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【应用分享】又快又稳、专柱专用!果冻中8种人工合成着色剂的提取和测定

纳谱分析

2020/04/07 08:58

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  合成色素检测的重要性



食品的色彩是食品感观品质的一个重要因素。人们在制作食品时常会使用一种食品添加剂-食用色素。目前使用的食用色素有天然食用色素和合成食用色素两大类。合成食用色素即人工合成的色素,其优点不少,如色泽鲜艳,着色力强,但它对人体也有一定的危害,如具有一定的毒性、致泻性、致突性(基因突变)和致癌性。鉴于食用合成色素的不安全性,国家也加强了对合成色素的监管,制订了食品添加剂使用标准(GB 2760-2011),对合成色素的检测非常重视

检测方法


GB5009.35-2016食品中合成着色剂的测定的方法是采用聚酰胺吸附法测定,但是该方法有一定的局限性,实验中对温度有一定要求,且吸附力不稳定。本实验采用的聚合物基质的弱阴离子交换法,针对目标分析的8种人工合成色素中含有苯磺酸和苯甲酸结构,可以和离子基团更好的结合,这样对于样品有着更好的净化能力,并且保证了测定的稳定性,更适用于复杂基质的食品的检测。

ChromCore C18-AC色素专用柱系纳谱分析基于食品安全国家标准(GB 5009.35-2016 食品中合成着色剂的测定)的色谱条件基础上研发出的一款色素专用色谱柱。其采用了独特的固定相键合技术,各色素组分均具有良好的峰形及分离度,具有更长的使用寿命。


样品制备


1、取8种色素样品各20 mg,分别溶于10%的乙醇水溶液中,根据HPLC的出峰峰高调整相应浓度,配置成50 ppm浓度的混标溶液,待用。
2、取果冻基质4g于离心管内,加入10 mL的提取液(乙醇:氨水:水=7:2:1),震荡混匀1min,在4000转的条件下离心5min,提取上清液,重复三次,收集上清液备用。
3、取果冻基质的上清液2 mL于两个10 mL容量瓶中,用超纯水定容至10 mL,加入200 uL50 ppm的混标溶液,用柠檬酸溶液调节至pH=6(±0.1),作为上样液备用。

前处理实验


1

上样液

  • 基质的全部液

2

活化

  • 依次用6 mL 甲醇、6 mL10%甲酸水溶液活化;(视频如下,图左为SelectCore WAX (150 mg/6 mL)SPE柱,图右为Brand W SPE柱)


  

活化,图左为SelectCore WAX (150 mg/6 mL)SPE柱,图右为Brand W SPE柱

3

上样

  • 上样液注入SPE小柱中,弃去流穿液;(视频如下图,图左为SelectCore WAX SPE柱,图右为Brand W SPE柱,为果冻基质上样)


  

上样,图左为SelectCore WAX  SPE柱,图右为Brand W SPE柱,为果冻基质上样

4

淋洗

  • 移取6 mL的水溶液注入SPE小柱中,弃去淋洗液;

5

洗脱

  • 移取6 mL的5%氨水甲醇液注入SPE小柱中,收集洗脱液;(视频如下,图左为SelectCore WAX SPE柱,图右为Brand W SPE柱,视频中为色素回收实验中的色素洗脱环节)


  

洗脱,图左为SelectCore WAX  SPE柱,图右为Brand W SPE柱

6

收集

  • 氮气吹干,用10%乙醇水溶液定容至1 mL,过0.45μm有机滤膜,上HPLC检测。

HPLC仪器条件


流动相A:乙腈      流动相B:0.02mol/L 乙酸铵水溶液

色谱柱:ChromCore C18-AC色素专用柱 5μm,4.6×250mm

波长:    254 nm

进样量:5 uL

柱温箱:35℃

梯度设置:

实验谱图及加标回收率数据



实验结论


据实验结果显示,纳谱分析的SelectCore WAX柱 (150 mg/6 mL)固相萃取柱对八种人工色素具有很好的保留效果,且在样品前处理过程中发现,相较于Brand W的SPE柱,纳谱的SelectCore WAX在流速上占有明显的优势---快且均匀,回收率也较为理想,结合纳谱分析的ChromCore C18-AC 5μm,4.6×250mm色素专用分析柱进行分析,峰型对称,分离度良好,可以满足食品中八种人工合成着色剂的测定。

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