验的厌氧培养的金标准比较，EIA的灵敏度为67%，精确度为92%，而PCR的灵敏度为94%，准确度为97%。在这个阶段，调查者还设定了一套明确艰难梭菌相关性腹泻诊断的标准，并发现几乎所有真正的CDAD病例每天会有3次或者更多的排便。对符合该标准的采自病人的370个标本，PCR检测的灵敏度比EIA的更高（93% vs. 73%）。real-time PCR和厌氧培养测定皆比酶免疫测定（EIA）更加灵敏(P目前市场上推出的艰难梭菌快速分子检测有BD GeneOhm real-time PCR test和Cepheid公司的GeneXpert C. difficile快速检测方法等。Stamper等（2009）评价了BD GeneOhm real-time PCR test的检测效果，引用的标准是商业化应用的CTA（Wampole C.difficile Toxin B test）。通过研究表明，GeneOhm的灵敏度为83.6% (95% CI: 74.3% to 92.9%) ，精确度为98.2% (96.8% to 99.6%)，PPV 和NPV分别为 89.5% (81.5% to 97.4%) 、97.1% (95.3% to 98.9%)。整个GeneOhm real-time PCR test大概需要3h，而一般CTA需要24-48h，厌氧培养的时间大约为5天。作者总结认为，GeneOhm是一个快速灵敏的C.difficile分子检测方法。而Cepheid公司推出的GeneXpert C. difficile快速分子检测，具有更强大的优势。整个检测过程仅需要30分钟。与肉汤富集产毒培养进行比较，其灵敏度为93.5%，精确度为94.0%。与现有的PCR检测、细胞毒素测定、EIA等各种检测方法比较，其具有高度的灵敏度。因此，相比之下，GeneXpert C. difficile检测是一种更加快速、灵敏的检测方法。为了更好的服务社会，创造双方利益zuida化，我们特设了微生物菌种查询网！专业为各企事业单位，科研院所，各级学校提供微生物菌种产品查询、购买服务！网站主要提供的产品：质控菌种，标准菌种，中国微生物菌种4万多株，细胞系/株1万多株其中金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌（大肠杆菌），沙门氏菌，黑曲霉，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，链球菌，白色念珠菌，志贺氏菌等为常用菌株。

                真菌培养常用的培养基及其分离方法！医学真菌形态学观察是认识真菌的diyi步，但仅通过光学显微镜对其进行观察并不能直接鉴定为真菌，需要对疑似相关病变部位的标本进行采集及分离，然后在合适的培养基进行培养。一、病变部位标本的采集分离通常采集疑似病变部位的皮肤附属物、分泌物、血液、痰液、脑脊液等体液，注意标本的新鲜度、无菌性、充足性，而且要对所采集标本进行正确消毒，杀死其中混有的杂菌。标本为脑脊液时，需进行离心，收集沉淀物进行培养，标本为血液时，需要先行增菌培养后再分离，这样可增加阳性率，未增菌培养的阴性结果并不能排除阳性结果。二、真菌培养常用的培养基目前商品化的真菌培养基多为干燥脱水的形式，可以按照配制说明书进行配制，值得注意的是，使用后的装培养基的瓶盖须拧严，防止受潮，以各下次使用。1.沙保弱培养基及含抗生素的沙保弱培养基  沙保弱培养基是培养真菌最常用的培养基，绝大多数的真菌均可以在其上生长，沙保弱培养基还可以添加抗生素，从而抑制多数细菌和污染真菌的生长速度。含抗生素的沙保弱培养基多用于皮肤癣菌和绝大多数致病真菌的分离和培养，但值得注意的是含有抗生素的培养基会抑制念珠菌属、隐球菌和少量丝状真菌的生长。2.玉米粉（厚膜孢子）培养基  多用于鉴别念珠菌属，培养基中的吐温可以促进白假丝酵母菌产生厚膜孢子，同时可以加入1％葡萄糖促进红色毛霉菌生长，并抑制须毛霉菌的生长。3.土豆葡萄糖培养基  土豆培养基中需将土豆切成小于1cm。的小块，常用于诱导真菌形成孢子或产生色素。4.脑-心浸液琼脂培养基  是一类营养丰富的真菌培养基，人工配制过程较为烦琐，一般通过商品化的培养基按照说明书进行配制。BHI多用于室温培养致病真菌，也可用于35～37℃培养致病真菌的酵母相。微生物菌种查询网是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

              志贺氏菌增菌肉汤与新生霉素使用方法！志贺氏菌增菌肉汤与新生霉素（Shigella broth）1、志贺氏菌增菌肉汤成分胰蛋白胨 20.0 g葡萄糖 1.0 g磷酸氢二钾 2.0 g磷酸二氢钾 2.0 g氯化钠 5.0 gTween 80 1.5 mL蒸馏水 1 000.0 mLpH7.00.2制法将以上成分混合加热溶解，冷却至25 ℃左右校正pH 至7.00.2，分装适当的容器，121 °C 灭菌15 min。取出后冷却至50 ~55 °C，加入除菌过滤的新生霉素溶液（0.5 μg/mL），分装225 mL 备用。（注：如不立即使用，在2 ~8 ℃条件下可储存一个月。）2、新生霉素溶液成分新生霉素 25.0 mg蒸馏水 1 000.0 mL制法将新生霉素溶解于蒸馏水中，用0.22μm 过滤膜除菌，如不立即使用，在2~8 ℃条件下可储存一个月。 临用时每225 mL 志贺氏菌增菌肉汤加入5 mL 新生霉素溶液，混匀。中国微生物菌种查询网是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

阴道加德纳氏菌（GV）最初是1954年Gardner从阴道炎 病人的阴道分泌物中分离出来的与非特异性阴道炎相关的致病菌。几十年来，国内外学者研究表明，该菌还可以引起宫颈炎，不洁流产，术后感染，尿道感染等多种疾病 ，是新认识的一种性传播疾病的病原菌和条件致病菌。由于初分离培养此菌营养要求高，故临床实验室少见培养。目前诊断方法多采用1983年Amsel等提出的诊断标准 ，有的实验室仅做单项实验。别    称阴道加德纳氏菌英文名称GV常见发病部位阴道常见症状阴道有灼热感,性交痛及外阴瘙痒.简介阴道加德纳氏菌(GardnerellaVaginalis,GV)和"非特异性阴道炎"(NSV)的病因等问题,国外近年报道甚多。目前虽已阐明了细菌的分类学和治疗等问题,但有关感染的流行病学,无症状带菌和致病机理等,尚待进一步澄清。早在1950年LeOPld从男性前列腺炎和女性子宫颈炎患者。分离到阴道加德纳氏菌病菌。由致病原加特纳杆菌引起,可通过性交传染,在性关系混乱的人群中,加特纳菌性阴道炎有高流行率.加特纳杆菌引起的感染多见于性活跃女性.急性期白带增多,有鱼腥或氨的臭味,外阴潮湿不适,常伴有阴道灼热感,性交痛及外阴瘙痒.阴道加德纳氏菌编辑阴道加德纳氏菌（GV）是引起的细菌性阴道病（BV）的病原菌。其致病可能与厌氧菌共同作用有关，除引起BV以外，GV还可致早产、产褥热、新生儿败血症、绒毛膜羊膜炎、产后败血症、脓毒血症、尿路感染、肾周脓肿及膀胱炎等。GV是一种大小为1．5～2．5×0．5μm，多形性，无荚膜，无鞭毛，革兰氏染色不稳定的细菌。在普通琼脂培养基上不生长，在血琼脂培养基、巧克力培养基上生长，但不需x因子、V因子、辅酶因子。兼性厌氧，在足够CO2的环境中，容易生长。生长最适温度为35～37℃，，pH为6．0～6．5。S型菌落，呈β溶血。触酶阴性，氧化酶阴性，GC2为43±1mol%。目前国内外常用于分离GV的培养基有：（1）阴道（V）琼脂培养基，（2）Caseman固体培养基，（3）GC巧克力琼脂培养基，（4）（含吐温80）双层人血琼脂培养基（BHT），（5）改良人血琼脂培养基等，鉴别培养基有：（1）以caseman基础培养基配成的鉴别培养基，（2）以GC基础培养基配成的鉴别培养基等。

                    清洗液的作用原理及配制方法！1、洗液的配制铬有致癌作用，因此配制和使用洗液时要极为小心，常用两种配制方法如下：(1)取100mL 工业浓硫酸置于烧杯内，小心加热，然后慢慢加入5g 重铬酸钾粉末，边加边搅拌，待全部溶解并缓慢冷却后，贮存在磨口玻璃塞的细口瓶内。(2)称取5g 重铬酸钾粉末，置于250mL 烧杯中，加5mL 水使其溶解，然后慢慢加入100mL 浓硫酸，溶液温度将达80℃，待其冷却后贮存于磨口玻璃瓶内。2、其他洗涤液(1)工业浓盐酸：可洗去水垢或某些无机盐沉淀。(2)5％草酸溶液：用数滴硫酸酸化，可洗去高锰酸钾的痕迹。(3)5％～10％磷酸三钠(Na3 PO4 •12H2 O)溶液：可洗涤油污物。(4)30％硝酸溶液：洗涤二氧化碳测定仪及微量滴管。(5)5％～10％乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)溶液：加热煮沸可洗脱玻璃仪器 内壁的白色沉淀物。(6)尿素洗涤液：为蛋白质的良好溶剂，适用于洗涤盛过蛋白质制剂及血样的容器。(7)有机溶剂：如丙酮、乙醚、乙醇等可用于洗脱油脂、脂溶性染料污痕等，二甲苯可洗脱油漆的污垢。(8)氢氧化钾的乙醇溶液和含有高锰酸钾的氢氧化钠溶液：这是两种强碱性的洗涤液，对玻璃仪器的侵蚀性很强，可清除容器内壁污垢，洗涤时间不宜过长，使用时应小心慎重。北京百欧博伟生物技术有限公司（biobw）是北京的一家专业于生物技术的研究与广泛运用及推广的高科技公司，位于北京企业林立的丰台区造甲街，生物技术推广及运用早于2011年开始，成立公司于2013年一月。本公司主要提供色谱耗材、色谱仪器、固相萃取装置、化学试剂、样品瓶、氘灯、标准品、微生物技术、菌种保藏服务以及ATCC产品代理等产品及服务。

               死细胞与活细胞的显微判别、活细胞计数！一、死细胞与活细胞的显微判别（一）健康细胞与衰老死亡细胞的观察健康细胞即是所谓的活细胞。在显微镜视场下，健康细胞的形态表现为细胞匀质明亮，透明度大，折光性强。相差显微镜的视场下，可以看清细胞的形态结构，细胞质中有粗大的线粒体颗粒和细胞核。细胞培养术语中，死细胞一般指衰老细胞和死亡细胞的总称。另外，相对于正常细胞大小两倍以上或1/2以下的细胞分别称作“大细胞”或“小细胞”。“大细胞”可以理解为多个细胞融合形成的临时细胞，或细胞经历核分裂但未能完成细胞质分裂的那些细胞，这些细胞不能正常分裂，故属于死细胞。“小细胞”一般是由于培养环境或培养液含有细胞凋亡因素，由细胞凋亡形成的规则小膜泡。⒈微量移液器的结构及其使用通常需要使用微量移液器的辅助才能将细胞培养物的单细胞悬液准备好，以便在显微镜下观察细胞的形态特征。对微量移液器的结构了解是非常必要的（图9-5)。使用时，微量移液器的操作手势和取吸嘴动作要领也有一定的规范，具体参考指导教师的现场示范动作。使用时，所取液体不可接触移液器吸嘴连接部。移液器调节刻度至zuida量程以免影响移液器的精密度，存放时应立放于指定位置。⒉台盼蓝染色法用微量移液器定量移取单细胞悬液，另取0.4％台盼蓝染液与细胞悬液按1：1比例混匀。然后滴加到干净的载玻片上，加盖玻片使成单层细胞悬液。染色3-5min后，在l00×显微视场下观察。死细胞和细胞碎片均被染成蓝色，活细胞则不着色。此种方法应用比较广泛，技术难度相对较小。但需注意，有些异常大小的、不着色的细胞不一定是活细胞，如“大细胞”和“小细胞”。⒊显微形态直接判别用微量移液器定量移取单细胞悬液，滴加到干净的载玻片上，加盖玻片使成单层细胞悬液。这种方法判别死活细胞有一定的技术难度，需要经过训练才能逐步把握。⑴连续变焦细胞形态观察在100×-400×显微视场下往复变焦观察。死细胞和细胞碎片的轮廓欠圆润，甚至不连续，细胞或碎片持续发亮的行程比较短。活细胞则相反，细胞轮廓圆润有清晰界限，随着往复变焦调节，能观察到持续发亮的细胞，即发亮行程比较长。⑵非变焦细胞形态观察在100×-400×显微视场下，调焦观察目标细胞。在悬浮细胞培养物中，死的细胞和细胞碎片的轮廓欠圆润，甚至不连续。活细胞轮廓圆润有清晰界限，大小均匀。在贴壁细胞培养物中，活细胞的贴壁生长形态富有特征，有特定的克隆生长形态。死细胞的原有贴壁生长形态完全丧失或部分丧失，如呈悬浮状态的、边界不圆润的或细胞膜不完整的细胞。⒋根据细胞是否增殖进行判断此种判断非常准确，但需要连续多天观察。观察到细胞形成克隆样生长，细胞数量增加的属于活细胞，否则为死细胞。二、动物活细胞计数技术（一）计数板准备先用酒精棉球分别擦拭血细胞计数板的2个计数窗及其专用盖玻片，再用干净纱布擦拭干血细胞计数板的2个计数窗及其专用盖玻片的残余酒精和水分。小心装载盖玻片使悬空放置到计数板窗口上。（二）血细胞计数板的读数窗结构和读数方法血细胞计数板读数窗结构中，设计有2个读数窗，也称计数窗，周边有沟槽，有两道与读数窗平面高出0.lmm的横梁，承载盖玻片用（图9-6)。配套的盖玻片规格要求24mm×24mm，厚0.13-0.17mm。盖玻片放于计数板上，与读数窗的斜面形成“V”形夹缝。细胞悬液加载于读数窗的斜面上，沿“V”形夹缝进入读数窗平面与盖玻片形成的空间。图中，1、2、3、4、5这5个“大格”正好全部在100X显微镜视场范围。每个“大格”是边长为1mm的正方形，均有16个“中格”。每个“大格”容纳的细胞悬液体积是0.lmm3，即0.lμl或10-4ml。动物细胞计数时，通常求算1、2、4、5这4个“大格”的平均细胞数，记录的细胞密度“平均细胞数／10-4ml=平均细胞数×104/ml。（三）单细胞悬液制备从CO2培养箱取出细胞培养物镜检。混匀使成单细胞悬液。混匀过程注意避免产生气泡，否则影响计数结果，使数值偏低。另外，混匀过程必须温和、充分，否则也会使计数数值偏低。（四）装载细胞悬液到血细胞计数板用微量移液器套取吸嘴，吸取混悬均匀的单细胞悬液50-80μl，快速点加至计数板的2个窗口的斜台上，让细胞悬液刚好布满窗口即可。如有细胞悬液流入计数窗周边的小槽内，则需重新准备计数板，然后再取样。否则计数结果偏低。如果加载悬液的速度比较慢，计数时容易使数值偏高。加载细胞悬液的计数板要求10min内计数完结，否则细胞容易坏死，使活细胞计数数值比实际数值低。（五）计算血细胞计数板读数利用倒置显微镜的接目镜，在100×视场下读取上方计数窗中4个大方格中的平均细胞数。记录当前计数窗口的细胞密度（(4个大方格中的平均细胞数×104/ml)。采用相同方法，读取下方计数窗的细胞密度。实际细胞密度为上、下计数窗的细胞密度数值的平均数。原则上，要求2个计数窗的读数差异控制在5％以内，否则，应重新准备计数板装载细胞悬液进行新一轮的计数。计数过程中，遵照以下原则：非独立而相连的细胞团计为1，压上线和压左线的细胞计数，压下线和压右线的细胞不计数。在活细胞计数时，活细胞不包括“大细胞”和“小细胞”。读数顺序是沿16个中格的S形路线读取各中格的细胞数总和。（六）血细胞计数板用后复原使用后，及时用酒精棉球擦拭血细胞计数板及其专用盖玻片，复原放置。盖玻片擦拭后放入培养皿，用无水乙醇浸泡。微生物菌种查询网是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！