小鼠肾足细胞操作前打开紫外灯30-60分钟,这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果,但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置,可以与紫外灯一起打开,小鼠肾足细胞此时不需要抽滤开的过大就可以。(所谓的抽滤装置就是就是那个风机,就是吹风超净工作台,不是过滤培养液的)!
细胞传代培养(消化法)具体操作:
一:传代前准备;
1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械:保证足够的*作空间,不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微波炉内高火,8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液:小鼠肾足细胞取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。
二:胰蛋白酶消化;
1.加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。
2. 小鼠肾足细胞 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。
3.吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。
三:吹打分散细胞;
1.吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
2.吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。
3.平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8分钟。
4.弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
四:分装稀释细胞;
1.分装:将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。
2.显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。
五:继续培养;
用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。小鼠肾足细胞传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25%时为一个+,占50%为++,占75%时为+++。
XY1603 大鼠回肠细胞,IEC-18细胞,
XY1604 大鼠滑膜细胞
XY1605 大鼠骨髓瘤细胞IR983F细胞
XY1606 大鼠骨髓瘤细胞,Y3-Ag1.2.3细胞
XY1607 大鼠骨肉瘤细胞,UMR-106细胞,
XY1608 大鼠骨肉瘤 VMR106细胞
XY1609 大鼠骨骼肌成肌细胞,L6细胞
XY1610 大鼠肝星形细胞,HSC-T6细胞,
XY1611 大鼠肝星形细胞,CFSC-8B细胞
XY1612 大鼠肝星形细胞,CFSC-3H & 5H细胞
XY1613 大鼠肝星形细胞,CFSC-2G细胞
XY1614 大鼠肝细胞瘤细胞,H-4-Ⅱ-E细胞
XY1615 大鼠肝细胞瘤 H4-II-E-C3细胞
XY1616 大鼠肝细胞,IAR20细胞
XY1617 大鼠肝细胞,BRL细胞
XY1618 大鼠肝细胞,BRL大鼠Buffalo细胞
XY1619 大鼠肝细胞,BRL 3A细胞
XY1620 大鼠肝上皮样干细胞,WB-F344细胞
XY1621 大鼠肝癌细胞(乳腺癌细胞接种到肝脏成瘤) Walker-256细胞
XY1622 大鼠肝癌细胞(wistar 大鼠) CBRH7919细胞
XY1623 大鼠肝癌细胞,Walker-256细胞,
XY1624 大鼠肝癌细胞,RH-35细胞
XY1625 大鼠肝癌细胞,H4-II-E-C3细胞
XY1626 大鼠肝癌细胞,H4-ⅡE细胞
XY1627 大鼠肝癌细胞,CRL-1548细胞
XY1628 大鼠肝癌细胞,CBRH-7919细胞
XY1629 大鼠肝癌 R15细胞,
XY1630 大鼠肺上皮Ⅱ型细胞,RLE-6TN细胞
XY1631 大鼠肺泡巨噬细胞,NR8383细胞
XY1632 大鼠埀体瘤细胞,GH3细胞
XY1633 大鼠垂体细胞,RPC细胞
XY1634 大鼠垂体瘤细胞,MMQ细胞