背景
自2020版中国药典四部2341农药残留量测定法中新增第五法,药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法,很多中药检测企业反馈含有挥发油成分较多品种基质效应较为严重,药典规定的四种前处理方法都难以解决。
纳谱分析根据挥发油成分特点,调整亲水亲脂聚乙烯吡咯烷酮填料技术参数,特别推出SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱(200mg/6mL)产品。相比市面上常规HLB产品,HLB-A可以吸附更多挥发油类成分,并且在除色效果上也较好,从而降低了基质效应。
适用范围:
本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法方式二,适用于含挥发油和色素较多的中药材农残检测。
★
实验步骤
★
一、 对照品溶液的制备
1.1 混合对照品配制
精密量取禁用农药混合1 mL,置20 ml量瓶中,加乙腈稀释至刻度,摇匀,备用;
1 .2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备
取磷酸三苯酯对照品适量,精密称定,加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液,即得。精密量取适量,加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。
1.3 空白基质溶液的制备
取空白基质样品,同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。
1.4 基质混合对照溶液的制备
分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份),置氮吹仪上,40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL,分别加入混合对照品溶液l0 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL,加乙腈稀释至l mL,涡旋混匀,即得。
二、供试品溶液的制备
2.1 提取
称取5 g花椒样品,加氯化钠1 g,加入50 mL乙腈,匀浆处理2分钟,离心后分取上清液,残渣再加50 mL乙腈,匀浆处理1分钟,离心后,合并两次提取上清液,减压浓缩至3~5 mL,加乙腈定容至10 mL,摇匀,待净化。
三、净化
SPE柱:SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱(200mg/6mL)/ SelectCore HLB固相萃取柱(200mg/6mL)
净化:量取直接提取法制备的供试品溶液3 mL,过SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱,收集全部净化液,混匀,即得;(同法用SelectCore HLB固相萃取柱进行平行试验)
GC/MS/MS测定:取过固相萃取柱后溶液1 mL,加入0.3 mL内标溶液,混匀,过PTFE膜,上机分析。
LC/MS/MS测定:取过固相萃取柱后溶液1 mL,加入0.3 mL水,混匀,过PTFE膜,上机分析。
四、高效液相色谱-串联质谱法
(岛津 LC-MS 8050)
4.1 色谱条件
色谱柱:
ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱(2.1 ×100mm,2.6μm)
Agilent InfintyLab Poroshell 120 SB-C18(2.1 ×100mm,2.7μm)
流动相:
A:0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L甲酸铵)
B:乙腈/0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L甲酸铵)=95/5
梯度:
时间(min) | 流速(mL/min) | 流动相A (%) | 流动相B (%) |
0 | 0.3 | 70 | 30 |
1 | 0.3 | 70 | 30 |
12 | 0.3 | 0 | 100 |
14 | 0.3 | 0 | 100 |
14.1 | 0.3 | 70 | 30 |
16 | 0.3 | 70 | 30 |
流速: 0.3 mL/min
柱温: 40 ℃
进样量: 1 µL
4.2 质谱条件
离子源: 电喷雾离子源(Electrospray ionization,ESI)正离子扫描
监测方式:多反应监测(Multiple Reaction Monitoring,MRM)
离子源接口电压:4.5 kV
雾化气:氮气3.0 L/min
加热气:干燥空气10.0 L/min
DL温度:250 ℃
加热模块温度:400 ℃
接口温度:300 ℃
干燥气:N2 10 L/min
图1:ChromCore C18-MS Pesticides 色谱柱30种农药标准品(以甲胺磷计0.025 μg/ml)的典型谱图
图2:Agilent InfintyLab Poroshell 120 SB-C18色谱柱30种农药标准品(以甲胺磷计0.025 μg/ml)的典型谱图
图3:花椒空白基质加标的典型谱图(SelectCore HLB净化)
图4:花椒空白基质加标的典型谱图(SelectCore HLB-A净化)
从以上花椒空白基质加标LC/MS/MS图对比来看,HLB-A可以有效减弱花椒样品的基质干扰,提高农残成分的灵敏度,让分析检测更为准确。
五、气相色谱-串联质谱法
(岛津 GC-MS 8030)
5.1色谱条件
色谱柱:DB-17MS,30m×0.25mm,0.25μm
进样口温度:250 ℃;
升温程序:初始温度为60 ℃,保持1 min;以10 ℃/min升温至160 ℃;再以2 ℃/min升温至230 ℃,最后以15 ℃/min升温至300 ℃,保持6 min;
载气:高纯氦气(纯度>99.999%);
进样方式:不分流进样;
恒压模式:146 kPa;
进样量:1 μL。
5.2质谱条件
电离方式:电子轰击电离源(EI);
电离能量:70Ev;
传输线温度:250 ℃;
离子源温度:250 ℃;
监测方式:多反应检测模式(MRM);
溶剂延迟:10.0 min。
图5:花椒空白基质加标的典型谱图(SelectCore HLB净化和SelectCore HLB-A净化对比)
表1 花椒中33种农药残留的的测定添加回收结果(%)
农残成分 | 回收率 | 农残成分 | 回收率 |
甲胺磷 | 90.6% | 甲磺隆 | 88% |
甲基对硫磷 | 77.3% | 氯磺隆 | 81.8% |
对硫磷 | 101.8% | 胺苯磺隆 | 85% |
久效磷 | 96.4% | 甲拌磷 | 95.2% |
磷胺 | 92.0% | 甲拌磷砜 | 118.9% |
α-六六六 | 88.4% | 甲拌磷亚砜 | 103.1% |
β-六六六 | 90.1% | 甲基异柳磷 | 95.9% |
γ-六六六 | 87.1% | 内吸磷-O | 84.5% |
δ-六六六 | 72.6% | 内吸磷-S | 92.1% |
2,4'-滴滴涕 | 61.8% | 克百威 | 98.3% |
4,4'-滴滴滴 | 69.6% | 3-羟基克百威 | 104.8% |
4,4'-滴滴涕 | 61.1% | 涕灭威 | 76.7% |
4,4'-滴滴伊 | 77.2% | 涕灭威砜 | 97.3% |
杀虫脒 | 88% | 涕灭威亚砜 | 98.5% |
除草醚 | 84.2% | 灭线磷 | 90.3% |
艾氏剂 | 72.8% | 氯唑磷 | 88.2% |
狄氏剂 | 66.2% | 水胺硫磷 | 77.3% |
苯线磷 | 100.0% | α-硫丹 | 69.8% |
苯线磷砜 | 77.4% | β-硫丹 | 86.4% |
苯线磷亚砜 | 96.3% | 硫丹硫酸酯 | 84.6% |
地虫硫磷 | 90.3% | 氟虫腈 | 92.6% |
硫线磷 | 91.5% | 氟虫腈砜 | 89.0% |
蝇毒磷 | 90.5% | 氟虫腈亚砜 | 86.0% |
治螟磷 | 97.4% | 氟甲腈 | 104.8% |
特丁硫磷 | 92.8% | o,p'-三氯杀螨醇 | 72.7% |
特丁硫磷砜 | 102.9% | p,p'-三氯杀螨醇 | 65.4% |
特丁硫磷亚砜 | 106.7% | 硫环磷 | 94.3% |
甲基硫环磷 | 91.3% |
注:磺隆类、三氯杀螨醇农残用3ml供试品溶液净化时,回收率偏低,可以另取5ml供试品溶液净化,回收率可以满足药典要求。
六、处理后溶液的颜色比对
花椒提取液过HLB-A柱
花椒提取液过HLB柱
由上图可以看出,花椒提取液经过SelectCore HLB-A中药农残专用柱净化后样品颜色澄清透明,而常规HLB柱净化后样品颜色较深。
七、 HLB与HLB-A SPE柱的部分农残基质响应的区别
涕灭威
涕灭威砜
久效磷
甲基对硫磷
对硫磷
硫丹硫酸酯
蝇毒磷
八、实验讨论
通过以上实验数据比对,可以看出,SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱,针对花椒的挥发性成分和色素成分去除效果良好,这样,不仅保护了分析柱和离子源,还极大的消除了由于基质效应带来的检测灵敏度下降等问题。该方法不需要固相萃取柱活化步骤,提取液直接过柱就可以测定,其中普遍反映存在较大基质抑制效应的甲基对硫磷、对硫磷、硫丹硫酸酯、蝇毒磷等农残,回收率都得以保证,而针对磺隆类、三氯杀螨醇类农残用3mL花椒供试品溶液净化时,回收率偏低,可以另取5mL供试品溶液净化,回收率可以满足药典要求。并且,ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱(2.1 ×100 mm,2.6 μm)针对中药农残各组分的峰型对称,灵敏度、柱效与其他知名品牌分析柱一样,保证了检测结果的准确性。
中药农残相关实验耗材:
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