为积极响应“健康中国2030”国家战略，推动数字PCR技术在精准医疗及肿瘤早诊早治等场景的落地，2022年8月3日，永诺生物与达健生物达成全方位合作，双方将发挥各自技术优势，联合推动癌症早期检测的全国布局，全面建立基于MicroDrop数字PCR全生命周期的癌症早期检测及复发监控新模式。永诺生物董事长赖炳权与达健生物首席科学家邵建永等双方管理层人员出席签约仪式。双方签署合作协议（左：达健生物  右：永诺生物）永诺生物与达健生物的合作愿景一致，彼此将利用自身资源和行业优势为对方提供全方位的支持，联合探索创新的院端业务合作模式，深化合作空间。此次签约，双方明确了合作方向、合作目标、合作原则和合作内容，在接下来的市场推广中全力合作，重点布局临床端的准入以及商业化落地，共同助力提高我国医疗机构的宝贵资源，为中国用户提供更便捷，更优质的健康服务，助力健康中国战略落地。双方管理层人员出席签约仪式作为癌症高发国家，癌症防治是国家健康战略关注的焦点之一。《健康中国行动（2019—2030年）》将癌症防治行动列为这一时期重大行动之一，确保到2022年，高发地区重点癌种早诊率达到55%以上。伴随我国人口老龄化的持续深化，近几年我国癌症发病率及死亡率呈现持续上升的趋势，癌症防控形势严峻。癌症是影响我国国民健康的重大公共卫生问题之一。数据显示，虽然近十年来我国癌症患者5年总体生存率已有效提升，从30.9%上升到40.5%，但这一水平与发达国家仍有很大差距。本次永诺生物与达健生物携手合作，将助力癌症的早期发现、早期诊断及早期治疗等工作的落地。永诺董事长赖炳权致辞“目前行业已有初步共识，数字PCR的绝对定量能力及灵敏性在ctDNA甲基化检测、病原体定量、MRD检测等方面相对于其他平台在性能上有明显优势。永诺生物推出的MicroDrop系列数字PCR平台，我们持开放合作的态度，希望与合作伙伴共同开发能够解决临床问题的应用试剂，共建数字PCR生态，推动数字PCR这一创新的分子诊断平台在临床的真正普及。永诺生物专注于微滴式数字PCR技术的研发和应用，达健生物是癌症早筛领域的优秀企业代表，此次合作，即能推动肿瘤早筛早诊试剂盒的开发报证及市场化进度，也是数字PCR应用于癌症防控的重要里程碑事件之一，将助力永诺数字PCR在临床的普及。”达健首席科学家邵建永致辞邵建永教授表示：“中国是癌症大国，无论是发病率还是死亡率均高于全球平均水平。如何能更早地对于癌症患者早发现、早诊断、早治疗，是中国抗癌事业成败与否的关键领域之一。利用现代化的分子诊断技术对中国常见癌症进行早检早诊，将能提高早诊率，显著提高癌症患者的五年生存率，实现最好的卫生经济费效比。达健生物一直专注于癌症诊断领域，希望为广大群众提供关于癌症的早诊早检、液体活检和预后监测领域最完整的解决方案。这次的合作，希望能借助永诺生物的数字PCR平台，助力达健更好地布局中国常见癌症单癌种、多癌种乃至泛癌种早诊早检产品的研发，为癌症精准诊疗产品市场化助力。”战略合作签约仪式现场关于 广州永诺生物科技有限公司广州永诺生物科技有限公司是一家专注于单分子第三代数字聚合酶链式反应分析系统产业化的高新技术企业，自主研发的MicroDrop系列数字PCR系统打破了国外技术垄断，成为国内首款具有自主知识产权的高通量微滴式数字PCR系统，基于这一自主平台开发的一系列肿瘤早筛和病原体定量试剂盒也正引领着分子诊断的新未来。永诺生物参与制订中华人民共和国医药行业标准《YY/T 1824-2021 EB病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)》，《国家药品标准物质（SARS-CoV-2核酸检测试剂国家标准品）》的标定。永诺生物致力于让基因分析更精准，推动基因分析进入绝对定量时代。关于 广州达健生物科技有限公司广州达健生物科技有限公司自2009年成立以来，一直专注于癌症早诊和精准诊断产品研发和生产，致力于癌症诊疗全流程应用场景的单癌种、多癌种乃至泛癌种早诊早检产品的研发。目前已完成基于脱落细胞和外周血游离DNA甲基化的辅助诊断产品的研发，包括膀胱癌、肠癌、甲状腺癌等中国常见的10余癌症，产品技术包括荧光定量PCR，数字PCR和液体活检等高灵敏技术。产品正在进行已经进入临床试验中期阶段，部分产品已经完成临床试验并进入审评阶段。公司及其全资子公司安徽达健分别在广州和安徽芜湖建立2个GMP标准厂房，广州联合易检检验实验室医学检验所和芜湖达健医学检验所实验室等两个第三方医学检验所，能提供包括荧光定量PCR、数字PCR、一代测序、二代测序（NGS）等分子诊断平台全方位的分子检测服务。广州达健始终秉承着“达仁济世，健康中国”的理念，希望在癌症的早诊早检、液体活检和预后监测等领域提供最完整的解决方案，保障人民健康。

影响因子：7.117期刊： 肿瘤年鉴单位：欧洲临床微生物学和传染病学会2019年06月18发布——研究目的——在过去的几十年中，已经开发了基于核酸的分子方法来诊断寄生虫感染。包括常规PCR，巢式PCR，实时PCR，这些方法已成功应用于寄生虫鉴定，但灵敏度仍然存在局限性，尤其是在样品量少且靶标多样性的情况下。最近，数字PCR（dPCR）已被用于病原体DNA检测，以用于诊断环境和食品监测。最近的分子生物学文献报道dPCR是一种令人兴奋的新技术，显示出其潜力，尤其是在肿瘤学中。——技术手段特点和研究对象——各种商业化dPCR平台：基于微流体腔室，基于微孔芯片的芯片，基于液滴的以及基于微通道和基于液滴的晶体数字PCR。此技术的原理是从较大稀释的样品中扩增单个DNA模板，从而根据泊松统计信息生成仅从一个模板衍生的扩增子。dPCR与产生指数信号的实时PCR不同，dPCR产生线性数字信号，可以对PCR产物进行定量分析，达到以前所未有的精度和灵敏度，还可以检测非常罕见的突变。我们报告dPCR在具有医学重要性的三个主要寄生虫类别中的应用：原生动物，蠕虫和节肢动物。——研究结果————表3————研究结论——dPCR在寄生虫感染方面的应用似乎仍处于起步阶段。但是，本次审查的结果表明，这是一种很有前途的工具，已经具有明显的潜在优势，尤其是对于两种最重要的寄生虫感染，即疟疾和血吸虫病而言。相对于qPCR，dPCR带来的最积极的改进是，根据大多数研究，dPCR提供了无标准曲线的定量分析，并且对低负荷DNA更为敏感。一些证据表明，dPCR测定法在疟疾控制程序或输血医学领域中有望用于无症状和低密度感染的寄生虫血症测定。文章总结：我们通过数字PCR在寄生虫感染诊断中的数据看出，未来，数字PCR必定成为寄生虫感染诊断最有力的技术手段，广州永诺医疗国产自主研发的微滴式数字PCR技术平台，采用微流控的芯片技术，油包水的分割形式以及流式的检测手段，相信在未来寄生虫感染诊断方面将会作为最可靠的平台。——关于永诺——广州永诺生物科技有限公司成立于2010年，总部位于广州国际生物岛，是一家专注于医学科学技术开发与服务、分子诊断产品研发与生产的高新技术企业。公司目前占地面积近6000㎡，其中硕、博士以上学历员工占比近40%。公司依托先进的技术力量以及高质量的人才储备，在科研服务、医学检测和数字PCR产品三大业务上保持竞争优势。 公司成立至今申请国家专利40多项，授权21项，计算机软件著作权8项，广东省高新技术产品证书8项，省、市等科技计划项目10多项，2018年入围了大湾区生物科技创新企业50强，获得国家高新技术企业，广州市科技创新小巨人企业、广东省高新技术企业培育库入库企业、广州市企业研发机构等荣誉称号。永诺医疗是永诺生物的全资子公司，以“中国智造”为己任，专注于数字PCR仪器与应用试剂的研发，并于2017年成功研发了国内率先拥有完全自主知识产权的MicroDrop®系列微滴式数字PCR系统并投入生产。

      2021中华医学会第十七次全国检验医学学术会议将于2021年11月30-12月2日在长沙国际会展中心举办。届时，永诺将携自主研发生产的microdrop®系列微滴式数字pcr系统亮相本次博览会（b233展位），期待与您见面！数字pcr作为第三代pcr技术，拥有超高灵敏度、无需依赖传统荧光定量pcr的标准曲线即可实现核酸的绝对定量、数据可靠等优点，可以精准、快速检出基因突变。永诺microdrop®数字pcr拥有完全自主知识产权，平台拥有从仪器、芯片、试剂、耗材、软件全系统研发及产业化生产，其中高精度微滴生成芯片的设计，拥有三维微纳防污结构，更为检测精确度提高一个等级。截止目前，永诺microdrop®数字pcr平台，已开发新冠，肺癌、结直肠、白血病等领域伴随诊断系列试的剂盒共计有40多个，并支持定制开发应用试剂。广泛应用于医院、科研、工业、政府、疾控、海关等各个领域。● 无需依赖传统荧光定量pcr的标准曲线即可实现核酸的绝对定量。● 全封闭防污染设计，一键式自动化操作。● 微滴生成采用油包水乳化微滴技术，在微管道中利用气压驱动，2mins生成数万个微滴，高效高产，支持多重数字pcr的开发。● 微滴生成芯片为高精度微流控芯片设计，三维微纳防污染结构，一张芯片可同时处理8个样本。● 微滴检测使用双通道荧光，支持evagreen染料法及探针法。● 检测通量高，可一次检测高达96个样本，支持灵活设定。● 全中文分析软件，人性化界面设置，多种分析工具供用户选择。参展地点：长沙国际会展中心展出时间：2021年11月30日-12月2日展 馆 号 ：e2展厅展 位 号 ：b233号招商合作联系400-829-8906emailzhoufenglian@forevergen.cn

 发表期刊：Water research.2020.影响因子：7.913作者单位：1 Office of Research and Development, U.S. Environmental Protection Agency, 26 W. Martin Luther King Dr., Cincinnati, OH, 45268, USA. Electronic address: jahne.michael@epa.gov.2 Office of Research and Development, U.S. Environmental Protection Agency, 26 W. Martin Luther King Dr., Cincinnati, OH, 45268, USA.       基于风险的现场分散废水再利用处理需要有关源水体中病原体的发生情况和密度信息；废水分散再利用系统处理指南制定的一个基本障碍是，缺乏现场或本地收集的废水病原体特征数据，包括灰水（来自浴室的水槽、浴缸/淋浴和洗衣机的水）、黑水（厕所和厨房水槽的水）以及混合废水（混合的灰水和黑水）。传统的荧光定量PCR（qPCR）检测灰水中病原体的灵敏度不够，病原体密度可能接近检测灵敏度极限。以流行病学为基础的病原体建模作为一种替代方法已被提出，然而，鉴于缺乏现场收集的废水病原体定量数据，这些病原体模拟结果没有在实际环境的病原体研究数据中得到验证。        为了改进以往废水中低病原体密度的检测方法，本研究采用微滴式数字聚合酶链式反应（ddPCR）方法，对来自三个不同建筑规模分散收集系统的未经处理的灰水（n=50个样本）和混合废水（即包括黑水，n = 28）中的病毒性肠道病原体（诺如病毒基因组GI、GII和人类腺病毒）进行定量分析。然后，用这些ddPCR定量结果与用于模拟非饮用现场废水再利用的基于流行病学的病原体模型和qPCR的结果进行对比。       这项研究表明，ddPCR可在废水和灰水中定量病毒，ddPCR的高灵敏度相对qPCR允许更大的定量检测率，ddPCR检测的浓度与先前报道的基于流行病学一定规模人群中病原体感染发生的建模结果基本一致，ddPCR定量结果支持针对现场非饮用水重复使用已发布的病原体减少目标。        通过双重ddPCR反应对样本中的腺病毒（用FAM标记）和内部扩增子对照（IAC：由一个线性化的定制基因组成，标记为VIC） 进行定量，使用双重RT-ddPCR反应定量诺如病毒（用FAM标记）和第二个对照IAC （标记为VIC）。对所研究的三个分散废水和灰水收集系统，使用ddPCR可定量病毒性肠道病原体（图1），有27/28个混合废水样本和3/50个灰水样本可量化诺瓦克病毒GII浓度；腺病毒可量化的样本比例是7/50个灰水样本和4/28个混合废水样本；在11/28个混合废水样本中，诺如病毒GI是可量化的；在灰水中无法定量到诺如病毒GI （0/50个样本）。在ddPCR可量化的样本中，混合废水的腺病毒、诺如病毒GI和诺如病毒GII浓度分别为2.2 ~ 3.2、2.1 ~ 4.0和5.2 ~ 7.9 log10基因组拷贝/L；灰水的腺病毒和诺如病毒GII浓度分别为2.0-3.8和2.1-2.5 log10基因组拷贝数/L。每个靶标病原体可定量浓度的样品数量，ddPCR比qPCR多（图1），显示出ddPCR比qPCR灵敏度高。在混合废水中，诺如病毒GII的ddPCR定量率（96％）与可比较的1000人模拟结果（所有基因组的总和为99％）非常吻合（图1）。图1 在三个分散式混合废水（WW1）和灰水（GW1和GW2） 收集系统中，腺病毒（AdV）、诺如病毒基因组I（NoVGI）和NoVGII通过ddPCR和qPCR可量化样本百分比。WW-Sim和GW-Sim列显示先前发表的这些病原体基于流行病学类似规模的模拟结果。        在混合废水中，诺如病毒GII的密度足够高，可以通过ddPCR和qPCR两种方法进行定量（图2），检测到的密度范围是5.2-7.9 log10基因组拷贝/ L，并且相关性良好（R2 = 0.96），表明了ddPCR方法在废水基质检测中的准确性。图2 通过ddPCR和qPCR测定分散混合废水中诺如病毒基因群II（诺如病毒GII）的浓度。结果与先前发表的基于流行病学的模型相比较，“Sim”线表示日模拟的各个百分比（n=365×10000）。        尽管数量有限的灰水样本可定量检测腺病毒（n = 7/50）和诺如病毒（n = 3/50），但ddPCR检测到的浓度（分别为2.0–3.8和2.1–2.5 log10基因组拷贝数/ L）都在先前发表的由100人和1000人规模模拟预测结果的范围内（图3）。 图3 使用ddPCR测定灰水的腺病毒（AdV）和诺如病毒基因组II （NoVGII）浓度和先前发表的基于流行病学的病原体模拟（100和1000人规模病原体模拟，分别是Sim 100P和Sim 1000P）。        本研究的ddPCR测定结果支持已公布的用于现场非饮用水重复使用的病原体的检测， ddPCR测定的以往无法检测到的病毒性肠道病原体浓度结果与先前模拟的浓度模型非常吻合。这项研究提供了新的ddPCR定量肠道病毒数据，以支持未来的研究工作。这是第一个关于灰水和现场收集的混合废水中诺如病毒浓度的定量报告。这项研究结果将有助于评估分散式供水系统的安全性和制定分散式废水再利用风险处理指南。 关于永诺        广州永诺生物科技有限公司成立于2010年，总部位于广州国际生物岛，是一家专注于医学科学技术开发与服务、分子诊断产品研发与生产的高新技术企业。公司目前占地面积近6000㎡，其中硕、博士以上学历员工占比近40%。公司依托先进的技术力量以及优秀的人才储备，在科研服务、医学检测和数字PCR产品三大业务上保持领先的竞争优势。        公司成立至今申请国家专利40多项，授权21项，计算机软件著作权8项，广东省高新技术产品证书8项，省、市等科技计划项目10多项，2018年入围了大湾区生物科技创新企业50强，获得国家高新技术企业，广州市科技创新小巨人企业、广东省高新技术企业培育库入库企业、广州市企业研发机构等荣誉称号。       永诺医疗是永诺生物的全资子公司，以“中国智造”为己任，专注于数字PCR仪器与应用试剂的研发，并于2017年成功研发了国内首款拥有完全自主知识产权的MicroDrop®系列微滴式数字PCR系统并投入生产。   

       金光绚丽，天朗气清，惠风和畅，2021年10月23日下午，由永诺生物举办的“MicroDrop®微滴式数字PCR专家应用研讨会暨第三届经销商大会”在广州市·海珠区·广州生物岛高新木莲庄酒店隆重召开！       期间我们有幸邀请到检验与临床领域院士及众多知名专家莅临会议，为我们带来了顶级的学术盛宴；而永诺生物推出的新品MicroDrop400更是受到多位专家的点评与业界各经销的青睐。全场瞩目，新品发布：MicroDrop-400微滴式数字系统●颁奖签署环节关于我们       广州永诺生物科技有限公司成立于2010年，位于广州国际生物岛，是一家以微流控技术开发和应用为主的高新技术企业，公司业务涵盖三大板块：数字PCR研发生产及试剂开发、临床医学检测服务以及生命科学技术开发与服务。       2017年10月永诺生物旗下全资子公司--永诺医疗打破国外技术垄断，成功研发了国内拥有完全自主知识产权的微滴式数字PCR系统MicroDrop并投入生产，并已建成符合GMP标准的分子诊断试剂及产品车间3000㎡，联合广东顺德创新设计研究院成立工程技术中心，联合香港中文大学深圳研究院成立研发实验室，累计申请国家发明专利22项，授权13项，目前MicroDrop数字PCR系统于2020年8月，取得医疗器械注册证。成为国家认证的高通量流式微滴数字PCR仪，能广泛应用于科研、医疗、食品安全、出入境检验检疫等领域。2021-2022新代理商签约仪式

通过液滴数字PCR对单链和自身互补的腺相关病毒载体基因组滴度进行绝对定量作者： James M. Wilson摘要准确定量腺相关病毒(AAV)载体基因组拷贝数对于临床前和临床中正确和可重复的给药至关重要。目前定量PCR(qPCR)是检测AAV基因组的主流方法。然而，由于AAV基因组自身互补配对或过早包装不完整基因组，基于qPCR的AAV载体基因组滴度测定还存在问题。液滴数字PCR(ddPCR)是一种新的PCR技术，可以无与伦比的精确度直接定量DNA拷贝，而不依赖标准曲线及高PCR扩增效率，这些特性有助于准确定量单链和互补AAV基因组。在本文中，我们将基于ddPCR的AAV基因组滴度测定与标准和优化的qPCR测定方法进行比较，以定量单链和互补的AAV基因组。结果显示，ddPCR对单链AAV载体基因组的绝对定量，与标准qPCR检测相比，滴度增加了4倍。对于自互补AAV载体，ddPCR滴度分别比标准qPCR、优化qPCR和琼脂糖凝胶测定法测定的滴度平均高5、1.9和2.3倍。基于液滴数字PCR的基因组滴度在批内和批间精度方面均优于qPCR，并且对PCR抑制剂更具抵抗力，是监测病毒生产过程及体内生物学分布的理想方法。 引言腺相关病毒(AAV)载体介导的基因治疗在临床上的成功以及欧洲第一个基于AAV的基因治疗产品(Glybera)的批准，引爆了对更安全可靠的AAV载体生产和检测方法的需求，以满足行业标准和商业生产的要求。AAV载体放行的最关键指标就是AAV基因组滴度测定，因为基因组拷贝数是临床前和临床研究中使用最普遍的剂量标准。以往测定基因组滴度的主要方法是DNA斑点印迹，随着实时定量PCR(qPCR)的出现，AAV基因组滴度分析得到了很快的发展，并显著增加了检测的准确性和简便性，目前qPCR常用于AAV基因组滴度测定。然而在生产用于临床试验的自身互补AAV(scAAV)载体期间，发现qPCR测定的滴度与斑点印迹和紫外分光光度法测定的滴度之间存在很大差异（10倍）。目前认为造成这种差异的原因是qPCR扩增的片段靠近病毒基因组互补配对的发夹状反向末端重复(ITR)区域。scAAV基因组自身退火并干扰了PCR扩增反应的整体效率，从而干扰了基因组滴度的准确测定。Fagone及其同事随后发表的一篇论文报告称，这种效应导致的错误程度与PCR目标序列和发夹ITR的空间距离相关，通过限制性内切酶消化物理分割PCR目标序列和发夹ITR能显著提升病毒的检测结果。这一发现引入了对AAV的检测一项建议：无论是基于qPCR或是琼脂糖凝胶的检测，在检测之前都需要对发夹ITR进行限制性内切酶消化。该研究的另一个含义是：如果一项标准qPCR可用于量化scAAV基因组，PCR反应所使用的扩增子最好远离发夹ITR。然而，目前标准qPCR的方法并未排除靶向发夹ITR区域，所以scAAV基因组的定量很可能还存在问题。研究人员要么使用一些复杂并容易出现操作失误的方法，要么花大量时间用于qPCR检测的设计和验证。qPCR在理想条件下是稳定的，但不当的引物设计、反应体系中存在抑制剂或如之前提到的scAAV载体模板中的二级结构等因素会显著影响PCR的扩增效率。qPCR的另一个问题依赖于标准曲线，但标准曲线本身可能会存在误差。无论是单因素还是组合因素，都可能导致AAV基因组滴度的误报。数字PCR(dPCR)于1990年代首次引入，已经成为日常使用的实用技术。dPCR将模板进行分割后，可以同时运行数万个纳升级PCR反应。使用标准的TaqMan引物探针组合，通过荧光对阳性和阴性反应进行判读，然后获得模板的绝对拷贝数。前面提到qPCR技术存在许多缺陷不适用于dPCR，因为即使是低效率的PCR也会被判读为阳性，并且不需要标准曲线。该技术以在各种DNA应用中无与伦比的精确度和灵敏度而闻名，这些特征使dPCR成为临床级AAV制品定量的首选方法。无需标准曲线或无需高效率的PCR反应即可直接对DNA定量的能力将使我们能够应用一种通用技术来检测ssAAV和scAAV基因组。我们证明了基于ddPCR的rAAV基因组滴度测定是可靠的，报告的滴度与qPCR和基于DNA凝胶的测定等效或更高，并能将dPCR的精度转化为AAV载体的滴度。此外，我们证明了与qPCR相比，ddPCR检测对PCR抑制剂的抵抗力增强，这一结果将有助于评估病毒粗提物的滴度以及生物学分布研究。结果与讨论qPCR目前是AAV基因组滴度测定的标准方法。然而，qPCR低估AAV自身互补基因组滴度的现象促使我们重新审视AAV滴度检测方法并探索数字PCR在AAV基因组定量中的潜力。标准qPCR检测包括对样品进行DNaseI处理，然后进行系列稀释、衣壳热变性以释放载体基因组，以及依据线性化质粒标准曲线进行qPCR定量。低浓度AAV载体会与塑料表面结合导致丢失，这一点可以通过在体系中加入表面活性剂来克服。我们对检测体系进行了优化，初步结果表明，加入0.1%的PF-68或用蛋白酶K预处理然后热灭活可以将标准qPCR测定的平均滴度分别提高2.9倍和2.4倍，当两种处理方法合并时可以提高3.5倍。因此，最终优化的qPCR检测采用了两种处理方法。数字PCR使用与qPCR相同的引物探针，但没有对样品进行蛋白酶K处理，因为包装到单个衣壳中的正链和负链一旦从衣壳中释放出来可能会重新退火，导致不会分散到单个液滴中。由于数字PCR输出是绝对测量值，因此不需要质粒校准曲线。AAV标准曲线存在偏差我们的终极目标是在一系列AAV载体中比较三种基因组滴度分析（标准qPCR、优化qPCR和ddPCR）的性能。最初，我们开始使用ddPCR校准两个质粒标准品（表1）。对于nRBG标准品，使用两种不同引物探针（nRBG和eGFP），ddPCR最初确定的拷贝数比通过分光光度法测定的拷贝数低50%。为了提高ddPCR和分光光度法确定的拷贝数之间的一致性，我们增加了PCR循环数并在PCR过程中增加延伸步骤。尽管这些方法提升了ddPCR测定的滴度，但仍比预期低30%。对于BGH标准品，使用优化后的条件通过ddPCR检测到的拷贝数与分光光度法测定的拷贝数基本吻合。nRBG和BGH ddPCR结果之间的差异表明nRBG分光光度法测量拷贝数存在偏差，所以使用质粒标准曲线进行qPCR定量存在问题，因为质粒自身的定量可能就存在偏差。采用数字PCR验证质粒标准品的拷贝数质粒标准品计算拷贝数a检测靶标ddPCR检测拷贝数RBG1,000nRBG488(pAAV.CBA.PI.eGFP.RBG)1,000eGFP50210,000nRBG6,920b10,000nRBG6,313b1,000nRBG677bBGH1,000CMV21,096b(pAAV.CMV.eGFP.BGH)1,000eGFP1,014b1,000eGFP1,063b10,000eGFP11,373ba采用分光光度计检测换算b采用优化后的PCR扩增程序 ddPCR对PCR扩增效率有较高耐受性使用三种PCR方法检测及比较一系列包含单链和自身互补基因组的AAV载体。对于各种血清型的单链AAV载体，优化qPCR和ddPCR基因组滴度测定显示比标准qPCR测定增加1.5到3.8倍。对于单链载体，ddPCR与优化的qPCR滴度的比率始终接近1。对于自互补载体，优化的qPCR和ddPCR检测的滴度分别比标准qPCR检测高4倍和8倍。此外，对于测试的6种scAAV载体，ddPCR检测的滴度比优化的qPCR检测高1.5到2.5倍。在ssAAV载体的情况下，优化qPCR和ddPCR分析观察到的更高滴度很可能是由于稀释缓冲液中包含表面活性剂。然而，对于scAAV载体，与优化的qPCR检测相比，获得的更高ddPCR检测滴度似乎对这种基因组类型具有特异性，反映了ddPCR对低效率PCR扩增具有更好的耐受性。Fagone2011年报告说，与其他类型的引物探针组合相比，距离scAAV基因组发夹ITR小于1000bp的引物探针往往会低估基因组滴度，说明靠近发夹位置的引物探针表现出更大的抑制作用。假定抑制效应是由于发夹基因组的快速退火导致引物探针不能与扩增区域结合，那么这种抑制效应在扩增子成为主要模板之前的早期循环中是最明显的，足以使扩增曲线向右移动并导致循环阈值的延迟。与qPCR相比，ddPCR对PCR扩增效率的依赖性较小，因为不需要达到循环阈值。为了评估scAAV基因组空间抑制效应是否对ddPCR和优化qPCR有不同的影响，两种测定方法都使用了距scAAV发夹ITR不同距离的引物-探针组合。与靶向发夹ITR-远端序列引物探针相比，靶向CMV和TBG启动子（分别距5'ITR290和444bp）的引物探针组，无论使用ddPCR或者优化的qPCR，检测的滴度低约2倍。相反，对于ssAAV基因组，在ddPCR或优化的qPCR分析中，使用CMV或TBG引物和探针与远侧靶向引物-探针没有差异。以上结果表明：接近发夹结构而不是引物探针组内在特性导致检测结果偏低，无论在哪种检测中，都要避免使用靠近发夹的引物探针。尽管PCR靶标的位置影响了scAAV载体基因组滴度检测，但ddPCR检测结果依然高于优化的qPCR，表明ddPCR不需要达到循环阈值的特点仍然比qPCR有优势。数字PCR的重复性和精密度更优秀数字PCR广为人知的优势是在定量基因拷贝数方面的高度精确性。尽管大量文献报道ddPCR比qPCR精度更高，但我们想确认ddPCR在AAV基因组滴定方面是否有优势。采用优化的qPCR和ddPCR，使用不同的引物探针组合对多个AAV样本重复检测3次，采用变异系数来评价每个方法学的精密度。对于优化的qPCR分析，nRBG和BGH引物探针组合的CV值中位数分别为5.35%和4.37%，CV值分布范围的上限分别为33.2%和8.7%。对于ddPCR分析，三个引物探针组合的CV值中位数分别为2%或更低，检测结果的分布范围更集中。作为临床开发计划的一部分，既往使用ssAAV载体（批次WL057CS）对优化的qPCR程序进行过正式的批间验证研究。由2名操作员对6个样本分别进行6次重复，变异系数的分布范围在11.5%~16.5%（均值，13.7%），这个结果与使用标准qPCR对阳性对照载体重复检测13次的CV（16.5%）相似。采用ddPCR进行相同的评价，获得的平均滴度与优化qPCR测定法获得的平均滴度非常相近，但变异系数平均值为5.0%（分布范围，2.7-7.92%），比优化的qPCR程序几乎低了3倍。结果表明ddPCR基因组滴度测定与qPCR测定相比，在测定内和测定间水平上都有更高的精度。 批内精密度评价重复次数检测靶标CV%中位数CV%分布范围最优qPCR36nRBG5.352.11–33.2317BGH4.371.95–8.72ddPCR4nRBG2.210.60–2.847BGH1.650.57–2.1913eGFP1.811.22–5.01批间精密度评价重复次数检测靶标稀释倍数均值(GC/mL)标准差CV%标准qPCR13RBG1×1.23E132.03E1216.5最优qPCR6RBG1×3.06E134.44E1214.56RBG100×2.75E133.53E1212.86RBG1000×2.77E134.57E1216.56TBG1×3.93E134.53E1211.56TBG100×3.52E134.52E1212.86TBG1000×3.74E135.31E1214.2ddPCR 4RBG1×3.01E131.64E125.455RBG10×2.97E131.01E123.385RBG100×2.69E138.40E113.125RBG1000×2.67E132.12E127.924TBG1×3.84E131.95E125.085TBG10×3.85E132.81E127.295TBG100×3.46E139.30E112.695TBG1000×3.59E131.77E124.93 数字PCR对复杂抑制物比qPCR至少好10倍在我们的研究过程中获得的数据表明：在载体稀释过程中使用表面活性剂以及用蛋白酶K处理衣壳可以显著提高qPCR滴度，然而，由于二级结构的存在、scAAV载体基因组自身互补、反应体系中的抑制物会抑制PCR扩增效率进而影响循环阈值。使用数字PCR，只要扩增后的微滴荧光信号超过阴性微滴的荧光信号，就可以判读为阳性微滴，因此，纯度较差样本中PCR抑制剂对ddPCR的影响不像在qPCR中那么严重。我们采用AAV基因组滴度测定验证了这个猜想，将未纯化的粗提物样品进行梯度稀释，并在稀释液中掺入已知量的纯化AAV载体，然后使用ddPCR和优化的qPCR对样品进行检测。在稀释1000倍的样本中，ddPCR检出了近100%的掺入AAV载体。相比之下，qPCR在10,000倍稀释的样品中检出了80%的掺入AAV载体。因此，我们的初步数据表明，ddPCR对细胞大分子和基因组复杂抑制物的抵抗能力至少比qPCR优秀10倍，该方法可用于评估早期生产阶段未纯化载体样品中的AAV拷贝数。 抑制物对ddPCR及qPCR定量结果的影响log10稀释0−1−2−3−4−5−6−7干扰物质拷贝数1.5E101.5E91.5E81.5E71.5E61.5E51.5E41.5E3掺入拷贝数3.5E33.5E33.5E33.5E33.5E33.5E33.5E33.5E3ddPCR回收率%103110112116118111qPCR回收率%003.64.378116115111 AAV参考物质的标定研究目前qPCR之所以被认为是AAV载体基因组滴定的最佳方法，是因为与更早期的基因组分析方法相比，它提供了更好的特异性和精确度。rAAV2参考标准物质(AAV2RSM)由多个独立实验室使用通用qPCR方法协同标定。在这项研究中，实验室间检测结果的变异系数非常大（CV，77.7%），甚至在其中一个实验室内，也观察到变异系数高达60%。有趣的是，当通过ddPCR对AAV2RSM进行标定时，获得的滴度（3.6×10¹³GC/mL）与报告值（3.28×1013GC/mL）相似，表明尽管检测结果的变异度很大，AAV2RSM检测结果的平均值接近真实值。除了各实验室在qPCR操作上的差异，另一个误差可能源自于各实验室采用了不用的基于qPCR的AAV载体基因组滴定方案。从我们的研究数据可以看出即使对qPCR方法学进行非常小的修改，例如在没有表面活性剂或蛋白酶K处理的情况下进行检测，也会导致检测结果的巨大差异。对于scAAV载体，qPCR目标区域的选择不当会进一步影响检测结果。因此，总的来说，需要更稳定、更精确的方法来定量AAV载体基因组滴度。自身互补AAV（scAAV）载体的定量scAAV载体基因组定量，Fagone及其同事2011年引入了两种新的检测方法，一种是在qPCR之前用限制性内切核酸酶切割末端发夹（称为ED-PCR），另一种是基于天然琼脂糖凝胶分析，。尽管这两种方法都能够克服scAAV基因组对PCR的抑制作用，但它们都存在局限性。分析间变异被认为是ED-PCR的一个问题，如果不同的载体基因组需要不同的限制性内切酶，这种变异可能会显著增加。另一些更古老的AAV基因组定量方法，如DNA斑点杂交和最近的Southern印迹，虽然可以克服基因组自身退火的问题，但特操作步骤非常复杂，容易引入偏差，不太可能被用作生产环境中的检验放行。通过紫外分光光度法直接定量AAV载体基因组是另一种检测方法，但仅限于高纯度制剂。相比之下，ddPCR代表了一种高度精确的AAV载体基因组定量方法，不会受到低效扩增或标准曲线问题的过度影响。该技术为所有AAV载体类型提供了一种通用的检测方法，没有qPCR的一些限制，也不需要针对scAAV载体开发特定的方法。尽管不能完全消除scAAV载体末端发夹结构对引物探针造成的抑制，但与最优的qPCR检测结果相比，ddPCR仍然显著提升了检测结果，提高了批内和批间精度，非常适合此类载体的定量。这非常符合临床及商业化载体生产中对高度的重现性和精密度的需求，小的滴度差异可以转化为更少次数的规模量产并节省更多成本。ddPCR检测的高精度可以减少重复次数，从而在单个96孔板上进行多样本、多引物探针组合分析。不需要质粒标准曲线免除了制备过程中涉及的时间、费用和误差。ddPCR有效地降低了引物探针的扩增效率阈值，并允许对不同扩增效率的检测结果直接进行比较。在分析纯度不够的样品，或在临床前/临床研究中分析AAV载体基因组的生物分布时，ddPCR在灵敏度、精密度和对抑制物的耐受方面具有实质性优势。ddPCR检测体系的验证和确认要将基于ddPCR的基因组分析发展为符合cGMP/GLP要求的方法，需要使用经过验证的终产物对ddPCR方法学进一步验证，例如准确度、精密度、定量限和线性范围等。该验证批次将包含在每次检测中，并作为参考点以确认正确的样品制备和检测性能。此外，还需要对ddPCR仪器本身进行确认和验证，并且执行对仪器的安装和操作确认(IQ/OQ)程序。但执行了这些验证程序后，ddPCR基因组滴度测定会非常适合用于临床级AAV载体的生产。 参考文献：· Allay J.A., Sleep S., Long S., et al. (2011). Good manufacturing practice production of self-complementary serotype 8 adeno-associated viral vector for a hemophilia B clinical trial. Hum. Gene Ther. 22, 595–604 · Bainbridge J.W., Smith A.J., Barker S.S., et al. (2008). Effect of gene therapy on visual function in Leber's congenital amaurosis. N. Engl. J. Med. 358, 2231–2239 · Bennicelli J., Wright J.F., Komaromy A., et al. (2008). Reversal of blindness in animal models of Leber congenital amaurosis using optimized AAV2-mediated gene transfer. Mol. Ther. 16, 458–465 · Christine C.W., Starr P.A., Larson P.S., et al. (2009). Safety and tolerability of putaminal AADC gene therapy for Parkinson disease. Neurology 73, 1662–1669· Clark K.R., Liu X., McGrath J.P., and Johnson P.R. (1999). Highly purified recombinant adeno-associated virus vectors are biologically active and free of detectable helper and wild-type viruses. Hum. Gene Ther. 10, 1031–1039 · Dolgin E. (2012). Gene therapies advance, but some see manufacturing challenges. Nat. Med. 18, 1718–1719 · Eberling J.L., Jagust W.J., Christine C.W., et al. (2008). Results from a phase I safety trial of hAADC gene therapy for Parkinson disease. Neurology 70, 1980–1983· Fagone P., Wright J.F., Nathwani A.C., et al. (2011). Systemic errors in quantitative polymerase chain reaction titration of self-complementary adeno-associated viral vectors and improved alternative methods. Hum. Gene Ther. Methods 23, 1–7· Hauswirth W.W., Aleman T.S., Kaushal S., et al. (2008). Treatment of leber congenital amaurosis due to RPE65 mutations by ocular subretinal injection of adeno-associated virus gene vector: Short-term results of a phase I trial. Hum. Gene Ther. 19, 979–990· Hindson B.J., Ness K.D., Masquelier D.A., et al. (2011). High-throughput droplet digital PCR system for absolute quantitation of DNA copy number. Anal. Chem. 83, 8604–8610  原文链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3991984/

            近日，中国计量科学研究院（ NIM, National Institute of Metrology, China)下发了《数字PCR测量能力计量比对》成绩单，永诺医疗的MicroDrop-100 数字PCR系统在该项行业比对中取得优异成绩！数字PCR测量能力计量比对-新冠项目证书本次计量比对活动分为两个测量项目， 分别为“ 新型冠状病毒核酸浓度测量” 和“ 转基因质粒核酸拷贝数比值测量”， 永诺医疗在两个测量项目中均取得满意结果， 标志着M i c r o D r o p - 1 0 0 数字P C R 系统获得国家权威机构的认可。数字PCR测量能力计量比对-质粒项目证书       计量比对作为保障量值准确一致、支撑计量事中事后监管和提升计量技术机构能力的有效手段， 在计量工作中具有重要作用。根据《市场监管总局关于组织实施2 0 1 9 年国家计量比对项目的通知》（ 国市监计量（ 2 0 1 9 ） 1 5 1 号） 的内容， 为进一步强化对标准物质研制单位的计量监管， 中国计量科学研究院作为组织单位和主导实验室开展了“ 数字P C R 测量能力计量比对” （ 2 0 1 9 - B - 0 4 ） 。国内外主要数字P C R 厂家、开展核酸测量检测的技术机构和核酸标准物质研制单位、取得过核酸国家有证标准物质的研制单位均有参加该项比对。关于我们广州永诺生物科技有限公司成立于2010年，总部位于广州国际生物岛，是一家专注于医学科学技术开发与服务、分子诊断产品研发与生产的高新技术企业。公司目前占地面积近6000㎡，其中硕、博士以上学历员工占比近40%。公司依托先进的技术力量以及优秀的人才储备，在科研服务、医学检测和数字PCR产品三大业务上保持领先的竞争优势。 公司成立至今申请国家专利40多项，授权21项，计算机软件著作权8项，广东省高新技术产品证书8项，省、市等科技计划项目10多项，2018年入围了大湾区生物科技创新企业50强，获得国家高新技术企业，广州市科技创新小巨人企业、广东省高新技术企业培育库入库企业、广州市企业研发机构等荣誉称号。永诺医疗是永诺生物的全资子公司，以“中国智造”为己任，专注于数字PCR仪器与应用试剂的研发，并于2017年成功研发了国内首款拥有完全自主知识产权的MicroDrop®系列微滴式数字PCR系统并投入生产。

7月8日上午，根据国家卫生健康委新型冠状病毒肺炎诊疗方案的出院标准，经专家评估，又有6名确诊患者从广州医科大学附属市八医院（以下简称“市八医院”）出院。这意味着，广州本轮本地疫情的在院感染者实现清零！（消息来源：“广州日报”公众号https://mp.weixin.qq.com/s/WwCHa7HcGZ18T6lWRcV5kA） 面对疫情的正面迎击，从接到任务开始的24小时内，永诺公司全民皆兵，每个永诺人都为抗疫工作出自己的一份力。永诺医检所在最短1小时内物资人员到位，及时完成相关指标人员的采集标本运输、检测及上报，累计服务核酸检测点134个，派出志愿人员255人次，完成核酸检测超46万人份。“我们”不穿白大褂，“我们”也不开急救车，但“我们”无惧新冠，广州需要“我们”，永诺随时出发！视频：最美风景线，永诺抗疫战士坚守一线！ _腾讯视频 (qq.com)广州永诺医检所是广州永诺生物科技有限公司旗下全资子公司，是由国家卫健委审批的第三方临床检验机构，检验所严格按照ISO17025和ISO15189构建实验室质量管理和物流体系，核心人员具有多年的医学检验学从业经验，专业技术人员均获得相应的技术资质认证，实验室拥有测序仪、数字PCR仪、QPCR仪等先进的检验仪器设备。

近日，国家卫生健康委临床检验中心（NCCL，National Center for Clinical Laboratories)下发了《2021年肿瘤游离DNA基因突变高通量测序检测室间质量评价》成绩单，广州永诺医学检验所满分通过该项质评活动！本次质评活动共检测5个样本，从样本接收处理、核酸提取结果、基因突变的检测结果、结果有效性、生信分析结果、检测报告的信息与格式六个方面对实验室检测的全过程进行了评价，广州永诺医学检验所满分通过本次测评，标志着广州永诺医学检验所的检测能力及质量管理体系获得国家权威机构的认可。关于肿瘤游离DNA基因突变高通量测序检测肿瘤游离DNA（ctDNA）是肿瘤细胞释放到血液循环系统中的DNA。ctDNA检测与常规传统侵入式组织活检相比具有非侵入性、患者依从性好、异质性低、可反复取材等优势。并且ctDNA检测应用于非小细胞肺癌EGFR T790M靶向治疗伴随诊断已获NMPA批准上市。ctDNA基因突变检测对肿瘤靶向治疗、早期治疗应答评估和耐药监测的实时评估等都具有一定的临床应用价值。由于组织样本的局限性，对于组织样本不可获得者和晚期肿瘤患者，临床上逐渐开始使用患者血浆中的游离DNA进行肿瘤基因突变检测。广州永诺医学检验所开展的ctDNA检测主要包括基于NGS的常见肿瘤基因检测（非小细胞肺癌、结直肠癌、乳腺癌、胃肠道间质瘤等），适用于泛癌种的实体瘤精准用药深度基因检测。其中，常见肿瘤基因检测基于双端UMI技术，测序深度高达30000X，可准确检测频率低至千分之一的低频突变。此外，基于公司自主研发的MicroDrop™微滴式数字PCR系统，同时开展EGFR、KRAS、BRAF等肿瘤常见热点突变的单基因或多基因检测，满足临床和患者多元化、个体化的检测需求。关于永诺医检所广州永诺医学检验所是广州永诺生物科技有限公司下设的第三方独立医学检验机构，以高通量测序技术及医学生物信息学为核心，专注于精准医疗基因检测服务。检验所严格按照医学检验实验室标准进行建设布局，拥有完善的质量管理体系和成熟的检测服务体系，并于2019年2月4日获得广东省临检中心颁发的《临床基因扩增检验实验室技术审核合格证书》。2020年3月实验室通过广东省二级病原微生物实验室备案并获得广州市新冠病毒核酸检测资质，成为广州市指定新冠病毒核酸检测机构。医检所现已构建高规格疾病标本库和数据库，开发具有自主知识产权的基因捕获技术和疾病大数据挖掘算法，精心研发出了国内领先的疾病早期诊断、个体化用药基因检测和遗传性疾病筛查等系列产品。

在7月1日中国100周年建党节来临前，我们迎来广州抗疫最好消息！从广州市疾病预防控制中心获悉，2021年6月30日0时至24时，广州市无新增境内确诊病例和境内无症状感染者。广东省5月21日以来本土疫情累计救治12例危重型、7例重型患者，无一例死亡，截至6月30日，重型、危重型患者全部清零，临床治疗压力大大缓解。（源：广州市疾病预防控制心 http://www.gzcdc.org.cn/news/view/5368/）从2021年5月31号接到紧急通知开始，广州永诺医学检验所和达安临床检验中心、金域医学检验中心等诸多医疗机构作为第三方医疗机构共同参与了本次疫情防疫工作。从接到任务开始的24小时内，永诺全公司都动员起来，上到公司高层，下到技术销售内务员工，也冲到前线，助力抗疫工作。永诺医检所在最短1小时内物资人员到位，及时完成相关指标人员的采集标本运输、检测及上报，累计服务核酸检测点134个，派出志愿人员255人次，完成核酸检测超46万人份。面对6月份龙舟水的袭击，也没有人退缩，这就是永诺精神！麻奢村委会核酸采样检测点和顺医院（南海区第三人民医院北院）核酸检测采样点和顺医院（南海区第三人民医院北院）核酸检测采样点永诺医检所24小时核酸检测抗疫战士佛山核酸检测采样面对疫情的正面迎击，无论是前线采样工作人员，还是后台的检测人员都无所无惧，为广州抗疫尽自己的一份力量，相信每一次的任务我们必定一样完美完成！“我们”不穿白大褂，“我们”也不开急救车，但“我们”无惧新冠，广州需要“我们”，永诺随时出发！充气移动式核酸检测站，它来了！近日，永诺最新引入充气移动式核酸检测站并正式在广州市花都区狮岭镇阳光路41号（宝峰社区卫生服务中心）落地安装、该工作站不仅能快速帮助市民完成采样，还能更好地保护采样人员的安全。移动式核酸采样工作站麻雀虽小但五脏俱全 工作站内配置齐全，完全满足核酸采样全流程的严格条件，而且站内的气压比外部高可以有效阻止外部气流进入，为医护人员提供更好的保障。一起来看看吧！关于永诺广州永诺生物科技有限公司成立于2010年，总部位于广州国际生物岛，是一家专注于医学科学技术开发与服务、分子诊断产品研发与生产的高新技术企业。公司目前占地面积近6000㎡，其中硕、博士以上学历员工占比近40%。公司依托先进的技术力量以及优秀的人才储备，在科研服务、医学检测和数字PCR产品三大业务上保持领先的竞争优势。 公司成立至今申请国家专利40多项，授权21项，计算机软件著作权8项，广东省高新技术产品证书8项，省、市等科技计划项目10多项，2018年入围了大湾区生物科技创新企业50强，获得国家高新技术企业，广州市科技创新小巨人企业、广东省高新技术企业培育库入库企业、广州市企业研发机构等荣誉称号。广州永诺医检所是广州永诺生物科技有限公司旗下全资子公司，是由国家卫健委审批的第三方临床检验机构，检验所严格按照ISO17025和ISO15189构建实验室质量管理和物流体系，核心人员具有多年的医学检验学从业经验，专业技术人员均获得相应的技术资质认证，实验室拥有测序仪、数字PCR仪、QPCR仪等先进的检验仪器设备。

永诺生物将在2021年5月18日“第四届基因测序网络会议”上推出最新型号MicroDrop-20微滴式数字PCR系统。在本次大会上，您可了解到最新产品优势，及其应用解决方案等，同时将请专家全面介绍数字PCR技术在临床中的应用。 演讲嘉宾吕晓明南方医科大学肿瘤学博士南方医科大学/香港城市大学博士后，香江学者南方医科大学第三附属医院副研究员，硕士生导师作为课题负责人承担国家自然科学基金青年项目1项，广东省自然科学基金3项，广州市产学研协同创新重大专项，中国博士后基金面上项目，南方医科大学科研启动计划各1项。作为主要参与者参与国家基金9项。共发表SCI论文30余篇，其中通讯作者及第一作者（含并列）在PLOS Pathogens，Molecular cancer, Nature communications, Oncogene, Molecular Therapy - Nucleic Acids , Biomaterials 等国际知名期刊发表论文10余篇,被引用频次820次，H因子16。Emerging Infectious Diseases, Genomics, OncoTargets and Therapy，Oncology letters等杂志审稿人。发布会时间会议形式：线上会议日期：2021年5月18日(周二)时间：上午09:30-10:30长按下方二维码，进入会议现场 什么是数字PCR?微滴式数字PCR（Droplet digital PCR, ddPCR)是一种核酸检测和绝对定量的新方法。同传统PCR以及QPCR相比，微滴式数字PCR拥有绝对定量，无需标准曲线；以及更高的检测灵敏度，基因突变检测灵敏度可高达十万分之一，基因表达绝对定量检测灵敏度高至单拷贝，基因拷贝数变异检测灵敏度高至0.1倍；和更好的数据重复性，更高的数据精密度，更高的抑制物的耐受度，以及绝对定量等优势，对于相对复杂的临床样本都能够很好的应用场景，如肿瘤液体活检，肿瘤早筛或NIPT等靶标核酸分子含量很低的情况，凭借微滴式数字PCR技术特点，能够有效对靶标分子进行精准检测，从而及时为临床提供预防或治疗方案。 新品优势！永诺MicroDrop-20微滴式数字PCR系统：1.     灵敏度：基因突变0.1%；绝对定量CV。2.     2mins生成两万个微滴，快速高效，生成稳定，应用广泛，性价比高。3.     微滴生成快速高效，一张芯片可同时处理8个样本，一次微滴生成耗时2mins。4.         检测通量高，约2mins检测一个样本，可同时检测高达96个样本，样本信息支持灵活设定。 创新My点！MicroDrop系列产品：1.   型号MicroDrop-100可一次生成10万微滴，高端精准，已获批医疗器械注册证，适合多重数字PCR的应用。最新推出型号MicroDrop-20，可一次生成2万微滴，检测快速，质量保证且性价比高，适合大部分数字PCR应用场景及进口替代。2.   微滴生成采用油包水乳化微滴技术，微滴生成芯片为高精度微流控芯片设计，三维微纳防污染结构，生成微滴效果稳定高效。3.   专业团队研发验证的微滴生成配方，微滴均匀稳定，不易破裂。4.   全封闭防污染，一键式自动化操作，配套QuantDrop软件界面中英可选，人性化设置，多种分析工具供用户选择，全自动分析，直接显示分析结果，采用最新工业数据标准格式fcs3.1，支持输出JPG/WORD格式报告。5.   超过40种配套基因检测试剂盒，拥有强大的研发团队，支持定制开发应用试剂。 关于永诺：广州永诺生物科技有限公司成立于2010年，总部位于广州国际生物岛，是一家专注于医学科学技术开发与服务、分子诊断产品研发与生产的高新技术企业。公司目前占地面积近6000㎡，其中硕、博士以上学历员工占比近40%。公司依托先进的技术力量以及优秀的人才储备，在科研服务、医学检测和数字PCR产品三大业务上保持领先的竞争优势。2017年10月永诺生物旗下全资子公司--永诺医疗成功研发了国内首款拥有完全自主知识产权的微滴式数字PCR系统MicroDrop并投入生产，并已建成符合GMP标准的分子诊断试剂及产品车间3000㎡，联合广东顺德创新设计研究院成立工程技术中心，联合香港中文大学深圳研究院成立研发实验室，累计申请国家发明专利22项，授权13项，目前MicroDrop®数字PCR系统于2020年8月，取得医疗器械注册证。成为国内第一家国家认证的高通量流式微滴数字PCR仪，能广泛应用于科研、医疗、食品安全、出入境检验检疫等领域。

永诺生物将在2021年5月18日“第四届基因测序网络会议”上推出最新型号MicroDrop-20微滴式数字PCR系统。在本次大会上，您可了解到最新产品优势，及其应用解决方案等，同时将请专家全面介绍数字PCR技术在临床中的应用。什么是数字PCR?微滴式数字PCR（Droplet digital PCR, ddPCR)是一种核酸检测和绝对定量的新方法。同传统PCR以及QPCR相比，微滴式数字PCR拥有绝对定量，无需标准曲线；以及更高的检测灵敏度，基因突变检测灵敏度可高达十万分之一，基因表达绝对定量检测灵敏度高至单拷贝，基因拷贝数变异检测灵敏度高至0.1倍；和更好的数据重复性，更高的数据精密度，更高的抑制物的耐受度，以及绝对定量等优势，对于相对复杂的临床样本都能够很好的应用场景，如肿瘤液体活检，肿瘤早筛或NIPT等靶标核酸分子含量很低的情况，凭借微滴式数字PCR技术特点，能够有效对靶标分子进行精准检测，从而及时为临床提供预防或治疗方案。 新品优势！永诺MicroDrop-20微滴式数字PCR系统：1.     灵敏度：基因突变0.1%；绝对定量CV。2.     2mins生成两万个微滴，快速高效，生成稳定，应用广泛，性价比高。3.     微滴生成快速高效，一张芯片可同时处理8个样本，一次微滴生成耗时2mins。4.         检测通量高，约2mins检测一个样本，可同时检测高达96个样本，样本信息支持灵活设定。 创新My点！MicroDrop®系列产品：1.   型号MicroDrop-100可一次生成10万微滴，高端精准，已获批医疗器械注册证，适合多重数字PCR的应用。最新推出型号MicroDrop-20，可一次生成2万微滴，检测快速，质量保证且性价比高，适合大部分数字PCR应用场景及进口替代。2.   微滴生成采用油包水乳化微滴技术，微滴生成芯片为高精度微流控芯片设计，三维微纳防污染结构，生成微滴效果稳定高效。3.   专业团队研发验证的微滴生成配方，微滴均匀稳定，不易破裂。4.   全封闭防污染，一键式自动化操作，配套QuantDrop软件界面中英可选，人性化设置，多种分析工具供用户选择，全自动分析，直接显示分析结果，采用最新工业数据标准格式fcs3.1，支持输出JPG/WORD格式报告。5.   超过40种配套基因检测试剂盒，拥有强大的研发团队，支持定制开发应用试剂。 关于永诺：广州永诺生物科技有限公司成立于2010年，总部位于广州国际生物岛，是一家专注于医学科学技术开发与服务、分子诊断产品研发与生产的高新技术企业。公司目前占地面积近6000㎡，其中硕、博士以上学历员工占比近40%。公司依托先进的技术力量以及优秀的人才储备，在科研服务、医学检测和数字PCR产品三大业务上保持领先的竞争优势。2017年10月永诺生物旗下全资子公司--永诺医疗成功研发了国内首款拥有完全自主知识产权的微滴式数字PCR系统MicroDrop并投入生产，并已建成符合GMP标准的分子诊断试剂及产品车间3000㎡，联合广东顺德创新设计研究院成立工程技术中心，联合香港中文大学深圳研究院成立研发实验室，累计申请国家发明专利22项，授权13项，目前MicroDrop®数字PCR系统于2020年8月，取得医疗器械注册证。成为国内第一家国家认证的高通量流式微滴数字PCR仪，能广泛应用于科研、医疗、食品安全、出入境检验检疫等领域。会议页面链接：https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/geneseq2021

利用多对引物/探针分析比较qRT-PCR和ddPCR两种方法对SARS-COV-2检测Analytical comparisons of SARS-COV-2 detection by qRT-PCR and ddPCR with multiple primer/probe sets发表期刊：Emerging Microbes & Infections 2020 影响因子：6.9作者单位：a State Key Laboratory of Virology, Modern Virology Research Center, College of Life Sciences, Wuhan University, Wuhan, People’s Republic of China;b State Key Laboratory of Virology, Renmin Hospital, Wuhan University, Wuhan, People’s Republic of China;c Department of Infectious Disease, Zhongnan Hospital, Wuhan University, Wuhan, People’s Republic of China;d Frontier Science Center for Immunologyand Metabolism, Wuhan University, Wuhan, People’s Republic of China研究目的通过使用不同的引物探针对比较qRT-PCR和ddPCR两种检测方法对SARS-COV-2的检测情况。研究背景SARS-CoV-2的大流行对临床病原体诊断提出了迫切的要求。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）测定法是检验的金标准，已被广泛用于快速检测SARS-CoV-2感染。但是，qRT-PCR结果不准确的问题日益暴露，qRT-PCR的假阴性报告（FNR）不可避免的，这可能会影响及时诊断，早期治疗，预防传播和评估出院标准。液滴数字PCR（ddPCR）用于SARS-CoV-2核酸检测的补充使用可以最大程度地减少FNR。 研究人群和样本采集本研究中，我们使用健康人和SARS-CoV-2感染患者的鼻咽拭子cDNA，在相同条件严格比较了8种常用的引物/探针组的qRT-PCR和ddPCR的性能。实验结果图1A为RT-PCR检测结果，在健康人样本为阴性对照，其中引物对UCDC-N1、UCDC-N2、CCDC-N  CT值表明有非特异性扩增这样易导致10−4和10−3稀释的低病毒载量的样本检测结果易出现假阳性， 相反，在没有非特异扩增的引物探针对中， UCDC-N3，HKU-，Charité-E和HKU-ORF的检测低载量的病毒样本时，易出现假阴性。并且根据结果来看最灵敏的引物探针对CCDC-ORF在10−4稀释时可以检测到3/10（30％）阳性样品。另外，引物探针对CCDC-ORF在病毒载量低时CT值范围从35.5到39.4，一致性较差，在病毒载量较高时结果一致性较好表明qRT-PCR仍然是检测正常病毒的可靠方法。图B表示使用相同引物/探针组的ddPCR结果，表明ddPCR在低病毒载量样本的检测总体上有所改善。健康样本对照中，尽管显示UCDC-N1和N2有扩增背景但它们仍然可以区分低病毒载量样品（稀释10−4）。此外，虽然UCDC-N3，HKU-N和CCDC-N显示较低的非特异性扩增背景，Charité-E，HKU-ORF和CCDC-ORF没有任何非特异性扩增，但是，所有低病毒载量的样本都可以产生正确的阳性报告。因此，ddPCR可以在病毒载量较低时，可以显着减少检测中的FNR和FPR。图1. 不同引物/探针组的qRT-PCR和ddPCR结果（A）   使用不同引物/探针组进行qRT-PCR的结果。横坐标为稀释倍数（转换为log10），纵坐标为Ct值， ND为阴性CT值≥40。（B）   使用不同引物/探针组的ddPCR结果。横坐标为稀释倍数（转换为log10）纵坐标为拷贝数。ND为阴性0拷贝。对于每个引物探针组，绿色阴影区域为健康人的样本（IgM / IgG阴性），超出该阈值为阳性。 结果讨论结果表明，与qRT-PCR相比，ddPCR方法可显着减少不准确的结果，包括FNR和FPR。同时，由于qRT-PCR这种标准检测方法易出现FNR或FPR，对于SARS-COV-2临床检测的更好选择是核酸测试。结合成像，血清测试以及经验丰富的临床医生的判断，而不是仅仅依靠qRTPCR。总之，qRT-PCR适用于大规模诊断正常病毒载量样本中病毒感染的检测。但是，对灵敏度和精度有特殊要求的定量ddPCR将是更理想的方法。关于我们广州永诺生物科技有限公司成立于2010年，总部位于广州国际生物岛，是一家专注于医学科学技术开发与服务、分子诊断产品研发与生产的高新技术企业。公司目前占地面积近6000㎡，其中硕、博士以上学历员工占比近40%。公司依托先进的技术力量以及优秀的人才储备，在科研服务、医学检测和数字PCR产品三大业务上保持领先的竞争优势。公司成立至今申请国家专利40多项，授权21项，计算机软件著作权8项，广东省高新技术产品证书8项，省、市等科技计划项目10多项，2018年入围了大湾区生物科技创新企业50强，获得国家高新技术企业，广州市科技创新小巨人企业、广东省高新技术企业培育库入库企业、广州市企业研发机构等荣誉称号。永诺医疗是永诺生物的全资子公司，以“中国智造”为己任，专注于数字PCR仪器与应用试剂的研发，并于2017年成功研发了国内首款拥有完全自主知识产权的MicroDrop®系列微滴式数字PCR系统并投入生产。

银鲳鱼的种属鉴定与定量研究Species identification and quantfication of silver pomfret using the droplet digital PCR assay期刊：Food Chemistry 影响因子：5.399通讯作者单位：Institute of Food Safety and Nutrition, Jinan University, Guangzhou 510632, Guangdong, China.College of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510641, Guangdong, China【背景】银鲳鱼（Pampus argenteus）是一种经济价值高的物种，中国有巨大的市场需求。近年来，由于高强度的捕捞，银鲳鱼的数量有所下降，为了维持利润，一些制造商已经采取了用更便宜的鱼代替银鲳鱼，进行食品的造假、掺假。【目的】开发一种准确的方法来识别银鲳鱼食品，减少食品造假、掺假的非法行为。【实验材料】银鲳鱼和金鲳鱼， 两种鱼按照比例分别为0.1%、0.5%、1%、10% 和50% 进行混合， 即混合物中含有0.1g银鲳鱼/99.9g金鲳鱼、0.5g银鲳鱼/99.5g金鲳鱼、1g银鲳鱼/99g金鲳鱼、10g银鲳鱼/90g金鲳鱼，还有50克银鲳鱼/50克金鲳鱼。【实验设计】①筛选ddPCR引物和探针；②特异性测试；③引物和探针之间浓度比筛选；④熔融温度筛选；⑤PCR循环数筛选；⑥qPCR对比测试。 1.筛选ddPCR引物和探针CY-1 细胞色素氧化酶Ⅰ亚基（COI） CY-2 细胞色素B（cytb）CY-3 16srrna对三组引探进行测试，CY-2、CY-3无扩增产物，故本实验采用CY-1组引探。2.特异性测试银鲳鱼液滴数字PCR检测的特异性检验。{ 样品说明如下： PC， 阳性对照（ 银鲳鱼）；NC， 阴性对照（ 无菌蒸馏水）；1.卵状细鳞鲷；2.无节圆鳃鲷；3.点状圆鳃鲷；4.圆头鲷；5.中国对虾；6.灰鲷。3.引物和探针之间浓度比筛选不同的引物与探针浓度进行实验对比，最终选取了300：200、300：300、400：200三种浓度比进行下一步测试。4.熔融温度筛选对实验③的三种不同浓度的探针进行TM筛选，最终选定56℃、57℃、58.2℃三个温度来进行下一步测试。5.PCR循环数筛选对实验④的三个温度进行循环数筛选。九种组合的银鲳鱼液滴数字PCR反应结果的正交设计，最终确认每个引物400nmol/l，水解探针200nmol/l，PCR扩增程序：95°C10 分 钟 ；然后50次循环94°C 30s ，50 ℃1min，98℃10min。6. qPCR对比测试结果qPCR的检出限约为313copies，而ddPCR其中一些LOD数值范围为1至5copies。【总结】①用ddPCR和qPCR系统检测了银柚和金柚的不同肌肉混合物和DNA混合物，并对结果进行了比较，发现两种方法检测结果是高度一致的。在不需要制定标准曲线的情况下，ddPCR的检测结果能精确定量。②由于缺乏标准物质，qPCR 难以对食品掺假进行定量，所以进行绝对定量的ddPCR是在这方面具有一定的优势。③ddPCR的精准度比qPCR高。【结论】ddPCR与qPCR各有优劣，在效率方面，qPCR的效率比ddPCR高，但在精确性方面，ddPCR系统具有优异的灵敏性，对样本能进行准确的定量，适合执法机构对食品进行精确检测。目前还没有准确和有效的方法来识别鱼类，使用ddPCR去进行检测食品是可行的，该方法可以成为执法机构和渔业相关机构的宝贵工具，并解决食品掺假问题。关于我们广州永诺生物科技有限公司成立于2010年，总部位于广州国际生物岛，是一家专注于医学科学技术开发与服务、分子诊断产品研发与生产的高新技术企业。公司目前占地面积近6000㎡，其中硕、博士以上学历员工占比近40%。公司依托先进的技术力量以及优秀的人才储备，在科研服务、医学检测和数字PCR产品三大业务上保持领先的竞争优势。公司成立至今申请国家专利40多项，授权21项，计算机软件著作权8项，广东省高新技术产品证书8项，省、市等科技计划项目10多项，2018年入围了大湾区生物科技创新企业50强，获得国家高新技术企业，广州市科技创新小巨人企业、广东省高新技术企业培育库入库企业、广州市企业研发机构等荣誉称号。永诺医疗是永诺生物的全资子公司，以“中国智造”为己任，专注于数字PCR仪器与应用试剂的研发，并于2017年成功研发了国内首款拥有完全自主知识产权的MicroDrop®系列微滴式数字PCR系统并投入生产。

永诺线上讲座|邀您一起探讨数字PCR在医检所的应用 ！演讲日期：2021年4月29日（周四）演讲时间：下午20:30演讲内容：1，微滴式数字PCR在医检所的应用演讲老师：罗伟全（华银医学研发经理）演讲日期：4月29日周四演讲时间：晚上20:302，多重PCR+NGS技术介绍演讲老师：黎新年（永诺医检所）演讲日期：4月29日周四演讲时间：晚上21:10永诺与您，不见不散~关于我们广州永诺生物科技有限公司成立于2010年，总部位于广州国际生物岛，是一家专注于医学科学技术开发与服务、分子诊断产品研发与生产的高新技术企业。公司目前占地面积近6000㎡，其中硕、博士以上学历员工占比近40%。公司依托先进的技术力量以及优秀的人才储备，在科研服务、医学检测和数字PCR产品三大业务上保持领先的竞争优势。 公司成立至今申请国家专利40多项，授权21项，计算机软件著作权8项，广东省高新技术产品证书8项，省、市等科技计划项目10多项，2018年入围了大湾区生物科技创新企业50强，获得国家高新技术企业，广州市科技创新小巨人企业、广东省高新技术企业培育库入库企业、广州市企业研发机构等荣誉称号。永诺医疗是永诺生物的全资子公司，以“中国智造”为己任，专注于数字PCR仪器与应用试剂的研发，并于2017年成功研发了国内首款拥有完全自主知识产权的MicroDrop®系列微滴式数字PCR系统并投入生产。

第84届中国国际医疗器械（春季）博览会(CMEF2021)将于2021年5月13-16日在上海国家会展中心举办。届时，永诺将携自主研发生产的MicroDrop®系列微滴式数字PCR系统亮相本次博览会（2.1馆R59号展位）。同时推出“MicroDrop-20微滴式数字PCR系统”新品预告，敬请期待！数字PCR作为第三代PCR技术，拥有超高灵敏度、无需依赖传统荧光定量PCR的标准曲线即可实现核酸的绝对定量、数据可靠等优点，可以精准、快速检出基因突变。永诺MicroDrop®数字PCR拥有完全自主知识产权，平台拥有从仪器、芯片、试剂、耗材、软件全系统研发及产业化生产，其中高精度微滴生成芯片的设计，拥有三维微纳防污结构，更为检测精确度提高一个等级。截止目前，永诺MicroDrop®数字PCR平台，已开发新冠，肺癌、结直肠、白血病等领域伴随诊断系列试的剂盒共计有40多个，并支持定制开发应用试剂。广泛应用于医院、科研、工业、政府、疾控、海关等各个领域。产品信息● 无需依赖传统荧光定量PCR的标准曲线即可实现核酸的绝对定量。● 全封闭防污染设计，一键式自动化操作。● 微滴生成采用油包水乳化微滴技术，在微管道中利用气压驱动，2mins生成数万个微滴，高效高产，支持多重数字PCR的开发。● 微滴生成芯片为高精度微流控芯片设计，三维微纳防污染结构，一张芯片可同时处理8个样本。● 微滴检测使用双通道荧光，支持EvaGreen染料法及探针法。● 检测通量高，可一次检测高达96个样本，支持灵活设定。● 全中文分析软件，人性化界面设置，多种分析工具供用户选择。永诺展位引导

2020年9月19日，永诺在广州国际生物岛举办的“MicroDrop®微滴式数字PCR系统”代理商签售大会”获得圆满成功。感谢各位代理商在这风雨交加的天气里从全国各地赶来广州参加这次会议，相信永诺会在各位代理商的支持下会越做越好！现场快闪小视频现场回顾 ·现场签到现场演讲（永诺副总经理：马坤）演讲内容：永诺企业介绍（永诺医疗产品负责人：许少飞）演讲内容：MicroDrop®微滴式数字PCR系统产品介绍（永诺医疗销售总监：王墨）演讲内容：代理商政策介绍（永诺市场总监：麦云珮）现场主持人授权签约仪式北京百赛盛科技有限公司成都正明达科技有限公司重庆安斯泰科技有限公司浚和（上海）仪器有限公司上海昨非生物科技有限公司四川德裕昌贸易有限公司廷禄（北京）科技有限公司签约代理商大合照全场大合照想回顾永诺919代理商大会的照片，请长按点击左边二维码，即可观看~数字PCR基本原理微滴式数字PCR主要是通过对PCR反应体系进行液相的有限稀释——将一个体系分割为数万个以上皮升级的微滴，每个微滴即一个独立的反应单元，每个反应单元所含的DNA模板分子个数符合泊松分布数学模型，最后通过测定每个反应单元的荧光信号并结合泊松分布计算出测定样本的绝对拷贝数。数字PCR特点??  绝对定量，不依赖Ct值，无需标准曲线。??  超高灵敏度，适用于稀有序列及稀有突变的检测。??  精准的定量结果和极佳的重复性。??  适用复杂样品检测，不易受PCR抑制物影响。??  兼容染料法和探针法，同时满足科学研究和临床检测要求。数字PCR基本原理MicroDrop招商热线！联系我们招商联系人：（微信同号）北区-北京/陕西/甘肃/宁夏/青海-邢经理 13910221370北区-黑龙江/吉林/辽宁/内蒙古/新疆-盖经理 13661106587北区-河南/河北/山东/山西/天津-王经理 18663711127南区-湖南-梁经理 13829707540南区-福建 -黎经理13725309302南区-广东/广西/海南 （科研+政府+部分医疗）-高经理 a18898536089南区-广东/广西/海南（企业+动物疾控+部分医疗）-黎经理 13725309302南区-湖北/江西/安徽-陈经理 18172862348南区-四川/重庆/云南/贵州/西藏-张经理 15086793523东区-上海/江苏-胡经理 18116466561东区-浙江-郝经理 17328867508市场联系人：（微信同号）全国-麦经理 15918882327邮箱：marketing@forevergen.cn永诺医疗是永诺生物的全资子公司，以“中国智造”为己任，专注于数字PCR仪器与应用试剂的研发，并于2017年成功研发了国内首款拥有完全自主知识产权的MicroDrop®系列微滴式数字PCR系统并投入生产。MicroDrop®数字PCR系统于2020年8月，取得医疗器械注册证。成为国内第一家国家认证的高通量流式微滴数字PCR仪，广泛应用于医院、科研、工业、政府、疾控、海关等各个领域。永诺生物永诺更多精彩，在此发现MicroDrop想了解数字PCR，就赶紧关注吧

2020年8月19日，经广东省药品监督管理局审批，广东永诺医疗科技有限公司MicroDrop-100B生物芯片分析仪 正式获批医疗器械注册证。至此，MicroDrop®微滴式数字PCR系统全套系统均获批医疗器械注册证！仪器名称注册编号MicroDrop-100A微滴生成仪粤禅械备20190099MicroDrop-100B微滴检测仪粤械注准20202221238MicroDrop®数字PCR系统获批医疗器械注册证意味着永诺即将进入临床应用市场，能广泛应用于 科研、医疗、食品安全、出入境 检验检疫等领域。1，无需依赖传统荧光定量PCR的标准曲线即可实现核酸的绝对定量。2，全封闭防污染设计，一键式自动化操作。3，采用主流可靠的解决方案，系统由MicroDrop-100A样本制备仪、MicroDrop-100B生物芯片分 析仪、QuantDrop分析软件组成，并可选配同品牌封膜仪、PCR仪等。4，微滴生成采用油包水乳化微滴技术，在微管道中利用气压驱动，2mins生成高达10万个皮升级的 微滴，高效高产，支持多重数字PCR的开发。5，微滴生成芯片为高精度微流控芯片设计，三维微纳防污染结构，一张芯片可同时处理8个样本。6，微滴检测使用双通道荧光，支持EvaGreen染料法及探针法。7，检测线性范围达到6个数量级，基因突变检测灵敏度高达0.001%。8，检测通量高，可一次检测高达96个样本，支持灵活设定。9，本系统为开放式平台，可使用第三方PCR反应液，支持用户自行开发试剂、产品。医疗器械一类证第一类是指通过常规管理足以保证安全性、有效性的医疗器械。医疗器械二类证第二类是指产品机理已取得国际国内认可，技术成熟，安全性、有效性应当加以控制的医疗器械。医疗器械三类证第三类 是指植入人体，或用于生命支持，或技术结构复杂，对人体可能具有潜在危险，对其安全性、有效性必须严格控制的医疗器械。永诺拥有多达40多种配套基因试剂盒，包或配套的新冠，肿瘤，感染，非洲猪瘟，禽流感等多种数字PCR方法检测试剂盒，欢迎全国有实力的经销商洽谈代理合作！北区-北京/天津/陕西/甘肃/宁夏/青海-邢经理 13910221370北区-黑龙江/吉林/辽宁/内蒙古/新疆-盖经理 13661106587北区-河南/河北/山东/山西-邢经理 13910221370南区-湖南-梁经理 13829707540南区-福建 -黎经理13725309302南区-广东/广西/海南 （科研+政府+部分医疗）-高经理 a18898536089南区-广东/广西/海南（企业+动物疾控+部分医疗）-黎经理 13725309302南区-湖北/江西/安徽-陈经理 18172862348南区-四川/重庆/云南/贵州/西藏-张经理 15086793523东区-上海-胡经理 18116466561东区-江苏-蒋经理 15380818111东区-浙江-郝经理 17328867508市场联系人：（微信同号）全国-麦经理 15918882327邮箱：marketing@forevergen.cn广东永诺医疗科技有限公司是永诺生物旗下的子公司，永诺生物以中国智造为己任，2017年10月永诺 生物成功研发了国内首款拥 有完全自主知识产权的MicroDrop®微滴式数字PCR系统并投入生产，已建 成符合GMP标准的分子诊断试剂及产品车间3000㎡，已联合广 东顺德创新设计研究院成立工程技术中 心，联合香港中文大学深圳研究院成立研发实验室，累计申请国家发明专利22项，授权13项，目 前数字 PCR仪器及配套试剂、数字PCR肿瘤液体活检试剂盒等正在申报医疗器械注册证，能广泛应用于科研、医 疗、食品安全、出入境 检验检疫等领域。

点击蓝字 关注我们北区-北京/天津/陕西/甘肃/宁夏/青海-邢经理 13910221370北区-黑龙江/吉林/辽宁/内蒙古/新疆-盖经理 13661106587北区-河南/河北/山东/山西-邢经理 13910221370南区-湖南-梁经理 13829707540南区-福建 -黎经理13725309302南区-广东/广西/海南 （科研+政府+部分医疗）-高经理 a18898536089南区-广东/广西/海南（企业+动物疾控+部分医疗）-黎经理 13725309302南区-湖北/江西/安徽-陈经理 18172862348南区-四川/重庆/云南/贵州/西藏-张经理 15086793523东区-上海-胡经理 18116466561东区-江苏-蒋经理 15380818111东区-浙江-郝经理 17328867508市场联系人：（微信同号）全国-麦经理 15918882327邮箱：marketing@forevergen.cn广东永诺医疗科技有限公司是永诺生物旗下的子公司，永诺生物以中国智造为己任，2017年10月永诺生物成功研发了国内拥有完全自主知识产权的微滴式数字PCR系统MicroDrop并投入生产，已建成符合GMP标准的分子诊断试剂及产品车间3000㎡，已联合广 东顺德创新设计研究院成立工程技术中心，联合香港中文大学深圳研究院成立研发实验室，累计申请国家发明专利22项，授权13项，目 前数字PCR仪器及配套试剂、数字PCR肿瘤液体活检试剂盒等正在申报医疗器械注册证，能广泛应用于科研、医疗、食品安全、出入境 检验检疫等领域。永诺生物永诺更多精彩，在此发现MicroDrop想了解数字PCR，就赶紧关注吧

近期，湖北省武汉市爆发的新型冠状病毒（2019-nCoV）感染肺炎疫情牵动着每一个中国人的心。目前，确诊感染者数量急速上升，疫情正在向全国各省市迅速蔓延。无数医务人员奔赴前线与病毒作战，但他们并非孤军奋战！作为抗击疫情的幕后支持者，大量科学仪器厂商义无反顾投身疫情防控工作中，加紧研发疫情解决方案，全力支援疫情防控工作。永诺生物，这家以数字PCR技术为核心的分子诊断公司，于2020年1月21日开发出基于数字PCR系统的检测试剂盒。仪器信息网：针对此次新型冠状病毒（2019-nCoV）感染肺炎疫情，贵单位推出了什么样的检测仪器、试剂和解决方案？有何特点？永诺生物：自2019年12月本次2019-nCoV新型冠状病毒肺炎爆发以来，永诺生物医疗团队于2020年1月21日率先开发出基于数字PCR系统的检测试剂盒（见图1）。图1.永诺生物新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测试剂盒（数字PCR法）该试剂盒依托于永诺生物MicroDrop-100数字PCR平台（见图2）进行研发。图2.永诺生物MicroDrop-100微滴式数字PCR系统该试剂盒采用一步法逆转录数字PCR技术，参考2020年1月13日世界卫生组织推荐的检测方法并结合2019-nCoV序列进行引物探针设计，将RNA逆转录及数字PCR扩增整合到一个反应体系，单管双检同时测定2019-nCoV ORF1ab基因及N基因，消除由于病毒变异带来的漏检风险，同时引入了人内源性管家基因RPP30对检测全流程进行监控，确保检测结果的真实可靠。该试剂盒检测阳性企业参考品及阴性企业参考品结果如下（见图3）。图3 .新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测试剂盒（数字PCR法）检测阳性企业参考品及阴性企业参考品与目前基于荧光定量PCR平台的新型冠状病毒检测试剂盒相比，该试剂盒采用了数字PCR平台进行研发。数字PCR技术拥有更高的灵敏度，对痰液中的核酸抑制物有更高的耐受性，因此，对于采用荧光定量PCR筛查Ct值位于37~40的疑似患者，可以采用数字PCR平台进一步复核以辅助诊断。此外，在缺乏新型冠状病毒标准物质的情况下，该试剂盒可以对病毒的拷贝数进行定量，辅助医生进行病程管理。仪器信息网：目前，贵单位开展了哪些具体工作？给疫情防控带来了哪些具体帮助？永诺生物：自2019年12月2019-nCoV新型冠状病毒肺炎发生以来，确诊病例及疑似病例呈现爆发性增长，大大超出了人们的预期。基于核酸的检测手段成为确诊方法，由于荧光定量PCR仪的保有量高，操作简便，是本次抗击新型肺炎的主要检测平台。但随着确诊病例的快速增加，患者的有效诊疗、疗效评估、治愈判定，成为新的挑战，数字PCR具备高灵敏度/抗干扰/绝对定量能力，是对荧光定量PCR平台的重要补充。基于此，永诺生物医疗团队紧急组织研发人员开发出基于数字PCR系统的检测试剂盒。目前，我们正在与新型肺炎定点医院及疾病预防控制中心沟通，以无偿形式提供给临床一线使用，为新型肺炎的诊断及治疗贡献力量。仪器信息网：针对疫情防控，后续还将有哪些工作计划？永诺生物：我们将持续关注新型冠状病毒肺炎疫情进展，针对可能出现的病毒变异即时开发适用的试剂盒。此外，基于数字PCR的技术特点，特别是对新型冠状病毒的定量能力，我们将积极参与到新型肺炎的救治及科学研究，为新型肺炎患者的病程管控及肺炎发病机制的研究做出贡献。

作为第三代PCR技术，数字PCR市场和数字PCR研发可谓是炙手可热。国外巨头纷纷布局这一细分，国内数字PCR厂商相继涌现，且仍不断有新玩家进入，市场非常活跃。  作为从事数字PCR研发制造的主要国内企业之一，广州永诺生物科技有限公司（下称：永诺生物）的产品进展一直受到业界关注。前不久，永诺生物旗下永诺医疗投产的MicroDrop-100微滴式数字PCR系统正式宣告推向市场了。10月26日，永诺生物在其经销商会上高调发布新品数字PCR仪——MicroDrop-100。那么，永诺这款产品到底做得怎么样呢？为了一探究竟，深入了解这家国产数字PCR研发厂商的实力，仪器信息网来到了广州国际生物岛，实地走访、考察了永诺生物总部，并与永诺生物董事长兼总经理赖炳权博士进行了深入的交流。永诺生物总部所在大楼赖炳权 永诺生物董事长兼总经理MicroDrop-100微滴式数字PCR不同于传统PCR，数字PCR能够实现绝对定量，具有更加出色的灵敏度、特异性和精确性。其在基因表达、microRNA研究、基因组拷贝数鉴定、癌症标志物稀有突变检测、致病微生物鉴定、转基因成分鉴定、NGS测序文库精确定量和结果验证等诸多方面具有的广阔应用前景。目前市售数字PCR系统主要分为两大原理线阵营——以赛默飞为代表的芯片式数字PCR和以伯乐、STILLA为代表的微滴式数字PCR。“永诺推出的MicroDrop-100数字PCR采用微滴式原理。”赖炳权介绍到，“微滴式数字PCR能在较低投入下产出大量稳定的微液滴，我认为这条原理线是数字PCR发展的大趋势”。微滴式数字PCR主要是通过对PCR反应体系进行液相的有限稀释——将一个体系分割为数万个以上皮升级的微滴，每个微滴即一个独立的反应单元，每个反应单元所含的DNA模板分子个数符合泊松分布数学模型，最后通过测定每个反应单元的荧光信号并结合泊松分布计算出测定样本的绝对拷贝数。这与荧光定量PCR的相对定量有本质的区别。永诺微滴式数字PCR系统分为样本制备仪和流式微滴检测仪两大部分。MicroDrop-100微滴式数字PCR系统据了解，相比起同类型产品，MicroDrop-100数字PCR主要有以下显著优势：1. 双通道荧光检测，支持EvaGreen染料及探针法，支持多重数字PCR；2. 生成100,000个皮升级的微滴，适合多重数字PCR的开发；3. 6个数量级线性范围，基因突变检测灵敏度为0.01%；4. 全封闭防污染设计，一键式自动化操作；5. 开放式平台，支持用户自行开发试剂、产品。业务遍布华南100余家大型三甲医院当前数字PCR尚处于市场导入期，销量不大，中国市场的保有量大约在300-500台。按照Markets and Markets的分析预测，全球qPCR和dPCR市场的年复合增长率达8.9%，到2022年市场容量将达5.31亿美元，并且预计数字PCR的增长将超过定量PCR。且以PCR技术为核心的分子诊断市场前景巨大，市场规模上百亿。这也是伯乐、赛默飞、罗氏、凯杰、Illumina等跨国公司争相布局的原因所在。令人感到欣喜的是，国内企业在这一品类的竞争并未落人后，先后有新羿、锐讯、领航等多家国内企业推出自主研发的数字PCR产品。虽然数字PCR仪市场前景诱人，但作为高端的科学仪器，其研发门槛高、研发难度大，玩家众多，市场已显得十分拥挤，要想在激烈竞争中获胜绝非易事。那么，永诺生物为何如此坚定地置身其中？有什么优势？   这要从永诺生物的公司定位说起。不同于其他数字PCR仪器研发公司，永诺生物更是一家分子诊断公司。“我2010年从中山大学（博士）毕业后，和团队成立了永诺生物。公司成立之初是做临床服务，包括医学检测和IVD（体外诊断）。”赖炳权介绍道，“临床服务平台是基于高通量测序仪、荧光PCR仪、永诺生物的数字PCR平台等，我们开设了肿瘤、感染类疾病检测，其中肿瘤类检测是我们产品线最全的业务。”永诺生物成立于2010年，旗下有三家子公司：广州库基生物科技有限公司、广州永诺医学检验所和广东永诺医疗科技有限公司。前两家子公司主要做科研和临床服务，后一家子公司永诺医疗负责生产数字PCR仪器设备。“数字PCR技术是分子诊断的核心技术之一，数字PCR仪是我们向产业链上游进军的发力点，所以永诺是一家以数字PCR技术为核心的分子诊断公司。”“我们的临床服务业务在华南地区已经达到很高的覆盖率。”赖炳权表示，经过多年的市场拓展，永诺生物目前已与华南地区100余家大型的三甲医院建立了合作关系，而光是开展这一业务的人员就达100人。永诺生物办公区一角高规格实验室建设展现实力穿上白色实验服，戴上一次性鞋套，在永诺工作人员的带领下，小编参观了永诺常规分子实验平台和二级生物安全实验室。永诺常规分子实验平台各室间分工严明，包含分子克隆室、病理室、公共仪器室、试剂准备室、细胞培养室、western blot室等。实验室工作人员在电泳室进行电泳操作实验室工作人员在细胞培养室进行细胞培养小编本次重点参观了永诺生物的二级生物安全实验室。二级生物安全实验室对人员进出、技术规范和安全操作规范都有严格规定。永诺生物安全实验室以高通量测序技术及医学生物信息学为核心，专注于精准医疗基因检测服务。占地面积1000平方米，按照国内临床检验实验室的要求布局设置，拥有完善的质量管理体系和成熟的检测服务体系。永诺生物安全实验室门禁标志进出入生物安全实验室需要登记，门上贴满了警示标志。永诺医学检验实验室内部细节在走访该实验室时，小编目睹了工作人员使用MicroDrop-100数字PCR仪进行样品前处理实验操作的流程。利用MicroDrop-100数字PCR仪进行微滴生成操作“全程不过2分钟，每个孔已经生成了10万滴微滴”，工作人员向小编介绍道。生物安全实验室内还设立符合国际标准的无特定病原体动物（SPF级实验动物）中心，该中心配备IVC系统、清洁级动物房、解剖间、净化工作台、洗消间等设施，能进行6000只大、小鼠的屏障环境培养。由于该环境严格控制人员、物品和空气，进入需要经过严格的灭菌和消毒操作。永诺生物SPF级实验动物中心与其他数字PCR公司不同的是，永诺生物更多的是一家分子诊断公司。其在华南地区的分子诊断业务已经打响了口碑，并建立了稳定的客户来源基础。而数字PCR作为第三代PCR技术，是其发展分子诊断业务的重要工具。在已经拥有了完善的下游业务，并有足够的营收来支撑研发时，自主研发何乐而不为？赖炳权表示，其数字PCR生产车间已经能达到年产200台的规模，目前已售出10余台，且用户反馈良好。结合小编的实地走访了解，发现这是一家稳扎稳打，用心做事的分子诊断公司。今其高调宣布发售数字PCR，我看靠谱。