高效液相色谱（HPLC）是色谱分析方法的一种，其检测范围广，灵敏度高，是实验室最常见的分析仪器之一，但由于其结构复杂，构造精密，如果操作不当容易出现各种故障，因此，小编整理了HPLC使用过程中常见的故障及解决方案，希望给大家的日常使用提供一定的参考。1、压力持续偏高1.  流速设定过高。将流速调整到适当数值。2.  流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀。更换流动相，冲洗色谱柱。3.  柱前筛板堵塞。在允许情况下反冲色谱柱，更换筛板，更换色谱柱。4.  保护柱堵塞。清洗或更换保护柱。2、压力持续偏低1. 流速设定过低。将流速适当调高。2.  系统漏液。检查色谱柱接口、泵等位置，确定漏液位置并维修。3.  色谱柱选择不当。更换合适的色谱柱。3、压力波动较大1. 管道中有气体，流动相脱气不充分。流动相继续脱气或改变脱气方法（如在线脱气等）。2.  单向阀、泵密封损坏。更换单向阀和泵。3.  流动相粘度变化引起压力波动。改用溶剂梯度洗脱。4、漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉。1.  接头处漏液。一般通过拧紧、清洗、更换等方法即可解决。2.  泵漏液。检查单向阀、接头是否松动，若松动拧紧（不要太紧）即可；检查混合器和泵的密封是否损坏；3.  进样阀漏液。检查进样阀转子、密封口是否松动，若松动则拧紧；检查废液管是否堵塞或产生虹吸现象，疏通或更换废液管，保持废液管高于废液液面。4.  色谱柱漏液。尾端接头松动，拧紧接头；卡套内有填料，拆下卡套，清洗卡套，重新安装；筛板厚度不合适，更换合适的筛板。5.  检测器漏液。检查流通池垫片、窗口是否损坏，更换垫片或窗口；检查流通池是否阻塞，更换或者重新安装；检查废液管是否阻塞，更换废液管。

黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉产生的毒性致癌物，自然界至少存在14种以上不同的黄曲霉毒素。其中黄曲霉毒素B1是公认最具毒性的。黄曲霉素含量在30-50 µg/kg为低毒，50-100 µg/kg为中毒，100-1000 µg/kg为高毒，1000 µg/kg以上为极毒。其毒性为氰化钾的10倍，为砒霜的68倍。黄曲霉素含量在1 mg/kg就可诱发癌症。而1 mg/kg黄曲霉素含量只相当于1吨粮食中只有1粒芝麻大的黄曲霉素。黄曲霉毒素M1和黄曲霉毒素M2是黄曲霉毒素B1和黄曲霉毒素B2的代谢产物。当牛等牲畜食用了被黄曲霉毒素B1和黄曲霉毒素B2污染的饲料后，经代谢转化成的M族黄曲霉就会出现在牛奶里。高浓度的黄曲霉毒素M1可导致肝癌。慢性接触黄曲霉毒素会增加患肝胆疾病的风险。检测方法本文参考《GB 5009.24-2016》检测方法，采用高效液相色谱(HPLC)检测，选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对黄曲霉毒素M1和M2混标溶液和乳粉样品加标溶液进行分离和检测，色谱检测条件及谱图如下：详细产品信息，欢迎试用：产品描述货号ChromCore C18 3μm, 4.6×150mmA001-030018-04615S试用方法：扫描以下二维码进行试用申请。

我公司（纳谱分析技术（苏州）有限公司）专注于研发、生产和销售液相色谱产品，为广大色谱工作者提供优质的产品和技术支持。产品涵盖用于小分子分离、生物大分子分离和手性拆分的液相色谱柱，样品前处理产品以及气相色谱柱。为答谢新老顾客，加强彼此沟通交流，我公司长期举办谱图征集活动，邀请广大用户使用纳谱产品并反馈应用效果，对于符合条件的应用结果，公司将给予奖励。（应用包括但不限于中药、化药、生物制药、临床质谱、环境、食品、样品前处理等。）1中药2化药3生物制药4临床质谱5环境6食品3样品前处理各位用户可在我公司官网上下载《谱图信息反馈表》模板，填写后提交至我公司邮箱，经审核完成后兑现奖励。投稿示例谱图反馈流程：1. 在我公司官网上下载模板《谱图信息反馈表》http://www.nanochrom.com/resshow/100.html2. 将填好的文档发送至marketing@nanochrom.com；3. 您也可通过当地销售人员直接取得联系，提交《谱图信息反馈表》。奖 励 办 法：1.请按照附件《谱图信息反馈表》如实填写，尽可能完善所有信息；2.对于如实填写《谱图信息反馈表》且信息完善的单个谱图反馈，奖励200元及以上购物卡或等价值礼品；3.对于同时提交多个谱图反馈的，视不同样品的种类及代表性，纳谱公司将酌情考虑，尽可能给予最大程度的叠加奖励。4.活动期间，试用柱与购买渠道的色谱柱均可参加。注：提交此表将默认您同意此谱图或将应用于纳谱分析的宣传场所，同时我们将对您的公司及个人信息进行保密。本活动最终解释权归 纳谱分析技术（苏州）有限公司 所有+ + + +心动不如行动！欢迎广大用户踊跃投稿！先定一个小目标比如说先找纳谱申请色谱柱试用试用方法：纳谱分析提供色谱柱和固相萃取柱免费试用。您可扫描上面二维码进行试用申请。

阿司帕坦阿司帕坦为N-L-α-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-1-甲酯，别名阿斯巴甜，分子式：C14H18N2O5，是一种非碳水化合物类的人造甜味剂。阿斯巴甜由L-苯丙氨酸先与甲醇酯化后再和L-天冬氨酸缩合酰胺化产生，国外商品名称为Nutrasweet、Equal Tablets ，又称甜味素、蛋白糖、天冬甜母、天冬甜精、天苯糖等。常温下，为白色结晶性的粉末。阿斯巴甜甜度为蔗糖的200倍，热量低，主要添加于饮料、维他命含片或口香糖代替糖的使用。许多糖尿病患者、减肥人士都以阿斯巴甜做为糖的代用品。但因高温会使其分解而失去甜味，所以阿斯巴甜不适合用于烹煮和热饮。检测方法阿司帕坦在水中极微溶解，在乙醇、正己烷或二氯甲烷中不溶。阿斯巴甜水溶液在一定的温度和酸性pH条件下，其酯键能被水解生成天冬氨酰苯丙氨酸和甲醇；在中性、碱性（pH>7）受热条件下，或经环化作用消去甲醇形成环天冬氨酰苯丙氨酸；在pH为3~5的环境中最为稳定；本次参考中国药典2020年版，采用高效液相色谱(HPLC)检测，选用纳谱分析ChromCore 120 C18色谱柱对阿司帕坦有关物质进行检测。色谱检测条件及谱图如下：实验结论使用纳谱分析ChromCore 120 C18色谱柱对阿司帕坦有关物质进行检测，系统适用性溶液中L-苯丙氨酸峰与5-苄基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸峰具有良好的分离度，该方法操作简单，灵敏度高，重复性好，符合药典要求，可用于阿司帕坦有关物质的检测，为该药物的质量保证提供检测依据。

使用液相色谱仪的小伙伴肯定会遇到漏气和漏液的状况，流动相是造成液相色谱各种问题的最主要源头。液相色谱最常见的故障一是堵，二是漏。今天就这两部分分别展开讨论（流动相以甲醇为例，色谱柱以C18为例） 。首先，为何会堵?“堵”的表现现象就是柱压异常升高，直接原因就是流路不畅。堵塞的主要位置就是在色谱柱的前端，最主要原因就是流动相里有杂质，杂质的主要来源就是细菌。1纯水中的细菌污染首先我们要认识到，一般的国产甲醇其实不需要额外过滤处理，直接使用没有问题。即使是有些固态微粒杂质，也能在液相流路系统最前端的过滤头上排除，真正容易引起问题的，是水中的细菌。新制备的纯水在室内放置几天就会长菌，而这些细菌虽然肉眼不可见，却足以堵塞柱填料颗粒的空隙，造成柱子很快报废。这就是在配制流动相时造成的细菌污染的原因，解决它的方法很简单，就是确保水的可靠性。解决办法：（1）最理想的方式当然是购买实验室专用纯水机，既方便又可靠，质量也放心。唯一的缺点就是价格不菲。（2）成箱购买市售品牌纯净水，如500ml的怡宝或娃哈哈，这些水的质量足以应付液相色谱的要求。先随机抽取一瓶做一下细菌平板实验，待菌落数合格方可使用。这样每次只要单独开一瓶即可，也很方便。每次成本2元左右。这里特别指出一个细节：在绝大多数书本上，凡谈到配制流动相都会谈到最后一个过滤的步骤。但是从我们长期使用的实际效果来说，只要能保证水的质量，这一步完全可以也应当去除。水有保证，可以不过滤？（1）流动相过滤在理论上有好处，但是实际操作时由于不可能做到专瓶专用，反而容易造成的交叉污染，对于配比复杂的流动相影响更大。（2）流动相过滤在经济成本上不划算。买一套过滤装置要6000多元，且过滤器公认是比较容易损坏的设备。最主要是过滤片的成本太高，一片就要几十元。按一般液相柱的正常使用寿命计算，过滤片的成本会远远高于色谱柱的成本。2流动相的细菌污染流动相刚开始不长菌，在使用时却产生了细菌污染。这主要是在使用多元液相色谱仪时的一种不良使用习惯造成的。举最简单的例子：50%的甲醇水流动相，有两种使用方式。一种方式是在上机前就配好混合在一起，另一种方式是在流路A放纯甲醇，流路B放纯水。从单纯实验效果来说，后一种有明显的优点：首先是简单，不需要实验者另外计算配比混合，其次就是比例准确，能得到保留时间重复性极好的实验效果。但是，它有一个致命的缺陷，就是纯水在流动相瓶中几天时间就会长细菌（很多情况下不仅仅用纯水作流动相，而是用缓冲盐溶液，本身就是优质肥料，细菌长得更迅速），一旦有细菌柱子就坏得很快。所以这种方式要求操作人员每次实验都要用新制备的纯水，更要求在每次实验后把水相换掉，换成甲醇冲洗干净，这一点在实际工作中很多人意识不强，就是意识到了但多次使用中总有一两次会遗漏，但是往往这一两次就足以产生致命的影响。因为液相色谱柱的堵塞是不可逆的。所以，宁可牺牲小小的保留时间的重复性，也不要用纯水溶液作为流动相。从实际实验效果来说，我建议用10%的甲醇水代替水溶液（以前做过不同比例甲醇水的细菌总数实验，在5%就基本可以抑菌，在10%及以上就可以完全杀菌了），这样可以有效排除长细菌的隐患，既可作流动相，也可冲柱。就算是在配制流动相时会计算得麻烦一些，但是一次麻烦，终身受益。3不适当操作（1）在更换零件时选择的型号有误，接口不是很匹配，在拧紧的时候产生变形而使得管路堵塞。（2）样品处理液净化得不干净，长期会在六通阀和柱之间造成阻塞不畅。（3）在使用手动六通阀时，有些人可能由于手劲小的原因，转动的不到位，于是造成流路形成死堵，压力快速升高超过警戒值。（4）在使用金属管路作出废液管时，应当注意最好废液瓶中先放一些水，并把废液管的出口端放在液面下。如果位于在液相上且实验使用较高浓度的缓冲盐溶液，在停机时可能在出口端结晶成块并造成堵塞。这种情况不常见，但却的确发生过。查堵的方法在发生“堵”的现象后，就需要找出原因，主要是什么位置发生了“堵”。注意，绝大多数情况下，整个系统只会有一个地方发生堵塞。查堵的方法是从尾向前逆向分段拆开，仔细观察压力数值，如果某一个部件（柱子除外）装上和拆下时的压力差别很大，可根据变化判断。至于柱的堵塞，可以通过换同样规格的柱的压力是否一致来判断。“漏” 分两种：漏液和漏气。一.漏液液相色谱仪从流动相瓶到废液瓶之间的流路是一个全封闭体系，内部压力很高，但外部却能保证一滴不漏。如果某个部件发生漏液，那就是故障所在。漏液的原因分两种：1接触硬件不当在更换零件如流路管或换柱时，换的接头接口不匹配，造成漏液。要注意不同公司的柱子接头很多是不同的，甚至同一家公司在不同时期生产的液相柱接头也有很大区别。当然选用PEEK接头是一个较好的解决方法，不仅通用性好，而且靠手拧就能保证不漏液。即使是接口本身是匹配的，但是如果操作不当也会漏液，一种不当就是力度把握不好，拧得太紧或太松；另一种不当就是致命的错误：滑丝，这往往是动手能力不太强，螺丝钉很少拧的工作者犯的错误，滑丝的后果不仅是漏液那么简单，常造成重要部件的报废。解决这个问题只能靠恶补基本功来实验，那就是拧螺丝。2使用仪器不当如果是输送泵漏液，最常见的原因就是在活塞位置缓冲盐析出造成。析出的原因有两个：一是使用缓冲盐溶液时突然加入了纯甲醇而析出，这种错误很容易避免，就是尽量不要用纯的甲醇和纯水。只要互相有10%比例就不会出现这个问题。另一原因是在用缓冲液盐溶液（不论甲醇含量有多少）作流动相时，实验结束后没有换甲醇水冲洗，使得微渗的流动相干燥形成晶体造成。不过，输送泵漏液并不是非得马上修不可，冲洗干净并在以后的使用中多加小心一般都可以正常使用。检测器漏液是个很麻烦的事，一般都是吸收池的问题，更换的费用相当高。但是并不是说一定要马上更换，还可以从实际实验效果看能否凑合使用。二.漏气漏液是从内部向外漏，而漏气则是外部的气体进入液相色谱仪的流路内部形成气泡。下面按流路的方向逐个部件分析产生气泡的原因和相应解决方法。1过滤头做样时，在流路管中有不规则但持续的小气泡产生，这时考虑的是流动相有没有脱气（需要特别提醒即使是有了真空脱气机也是要先超声脱气的，起码可以减少脱气机的工作压力并提高工作效率），如果已脱气，则要注意过滤头的污染也会造成这种现象。处理方法比较简单，拧下过滤头在稀硝酸中浸泡，超声半小时，洗净后装回去即可。2透明流路管指的是在过滤头和输送泵之间的那一段管路。这一个部分往往不是有点气泡，而经常是整个管中全是空气而操作人员却浑然不知，以致输送泵工作了半天才发现流动相瓶里的液体一点也没少。这也是我们常说的液相色谱仪至少一周要开机一次的原因（我们做液相一定要有“微渗”的概论）。如果长时间不用，这一段管路的液体会彻底干掉，而充满空气的管路和充满液体的管路不仔细看是分辨不出来的。这种情况对于输送泵很危险，因为泵从设计来说是输送液体而不是输送气体，内部的液体对于活塞来说起到了机油的作用，如果活塞杆还残存了一些缓冲盐，则极易拉伤，造成不可逆转的影响。对于这种情况，要突出“预防为主”。如：液相色谱使用人员要相对固定和稳定，工作中合理搭配资源，每台机一周至少一次实验，如长期不用起码每周要冲流动相2小时。养成良好的工作习惯很重要。如果流路管中真漏气了怎么办？我的建议是用外力使管路中充满液体。具体如下：1、找到流路管进入输送泵的接头。2、拧下来。3、用一干净洗耳球的尖端对准管路的平整切口。4、吸液体，看液面从流动相瓶里上升，至离洗耳球5cm左右时停止该动作。5、快速把接头拧回输送泵上（这个过程可能会有少许流动相外泄，这是正常现象）。6、开机，打开排液阀门，启动输送泵。7、等排液管中流出的溶液没有气泡时，再关闭排液阀，仪器正常工作。3输送泵和柱子这些部分进了气泡一般不怕，冲掉就行。4检测器应该说，整个流路中只要有一个气泡都会在检测器上得到强烈的信号反应，检测器内部的气泡一般都能被冲走，但也有很难冲掉的残留气泡的情况。如果检测器内有残留气泡，会有特别明显的表现形式，就是在走基线时会时不时间隔出现直上直下信号很大的信号峰。这时先看普通流量能否冲走，如果冲不走，那唯一的办法就是拆柱，把检测器直接连接到输送泵的出口，加大几倍流量冲洗，则肯定能冲走气泡。

黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉产生的毒性致癌物，自然界至少存在14种以上不同的黄曲霉毒素。其中黄曲霉毒素B1是公认最具毒性的。黄曲霉素含量在30-50 µg/kg为低毒，50-100 µg/kg为中毒，100-1000 µg/kg为高毒，1000 µg/kg以上为极毒。其毒性为氰化钾的10倍，为砒霜的68倍。黄曲霉素含量在1 mg/kg就可诱发癌症。而1 mg/kg黄曲霉素含量只相当于1吨粮食中只有1粒芝麻大的黄曲霉素。黄曲霉毒素M1和黄曲霉毒素M2是黄曲霉毒素B1和黄曲霉毒素B2的代谢产物。当牛等牲畜食用了被黄曲霉毒素B1和黄曲霉毒素B2污染的饲料后，经代谢转化成的M族黄曲霉就会出现在牛奶里。高浓度的黄曲霉毒素M1可导致肝癌。慢性接触黄曲霉毒素会增加患肝胆疾病的风险。检测方法本文参考《GB 5009.24-2016》检测方法，采用高效液相色谱(HPLC)检测，选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对黄曲霉毒素M1和M2混标溶液和乳粉样品加标溶液进行分离和检测，色谱检测条件及谱图如下：结论采用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对黄曲霉毒素M1和M2混标溶液和乳粉样品加标溶液进行分离和检测，各峰均具有良好的峰形和分离度，周围无干扰杂峰，该方法操作简单，灵敏度高，重复性好，符合国标要求，可用于黄曲霉毒素M1和M2的分离和测定。详细产品信息，欢迎试用：产品描述货号ChromCore C18 3μm, 4.6×150mmA001-030018-04615S

王不留行，有异名“奶米”“王不留”“麦蓝子”“剪金子”“留行子”，本品为石竹科植物麦蓝菜Vaccaria segetalis（Neck.）Garcke的干燥成熟种子。夏季果实成熟、果皮尚未开裂时釆割植株，晒干，打下种子，除去杂质，再晒干。功能与主治：活血通经，下乳消肿，利尿通淋。用于经闭，痛经，乳汁不下，乳痈肿痛，淋证涩痛。检测方法参考《中国药典》2020年版，采用高效液相色谱法(HPLC)，测试要求：理论塔板数按王不留行黄酮苷峰计算应不低于3000，供试品中主峰与前后杂质可以达到基线分离；本次选用纳谱分析ChromCore AR C18色谱柱对王不留行进行分离和检测，色谱检测条件及谱图如下：王不留行--不同柱温对比实验结论本次参考《中国药典》2020年版，选用ChromCore AR C18反相色谱柱对王不留行进行分离，柱温对理论塔板数影响比较大，测试柱温在35 ℃时，主峰拥有更好的峰型，黄酮苷峰理论塔板数远高于3000，符合药典规定，为该药物的质量保证提供检测依据。详细产品信息，欢迎试用：产品描述货号ChromCore AR C18 5μm, 4.6×250mmA401-050012-04625S

克痤隐酮凝胶是以中药为主的中西药复方制剂，其组分为丹参酮粉，甲氧苄啶，维生素A，维生素E。临床上主要用于抑制皮脂腺分泌及痤疮杆菌生长。用于黑头、白头粉刺。其主要成分丹参酮经现代研究显示具有抗菌消炎，改善微循环，促进皮肤新陈代谢的作用，而且还有较温和的雌性激素活性和抗雄性激素的作用以及皮脂腺抑制作用。检测方法:本次采用高效液相色谱法，选用纳谱分析ChromCore AR C18色谱柱对克痤隐酮凝胶中隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量进行分离和检测。色谱检测条件及谱图如下：Column:            ChromCore AR C18, 5 μmDimension:        4.6×250 mmMobile Phase:   75/25 v/v 甲醇/水Flow Rate:        1.0 mL/minTemperature:    25 ℃Injection:         10 μLDetection:        UV 254 nmSample:           克痤隐酮凝胶Peaks:             1. 隐丹参酮                       2. 丹参酮ⅡA结论采用纳谱分析ChromCore AR C18色谱柱对克痤隐酮凝胶中隐丹参酮和丹参酮ⅡA进行检测，各峰均具有良好的峰形和分离度，周围无干扰杂质。该方法简便、准确、重现性好，可用于克痤隐酮凝胶中隐丹参酮和丹参酮ⅡA含量测定，为该药物的质量控制提供检测依据。应用相关产品，欢迎试用产品描述货号ChromCore AR C18 5μm, 4.6×250mmA401-050012-04625S

：PAHs多环芳烃是指含两个或两个以上苯环的芳烃，简称PAHs。它们主要有两种组合方式，一种是非稠环型，即苯环与苯环之间各由一个碳原子相连，如联苯、联三苯等；另一种是稠环型，即两个碳原子为两个苯环所共有，如萘、蒽等。 多环芳烃的来源分为自然源和人为源。自然源主要来自陆地、水生植物和微生物的生物合成过程，另外森林、草原的天然火灾及火山的喷发物和从化石燃料、木质素和底泥中也存在多环芳烃；人为源主要是由各种矿物燃料（如煤、石油和天然气等）、木材、纸以及其他含碳氢化合物的不完全燃烧或在还原条件下热解形成的。  PAHs由于具有毒性、遗传毒性、突变性和致癌性，对人体可造成多种危害，如对呼吸系统、循环系统、神经系统损伤，对肝脏、肾脏造成损害。被认定为影响人类健康的主要有机污染物。本标准适用于土壤和沉积物中16种多环芳烃的测定，目标物包括：萘、苊烯、苊、芴、菲、蔥、荧蔥、芘、苯并【a】蒽、䓛和苯并【b】荧蔥、苯并【k】荧蔥、苯并【a】芘、二苯并【a，h】蔥、苯并【g，h，i】苝、茚并【1，2，3，-cd】芘。检测方法本次参考GB5009.265-2016，采用高效液相色谱法，选用ChromCore PAH色谱柱，结合简便的乙腈/水系统进行梯度洗脱，对多环芳烃类化合物进行分离和检测。色谱检测条件及谱图如下：结论：本次选用ChromCore PAH色谱柱对多环芳烃进行分离和检测，在该色谱条件下，各组分均有良好的峰形和分离度，满足国标要求，可用于该类化合物的分析检测。详细产品信息，欢迎试用：产品描述货号ChromCore PAH 5μm, 4.6×250mmA118-050018-04625S

BioCore SCX 是一款以先进的单分散无孔聚合物微球为基质，结合独特的表面键合技术而成的高性能阳离子交换蛋白分离色谱柱，适用于单抗、双抗以及单抗偶联药物中电荷异质体的分离，广泛地应用于生物制药、医疗、科研等领域。特点对单抗类分子电荷异质体选择性好、分离度高 先进的单分散微球技术，柱效高、批次间一致性佳 独特的表面修饰工艺，非特异性吸附低、回收率高 对酸、碱和有机溶剂都有良好的耐受性色谱柱技术BioCore SCX采用先进的色谱柱技术，并针对单抗类生物大分子电荷异质体的选择性进行优化而成。固定相是由在无孔、单分散、高交联度、聚二乙烯苯微球表面键合一层中性亲水层，以及在亲水层上接枝的磺酸官能团构成。创新性的微球技术保证了色谱柱的高柱效、耐压性、耐热性、化学稳定性以及有机溶剂的兼容性。先进的键合技术有效地阻绝生物大分子与疏水性基球的接触，最大限度地降低了生物大分子与固定相间不利的相互作用，确保单抗电荷异质体分离所需的选择性。参数信息产品名称BioCore SCX色谱柱官能团磺酸基基质单分散、聚苯乙烯-二乙烯苯聚合物微球粒径5 & 10 μm孔径无孔色谱柱管材质PEEK (polyetheretherketone)色谱柱规格4.6×250 mm 4.6×150 mm 4.6×100 mm 4.6×50 mm色谱柱耐压性5000 psi色谱柱耐热性60 ℃色谱柱pH范围2 - 12应用实例单克隆抗体(mAb)是快速增长的生物药物市场的重要组成部分，近年来发展迅猛。mAb治疗是诊断和治疗广泛疾病的有效方法，包括自身免疫性疾病、心血管疾病、传染病、癌症和炎症。在生物药物的开发和生产过程中，必须检测、表征和量化杂质以及结构变异和修饰，并监测产品的稳定性，这是证明监管机构所要求的安全性和有效性的关键。由于翻译后修饰(PTMs)的原因，mAbs通常表现出复杂的微观异质性，包括糖基化（glycosylation），末端修饰（modifications onthe termini），氧化（oxidation），脱酰胺（deamidation ），异构化（isomerization），二硫键的还原（reduction of disulfide bond），聚体形成（aggregation）。mAbs的质量控制和稳定性评价是一项极具挑战性的任务，需要一整套不同分离模式的高性能色谱柱来支撑，包括Protein A、体积排阻（SEC）、离子交换（IEX）、疏水保留（HIC）和反相（RP）。由于大部分mAb的等电点pI在6-10范围内，其电荷异质体的分离主要由阳离子交换(CEX)来实现。IgG1(利妥昔)电荷异质体的分离IgG2 单抗的电荷异质体分离IgG4 电荷异质体的分离融合蛋白电荷异质体分离质量保证每个批次的BioCore SCX的填料都按照严格的质量管理体系生产，并且用相关生物大分子（IgG单抗）质检以确保分离性能和批次间一致性。每一支出厂的色谱柱都经过成熟的装柱工艺和严格质检，并附有填料合格证书和色谱柱测试色谱图。订货信息产品柱管规格货号BioCore SCX 5 μm4.6×250 mmB411-050000-04625P4.6×150 mmB411-050000-04615P4.6×100 mmB411-050000-04610P4.6×50 mmB411-050000-04605PBioCore SCX 10 μm4.6×250 mmB411-100000-04625P4.6×150 mmB411-100000-04615P4.6×100 mmB411-100000-04610P4.6×50 mmB411-100000-04605P

近日，纳谱分析技术（苏州）有限公司（以下简称“纳谱分析”）宣布，正式推出BioCore SCX强阳离子交换蛋白分离色谱柱新品。该款色谱柱适用于单抗、双抗以及单抗偶联药物中电荷异质体的分离，主要用于生物制药、医疗、科研等领域。据了解，BioCore SCX是以单分散无孔聚合物微球为基质，结合独特的表面键合技术而成的高性能阳离子交换蛋白分离色谱柱。其固定相是由在无孔、单分散、高交联度、聚二乙烯苯微球表面键合一层中性亲水层，以及在亲水层上接枝的磺酸官能团构成。创新的微球技术保证了色谱柱的高柱效、耐压性、耐热性、化学稳定性以及有机溶剂的兼容性，其键合技术还可有效的阻绝生物大分子与疏水性基球的接触，可最大限度的降低生物大分子与固定相间不利的相互作用，确保单抗电荷异体分离所需的选择性。此外，每个批次的BioCore SCX的填料都按照严格的质量管理体系生产，并且用相关生物大分子（IgG单抗）质检以确保分离性能和批次间一致性。关于纳谱分析纳谱分析技术（苏州）有限公司旨在打造一个世界领先、自主创新的液相色谱柱的中国品牌，实现液相色谱柱及色谱材料的高端国产化，打破外国公司在核心技术和产品上对该领域的长期垄断。在此过程中，培养一批液相色谱分离材料、色谱柱装填和应用开发的专业技术人才，和一个世界一流水平的产业化团队，助力中国液相色谱产业化水平的提升，为包括生物制药在内的广大用户提供高质量的产品和优质的服务。

大约没有哪一年像2020年那样，太多人对它的期待是重启。如今，2020年终于画上了句号，当以后的某一天再回首，新冠、隔离会成为回忆，也会成为难忘的时代记忆。对于色谱耗材圈来说，过去的一年是那么的不平凡，疫情下经历了一次又一次的考验；同时，也是充满机遇的一年，医药领域的巨大需求使得下半年色谱耗材行业逆风而上。回顾2020年，艰难，却并不乏机会；展望2021年，变数仍在。过去的一年，色谱柱/填料行业有哪些事让我们刻骨铭心？未来这个行业又会出现哪些新变化？仪器信息网特别策划了视频/文字微访谈——“大咖访谈录之色谱耗材的昨天、今天与明天”，此次，我们特别邀请纳谱分析技术(苏州)有限公司董事长刘晓东谈一谈纳谱分析色谱耗材的过去和未来。纳谱分析技术（苏州）有限公司董事长刘晓东仪器信息网：请您认为2020年的色谱耗材圈关键词有哪些？刘晓东：2020是充满意外和挑战的一年。由于新型冠状病毒（“新冠”）疫情在全球范围内的传播以及中美关系的种种挑战，对世界格局和商业运作模式产生了深远影响。新冠疫情的肆孽极大地促进了新冠疫苗的研发，在全球范围内影响了生物制药的格局，其中基因治疗更是在反击新冠疫情中大放异彩：在2020年内已获美国FDA紧急使用授权的Pfizer和Moderna的新冠疫苗都是基于基因治疗的原理。Moderna COVID-19疫苗含有信使RNA（mRNA）。该疫苗含有一小段SARS-CoV-2病毒的mRNA，该mRNA指示体内的细胞产生该病毒的独特“尖峰”蛋白。人体收到这种疫苗后会产生刺突蛋白的副本，该蛋白不会引起疾病，但会触发免疫系统学习防御性反应，从而产生针对SARS-CoV-2的免疫反应。2020年在与生物制药企业和国家食药检单位的沟通中，色谱耗材的进口替代越来越多地被提及，除有成本上的因素之外，更多的是供应保证上的原因。举个例子，在生物制药的质检和研发中所需的液相色谱柱往往被一两家国外公司垄断，由于疫情和国与国之间的政治贸易冲突，这些色谱柱的生产质量和稳定供应受到波及，已严重地影响了项目进展。因此，色谱耗材的“高端”进口替代刻不容缓。仪器信息网：对于2020年，给您留下印象最深的事是什么？刘晓东：基因治疗的快速发展：基因治疗（gene therapy）是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿缺陷和异常基因引起的疾病，达到治疗目的。基因治疗可以对包含血友病、帕金森症、老年黄斑变性、肌萎缩侧索硬化症、遗传性血管水肿、嗜血细胞综合征、法布里疾病等适应症多种遗传病和老年性以及恶性疾病提供有效的解决方案。然而，目前业界对基因治疗药物和相关物质的分析表征还处于探索阶段，其中液相色谱是重要的分析表征手段之一，需要色谱柱和色谱仪厂家与药物研发人员和单位的密切合作，开拓出全新的色谱表征体系。        生物制药需要性能和稳定性更好的色谱耗材：抗体类生物药物是以往十年也将是未来十年的热点。由于抗体类生物分子稳定性和结构复杂性，其色谱表征极具挑战性。目前国内生物药物研发和生产质检不可或缺的生物色谱柱几乎完全依赖进口，生物色谱柱成本和稳定供应方面具有不确定性。尤其值得关注的是：当前公认的最好的生物色谱柱经常无法满足生物药物的研发和生产所需要的分离性能和稳定性，因此需要色谱柱厂家和生物制药企业通过紧密合作和创新，不断地开发出性能和稳定性更好的液相色谱耗材。        混合机制色谱柱的“兴起”：混合基质类型的色谱柱（填料）上世纪八十年代首次出现，而其规模商品化则是在2003年以后，主要生产厂家为SIELC和Dionex （2011年被Thermo Fisher收购）。SIELC混合机制色谱柱的开发策略以取代通用型液相色谱柱为目标，产品包括PrimeSep和Obelisc系列；Dionex则是以解决色谱分析中的疑难问题为重点，从而开发出一系列专用色谱柱，例如Acclaim Mixed-Mode、Acclaim Trinity、Acclaim Surfactant和GlycanPac AXH等，其中Acclaim Mixed-Mode WCX、Acclaim Mixed-Mode WAX作为全新的色谱柱类型已被美国药典收录为L78和L85。混合机制色谱柱具有选择性独特、可调的特点，对离子性物质的分离具有很好的适用性，但由于各种原因一直没有得到市场的重视。值得注意的是全球液相色谱柱的龙头Waters 新近推出了它的首款混合机制色谱柱Atlantis PREMIER BEH C18 AX，预示着这一独特的分离模式将受到更多的关注。仪器信息网：您认为明年的色谱柱/填料市场将有哪些新需求？贵公司将重点在哪些领域发力？是否会有相应的新产品推出？刘晓东：我认为2021年液相色谱柱的市场需求主要为三个方面：1）针对单抗、多抗和ADC异质体分离的高性能分离色谱柱；2）针对基因治疗药物及相关物质表征的色谱柱；3）针对市场“痛点”或标准方法的专用色谱耗材。对应上述需求，纳谱分析重点发展领域为：1）完善单抗类生物大分子表征用色谱柱体系；在目前已商品化的BioCore Protein A亲和柱、BioCore SEC体积排阻柱、BioCore WCX和BioCore SCX阳离子交换柱以及BioCore HIC疏水作用柱的基础上，进一步开发出BioCore 阴离子交换色谱柱、BioCore Glycan寡糖色谱柱、BioCore RP完整蛋白或蛋白片段色谱柱。2）针对基因治疗药物及其相关物质的色谱表征用色谱柱及方法的开发：推出DNACore系列色谱柱。3）针对目前分析分离痛点的“专用”色谱柱，包括ChromCore PEI 聚乙烯亚胺分析专用柱、ChromCore SAA表面活性剂分析专用柱、ChromCore PAH多环芳烃分析专用柱、ChromCore vADE维生素A、D和E分析专用柱等产品。 仪器信息网：新的一年，您对行业发展有哪些新期待？请问公司设立了哪些小目标？刘晓东：2021是充满挑战、也是充满希望的一年。纳谱分析期望在以下三个方面取得实质性进展：1）不断深化进口液相色谱耗材的高端国产取代，让不同领域的广大色谱分析工作者有性能优良、价格合理、供应保证的产品可以选用；2）重点发展生物制药研发和生产中不可或缺的液相色谱柱业务，通过不断创新和完善产品线而成为这一细分领域的引领者之一；3）运用先进的色谱填料技术和设计理念，研发出针对性强的专用色谱柱用以解决当前液相色谱分离中的“痛点”问题，从而建立纳谱分析在液相色谱分离填料技术方面的领先地位。从2018年成立以来，经过近三年的努力，纳谱分析在研发、生产和推广先进的色谱耗材产品和色谱技术理念等方面取得了显著进展：建立多个核心技术平台，申请14项发明专利，并以此为基础研发出了包括生物大分子分离（BioCore）、小分子分离（ChromCore）、手性分离（UniChiral）液相色谱柱以及样品前处理产品（SelectCore）等四大系列、近千个品规的产品，并逐渐受到越来越多色谱用户的认可。我们希望通过自身的努力和广大用户的支持，争取2021年的业务与2020年相比有80%以上的增长。此外，我们希望有机会与业界的同行合作互惠，共同为提高中国液相色谱产业化水平、为广大液相色谱用户提供优质的服务尽一份力，正如纳谱分析的公司愿景所述：成为“最可信赖的色谱分离合作伙伴和创新引导者”。 【背景】液相色谱是一种重要的科学分析手段，主要应用领域包括制药、生物技术、食品安全、环境监测、化工等行业和科研中的分析检测。液相色谱的核心元素是“色谱柱”。目前全球液相色谱柱每年约有300-400万根的需求量，折合15-20亿美元的销售额，并呈稳步增长的态势。其中（生物）制药的应用是推进液相色谱柱发展的重要动力，约占液相色谱柱销售总量的三分之一。在全球范围内，液相色谱柱主要被国外厂家垄断，其中Waters 、Agilent和Phenomenex三家占有50%以上的市场份额。中国色谱柱市场需求占全球市场10%左右。然而，与坚挺的市场需求相比，国产色谱柱只占全球市场份额的2%。目前中国液相色谱柱市场主要被Agilent、Shimadzu、Waters和Thermo Fisher等国外厂家垄断，国产色谱柱在国内市场占有率仅为20%，其中绝大部分国产液相色谱柱的色谱填料或微球原料依赖进口。从色谱柱的品种来看，国产液相色谱柱品规较为单一，尤其是生物制药中研发和生产质检不可或缺的生物色谱柱基本完全依赖进口。此外，国产液相色谱柱与进口产品相比在性能和质量方面尚有明显差距。国产液相色谱柱大都集中在质量要求不高而价格敏感的应用，缺乏核心竞争力，导致其发展受到局限。因此，液相色谱柱的国产化，特别是国际水平的国产化势在必行。纳谱分析技术（苏州）有限公司旨在打造一个世界领先、自主创新的液相色谱柱的中国品牌，实现液相色谱柱及色谱材料的高端国产化，打破外国公司在核心技术和产品上对该领域的长期垄断。在此过程中，培养一批液相色谱分离材料、色谱柱装填和应用开发的专业技术人才，和一个世界一流水平的产业化团队，助力中国液相色谱产业化水平的提升，为包括生物制药在内的广大用户提供高质量的产品和优质的服务。 【嘉宾介绍】刘晓东，纳谱分析技术（苏州）有限公司联合创始人/首席科学家/董事长。美国爱荷华州立大学化学博士。曾任世界500强科学仪器公司色谱耗材全球研发总监，具有丰富的研发管理、研发创新和战略规划经验以及广阔的国际视野；资深色谱分离技术专家，专注液相色谱分离材料和色谱柱研发20余年，擅长色谱填料顶层设计、表面化学修饰、色谱柱装填和应用开发，独立完成或主导了40余个新型液相色谱分离产品的研发和生产转移；拥有80余项发明专利，撰写50余篇相关技术论文和3篇液相色谱专业书籍章节，并在各种国际大型色谱会议上作50余篇报告。2018年回国创立纳谱分析技术（苏州）有限公司，致力于液相色谱柱的创新以及国际水平的产业化。刘晓东博士的创业项目受到江苏省各级政府的大力支持，已获2018年苏州工业园区创业领军人才、2019年姑苏创业领军人才、2019年江苏省双创创业人才、江苏省海外高层次人才等荣誉。

硝苯地平，又名1,4-二氢-2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯，是一种二氢吡啶类钙拮抗剂，用于预防和治疗冠心病心绞痛，特别是变异型心绞痛和冠状动脉痉挛所致心绞痛。对呼吸功能没有不良影响，故适用于患有呼吸道阻塞性疾病的心绞痛患者，其疗效优于β受体拮抗剂。还适用于各种类型的高血压，对顽固性、重度高血压也有较好疗效。由于能降低后负荷，对顽固性充血性心力衰竭亦有良好疗效，宜于长期服用。检测方法硝苯地平，黄色结晶固体，无臭，无味，遇光不稳定。在丙酮或氯仿中易溶，在乙醇中略溶，在水中几乎不溶。本次参考中国药典2020年版，采用高效液相色谱(HPLC)检测，选用纳谱分析ChromCore 120 C18色谱柱对硝苯地平进行检测，色谱检测条件及谱图如下：结论采用纳谱分析ChromCore 120 C18色谱柱对硝苯地平进行检测，主峰具有良好的峰形，主峰与杂质峰具有良好的分离度，该方法操作简单，灵敏度高，重复性好，符合药典要求，可用于硝苯地平的测定，为该药物的质量保证提供检测依据。详细产品信息，欢迎试用：产品描述货号ChromCore 120 C18 5μm, 4.6×250mmA001-050012-04625S试用方法：扫描下面二维码进行试用申请。

Q1. 怎么改变流动相比例来延长保留时间?问题描述：做的黄酮苷，用甲醇:乙腈:四氢呋喃:醋酸(1:1:19.4:78.6)溶液做流动相，现在分离效果不理想，想延长保留时间看看怎么样，也就是增大流动相的极性，给点建议，谢谢！PS：用的C18柱。解答：用液相色谱，C18柱分离黄酮苷，不是太清楚为什么要选用甲醇+乙腈+四氢呋喃+醋酸这样一种很复杂的流动相体系，难道体积分数78.6%的醋酸是直接用的冰醋酸？这是一种很不可思议的流动相配比。建议直接使用甲醇-水，或是乙腈-水作为流动相，水相中可以适当加点甲酸或是乙酸来得到最佳分离效果。Q2. 保留时间为什么总在变？问题描述：苯甲酸的测定中流动相走了很久，进样以后，保留时间还是变，难道这个项目的柱子这么难平衡么？解答：保留时间一直在变，说明系统没有平衡好，可以从多个方面去排查原因。a.流动相可能是最主要的原因，流动相平衡时间是否充足，管路有没有气泡，流动相中有机相是否蒸发，比例阀工作是否正常？b.泵有可能存在问题，输液是否正常，压力是否稳定，泵密封垫是否完好，是否有漏点？c.色谱柱也需要排查，是否恒温，是否有漏液？Q3. 液相色谱中影响峰扩散的有哪些因素？问题描述：液相色谱中影响峰扩散的有哪些因素？与气相色谱相比，有哪些不同之处？解答：气相色谱与液相色谱在速率理论方程上的差异主要是由于气体与液体的性质差异造成的。液体的黏度比气体大约100倍，表面张力大约10000倍，密度大约1000倍；气体还具有高压缩性系数。溶质在液体中的扩散系数要远远小于在气体中，液相在传质过程中对理论塔板高度的影响尤其的大。与气相色谱速率理论方程不同的是，液相色谱增加了固定相孔结构内滞留流动相传质项。因此我们可以得知主要有以下几个方面会影响色谱峰扩张：1.涡流扩散涡流扩散是由于柱填料粒径大小不同及填充不均匀等因素造成的流动相在色谱柱内迁移过程中发生的涡流运动。2.分子扩散分子是由于进样后，溶质分子在柱内纵轴上存在浓度梯度，引起浓差扩散而使谱带展宽。由于液体流动相的传质速度较慢，分子扩散项B/u可以忽略不计。3.传质阻力溶质分子与固定相、流动相分子间存在相互作用，扩散、分配、转移的过程并不是瞬间达到平衡，实际传质速度是有限的，总是存在超前与滞后现象。这使色谱柱总是在非平衡状态下工作，从而产生峰展宽。4.流速一般难以观察到最低H对应的最佳流速，因为流速降低，H总是降低。当u>uopt时，H随着u升高而升高，传质引起的色谱峰扩张也会更明显。5.固定相颗粒大小涡流扩散项A和流动相传质阻力项Cm均与柱填料粒径dp的平方成正比，所以固定相粒径与色谱峰扩张有很大的关系。6.柱温色谱柱温直接影响到分子在固定相和流动相中的扩散系数DS和Dm，从而影响分子扩散和传质的速率。柱温升高，DS和Dm升高，分子扩散导致柱效降低；而传质改善又导致柱效升高；因此柱温对色谱峰扩张的影响是矛盾的。Q4. 液相色谱使用缓冲盐的注意事项解答：1.避免使用盐酸盐，盐酸盐对钢质有腐蚀作用。2.缓冲液最好要现配现用，往往缓冲液是良好的菌类培养液，隔天或放置长时间实验时会有很多怪现象发生。3.实验后不可用有机溶剂直接过度，有机溶剂会促使盐类析出，造成液路或色谱柱堵塞，可用95：5的水甲醇冲洗。4.使用缓冲液要及时掌握pH范围，做到胸中有数。5.清洗液路和柱子时，有温控可加热到30℃易于冲洗。6.长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出，若有白色盐类析出，可考虑一定周期用10%硝酸冲洗一下液路(拆下柱子，走30mL，再用5倍水冲洗)可以避免液路的堵塞。7.选择缓冲液要用可靠的试剂，避免不纯的盐类造成不必要的麻烦。如果流动相中有机溶剂的比例很高是不能用来冲洗缓冲盐的，是洗不出来的。通常C18柱先用5%~10%的甲醇冲洗，是可以把缓冲盐冲洗出来的，然后用纯的有机溶剂来保护柱子。最好的方法是使用与流动相相同浓度不含盐的流动相进行清洗。但就是速度慢一些。用水是为了快速替换，一般在15分钟以内最好，且用0.8的流速较好。如果用纯水冲，容易造成键合的碳链的流失，最好用5%~10%甲醇水溶液冲。可以用纯水代替流动相中的缓冲液，有机相不变。这样冲洗柱子比较稳妥。Q5. 影响出峰时间的因素有哪些？问题描述：pH值不同出峰时间不同，具体原理是什么？除了pH值会影响，还有其他因素吗？解答：流动相的pH值主要是影响到分配系数而出峰时间的不同。影响出峰时间的因素有很多，从分配系数、容量因子等各个方面考虑，与目标化合物在固定相和流动相中的分配性质有关，还与流速，压力，柱温等液相色谱仪参数有关，具体涉及下面几种因素的影响：1.目标化合物本身，具体包括分子量、结构、化合物类型、极性等；2.流动相，具体包括流动相构成、配比、流动相各组分极性，洗脱方式，流速等；3.固定相，具体包括固定相种类，结构，色谱柱长度等；4.分配系数与容量因子，具体包括化合物在流动相与固定相之间的分配情况，柱温等。Q6. 有没有方法将保留时间提前？问题描述：我现在用液相色谱做含量测定时，保留时间太长，20分钟左右才出峰，有没什么方法提前，原理是什么？解答：可以从通过改变目标组分容量因子k的方式，以及缩短柱长增加柱温等方式，具体可以采取以下方法：1.调整流动相，具体包括流动相构成、配比、流动相各组分极性，洗脱方式，提高流速等；2.调整固定相，具体包括固定相种类，结构，缩短色谱柱长度等；3.增加柱温，降低流动相传质阻力等。Q7. 流动相使用前为什么要脱气？解答：首先我们了解一下不脱气可能造成的影响：1.气泡会增加基线的噪音，造成灵敏度下降，甚至无法分析（噪声增大，基线不稳，突然跳动）。2.溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化，柱中固定相（如烷基胺）发生反应，降解而改变柱的分离性能。3.溶解氧能与某些溶剂（如甲醇、四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收（特别是在260nm以下），并导致检测灵敏度的轻微降低，会在梯度淋洗时造成基线漂移或形成鬼峰（假峰）。4.若用FLD（荧光检测器），溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。在某些情况下，荧光响应可降低达95%。脱气的作用：除去其中溶解的气体（如O2），以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡。排出气泡能减少泵工作的伤害，提高UV检测器的性能高，改善灵敏度。脱气的方式：加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染，同时需要考虑低沸点溶剂挥发造成的组成变化。1.抽真空脱气法：易抽走有机相。2.超声脱气法：流动相放在超声波容器中（一般500mL溶液需超20~30min），此法不影响溶剂组成。超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不要高出水面太多。3.氦气脱气法：在色谱操作前和进行时，将惰性气体喷入溶剂中。严格来说，此方法不能将溶剂脱气，它只是用一种低溶解度的惰性气体（通常是氦）将空气替换出来。主要利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好，但成本高。4.在线真空脱气法：利用在线脱气机在线脱气，智能控制，无需额外操作，成本低，脱气效果明显优于以上几种方法，并适用于多元溶剂体系。Q8. 怎样提高高效液相色谱法的柱效？解答：1.要想提高液相色谱法的柱效，应当用小而均匀的固定相颗粒填充均匀，以减小涡流扩散和流动相传质阻力，这是最佳的提升柱效的方法。2.改进固定相的结构，可以减小滞留流动相传质阻力以及固定相传质阻力。3.选用低粘度的流动相(如甲醇、乙腈等)，也有利于减小传质阻力，提高柱效。4.合适的柱温，也会影响到柱效。5.降低流速、增加柱长也可以提高柱效。Q9. 用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移,有时发生快速变化,原因何在?如何解决?解答：关于漂移问题1.温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定2.流动相发生変化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3.柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题1.流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定2.泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。3.流动相不合适,解決办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合Q10. 为何会基线漂移？怎么解决？解答：原因1.柱温波动。(即使是很小的温度变化都会引起基线波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。)2.流动相不均匀。(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。)3.流通池被污染或有气体4.检测器出口阻塞。(高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线)5.流动相配比不当或流速变化6.柱平衡慢,特別是流动相发生变化时7.流动相污染、变质或由低品质溶剂配成8.样品中有强保留的物质(高K值)以头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。9.使用循环溶剂,不提倡。未调整检测器。10.检测器没有设定在最大吸收波长处。解决方法1.控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器。2.使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气,使用中使用在线脱气或氦气脱气。3.用甲醇或其他强极性溶剂中洗流通池。如有需要,可以用1N的的酸,(不要用盐酸）。4.取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。5.更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。6.用中等强度的溶剂进行冲洗。更改流动相时,在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。使用离子对试剂、缓冲盐更应注意平衡柱。7.检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。8.改变分析条件。使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。9.重新设定基线。使用新的流动相。10.将波长调整至最大吸收波长处。重选检测波长。Q11. HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法解答：1.样品量不足,解决方法为増加样品量。2.样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子。3.样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检器4.检测器衰减太多。调整衰减即可。5.检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数。6.检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。7.检池中有气泡。解决办法为排气。Q12. 如何进行色谱柱的维护？解答：1.建议检测前样品和流动相进行过滤。2.建议每天做完样品后及时进行清洗。3.常规检测：测试完后直接把色谱柱反向连接采用90%有机相冲洗45min，最后保存在纯甲醇或纯乙腈中。4.使用缓冲盐条件：a.等度条件：使用缓冲盐之前和之后都用过渡流动相以1mL/min流速冲洗45minb.梯度条件：使用缓冲盐之前与初始流动相组成相同的过渡流动相以1mL/min流速冲洗45min。注意：过渡流动相是指有机相和水相比例与分析流动相相同比例，只是不含有缓冲盐。c.缓冲盐冲洗干净后，采用90%有机相反向冲洗60min，最后保存在纯有机溶剂中。注意：如果使用缓冲液不能存留色谱柱中过夜。Q13. 规则的基线噪音是如何产生的解答：原因1.在流动相、检测器或泵中有空气(尖锐峰)。2.漏液。3.流动相混合不完全。4.温度影响(柱温过高,检测器未加热)。5.在同一条线上有其他电子设备(偶然噪声）6.泵振动解决方法1.流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。2.检查管路接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换泵密封。3.用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂。4.减少差异或加上热交换器。5.断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正。采用精密级稳压电源。6.在系统中加入脉冲阻尼器。Q14. 不规则的基线噪音是如何产生的解答：原因1.漏液。2.流动相污染、变质或由低质溶剂配成。3.流动相各溶剂不相溶4.检测器/记录仪电子元件的问题5.系统内有气泡6.检测器内有气泡7.流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音。8.检测器灯能量不足9.色谱柱填料流失或阻塞10.流动相混合不均匀或混合器工作不正常解决方法1.检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换密封。检查流通池是否漏液。2.检査流动相的组成。3.选择互溶的流动相4.断开检测器和记录仪的电源,检查并更正。5.用强极性溶液清洗系统6.清洗检测器,在检测器后面安装背景压力调节器7.用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池8.更换灯9.更换色谱柱维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,建议不使用泵的混合装置Q15. 氨基柱在进酸性样品时，很伤柱子，如使用一段时间后，柱效降低，峰形改变，如何恢复？解答：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱(冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨)，之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。Q16. 做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？解答：1.泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理。2.比例阀失效，更换比例阀即可。3.泵密封垫损坏，更换密封垫即可。4.溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法。5.系统检漏，找出漏点，密封即可。6.梯度洗脱，这时压力波动是正常的。Q17. HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？解答：柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因：1.拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查。2.把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查。3.将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查。只用于使用过的柱子。4.更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题。Q18. 流动相出现气泡的原因有哪些？解答：1.流动相溶液中往往因溶解有氧气或空气而形成气泡。2.液路阻力比较大，吸液时出现了真空气泡。3.系统开始工作时未能将流路中的空气排除干净。4.在注入样品时混入了空气。

   摘要在采用高效液相色谱进行分析方法开发时，色谱柱的选择直接影响了分离效果的好坏，选择合适的色谱柱可以缩短方法开发所需的时间，并且使方法更具稳定性。但是现在市场上色谱柱种类繁多，不同类型的色谱柱分离对象不同，因此，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。本文结合以往经验及对色谱柱的一些认识进行了简要的汇总，从分离模式选择、样品信息、色谱柱参数三个方面进行简述，以期为方法开发时色谱柱的选择提供思路。纳谱分析液相色谱柱种类繁多，在选择合适的色谱柱之前，首先必须选择HPLC的分离模式，根据使用的固定相和流动相的组合不同，可以得到下列各种各样的分离模式。了解样品了解待检样品的结构、分子量、溶解性、离子化、极性、pH值等物理化学性质，再参照下图选择适合的分离模式和合适的液相色谱柱固定相：色谱柱参数色谱柱性能影响因素中包括硅胶纯度、色谱柱尺寸、颗粒形状、粒径、表面积、孔径，化学性质包括键合类型、碳覆盖率、封端，下面依次介绍各参数对色谱柱性能的影响。硅胶纯度硅胶纯度对强极性化合物的分离最为重要，残留金属离子浓度、硅胶的杂质会影响化合物的峰形，硅胶表面的金属含量高会影响碱性化合物的峰形，易发生拖尾。纳谱分析采用的纳微科技UniSil硅胶，是利用高纯的有机硅烷试剂作为原材料生产制得，其金属含量都在10ppm以下，纯度高于国外高纯度色谱硅胶。 色谱柱尺寸增加色谱柱长度，可以在一定程度上提高柱效，但也会升高压力和导致峰展宽；含量测定、溶出检测等对于分离的要求较低，可选用较短的色谱柱，减少运行时间。内径大，提高载样量，但也会增加横向扩散，同样会导致峰展宽。内径小的色谱柱灵敏度较高，峰型更窄，但是载样量较小。如果载样量满足要求，需要更高更尖锐的峰提高灵敏度，可以选择更小内径，但压力较大，对系统要求较高。短柱（15-100mm）运行时间短、柱压低；长柱（150-250mm）分辨率高、运行时间长；小内径（≤2.1mm）检测器灵敏度高；大内径（3-21.2mm）载样量高、耐污染、寿命长。颗粒形状粒径球形颗粒柱效高、重现性好、柱床结构均匀，不规则形柱床结构不均匀、流动相线速度不均匀，容易谱带展宽；当使用粘度较大流动相时，球形颗粒可降低柱压，延长色谱柱寿命。纳谱分析采用的纳微UniSil硅胶微球在电子显微镜下呈现严格的单分散球形，而某国际品牌呈现不均一球形，表面缺陷清晰可见。粒径粒径指柱填料颗粒直径的大小，实际上色谱柱上所标的粒径是一个平均值，通常1.5-10μm。粒径小的色谱柱分离度较好，但色谱柱压力更大，如果5μm粒径的色谱柱分离度稍有不足，则同型号3μm色谱柱的分离度一般会提供令人满意的选择性。目前纳谱分析主要可供选择的填料粒径如下：1.8μm为快速液相色谱柱，匹配UPLC3.0μm用于一般普通快速分析，常用于分离复杂的多组分样品5.0μm用于常规分析平均粒径越小，颗粒分布度越小，色谱柱柱效越高，但耐污染性能下降，反压亦越高。UniSil硅胶微球的粒径分布要远远好于国外知名品牌，拥有极窄的粒径分布。表面积表面积是指颗粒外表面与内部孔面积的总和，以m2/g表示，高表面积对于多组分样品的分离具有较强的保留能力、柱容量和分离度；表面积低的柱填料能迅速达到平衡状态，对于梯度洗脱尤为重要。孔径孔径是指填料颗粒的孔或腔的平均尺寸，范围是120～300Å，多孔色谱填料与目标物的作用绝大部分（＞95%）是发生在填料颗粒的内部，即孔内的，所以孔对于色谱填料也是最重要的参数之一，一款填料孔径大小(Pore Size)和孔径分布(Pore Size Distribution)，在绝大多数的色谱分离纯化中，起到关键性作用。大孔径的填料颗粒可以延长大分子溶质在填料表面的滞留时间，达到充分分离，改善峰形，所以大孔径填料适合分离大分子化合物或者水动力体积较大的分子；较小孔径提供较高的表面积，可用于较大的载荷量，并保留小的有机化合物，可用于小分子有机物到聚合物的分离。 样品分子直径小于平均孔径才能进入微粒内部，所选色谱柱孔径至少是样品流体学直径的4倍，一般根据样品的分子量选择适合的孔径。分子量＜2000， 选择孔径80～180Å分子量＞2000，选择孔径300Å，300Å全多孔色谱柱可用于分离蛋白质和多肽。不同的载碳量载碳量越高，固定相传质效应增加，高载碳量，有利于不易保留化合物的分离，水解稳定性好，重现性好；低载碳量，有利于分析有一定保留的化合物，降低溶剂损耗、减少运行时间。一般C18载碳量为10～14%，ChromCore 120 C18载碳量高达18%。可以通过增加碳键的长度或键合密度来增加载碳量，载碳量增加了有利于不易保留化合物的分离。试用：纳谱分析提供色谱柱和固相萃取柱免费试用。您可扫描以下二维码进行试用申请。

冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordyceps sinensis（BerK.）Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体。夏初子座出土、 孢子未发散时挖取，晒至六七成干，除去似纤维状的附着物及杂质，晒干或低温干燥。主治补肾益肺，止血化痰。用于肾虚精亏，阳痿遗精，腰膝酸痛，久咳虚喘，劳嗽咯血。检测方法腺苷是一种核苷类物质，是虫草素的直接前体。腺苷分子式为C10H13N5O4，分子量为267，熔点为234-235摄氏度，易溶于水。腺苷是冬虫夏草重要成分之一，也是冬虫夏草的指标性物质之一。《中国药典》2020年版中就有明确规定，冬虫夏草作为药物，其腺苷含量不得低于0.01%。腺苷本身具有多种生物活性，是一种遍布人体细胞的内源性核苷，可直接进入心肌经磷酸化生成腺苷酸，参与心肌能量代谢，同时还参与扩张冠脉血管，增加血流量。腺苷对心血管系统和肌体的许多其它系统及组织均有生理作用。本次参考《中国药典》2020年版，采用高效液相色谱法(HPLC)，选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对冬虫夏草中腺苷成份进行分离和检测，色谱检测条件及谱图如下：实验结论本次参考《中国药典》2020年版，选用ChromCore C18反相色谱柱对冬虫夏草中的腺苷成份进行分离，使主峰拥有良好的峰型及分离度，周围无干扰杂峰，符合药典规定，为该药物的质量保证提供检测依据。详细产品信息，欢迎试用产品描述货号ChromCore C18 5μm, 4.6×250mmA001-050018-04625S试用方法：扫描以下二维码进行试用申请。

对于每一个身经百柱的实验人员来说，液相色谱图是他们打开未知物质世界的大门钥匙，科研中的很多问题都能从色谱图中得到很好的反映，有些问题可以通过改变设备参数得到解决，而有些问题则必须通过修改操作程序来解决，毕竟，正确选择色谱柱和流动相才是得到好的色谱图的关键。在此根据大家实践中可能会经常遇到的一些图谱问题进行了整理汇总，大家一起来看一下吧。1、拖尾峰1、筛板阻塞：柱子两头的过滤筛板如果堵塞，样品就会在筛板部分受阻而形成时间延迟，使得样品在柱后流出时峰型形成拖尾。需要通过反冲色谱柱，或者更换筛板。2、色谱柱塌陷：是指色谱柱由于其它原因引起了柱效率丧失，不能对物质形成保留，使得物质不在固定相上保留而随流动相流出，但是又还有一点柱效，因此形成拖尾。需要重新填充色谱柱或者更换色谱柱。3、有污染：即样品不在同一起跑线起跑，从后面开始跑得到达终点稍晚，表现出拖尾。更换色谱柱或者采用有机溶剂梯度洗脱1h以上，以冲洗柱子。4、流动相PH值选择错误：如某PH下有的样品存在分子型和离子型的动态平衡，离子型的陆续向分子型转化就会表现出拖尾。调节PH值可抑制分子解离，改善拖尾，对于碱性化合物，相对较低的PH值更有利于得到对称峰。2、前沿峰1、样品过载：被保留的样品在正常出峰时间前陆续出来，形成前沿峰。降低样品含量。2、样品溶剂选择不恰当：当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰，例如，在反相色谱中用乙腈做样品溶剂，而流动相的洗脱力较弱时会出现前沿峰。选择流动相或者接近流动相的比例作为样品溶剂。3、色谱柱损坏：色谱柱柱效损失，不能对物质形成保留。更换色谱柱。4、在大峰前有小峰出现，假象前沿峰，即大峰前包埋了没有分开的小峰。调整流动相洗脱梯度。3、倒峰1、样品折射率小：示差折光检测器测的信号是折射率，出现倒峰的原因是组分的折射率小于流动相。2、密度的原因：密度不一样，出来的峰正倒不一样。3、进样所致：进样时，样品对原有流动相产生瞬间阻断，然后瞬间涌流，所以产生先倒后高的“溶剂峰”。4、基本不可避免：试着使用与流动相相同的溶剂作为溶样溶剂，另外进样之前注意平衡跟冲洗参比池。倒峰基本上不能避免，但是这样操作会小些。4、包裹1、色谱柱问题：色谱柱流失，柱子被污染。2、样品溶解度差：温度可能会影响到溶解度。3、流动相不均匀：一般是流动相没配好，管路流动相不均匀，也会导致上述现象。5、基线漂移1、柱温波动：即使是很小的温度变化都会引起基线的波动，通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。使用柱温箱，控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器。2、流动相不均匀：流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。使用HPLC级的溶剂，流动相在使用前进行脱气处理。3、流通池被污染或有气体：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。4、流动相配比不当或流速变化：更改配比或流速，为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。5、样品中有强保留的物质：以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。6、出现宽峰1、色谱柱污染或失效，造成塔板数降低：更换同样类型的色谱柱，如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。2、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大：更换内径较小的短管路。3、检测器对反应时间或池体积响应过大：减少响应时间或使用更小的流通池。7、基线噪音1、在流动相、检测器或泵中有空气(尖锐峰)：流动相脱气，冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。2、漏液：检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。3、流动相混合不完全：用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂。4、温度影响(柱温过高，检测器未加热)：使用柱温箱，减少温度差异或加上热交换器。5、在同一条线上有其他电子设备(偶然噪声)：断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。采用精密级稳压电源。8、分离度不够1、流动相梯度洗脱设置不合理：优化梯度洗脱程序。2、流动相污染或变质(引起保留时间变化)：重新配置流动相。3、保护柱或分析柱阻塞：去掉保护柱进行分析，如果必要则更换保护柱；如果分析柱阻塞，可进行反冲；如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序；如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。文章内容来源网络，转载仅为分享知识，如有侵权请联系删除。

腊八粥，又称“七宝五味粥”、“佛粥”、“大家饭”等，是一种由多样食材熬制而成的粥。“喝腊八粥”是腊八节的习俗，腊八粥的传统食材包括大米、小米、玉米、薏米、红枣、莲子、花生、桂圆和各种豆类（如红豆、绿豆、黄豆、黑豆、芸豆等）。薏苡仁，中药名，为禾本科植物薏米Coix lacryma-jobi L.var.ma-yuen(Roman.) Stapf的干燥成熟种仁。秋季果实成熟时采割植株，晒干，打下果实，再晒干，除去外壳、黄褐色种皮和杂质，收集种仁。中医认为薏米具有健脾、补肺、清热、渗湿的功能，经常食用对慢性肠炎、消化不良等症也有良效。富含膳食纤维的薏米有预防高血脂、高血压、中风及心血管疾病的功效。检测方法甘油三油酸酯，分子式：C57H104O6，不溶于水，微溶于乙醇，溶于氯仿、乙醚、四氯化碳。在《中国药典》中，明确要求薏苡仁药材按干燥品计算，含甘油三油酸酯不得少于0.5%。本次参考中国药典，采用高效液相色谱(HPLC)检测，选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对薏苡仁中甘油三油酸酯进行分离和检测，色谱检测条件及谱图如下：Column:            ChromCore C18, 5 μmDimension:       4.6×250 mmMobile Phase:   65/35 v/v 乙腈/二氯甲烷Flow Rate:        1.0 mL/minTemperature:    30 ℃Injection:          10 μLDetection:         蒸发光Sample:            薏苡仁Peak:                1. 甘油三油酸酯实验结论采用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对薏苡仁中甘油三油酸酯进行分离和检测，主峰峰形良好，周围无干扰杂峰，该方法操作简单，灵敏度高，重复性好，符合药典要求，可用于薏苡仁中甘油三油酸酯的分离和测定，为该药物的质量保证提供检测依据。详细产品信息，欢迎试用产品描述货号ChromCore C18 5μm, 4.6×250mmA001-050018-04625S试用方法：扫描以下二维码进行试用申请。

在操作高效液相色谱时，你有没有为老是出现气泡而崩溃？有没有为超声波震荡了一个小时，流动相还出现气泡，而晕倒？有没有为天气晴好的时候没出现气泡，阴天、下雨天，同一瓶，出现了气泡，而对自己的工作失去信心？在操作高效液相色谱时，流动相出现气泡，那整个工作就变得非常困难。超声波震荡了一个小时的流动相，为什么天气晴好的时候没出现气泡，阴天、下雨天就会出现；是因为阴天、下雨天空气气压下降，引起溶在流动相中的空气过饱和（晴天时气压高还没饱和），当高压泵抽取流动相时，空气析出，产生了气泡。超声波震荡了一个小时的流动相，为什么里面还有空气呢？这是由于在常压下震荡，驱赶空气效果不行。如果把装流动相的瓶子进行抽真空，同时进行超声波震荡，效果会怎么样呢？效果非常好，只要1min，流动相中的空气差不多没了；经过这样驱逐空气的流动相，阴天、下雨天使用也不会出现气泡了；而且省时，不用动不动半小时、一小时超声波震荡；并且效果非常好。由于气泡的存在，会造成色谱图上出现尖锐的噪声峰，严重时会造成分析灵敏度下降；气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定，使基线起伏。气泡产生原因及解决办法1. 故障原因：溶剂混合时，由于两种液体热力学体积的变化，会产生气泡；混合时放热或者吸热易产生气泡，比如：甲醇和水混合属于放热，乙腈和水混合属于吸热。通常用量筒混合后明显看到体积的增减，而且有许多小气泡产生，挂在瓶壁上，或者晃一下可以看到许多小气泡存在液体中。  故障排除：对溶剂过滤，超声脱气（常用），尤其是乙腈和水混合后，超声脱气时间要长一些，也可以通过其他方法脱气，例如安装在线脱气机，充氮脱气等。处理好的液体在使用过程中应该保持室内温度恒定。2. 故障原因：溶剂滤头污染，导致泵在吸液过程中吸力不均匀而强制吸液从而产生微小的真空气泡。此时会观察到进液管壁上分布许多很小的气泡，有的在动有的停留在管壁上，或者感觉流速比设定值小，压力也不稳。 故障排除：先观察现象确认，再排除。用5%—10%的稀硝酸浸泡过夜（怕超声的滤头）或者超声处理数小时（可以超声的滤头），然后用纯水浸泡过夜或者超声处理，注意换水多处理几次，洗掉酸的残留，最后用有机相甲醇浸泡处理或者超声即可。若上述处理未果，需更换新的溶剂滤头。3. 故障原因：流动相放好后，没有排气，就开始运行泵，易产生气泡。 故障排除：放好流动相后，打开旁通阀，用注射器慢慢吸液，观察进液管无气泡后再吸10ml将流路中的空气驱赶干净，旋紧旁通阀后再运行泵，或者是打开旁通阀大流速排液，观察进液管无气泡后，再排气2min将流路中的空气驱赶干净，旋紧旁通阀后再运行泵。4. 故障原因：单向阀或者泵头内部污染。（泵的压力波动一般在100psi以上就要考虑了）泵头是压力变化最剧烈的地方，也是最易产生气泡的地方，泵头靠负压而吸液，而负压必然使流动相中的小气泡长大，当泵腔变正压时，已长大的气泡未必能全部变小流入后续液路，则泵腔内将积存气泡，从而影响吸液精度。 故障排除：小心拆下泵头，用甲醇超声清洗单向阀以及内部密封圈和泵头整体，用棉花沾甲醇擦拭柱塞杆。必要时更换单向阀，密封圈，柱塞杆等。5. 故障原因：进样时带入气泡，吸样时带到进样针中气泡  故障排除：在进样前，注意排出进样针里的空气，将进样针头垂直向上，用手指垫上滤纸摁住针头处，往上推，气泡很容易就上去了，排出即可。6. 故障原因：色谱柱进气泡  故障排除：用纯甲醇低流速（0.2-0.3ml/min）长时间冲洗反相色谱柱，随后可逐步加大流速，最大加到1ml/min，直至色谱柱压力稳定。或者更换色谱柱。 7. 故障原因：流通池是易积存气泡的地方，其对基线影响较大，流动相流入色谱柱后，压力越来越小，微小气泡将逐渐长大，而流通池截面积相对较大，则气泡在池内易长大，在无外压的情况下，很难缩小到管路内径以下流出流通池，从而存在了池内，导致基线很乱。 故障排除：在废液出口处加反压调节器（压力一般在150psi左右），为流通池提供一个背压；其次是用手指堵废液管出液端，眼看泵柱压上升（约2-3s），松开，且同时看检测器显示屏上吸光度值的变化。如果池内有气泡，则手指堵废液管，吸光度值将剧烈变化，当手松开后吸光度值再次大步上升，证明池内有气泡但没有排掉，当手指堵住和松开废液管时，吸光度值基本不变时，证明排气泡成功，再观察基线将稳定（此过程需要重复10-20次）。 以上为等度系统气泡的故障排除，望各位同行和工作者多多指教，商榷。给予纠正，有不妥之处，及时沟通。

板蓝根颗粒板蓝根颗粒主要成分为板蓝根，辅料为蔗糖，糊精。板蓝根又名靛青根、蓝靛根、大青根，是一种中药材。中国各地均产，分为北板蓝根和南板蓝根，北板蓝根来源为十字花科植物菘蓝和草大青的根；南板蓝根为爵床科植物马蓝的根茎及根。具有清热解毒，凉血利咽。用于肺胃热盛所致的咽喉肿痛、口咽干燥、腮部肿胀；主治急性扁桃体炎、腮腺炎见上述证候者。检测方法板蓝根中尿苷、鸟苷、（R，S）-告依春、腺苷的含量，是2020版《中国药典》中板蓝根颗粒的重要控制指标之一。本次参考中国药典2020年版，采用高效液相色谱(HPLC)检测，选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对板蓝根颗粒中有效成分的含量进行分离和检测，色谱检测条件及谱图如下：Column:           ChromCore  C18, 5 μmDimension:      4.6 × 250 mmMobile phase:  A）甲醇                           B）水Gradient:           t (min)          A                B                           0                  3                97                           3                  3                97                          20                10              90                          40                70              30                          50                70              30                          51                 3               97              Flow rate:         0.8 mL/minTemperature:   30 ℃Injection:          5 μLDetection:        UV 254 nmSamples:          板蓝根颗粒Peaks:              1. 尿苷                          2. 鸟苷                          3. (R,S)-告依春                          4. 腺苷结论选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对板蓝根颗粒中有效成分的含量进行分离和检测，各有效成分峰形良好，该方法操作简单，灵敏度高，重复性好，符合药典要求，可用于板蓝根颗粒中有效成分的分离和测定，为该药物的质量保证提供检测依据。详细产品信息，欢迎选购：产品描述货号ChromCore C18 5μm, 4.6×250mmA001-050018-04625S

Part 01载气的选择气相色谱可选择的“流动相”(载气)的范围较窄，满足需要的载气主要有氢气、氦气、氮气以及氩气。其中氢气是最好的载气，使用氢气作为载气的时候，分离的效率是最高的，大概是使用氦气的分离效率的2倍，是使用氮气的分离效率的四倍。这一点非常重要，如在使用气相手性分析色谱柱对异构体进行拆分的时候，虽然三种载气通过调整最佳线速度得到近乎相同的塔板高度以及柱效，但实际情况下，我们会发现氮气的色谱峰宽最大，氦气下的峰宽其次，氢气下的峰宽最小，表观柱效最高，分离情况最为让人满意。Part 02GC–MS色谱柱分析灵敏度和检测极限是信噪比（S / N）的函数，噪声的降低会提高灵敏度。所有GC色谱柱都会流失，而极性固定相和较厚的膜更容易流失，固定相聚合物的这种正常降解会导致基线噪声增加。当存在过量的氧气且温度更高时，降解会加速；因此，随着温度升高到色谱柱的上限，基线升高了。用于气相色谱-质谱（GC-MS）的指定色谱柱（MS柱）经过精心设计，可在高温下减少流失和高惰性，从而最终提高信噪比。许多检测器对泄漏产物的污染很敏感，并且在使用低排放柱时需要较少的维护。对于GC-MS应用，低流失固定相减少了色谱柱对背景噪声的影响，从而提高了质谱纯度和更准确的库识别。Part 03超高惰性色谱柱近年来，制造商开发了使GC色谱柱失活的新方法，即超高惰性色谱柱（UI柱），由于它们具有低流失和低硅烷醇活性，因此提高了灵敏度。分析碱或极性化合物或某些特定应用（例如农药，食品，环境或药物分析）时，降低硅烷醇活性尤其重要，所有这些都需要不断降低的检测限。色谱柱中的活性硅烷醇会与碱或极性化合物发生相互作用，并导致峰拖尾，这会影响灵敏度（通过降低峰高（相对于基线噪声）），并使积分（并因此定量）更具挑战性且重现性较低。只有在具有惰性流动路径的系统（即进样口衬管和填料，色谱柱，离子源等）的情况下，才能充分实现高度失活色谱柱的优势。如果在进样口出现峰拖尾，则仅在色谱柱中低硅烷醇活度带来的任何优势都将得到缓解。大多数制造商提供高度惰性的易损件，包括衬管和填料进样口。Part 04气相色谱柱固定相的选择如果对选择何种固定相拿不定主意，那就先从BP-1或BP-5开始选择。柱流失较低的色谱柱通常为化学惰性且使用温度极限较高。若能够满足分离度和分析时间的要求，则选择极性最小的固定相。非极性固定相的使用寿命优于极性固定相。所选固定相的极性与溶质的极性相同，这种选择方法很有用，但是使用这种方法不能总是选择出最合适的固定相。如果分离效果较差的溶质分子具有不同的偶极子或氢键强度，可以改变固定相偶极子的数量(未必更多)或氢键作用的大小。但是，固定相改变后其它分析物可能会被同时洗脱出来，因此新的固定相可能无法提供整体上较好的分离效果。如果可能，避免使用与选择性检测器连接时能产生较大响应信号的固定相。例如含氰丙基的固定相（BP-624、BP-1701、BP-1301等）与NPDs检测器连接时，基线(由于柱流失)会不成比例的大幅上升。100%甲基（BP-1）或5%苯基（BP-5）、50%苯基（BP-50+MS）、6%氰丙基苯基（BP-624）、14%氰丙基苯基（BP-1701）以及WAX系列PEG固定相（BP-INOWAX）基本涵盖了色谱柱的选择范围。PLOT色谱柱用于分析高于柱温的气态样品。Part 05分流进样比例不分流进样用于低浓度样品，以提供最佳灵敏度。与分流进样相比，样品从进样口的蒸汽传输要慢得多，从而导致谱带展宽；因此，必须使用较低的初始柱箱温度将样品蒸气截留在色谱柱的顶部。如果可以牺牲一些灵敏度，最好采用小比例的分流进样，主要有以下几方面的好处：更好的峰形：更快地迁移出衬管，这会将分析物以较窄的谱带引入色谱柱。无需低温冷却：分析物以较窄的谱带引入；因此，无需降低柱箱温度即可将其聚焦在色谱柱的顶部。较短的运行时间：可以在较高的柱箱初始温度下开始分析，从而减少了运行时间和柱箱再平衡时间。使用等温方法：不需要较低的初始烘箱温度，可以使用从较高温度开始的等温方法。这些方法对于包含更高沸点成分的样品特别有用。1:10的分配比例有利于平衡灵敏度和分流进样的好处。Part 06载气节流模式可在分流进样期间使用载气节流模式，在样品进样后的指定时间更改分流比，从而减少载气消耗。例如，如果在进样后1分钟将分流流速从150 mL / min降低到25 mL / min（在使用节气阀之前确保所有样品和溶剂蒸气已转移到色谱柱上），分流可以在整个分析过程中保持速率不变，直到下一次分析为止。在这些条件下，每次分析可节省79％的气体：分析时间：20分钟；分流比：100：1; 省气模式：1分钟后分流比为15；柱温：100°C; 色谱柱：30 m×0.25 mm×0.25 µm。Part 07点火氢焰气相色谱仪开机时需要点火，有时因各种原因致使熄火后，也需要点火。然而，我们经常会遇到点火不着的情况 ，下面介绍两种点火技巧，供同行们相试。加大氢气流量法先加大氢气流量，点着火后，再缓慢调回工作状况，此法通用。减少尾吹气流量法先减少尾吹气流量，点着火后，再调回工作状况，此法适用于用氢气作载气，用空气作助燃气和尾吹气情况。毛细管柱设置尾吹气，能快速将样品组分吹送入检测敏感区，消除检测器死体积的柱外效应，从而消除柱后死体积对分离测定的影响，达到改善柱效和色谱图峰形的效果。Part 08进样技术在定量分析中，应注意进样量读数准确。在气相色谱分析中，一般是采用注射器或六通阀门进样，在考虑进样技术的时候，主要是以注射器进样为对象。进样量进样量与气化温度、柱容量和仪器的线性响应范围等因素有关，也即进样量应控制在能瞬间气化。达到规定分离要求和线性响应的允许范围之内 ，填充柱冲洗法的瞬间进样量：液体样品或固体样品溶液一般为0.01～10微升，气体样品一般为0.1～10毫升，在定量分析中，应注意进样量读数准确。（1)排除注射器里所有的空气用微量注射器抽取液体样品时，只要重复地把液体抽入注射器又迅速把其排回样品瓶，就可做到这一点。还有一种更好的方法，可以排除注射器里所有的空气，那就是用计划注射量的约2倍的样品置换注射器3～5次。每次取到样品后，垂直拿起注射器，针尖朝上，任何留在注射器里的空气都应当跑到针管顶部，推进注射器塞子，空气就会被排掉。（2)保证进样量的准确用经置换过的注射器取约计划进样量2倍左右的样品，垂直拿起注射器，针尖朝上，让针穿过一层纱布，这样可用纱布吸收从针尖排出的液体，推进注射器塞子。直到读出所需要的数值。用纱布擦干针尖 ，至此准确的液体体积已经测得，需要再抽若干空气到注射器里，如果不慎推动柱塞，空气可以保护液体使之不被排走。进样方法双手拿注射器，用一只手(通常是左手)把针插入垫片，洼射大体积样品(即气体样品)或输入压力极高时，要防止从气相色谱仪来的压力把柱塞弹出(用右手的大拇指)让针尖穿过垫片尽可能深的进入进样口，压下柱塞停留1～ 2秒钟，然后尽可能快而稳地抽出针尖（继续压住柱塞)。进样时间进样时间长短对柱效率影响很大，若进样时间过长，会使色谱区域加宽而降低柱效率 。因此，对于冲洗法色谱而言，进样时间越短越好，一般必须小于1秒钟。Part 09气化温度的设置气化温度的高低对组分的分离和峰形有很大影响。温度过低，产生前沿峰；温度过高，峰前沿直立或出现分解产物的色谱峰。气化温度选择一般根据样品组成、样品量和使用色谱柱类型以及柱温来选择，如柱上进样，由于柱头插入气化室，温度过高超过色谱柱的最高限值，往往会使柱头前沿部分固定相的剥落或分解，造成基线不稳和出现“鬼”峰。Part 10遇到问题，先想到检漏遇到保留时间，重复性，灵敏度相关的问题，先想到检漏1）载气检漏，在更换载气时进行检漏操作，载气泄露会导致上述最常见问题出现，甚至会对气相色谱仪的硬件造成损害(流量控制）；2）进样口是容易泄露的区域，因此进样口的检漏非常有必要。如何避免进样口泄露：及时更换隔垫和衬管的橡胶密封圈；定期检查接柱子的石墨密封垫；对进样口进行憋压测试和流量测试。

色谱柱是液相色谱仪的最核心部件，价格相对昂贵，请牢记它是高档仪器中的高档部件，给它以足够的尊重和关怀。如避免强烈的碰撞和震动，不要让柱床变干，避免在严寒环境受冻等。在内容正式开始之前，我们先了解一下液相色谱柱的基本结构，色谱柱由接头、螺帽、柱管、填料、垫圈及过滤片等组成。色谱柱安装、启用和维护1、柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配色谱柱是消耗品，不是仪器原配的情况很多。如果接头和柱头深度不匹配将会产生漏液或者死体积过大的现象。接头比柱头深度长，不易拧紧而漏液；接头比柱头深度短，柱头内留有空隙而产生死体积，使谱带展宽和峰拖尾。2、溶剂的匹配转换色谱柱内保存溶剂和仪器系统内存留溶剂，如果和流动相不匹配，使用前需进行转换。特别是流动相含缓冲盐时，如保存溶剂是纯有机相或有机相比例高，直接将新柱接入使用，会导致缓冲盐在柱内结晶析出，最严重会将新柱永久不可逆地损坏。正相柱保存溶剂一般为正己烷，如果要转换成HILIC柱模式使用，由于正己烷和甲醇乙腈的互溶性不好，转换中间需用二氯甲烷或乙酸乙酯过渡。3、正确使用缓冲盐缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂，因此缓冲盐使用不当会使其析出，堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙，使填料板结，柱压上升；同时阻碍了基质上键合的碳链自由舒展，使色谱柱的保留能力下降，柱效降低。缓冲盐析出后，去除非常困难，因此，正确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要。正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出，因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话：使用前要过滤，使用后要冲洗。具体方法如下：1、等度条件：使用缓冲盐前和使用后需用过渡流动相以1.0mL/min流速冲洗10个柱体积；使用后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相以0.2mL/min流速冲洗色谱柱过夜。2、梯度条件：用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前，用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1.0mL/min流速冲洗10个柱体积。含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓，以避免梯度过程中缓冲盐析出。注意：过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同，区别只是过渡流动相不含缓冲盐。3、缓冲盐析出的补救方法：1）方案1：用甲醇/水=20/80以1.0mL/min流速35摄氏度条件下反向冲洗色谱柱120min；2）方案2：用甲醇/水=20/80以0.2mL/min流速反向冲洗色谱柱过夜。4、新柱使用前的平衡和老化厂家出厂检验时一般都已进行过平衡，但色谱柱到最终用户时间不一，用户正式测定前最好对色谱柱再次平衡。最好的平衡兼老化一起进行的方法是运行几次完整的分析程序（包括进样），直到观察到峰形、保留时间和峰面积稳定为止。所谓“老化”是借用了气相的术语，目的是达到分析物在色谱柱以及整个液相系统流路中的吸附饱和。对某些特定的待测物，如分子量大于1000的，因扩散速度慢，老化时间相应要长，可采取大浓度进样或在同一个洗脱周期内连续进样多针的方式加快老化。5、pH使用范围一般认为硅胶基质柱子的pH使用范围是2-8，这是很粗略的。硅胶类型、使用温度、硅胶表面所键合的固定相类型以及缓冲盐的不同，对此均有影响。硅胶比孔容小、键合密度大的填料pH耐受范围要大一些，有些选用高品质硅胶，加上高密度键合和双封尾，或特殊工艺使pH耐受范围最大提高到10。磷酸盐缓冲盐渗透力强，有加快硅胶溶解的副作用，它的存在会降低pH使用范围。有机杂化硅胶以及硅胶表面涂覆杂化层的硅胶填料，有机质的存在使pH使用范围能到12以上。拿到柱子第一时间阅读说明书，确认色谱柱内的封存液，有条件可以依照COA报告做柱效测试。6、色谱柱保存短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流动相（不含缓冲盐）保存为佳，以尽量减少下次使用的平衡时间。一般只建议在长期保存反相柱的时候用纯甲醇或乙腈，一方面纯有机相保存有最大限度减少键合相水解的作用，但纯甲醇（乙腈）又会将已水解而暂时吸附在柱内的键合相洗脱出去，使固定相流失进程加快，寿命缩短。纯有机相保存还有易挥发使柱床变干的缺点，使用80%左右有机相保存也属好的选择，且足以避免长菌。强烈建议在柱身上贴标签标明保存溶剂。离子交换柱和水性SEC柱等适合保存在水溶液中的色谱柱，可加0.05%叠氮化钠溶液防止长菌。正相柱，无论是短期还是长期，都推荐保存在所用流动相中。色谱柱柱压柱压反映了色谱柱的内部状况，所以是 HPLC方法中的最重要参数之一，当柱压升高接近上限或者柱压有异常升高，往往意味着色谱柱出状况了，需及时进行维护和补救，严重时色谱柱就已报废了。下面是色谱柱柱压方程。对填充色谱柱，柱压与黏度 (η)、柱长 (L)和流速 (F)成正比，与填料粒径（d p）以及柱管半径（r）的平方成反比。K0是比渗透性系数，对填充床，其值约为0.001。通过此公式可近似计算出给定色谱条件下的理论柱压。只有当新柱实际测得的柱压和理论柱压相差很大，才能说柱压存在问题。黏度 (η)取决于流动相溶剂的选择，为降低柱压，反相色谱中倾向于选择低黏度的乙腈，而不是高黏度的异丙醇。当然选择时还需考虑溶剂强度、极性、分析物的溶解度以及和分析物兼容性等。柱长（L）增加可以提高分离度（R），流速（F）提高能加快分离，但都会导致柱压上升，选择确定这些运行参数时，需综合平衡和折中。填料粒径对柱压影响极大，d p降低一倍，柱压将增加4倍。UHPLC中采用的sub-2 μm填料，柱压超过普通HPLC泵的400Bar上限很多。提高柱温因可降低黏度η，相应降低柱压。在梯度洗脱时，黏度随流动相组成的变化而改变，柱压也会处在不断变化中。对水/甲醇流动相体系，在55：45时，黏度和柱压有个极大值。内径的影响同样很大，根据线流速相同柱压相同的原则，4.6mm内径的色谱柱流速为1mL/min，约相当于在2.1mm内径色谱柱上的0.2mL/min流速，在10mm半制备色谱柱上的5mL/min，计算公式为v＝1.0mL/min x（内径r/4.6）2。所以在换不同内径色谱柱时，请及时调整流速，以免因高柱压损伤色谱系统。柱压下降是仪器系统的连接有泄漏，柱压不稳定一般认为是流路中有气泡或空穴，和色谱柱相关的柱压问题是柱压上升。柱压波动的原因及解决办法和柱压波动相关最大的是进口端筛板（inlet frit）以及其后面1-2cm长度的柱头填料。筛板上有比填料粒径小的小孔，筛板上的小孔或柱头填料的间隙被部分堵塞，是柱压上升的主要原因。有以下几类情况：1、填料破碎和使用后有填料粉末生成填料破碎一般在装柱过程中发生，装柱压力过大或所选硅胶机械强度过低所至，设定柱压出厂标准可解决；流动相中高pH值缓冲盐使硅胶溶解并重新形成填料粉末，堵塞出口端筛板，这种情况下反冲不起作用，只有更换后筛板，不过打开承压的后筛板，对柱床会有不好影响。2、颗粒物堵塞引起柱压上升和对策可能堵塞进口端筛板（前筛板）和柱头填料间隙的颗粒物来源有：样品（制样时灰尘和滤纸等带入）、进样阀密封圈磨损、流动相（溶剂本身含有和配制过程进入）、液相仪器中泵阀密封圈的磨损、缓冲盐析出（一般在梯度运行和进样时盐的溶剂环境改变导致）。水和缓冲盐流动相内生长的细菌，也是颗粒物来源的一种，可堵塞筛板和填料间隙。应避免将这类流动相在室温下久放，可放入冰箱存放。（1）预防措施样品（甚至标准品）和流动相过滤，既预防了筛板、柱头和毛细管堵塞，又能减少进样阀、活塞杆和截止阀等仪器关键部件的磨损。普通用0.45μm孔径滤膜过滤样品和流动相，对使用2μm以下填料的超高压柱的，可用0.20μm滤膜。滤膜材质有再生纤维素、聚四氟乙烯、尼龙、硝酸纤维和醋酸纤维等，须根据和样品溶剂及分析物的适应性慎重选择。使用保护柱或在线过滤器，具体安装位置见下图：在线过滤器内装有可更换的滤片，滤片孔径一般有2μm和0.5μm两种。安装位置有两个可选择，在进样器和色谱柱之间时，对样品和流动相中的颗粒物都有效；在泵和进样器之间，则只对流动相有过滤作用。保护柱是缩小版的色谱柱，内含带填料的可更换的柱芯，安装在进样阀和色谱柱之间，用于防止色谱柱的化学污染为主，也有过滤颗粒物的作用。（2）故障排除反冲色谱柱：不连接检测器，直接将堵在前筛板上的颗粒物冲出排到废液瓶中。开始时反冲压力可低于正常使用压力，待颗粒物有冲出后，逐步提高冲洗压力。有时颗粒物已非常牢固嵌入到筛板内部，反冲不一定凑效，早反冲、勤反冲相对效果更好。有的厂商为避免堵塞，使用了较大孔径（2-5μm）的前筛板，这种情况反冲会将填料冲出。换筛板：一般不建议这样做，因为换筛板会带走粘在筛板上的部分填料，使柱床的均一性受影响，导致柱效下降。不过如果反冲不能解决问题，也只能不得已而为之，要不然就要把色谱柱报废了。如果系统中不接色谱柱，柱压仍然高，说明泵出口到色谱柱之间的其它部位，包括进样器、在线过滤器和保护柱等有堵塞，可逐一排查。为了减少死体积，毛细管都做得尽可能的细，也可能被堵。3、化学污染物引起柱压上升和对策来源同样是样品、流动相和系统，不过来源于样品的污染最普遍，特别是对复杂基体样品未经前处理或前处理不够的时候。化学污染物主要有：分子量很大的化合物、盐类、脂质、蜡类、油脂、腐殖酸、蛋白质等其它生物来源的物质。像盐类这样的保留能力极小的污染物会在死体积处很快从柱中洗脱出去，检测器一般对此类物质响应不大，有时表现为干扰峰、基线波动、斑点甚至负峰。保留能力中等的污染物，会被慢慢洗出色谱柱，表现为宽峰、基线馒头形波动和基线缓慢漂移。对强保留的污染物，一般流动相强度不足以将其从柱中洗出，会逐步在柱头累积。有时，累积在柱头的污染物可作为新固定相对分析物起作用，引起保留时间改变、峰拖尾和峰分叉等。污染物在柱头累积到一定程度，如果不采取措施，会堵塞填料间隙，引起柱压上升。最好的办法是选用合适的溶剂冲洗溶解这些物质，同时又不对填料本身有损害。如聚合物柱中累积的蛋白类污染物可用pH13-14的强碱溶液洗掉，但这种方法不适合硅胶基质色谱柱。（1）预防措施：a．制样时采用SPE固相萃取等方法，预先将色谱柱杀手类的污染物质清除掉；b．连接保护柱。保护柱是分析柱的延伸，在填料类型和粒径上应与分析柱一致，才能最大限度起保护作用，又不影响色谱性能。一个设计和装填良好的保护柱，还可增加分析柱的分离效率。如果因某种原因需在保护柱中用不同的填料，也应选择比其所保护的分析柱保留能力弱的固定相，这时的保护柱完全用于截住强保留物质，类似于SPE小柱的功效。当保护柱柱芯保护功能用尽时，也不能说不可再清洗后复用，但价格低不值得去花这个时间。c．经常对分析柱进行冲洗维护。（2）故障排除：已经累积很多污染物，用甲醇或乙腈简单冲洗不奏效，推荐使用下面方法清洗反相柱100％甲醇---100％乙晴---75％乙晴/25％异丙醇---100％异丙醇---100％二氯甲烷---100％正己烷用每种溶剂冲洗至少10个柱体积，对于250mm×4.6mm的分析柱，合适的冲洗流速是1～2mL/min。最后用10柱体积的异丙醇过渡，然后回到原来的流动相体系。对受蛋白类污染的硅胶基质反相柱，纯有机溶剂如乙腈或甲醇不能溶解多肽和蛋白质。由有机溶剂、缓冲液和酸,有时还加上离子对试剂等组成的配方清洗效果极佳，譬如用三氟乙酸水溶液和三氟乙酸/丙醇溶液对柱子重复进行梯度洗来再生；Bhadwaj和Day试验了在250mm×4.6mm的柱子中注入100μL的三氟乙醇，再生效果良好。清洗硅胶、CN和Diol等正相柱建议方法：先用20柱体积50：50正己烷/氯仿冲洗，然后用甲醇、二氯甲烷或者100%醋酸乙酯冲洗。对油脂类物质，可用异丙醇清洗。

醋五味子本品为木兰科植物五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实。习称“北五味子”。秋季果实成熟时采摘，晒干或蒸后晒干，除去果梗及杂质。在《神农本草经》中该药被列为上品，其皮肉甘酸，核辛苦，全果都有咸味，五味皆有，故名五味子。主治收敛固涩，益气生津，补肾宁心。用于久嗽虚喘，梦遗滑精，遗尿尿频，久泻不止，自汗，盗汗，津伤口渴，短气脉虚，内热消渴，心悸失眠。检测方法五味子醇甲由五味子果仁中提取出的一类木脂素类。其结构可以五味子丙素为代表。在不同的产物中，苯环上的亚甲二氧基可由两个甲氧基所代替，八元环的脂架部分也可以具有一个或多个羟基(或其酯基)。对迁延性和慢性病毒性肝炎血清谷丙转氨酶(SGPT)升高患者有较好的疗效。本次参考中国药典2020年版，采用高效液相色谱(HPLC)检测，选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对五味子中五味子醇甲的含量进行分离和检测，色谱检测条件及谱图如下：Column:               ChromCore C18, 5 μmDimension:           4.6×250 mmMobile Phase :     65/35 v/v 甲醇/水Flow Rate:            1.0 mL/minTemperature:       30 ℃Injection:             10 μLDetection:            UV 250 nmSample:               五味子Peak:                   1. 五味子醇甲结论采用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对五味子中五味子醇甲的含量进行分离和检测，主峰峰形良好，周围无干扰杂峰，该方法操作简单，灵敏度高，重复性好，符合药典要求，可用于五味子中五味子醇甲的分离和测定，为该药物的质量保证提供检测依据。应用相关产品，欢迎选购产品描述货号ChromCore  C18 5μm, 4.6×250mmA001-050018-04625S

HPLC色谱保养技巧仪器：高效液相色谱HPLC组件：流动相溶剂瓶→高压泵→进样器→色谱柱→检测器→废液保养：具体如下：01流动相溶剂瓶溶剂瓶是流动相的起点，通常是盛放水相溶液或是有机相溶液。1、水相溶液，对于水相溶液来说，首要的问题是防止污染。对于溶剂瓶我们要做的非常重要的工作就是勤换流动相，常换常新。2、有机相溶液，对于有机相溶液，可以不用担心细菌繁殖的问题。但是有机相容易发生聚合，特别是乙腈在适宜的光照条件下极易发生聚合，瓶子里就会出现一些絮状的聚合沉淀物。为了防止聚合过程的发生，装乙腈时要用棕色的溶剂瓶，避免阳光直射，更换乙腈时应当弃去瓶底剩余的溶液。3、清洗过滤，溶剂瓶里的过滤头，其作用是为了防止溶液瓶中的颗粒杂质进入到仪器的流路系统中，它的材质通常分为玻璃烧结石英和不锈钢，如果不慎堵塞会造成流动相吸液不畅，因此必须进行清洗，玻璃材质的通常是用稀硝酸泡，而不锈钢材质的可以直接进行超声清洗。02高压泵泵是液相色谱的核心，泵将流动相从溶剂瓶输送到液相流路系统中，并要在高压下保持流量和压力的稳定。状态正常的高压泵是液相色谱准确分析的基础，所以平日一定要重视对泵的维护。1、泵压力波动，很多情况下，泵的问题反映在压力上，压力波动又是常见的一类问题。通常我们可以通过重新清洗流路和再次脱气流动相加以解决。2、过滤白头保养，在泵的维护里还有一项常做的工作就是更换清洗阀上的过滤白头，通常判断的标准是纯水以5mL/min流速清洗的时候，如果压力超过1MPa则考虑更换。03进样器进样器分手动和自动两大类，虽然两者工作模式不同，但使用的要点是基本一致的。1、防止交叉污染，自动进样器常见的问题是交叉污染，交叉污染产生的原因很直接，样品残留在进样针内外表面，并随下一次进样进入色谱系统。要解决交叉污染，主要靠清洗。2、精细操作，手动进样器的操作要点大致相同，应使用液相色谱LC专用进样针，进样时插针应插到底，不使用时将针头留在进样器内，使用前后都要及时清洗。04色谱柱1.所使用的流动相均应为HPLC级或相当于该级别的，在配置过程中所有非HPLC级的试剂或溶液均经0.22um薄膜过滤，而且流动相使用前都经过超声仪超声脱气后才使用。2.所使用的水必须是经过蒸馏纯化后再经过0.22um水膜过滤后使用，所有试液均现用现配。并且在进样的样品都必须经过0.22um薄膜针筒过滤后进样。3.所使用到的最大流速为1.0mL/min，所以流速提升过程应是梯度提升，不存在流速的突升突降。4.仪器检测完，需要用流动相梯度洗脱色谱柱1小时以上。之前有出过详细的攻略，请点击下方查看：色谱柱宝典上色谱柱宝典下05检测器1、光源部分检测器中非常重要的部件是光源，光源对发射能量有要求，一旦能量衰减到一定程度，就会出现基线噪声变大，灵敏度降低等一系列影响使用的问题，因此光源是一个消耗品。通常紫外灯的寿命是2000h，当到达这个时限的时候，我们就要特别关注灯的能量状况，可以通过仪器维护软件中自带的“灯能量测试”功能来判断，测试的结果会分别评估低、中、高三个波长段的能量，一旦某个波长段的测试结果显示失败，就表示需要更换灯。2、检测池检测器中另一个重要部件是检测池，也叫流通池。通常大家关心的一个问题是检测池被堵掉，因为检测池通常不是很耐压，所以一旦被堵就很可能造成损坏。事实上检测池通常不太容易被堵，原因是几乎所有的颗粒杂质都会被色谱柱拦下了，所以堵塞检测器的东西基本都不是来自样品的，很可能是后来“产生”的，比如含盐流动相残留在检测池中导致盐析出。04废液液相色谱仪LC的废液大部分含有有机溶剂，会对人体产生一定的危害，对环境也会产生污染，严禁随意倾倒，应及时处理。目前，国内大部分实验室是将废液送到专门的废液处理站集中进行无害化处理。总之，对分析仪器来说，避免故障的最主要的做法是正确的操作和调节，切忌盲目操作，对核心部位如离子室、微电流放大器等减少震动和碰撞，保证绝缘，并减少各种系统误差要注意以上要点，但，还要注意日常的仪器保养，色谱柱子的维护，仪器室保持清洁，这样才能使液相色谱处于最佳工作状态，在分析中发挥其重要的作用。

板蓝根颗粒板蓝根颗粒主要成分为板蓝根，辅料为蔗糖，糊精。板蓝根又名靛青根、蓝靛根、大青根，是一种中药材。中国各地均产，分为北板蓝根和南板蓝根，北板蓝根来源为十字花科植物菘蓝和草大青的根；南板蓝根为爵床科植物马蓝的根茎及根。具有清热解毒，凉血利咽。用于肺胃热盛所致的咽喉肿痛、口咽干燥、腮部肿胀；主治急性扁桃体炎、腮腺炎见上述证候者。检测方法板蓝根中尿苷、鸟苷、（R，S）-告依春、腺苷的含量，是2020版《中国药典》中板蓝根颗粒的重要控制指标之一。本次参考中国药典2020年版，采用高效液相色谱(HPLC)检测，选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对板蓝根颗粒中有效成分的含量进行分离和检测，色谱检测条件及谱图如下：Column:           ChromCore  C18, 5 μmDimension:      4.6 × 250 mmMobile phase:  A）甲醇                           B）水Gradient:           t (min)          A                B                           0                  3                97                           3                  3                97                          20                10              90                          40                70              30                          50                70              30                          51                 3               97              Flow rate:         0.8 mL/minTemperature:   30 ℃Injection:          5 μLDetection:        UV 254 nmSamples:          板蓝根颗粒Peaks:              1. 尿苷                          2. 鸟苷                          3. (R,S)-告依春                          4. 腺苷结论选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对板蓝根颗粒中有效成分的含量进行分离和检测，各有效成分峰形良好，该方法操作简单，灵敏度高，重复性好，符合药典要求，可用于板蓝根颗粒中有效成分的分离和测定，为该药物的质量保证提供检测依据。详细产品信息，欢迎选购：产品描述货号ChromCore C18 5μm, 4.6×250mmA001-050018-04625S

极性溶剂极性溶剂是指含有羟基或羰基等极性基团的溶剂，即溶剂分子为极性分子的溶剂，由于其分子内正负电荷重心不重合而导致分子产生极性。用于表征分子极性大小的物理量为偶极矩或介电常数，介电常数大表示其极性大。化学共价键分为极性键与非极性键。非极性键就是共用电子对没有偏移，出现在单质中比如O2；极性键就是共用电子对有偏移比如HCl。而当偏移的非常厉害之后，看上去一边完全失电子另一边得到了电子，就会变成离子键了，如NaCl 。化合物的极性决定于分子中所含的官能团及分子结构。各类化合物的极性按下列次序增加：—CH3，—CH2—，—CH=，—C三，—O—R，—S—R，—NO2，—N（R）2，—OCOR，—CHO，—COR，—NH2， —OH，—COOH，—SO3H强极性溶剂甲醇〉乙醇〉异丙醇中等极性溶剂乙腈〉乙酸乙酯〉氯仿〉二氯甲烷〉乙醚〉甲苯非极性溶剂环己烷，石油醚，己烷，戊烷单一溶剂的极性大小顺序石油醚（小）→环己烷→四氯化碳→三氯乙烯→苯→甲苯→二氯甲烷→氯仿→乙醚→乙酸乙酯→乙酸甲酯→丙酮→正丙醇→甲醇→吡啶→乙酸（大）混合溶剂的极性顺序苯∶ 氯仿（1+1）→ 环己烷∶乙酸乙酯（8+2 ）→氯仿∶丙酮（95+5 ）→苯∶丙酮（9+1 ）→苯∶乙酸乙酯（ 8+2）→氯仿∶乙醚（ 9+1）→苯∶甲醇（ 95+5） →苯∶乙醚（ 6+4）→环己烷∶乙酸乙酯（ 1+1 ）→氯仿∶乙醚（ 8+2）→氯仿∶甲醇（ 99+1）→苯∶甲醇（ 9+1）→氯仿∶丙酮（ 85+15 ）→苯∶乙醚（ 4+6）→苯∶乙酸乙酯（ 1+1）→氯仿∶甲醇（ 95+5 ）→氯仿∶丙酮（ 7+3）→苯∶乙酸乙酯（ 3+7）→苯∶乙醚（ 1+9）→乙醚∶甲醇（ 99+1 ）→乙酸乙酯∶甲醇（ 99+1 ）→苯∶丙酮（ 1+1 ）→氯仿∶甲醇（ 9+1）说明一下: 苯∶甲醇（ 95+5 ）的意思是95 体积的苯混合5 体积的甲醇配成混合溶剂常用混合溶剂乙酸乙酯/ 己烷：常用浓度0~30%。但有时较难在旋转蒸发仪上完全除去溶剂。乙醚/ 戊烷体系：浓度为0~40%的比较常用。在旋转蒸发器上非常容易除去。乙醇/ 己烷或戊烷：对强极性化合物5~30%比较合适。二氯甲烷/ 己烷或戊烷：5~30%，当其他混合溶剂失败时可以考虑使用。官能团极性大小比较烷烃（ —CH3，—CH2—）＜烯烃（ —CH=CH —）＜醚类（ —O—CH3，—O—CH2—）＜硝基化合物(—NO2) ＜二甲胺（ CH3—N—CH3）＜脂类（ —COOR ）＜酮类（ —CO—）＜醛类（—CHO）＜硫醇（—SH）＜胺类（—NH2）＜酰胺（—NHCO—CH3）＜醇类（—OH）＜酚类（＜ Ar—OH）＜羧酸类（ —COOH ）常用流动相极性石油醚＜汽油＜庚烷＜ 己烷＜二硫化碳＜二甲苯＜甲苯＜氯丙烷＜苯＜溴乙烷＜溴化苯＜二氯乙烷(DCM) ＜三氯甲烷＜异丙醚＜硝基甲烷＜乙酸丁酯＜乙醚＜ 乙酸乙酯＜正戊烷＜正丁醇＜苯酚＜甲乙醇＜叔丁醇＜四氢呋喃＜二氧六环＜丙酮＜ 乙醇＜乙腈＜甲醇＜氮氮二甲基甲酰胺(DMF) ＜水实验室常用溶剂极性指数表*15℃下cP**25℃下cP缺失值表示没有检测数据本图表由Honeywell Burdick & Jackson提供 ， www.honeywell.com/contactbandj有机溶剂的极性，关系到其物理化学性质、如介电常数、偶极矩或折射率。这种表示方法把所有的溶剂看作是连续作用的介质，而不是看作由各个分子组成的非连续统一体，并且未考虑到溶剂和溶质之间的特殊的相互作用。

近日，国家药监局 国家卫生健康委发布关于2020年版《中华人民共和国药典》的公告(2020年 第78号)：根据《中华人民共和国药品管理法》，2020年版《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)经第十一届药典委员会执行委员会全体会议审议通过，现予发布，自2020年12月30日起实施。其中在四部2341农药残留量测定法中新增第五法 药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法。2020版中国药典2341农药残留量测定法第一法  有机氯类农药残留量测定法（色谱法）第二法  有机磷类农药残留量测定法（色谱法）第三法  拟除虫菊酯类农药残留量测定法（色谱法）第四法  农药多残留量测定法（质谱法）第五法  药材及饮片（植物类）中禁用农药多残留测定法             GCMSMS             LCMSMS2020版中国药典2341第五法选择合适的前处理方法和实验耗材快速样品处理法（QuEChERS）固相萃取方法（SPE）纳谱分析提供中药农残包免费试用申请试用方式：1、您可点击以下试用申请链接直接在线申请试用http://nanochrom.mikecrm.com/xexvAk2、识别以下二维码直接在线申请试用

白芷本品为伞形科植物白芷Angelica dahurica （Fisch，ex Hoffm.）Benth.et Hook.f.或杭白芷Angelica dahurica（Fisch. ex Hoffm.）Benth.et Hook.f.var.formosana（Boiss.）Shan et Yuan的干燥根。夏、秋间叶黄时采挖，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥。主治解表散寒，祛风止痛，宣通鼻窍，燥湿止带，消肿排脓。用于感冒头痛，眉棱骨痛，鼻塞流涕，鼻鼽，鼻渊，牙痛，带下，疮疡肿痛。白芷对痤疮、黑头、粉刺都有一定的疗效，在美白祛斑，改善微循环，延缓皮肤衰老方面都有独特的疗效，白芷常常被用来制成面膜用于美容。检测方法欧前胡素，别名前胡内酯,白芷乙素，分子式：C16H14O4，具有抗菌、平喘及抗过敏等作用。极性小，不溶于水，易溶于极性小的有机溶剂。本次参考中国药典2020年版，采用高效液相色谱法(HPLC)，选用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对白芷中欧前胡素进行分离和检测。色谱检测条件及谱图如下：Column:            ChromCore C18, 5 μmDimension:       4.6×250 mmMobile phase :  55/45 v/v 甲醇/水Flow rate:         1.0 mL/minTemperature:    30 ℃Injection:          5 μLDetection:         UV 300 nmSample:            白芷Peaks:              1. 欧前胡素结论采用纳谱分析ChromCore C18色谱柱对白芷中欧前胡素进行检测，欧前胡素主峰具有良好的峰形，周围无干扰杂质，该方法操作简单，灵敏度高，重复性好，符合药典要求，可用于白芷中欧前胡素的分离和测定，为该药物的质量保证提供检测依据。应用相关产品，欢迎选购产品描述货号ChromCore C18 5μm, 4.6×250mmA001-050018-04625S延伸阅读-白芷中药小故事传说南方一富商的掌上明珠年方二八，患痛经症，每逢行经即腹部剧痛。虽遍访当地名医，疗效甚微，痼疾缠绵，形体日衰，容颜憔悴精神萎靡。急得富翁食不甘味，夜不成寝。为了治好千金之疾，富翁携爱女日夜兼程向京都寻找名医。赶至汴梁，适逢女儿经期，腹痛顿作，呼天唤地。正巧，一采药的老翁路过闻之，经仔细询问病情后，从药篓里取出白芷一束相赠，嘱咐以沸水洗净，水煎饮用。富翁半信半疑，但眼看女儿疼痛难忍，无药可施，只好一试。不料，一煎服而痛缓，二煎服而痛止，又服数煎后，次月行经，安然无恙。富翁喜出望外，四处寻觅采药老翁以重金酬谢。从此，白芷一药，在百姓中广为流传，后有人先把白芷用沸水泡洗四五遍，晾干后研末，炼蜜为丸，丸如弹子大。即为“都梁丸”，因其在京都汴梁觅得，故取都梁丸为名。

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蜂蜜是蜜蜂从开花植物的花中采得的花蜜在蜂巢中经过充分酿造而成的天然甜物质。气味清香浓郁，味道纯真甜美。蜜蜂从植物的花中采取含水量约为75%的花蜜或分泌物，存入自己第二个胃中，在蜜蜂体内多种转化的作用下，再由工蜂将转化后花蜜或分泌物存贮到巢洞中，用蜂蜡密封。经过15天左右反复酝酿，将各种维生素、矿物质和氨基酸丰富到一定的数值，同时把花蜜中的多糖转变成人体可直接吸收的单糖葡萄糖、果糖。而水分含量少于23%的花蜜或分泌物就是蜂蜜。蜂蜜是糖的过饱和溶液，低温时会产生结晶，生成结晶的是葡萄糖，不产生结晶的部分主要是果糖。检测方法目前市场上存在严重的蜂蜜掺假现象，对蜂蜜产业的健康发展和消费者的权益造成严重影响。本次参考中国药典2020年版二部标准，采用高效液相色谱法(HPLC)，选用纳谱分析ChromCore NH2色谱柱对蜂蜜进行检测，色谱检测条件及谱图如下：结论采用纳谱分析ChromCore  NH2色谱柱对蜂蜜进行检测，各峰峰形良好且具有良好的分离度，该方法操作简单，灵敏度高，重复性好，符合药典要求，可用于蜂蜜的测定，为打击蜂蜜掺假行为，净化蜂蜜市场提供检测依据。