酶联免疫吸附试验中空白孔是什么都不放还是0标准溶液加标准品或样本50μl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50μl/孔，再加入50μl/孔的抗体工作液，用盖板膜封板，轻轻振荡5秒混匀，25℃反应30分钟。6.3 洗 涤：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用工作洗涤液250μl/孔充分洗涤5次，每次间隔30秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。6.4 显 色：每孔加入底物液A50μl，再加底物液B 50μl，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟。6.5 终 止：每孔加入终止液50μl，轻轻振荡混匀，终止反应。6.6 测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。7 结果分析7.1 百分吸光率的计算标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即百分吸光度值（%）＝A×100%A0A—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值A0—0ppb标准溶液的平均吸光度值7.2 标准曲线的绘制与计算以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）8 注意事项8.1 室温低于25℃或试剂及样本没有回到室温（25℃）会导致所有标准的OD值偏低。8.2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。8.3 混合要均匀，洗板要彻底，在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性。8.4 在所有孵育过程中，用盖板膜封住微孔板，避免光线照射。8.5 不要使用过了有效期的试剂盒，不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。8.6 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm8.7 反应终止液有腐蚀性，避免接触皮肤。9 贮藏及保存期储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，避免冷冻。保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒

酶联免疫反应吸附试验（ELISA）共有几种类型？各有什么特点？（一）双抗体夹心法双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：（1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。（2）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。（3）加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。（4）加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。（二）双位点一步法在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步（图15-5）。这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。在一步法测定中，应注意钩状效应（hookeffect），类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。（三）间接法测抗体间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：（1）将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。（2）加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。（3）加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。（4）加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。 （四）竞争法竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下：（1）将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤。（2）待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。洗涤。   （3）加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。（五）捕获法测IgM抗体血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗本多用捕获法，先将所有血清IgM（包括异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。操作步骤如下：（1）将抗人IgM抗体连接在固相载体上，形成固相抗人IgM。洗涤。（2）加入稀释的血清标本：保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。（3）加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合。洗涤。（4）加入针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合。洗涤。（5）加底物显色：如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在，是为阳性反应。（六）应用亲和素和生物素的ELISA亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合。现在使用更多的是从链霉菌中提取的链霉和素（strepavidin）。生物素（biotin）又称维生素H，分子量244.31，存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物，生物素－羟基琥珀亚胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置，可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物素与ELIS偶联起来，就可大提高ELISA的敏感度。亲和素－生物素系统在ELISA中的应用有多种形式，可用于间接包被，亦可用于终反应放大。可以在固相上先预包被亲和素，原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合，通过亲和素－生物素反应而使生物素化的抗体或抗在相化。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量，而且使其结合点充分暴露。另外，在常规ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代，然后连接亲和素－酶结合物，以放大反应信号。

在2-氯TRT树脂上挂个FMOC氨基酸的方法Weigh 10 g 2-chlorotrityl chloride resin (15 mmol) in a reaction vessel, wash with DMF (2x), swell the resin in 50 mL DMF for 10 min, drain vessel.Weigh 10 mmol Fmoc-amino acid in a test tube, dissolve Fmoc-amino acid in 40 mL DMF, transfer the solution into the reaction vessel above, add 8.7 mL DIEA (50 mmol), swirl mixture for 30 min at room temperature.Add 5 mL methanol into the reaction vessel and swirl for 5 min.Drain and wash with DMF (5x).Check substitution.Add 50 mL 20% piperidine to remove the Fmoc group. Swirl mixture for 30 min.Wash with DMF (5x), DCM (2x), put resin on tissue paper over a foam pad and let dry at room temperature overnight under the hood. Cover the resin with another piece of tissue paper, press lightly to break aggregates.Weigh loaded resin.Pack in appropriate container.

N末端的生物素标记Wash 0.1 mmol resin with DMF.Dissolve 0.244 g (+)-biotin (1 mmol, MW 244.3) in 5 mL DMF-DMSO (1:1) solution. A little warming is necessary.Add 2.1 mL 0.45 M HBTU/HOBt solution and 0.3 mL DIEA to the solution prepared in step 2.Add the activated biotin solution to the resin and let stir overnight.Check resin to make sure coupling is complete as evidenced by negative ninhydrin test (colorless).Wash resin with DMF-DMSO (1:1) (2x) to remove excess (+)-biotin.Wash resin with DMF (2x) and DCM (2x).Let the resin dry before proceeding to cleavage.

                 是什么可以影响到elisa试剂盒的结果呢？1.使抗原（或抗体）结合到某种固相载体外表，并坚持其免疫活性；2.使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标抗原（或抗体），并且此酶标抗原（或抗体）既保存其免疫活性，又保存其酶活性； 3.测定时将受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原（或抗体）按不同步骤与固相载体外表的抗原或抗体进行反响，再用洗刷办法使固相载体上构成的抗原抗体复合物与其它物质分开。4.最终结合在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成必定份额；elisa试剂盒再参加酶反响底物后，底物被酶催化后变为有色产品，依据其色彩反响的深浅 5.elisa试剂盒进行定性或定量分析，以了解被测标本中抗体或抗原含量。

                 ELISA检测方法的原理及其优缺点是什么1.ELISA试剂盒是以免疫学反应为基础,将抗原、牵9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术.由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行.2.每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证ELISA试剂盒试验结果的特异性与稳定性.在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种.3.即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等.比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法.4.优点：操作方便,实验可靠,缺点：暂未发现

bim试剂盒教您如何选择正确的反转录方法逆转录pcr(rt-pcr)在实验室中经常被用于检测和量化样本中的rna表达。实验的第一步是通过逆转录(rt)将不稳定的rna转化为互补的dna(cdna)。实际上，rt是许多用于研究rna的分子生物学技术的第一步，因为将不稳定的rna转换为更稳定的dna会使分析更容易、更可靠。对于rt-pcr,有一步法和两步法。               在一步法rt-pcr中，rt反应和pcr扩增是在同一管中进行。将rna模板添加到试管中，加有两种酶(逆转录酶和dna聚合酶)，以及完成反应的所有必须组分。逆转录酶产生cdna产物，然后逆转录酶和cdna变性，dna聚合酶扩增cdna。在一步法中，rt反应由基因特异性引物启动。因此，只有感兴趣的区域被反向转录，然后进行扩增。   在两步法rt-qpcr中，rt反应与pcr扩增单独进行。首先，rna添加到反应混合物中，混合物包括逆转录酶和oligo-dts (结合mrna的poly-a尾巴)或随机六聚体(或两者都有)，合成cdna。下一步，从管子中取出少量cdna，置于一个新管中，作为pcr的模板与基因特定的引物一起混合。因为rt反应采用随机启动或由oligo-dts进行启动，总rna或总mrna在rt步骤中被转录。尽管这两种方法都能得到最终的结果，但是每种方法都有优缺点。选择哪种方法取决于各种因素。如下总结它们的优缺点。一步法rt-pcr：优点: 只需一步，反应发生在单管中，速度比两步法更快，而且需要较少的准备和操作时间。处理大量样品时易于操作，减少污染的机会。整个cdna样品都被扩增，灵敏度更高。缺点: 同一样本只有有限数量的目的基因被扩增。另一个挑战是组分的兼容性，因为一步法需要转录和扩增之间的平衡。适用性：当时间对于实验很重要时，一般采用一步法。例如，迅速的一步法是rna病毒检测的好方法，结果可以很快得到。也适用于高通量分析。 由于该方法采用基因特异性引物，所以通常是分析低表达水平基因的较好选择。此外，一步法是非常精确的，需要测量表达水平上的细微差异时这是一种常用的方法。两步法rt-pcr：优点: 可以分析同一样本的多个目标。逆转录步骤将样本中所有的rna转换为cdna，可以储存cdna用于后续实验，检测大量基因。能够分别优化rt和pcr步骤,可以更好地控制实验过程。因为只有少量的转录材料用于pcr，任何可能从rna分离到rt反应的抑制剂（如乙醇、苯酚或胍盐）都被稀释了。缺点：它更耗费时间，且带来污染的可能性更高。rt步骤转录所有的rna以相同的效率，选择这种方法时，应该考虑到启动会影响qpcr的结果。例如，以oligo-dts 和随机六聚体启动反应可能会带来不同的结果。因此，对于每个rt反应应该使用相同的条件。适用性：选择两步方法的最常见原因是对同一样本的多个目标进行分析。第二,当rna的存储是个问题时,最好是进行两步rt-pcr，因为cdna在-20°c是稳定的。此外，当起始材料有限时，使用两步rt-pcr ，通常会有更高的cdna产量。

PBS缓冲溶液的配制方法及它的用途是什么?什么是PBS缓冲溶液？   磷酸盐缓冲液(简称PBS)的是生物化学中常用的一种阻碍溶液pH变化的缓冲溶液，这种由盐溶液中含有氯化钠，磷酸盐，磷酸盐，和磷酸钾组成。组份浓度：137mM 氯化钠，2.7mM ，10mM 磷酸二氢钠，2mM 磷酸二氢钾。它的配置方法：先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后，再用蒸馏水稀释至1000mL。稀释液：取储存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL。分装每瓶100mL或每管10mL，121℃高压灭菌15min。它的用途：   主要用于一些化学实验中不影响实验反应的情况下调节pH值，以便让实验的化学反应在最好条件下进行。部分用于食品或是饲料行业加工，如食品或者饲料真菌毒素检验中ELISA方法的洗板应用或者食品微生物检验中的稀释缓冲液。

pH的测定一、pH的定义溶液的酸碱性可用[H+]或[OH-]来表示，习惯上常用[H+]来表示。因此溶液的酸度就是指溶液中[H+]的大小。对于很稀的溶液，用[H+]来表示溶液的酸碱性往往既有小数又有负指数，使用不方便，因此常用pH值来表示溶液的酸碱性。pH值是指氢离子浓度的负对数，即pH=一lg[H+]例如：[H+]=10一7mol/L，pH=7；[H+]=10一9mol/L，pH=9；[H+]=10一3mol/L，Ph=3。pH值的使用范围一般在0～14之间。pH值越小，溶液的酸性越强，碱性越弱；pH值越大，溶液的酸性越弱，碱性越强。溶液的酸碱性和pH值之间的关系为：中性溶液，pH=7；酸性溶液，pH＜7；碱性溶液，pH＞7。溶液pH值相差一个单位，[H+]相差10倍。更强的酸性溶液，pH值可以小于0([H+]＞lmol/L)；更强的碱溶液，pH值可以大于14([OH-]＞1mol/L)。这种情况下，通常不再用pH值来表示其酸碱性，而直接用[H+]或[OH]来表示。溶液pH值的粗略测定，可使用广泛pH试纸或精密pH试纸来获得，准确测定溶液的pH值可使用pH计来完成。二、方法原理pH值由测量电池的电动势而得，通常以玻璃电极为指示电极、饱和甘汞电极为参比电极组成电池。在25℃时，溶液中每变化1个pH单位，电位差改变59.16mV，在仪器上直接以pH的读数表示。玻璃电极基本上不受颜色、胶体物质、浊度、氧化剂、还原剂以及高含盐量的影响。但在pH＜1的强酸性溶液中，会有所谓的“酸误差”，可按酸度测定；在pH＞10的碱溶液中会产生钠误差，使读数偏低，可用“低钠误差”电极消除钠误差，还可以选用与被测溶液pH值相近似的标准缓冲溶液对仪器进行校正。温度影响电极的电位和水的电离平衡，仪器上有补偿装置对此加以校正。测定时，应注意调节仪器的补偿装置与溶液的温度一致，并使被测样品与校正仪器用的标准缓冲溶液温度误差在±1℃以内。不可在含油或含脂的溶液中使用玻璃电极，测量之前可用过滤方法除去油或脂。三、试剂与仪器1．标准溶液的配制pH标准缓冲溶液(简称标准溶液)均需用新煮沸并放冷的纯水(不含C02，电导率应小于2Μs/cm，pH值在6.7～7.3之间为宜)配制。配成的溶液应贮存在聚乙烯瓶或硬质玻璃瓶内。此类溶液可以稳定1～2个月。测量pH时，按水样呈酸性、中性和碱性三种可能，常配制以下三种标准溶液：(1)pH标准缓冲溶液甲 称取预先在110～130℃干燥2～3h的邻苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4)10.12g，溶于水并在容量瓶中稀释至1L。此溶液的pH值在25℃时为4.008。(2)pH标准缓冲溶液乙 分别称取预先在110～130℃干燥2～3h的磷酸二氢钾(KH2P04)3.388g和磷酸氢二钠(Na2HP04)3.533g，溶于水并在容量瓶中稀释至1L。此溶液的pH值在25℃时为6.865。(3)pH标准缓冲溶液丙 为了使晶体具有一定的组成，应称取与饱和溴化钠(或氯化钠加蔗糖)溶液(室温)共同放置在干燥器中平衡两昼夜的硼砂(Na2 B4 O7·10H2O)3.80g，溶于水并在容量瓶中稀释至1L。此溶液的pH值在25℃时为9.180。当被测样品的pH值过高或过低时，应配制与其pH值相近似的标准溶液校正仪器。2．标准溶液的保存①配好的标准溶液应在聚乙烯瓶或硬质玻璃瓶中密闭保存。②标准溶液的pH值随温度变化而稍有差异。在室温条件下，标准溶液一般以保存1～2个月为宜，当发现有浑浊、发霉或沉淀现象时，则不能继续使用。③标准溶液可在4℃冰箱内存放，且用过的标准溶液不允许再倒回去，这样可延长使用期限。3．仪器①酸度计或离子浓度计。常规检验使用的仪器，至少应当精确到0.1pH单位，pH范围从0～14。如有特殊需要，应使用精度更高的仪器。②玻璃电极与甘汞电极。4．样品的保存最好现场测定。否则，应在采样后把样品保持在0~40C，并在采样后6h之内进行测定。四、试验步骤(1)仪器校准操作程序按仪器使用说明书进行。(2)样品测定测定样品时，先用蒸馏水认真冲洗电极，再用水样冲洗，然后将电极浸入样品中，小心摇动或进行搅拌使其均匀，静置，待读数稳定时记下pH值。五、试验报告试验报告应包括下列内容：取样日期、时间和地点，样品的保存方法，测定样品的日期和时间，测定时样品的温度，测定的结果(pH值应取最接近于0.1pH单位，如有特殊要求时，可根据需要及仪器的精确结果的有效数字位数而定)，其他需说明的情况。

化学实验分析结果的数据处理在分析工作中，最后处理分析数据时一般都需要在校正系统误差和剔除错误的测定结果后，计算出结果可能达到的准确范围。首先要把数据加以整理，剔除由于明显的原因而与其他测定结果相差很远的那些数据。对于一些精密度似乎不高的可疑数据，则应按照q检验(或按照其他规则)决定取舍，然后计算数据的平均值、各数据对平均值的偏差、平均偏差与标准偏差，最后按照要求的置信度求出平均值的置信区间。一、平均偏差二、标准偏差标准偏差又称均方根偏差。当测定次数趋于无穷大时，总体标准偏差σ表达式为：式中，μ不多次测定的平均值，称为叫体平均值。即：显然，在校正了系统误差的情况下μ即为真值。在一般的分析工作中，只作有限次测定，根据几率可以得出有限测定次数n时的标准偏差s表达式为：用标准偏差表示精密度比用算术平均偏差更合理，因为单次测定值的偏差平方之后，较大的偏差也能显著地反映出来。例如有甲、乙两组数据，其各次测定的偏差分别为：甲、乙两组数据的平均偏差相同，但可以明显看出甲组数据较为分散，因其中有两个较大的偏差(标有*者)，因此用平均偏差反映不出这两组数据的优劣。但是，如果用标准偏差表示，甲组数据的标准偏差明显比乙组数据的大，因而甲组数据的精密度较低。三、置信度与平均值的置信区间对于无限次测定，图3-13中曲线各点的横坐标是x-μ，其中x为每次测定的数值，μ为总体平均值(真值)，曲线上各点的纵坐标表示某个误差出现的频率，曲线与横坐标从-∞到+∞之间所包围的面积代表具有各种大小误差的测定值出现的概率总和，设为100％。由数学计算可知，在μ一σ到μ+σ区间内，曲线所包围的面积为68.3％，即真值落在此区间内的概率为68.3％，此概率为置信度。亦可计算出落在μ±2σ和μ±3σ区间内的概率分别为95.4％和99.7％。以上是对无限次测定而言的。在实际分析工作中，不可能对样品做无限多次测定，而且也没有必要做无限多次测式中：s一一标准偏差；n——测定次数；t——在选定的某一置信度下的概率系数，可根据测定次数从表3—5中查得。由表3—5可知，t随测定次数的增加而减小．也随置信度的提高而增大。式(3—17)有明显的概率意义，可以估算出在选定的置信度下，总体平均值在以测定平均值x-为中心的多大范围内出现，这个范围就是平均值的置信区问。例如，分析试样中某组分的含量，经过n次测定，在校正系统误差后，由式(3—17)算出含量为(28.05±0.13)％(置信度为95％)，即说明该组分的n次测定的平均值为28.05％，而且有95％的把握认为该组分的总体平均值(真值)μ在27.92%～28.18％之间。显然，置信区间的大小受到所定置信度的影响。由表3—5可知，相同的测定次数，置信度p越大，置信系数t越大，则同一体系的置信区问就越宽；反之，置信度p越小，t越小，则同一体系的置信区间就越窄。在实际工作中，置信度不能定得过高也不能定得过低。置信度过高，例如置信度为100％，就意味着区间是无限大的，肯定会包括μ，但这样的置信区问是毫无意义的。置信度过低，尽管置信区间很窄，但其可靠性得不到保证。因此，在做统计推断时应当根据实际工作的需要定出合适的置信度，既要使置信区间的范围足够小，又要使置信度很高。在分析化学中，通常取95％的置信度，它表示在有限次测定中，约有95％的测定值落在规定的范围内，约有5％的测定值是落在规定的范围之外。有时也将置信度定在90％。四、可疑数据的取舍在一组平行测定中，常常会遇到个别数据与平均值的差值较大，这种明显偏离平均值的测定值称为可疑值或离群值。可疑值的取舍会影响测定结果的平均值，尤其当测定次数较少时影响更大，因此在计算之前必须对可疑值进行合理的取舍。对于可疑值，首先应查明原因。如果查明确实由过失引起的，就应舍去，而不必进行统计检验。当无法查明原因时，就必须对其进行统计检验，以便从统计学上判断可疑值是否为异常值，以决定取舍。如果统计检验它确为异常值，则应在计算测定结果的平均值以前将其从这组测定值中舍去，否则应予以保留。用于可疑值的统计检验方法很多，都是建立在随机误差服从一定的分布规律的基础上。下面仅介绍常用的q检验法。q检验法是适用于3～10次测定的比较简便的检验方法。当测定次数n=3～10时，根据所要求的置信度(如取95％)，按照下列步骤检查可疑数据是否可以舍去。(1)排序。将各数据按递增的顺序排列：x1，x2，…，x1。(2)求出最大与最小数据之差xn一x1。(3)求出可疑数据与其邻近数据之间的差xn-xn-或x2—x，。(4)求出:(5)根据测定次数n和要求的置信度(如95％)，查表3—6，得出q0.95。(6)将q与q0.95相比较，若q＞q0.95，则弃去可疑值，否则应予保留。

                      减少ELISA实验误差,您是怎么做的?做任何实验，都不可能完全没有误差，我们能做的就是尽最大的努力减少实验误差。在ELISA试剂盒实验操作中，误差分有系统误差、偶然误差、过失误差，而一个小小的误差主意能够影响到实验，那么怎样才能缩小实验误差呢？除了需要细心之外，还有一些需要重点注意的地方。    ①：检验技师应具备从事实验室操作的基本素质和实践经验。能熟练操作实验仪器、器械，具有一定总结和分析问题的能力，对实验中出现的意外情况能及时妥善解决。    ②：使用校对过的微量移液器，排除自然误差。移液器准确与否对定量检测尤为重要。    ③：仔细阅读说明书，严格按照说明书要求进行规范化操作。不同批号的试剂不可混用。值得改进的地方，反复试验确定成立后才能改进。    ④：洗涤彻底，如若洗板不彻底，酶结合物本底显色会呈现假阳性。洗涤液要新鲜，现用现配，陈旧的洗涤液会出现本底增高现象，也可能出现假阳性。    ⑤：严控反应时间，反应时间过长，酶失活；反应时间过短，酶结合物不能与血清中的微生物抗原抗体充分结合，生成物结构松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假阴性。    ⑥：注意试剂盒保存期，过保存期的试剂不能使用。    ⑦：评估试剂的实用性，试剂的稳定与否，对准确率的高低到头重要。在试剂启用前，应进行阴、阳对照及样品反复比照试验，判定试剂符合要求后方可使用。    ⑧：严格掌握显色时间，显色时间过短，加入终止液反应终止后，底物结合物的量过少，易出现假阴性。超过显色要求时间后显色，应判为假阳性，这可能与试剂本身有关。加显色剂后立即显色，不可报阳性，这可能是本底显色的结果。    ⑨：加样要准确、快速。如果加样不准确，酶生成物的量不能确定，直接影响显色结果。显色的深浅及A值的测定与加入显色剂和终止液的量有关，所以加样应慎重。要求在一定时间内加样完毕的实验，如果加样迟缓，便出现误差，而且试剂长时间暴露在外，尤其室温过高时，保存期会缩短甚至失效。

                     为何双抗体夹心法是检测抗原的最常用方法用ELISA试剂盒检测抗原的方法很多，但是有一种方法是科研工作者们用得最多的，那就是双抗体夹心法。双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。所以双抗体夹心法是检测抗原的最常用方法！双抗体夹心法操作步骤如下：1、将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。 2、加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。 洗涤除去其他未结合物质。3、加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合 的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。 4、 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。    在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、 AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相 载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，作一步检测。

     ELISA与大家分享血清极为重要的功能ELISA与大家分享血清极为重要的功能。A、提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。B、提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。C、是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。D、起酸碱度缓冲液作用。E、有些情况下结合蛋白质能与热原质结合。F、提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。ELISA试剂盒实验加样时常见事宜：1、标本为血浆时必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟。2、若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。3、标本为血清时最好将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟。4、加样后及时放入孵箱。5、如果采用AT或其他全自动加样，最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。6、标本较多时，请分批操作。

          试剂盒关于各标本处理事宜讲解组织匀浆：将组织加入适量盐水捣碎，1000×g离心10分钟，取上清液。细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。血清：操作过程中避免任何细胞刺激，使用不含热原和内毒素的试管，血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测，1000×g离心30分钟去除颗粒。保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。

2017年“国庆”“中秋”放假通知尊敬的客户及公司全体员工：　　国庆中秋两佳节，双份祝福来送上，愿国庆家庆与您同庆，佳节佳时与您共享，上海信裕生物科技有限公司全体员工祝您国庆中秋双节快乐！　　根据《国务院关于修改〈全国年节及纪念日放假办法〉的决定》精神，结合公司实际，现将“国庆节”“中秋节”放假的有关事宜通知如下：2017年“国庆节”“中秋节”本公司放假时间为：2017年10月1日-10月8日，共8天 。10月9日正常上班。节日期间，我司将全体放假，有需要订货的客户节后统一安排处理！                                                                          上海信裕生物科技有限公司　　                                                        2017年9月30日

铜绿假单胞菌一、细菌的传播与致病假单胞菌普遍存在,而在潮湿环境尤甚。铜绿假单胞菌是存在于人类中最常见的一种假单胞菌，它偶尔可在腋下和肛门生殖道周围的正常皮肤,但除非给服抗生素,在粪中甚为罕见。该菌通常伴随毒力较强的细菌存在于病灶中,但偶尔也可单独引起暴露于外部的组织感染.假单胞菌感染通常发生于医院内。洗涤槽,防腐溶液和贮尿容器中常可发现这种细菌。通过医护人员可将病菌传给病人,特别在灼伤和新生儿重症监护室.是重要的医院内病原菌。铜绿假单胞菌引起的很多感染发生在衰弱或免疫受损的住院病人，它是重症监护室感染的第二位最常见的病原菌,是换气机相关性肺炎的常见原因。除医院内获得感染外,HIV感染者很容易在社区获得该菌的感染,而且一旦被铜绿假单胞菌感染,常可出现晚期HIV感染的体征。　　铜绿假单胞菌感染可发生于很多解剖部位,包括皮肤,皮下组织,骨,耳,眼,尿路和心脏瓣膜。感染部位与细菌的入口及病人的易感性有关。烧伤时,焦痂下区域可成为大量细菌侵犯的场所,进而成为引起菌血症的病灶,而菌血症常是烧伤的致死性并发症。本菌所致感染的临床表现取决于受累部位。在住院病人中,若口咽部有绿脓杆菌和其他革兰氏阴性杆菌共同繁殖,则气管插管,气管切开或间歇性正压呼吸可引起肺部感染。囊性纤维病的后期铜绿假单胞菌性支气管炎常见，分离得到的菌株有粘液状菌落的形态学特征。烧伤伴有恶性肿瘤的病人常见在其血液中分离出该菌株,临床表现为革兰氏阴性败血症,有时出现坏疽性深部脓疱,其特征为直径约1cm的紫黑色病变,中央区溃疡,四周为红斑。这种病变最常见于腋下和肛门生殖器部位。该菌还是尿路感染的常见病原菌,特别常见于有过泌尿科操作的病人,尿路梗阻的病人或接受广谱抗生素的病人。热带气候条件下常见的外耳炎流脓是耳部铜绿假单胞菌感染最常见的临床类型。糖尿病患者可发生更为严重的恶性外耳炎,表现为严重耳痛常伴有单侧颅神经麻痹,需要肠外给药治疗。绿脓杆菌眼部感染一般表现为角膜溃疡,最多见于外伤之后,但有些病人也可因角膜接触镜片或镜片液体污染而感染。引流的窦道,特别在足部外伤或深部穿刺伤后,可发现该菌菌。引流物常有汗味和果味.这种穿刺伤有很多可引起铜绿假单胞菌性蜂窝织炎和骨髓炎,为此除抗生素外,还要早期外科扩创。罕见情况下该菌可引起心内膜炎,通常发生于心脏直视手术所装的人工瓣膜或静脉吸毒者的自然瓣膜上。右侧心内膜炎用内科治疗,但为根治累及二尖瓣,主动脉瓣或人工瓣膜的感染,通常必须将感染的瓣膜切除。二、细菌的生物学特性铜绿假单胞菌属于假单胞菌属，是一种非发酵革兰阴性菌，菌体细长且长短不一，有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。菌体的一端有一根鞭毛，在暗视野显微镜或相差显微镜下观察可见细菌运动活泼。本菌生长温度范围25~42℃，最适生长温度为35℃，特别是该菌在4℃不生长而在42℃可以生长的特点可用以鉴别。需氧生长，在普通培养基上可以生存并能产生水溶性的色素。在血平板上会溶血。该菌含有O抗原（菌体抗原）以及H抗原（鞭毛抗原）。O抗原包含两种成分：一种是其外膜蛋白，为保护性抗原；另一种是脂多糖，有特异性。O抗原可用以分型。细菌的实验室检查及其它检查1. 标本采集 采自不同感染部位的各种标本，包括血液、尿液、痰标本、脓汁、穿刺液等。还包括来自医院环境中的各种标本如水、空气、物体表面采样等。2. 染色镜检 为革兰阴性菌，菌体细长且长短不一，有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。菌体的一端有一根鞭毛。3. 分离培养 对有正常菌群存在的临床标本或采自环境中的标本应接种选择性培养基如MAC；对无正常菌群存在的临床标本如血液、脑脊液、穿刺液等可接种普通或血琼脂培养基。在普通琼脂培养基上生长18~24h可以见到扁平、湿润的菌落，该菌所产生的带荧光的水溶性青脓素与绿脓素相结合将使得培养基呈亮绿色；在血琼脂平板上生长时可以见到在菌落的周围有溶血环，菌落呈金属光泽；如果是在液体培养基中则呈浑浊状生长，在液体表面形成菌落，而在培养基底部细菌的生长不良。4. 生长实验 该菌在4℃不生长而在42℃可以生长。5. 生化鉴定 该菌能氧化分解葡萄糖但不分解甘露醇、麦芽糖和蔗糖。不产生吲哚、常不液化明胶、可分解尿素，还原硝酸盐为亚硝酸盐并产生氧气。6. 分型（1） 噬菌体分型 所应用的噬菌体现有24株，分型率达90%。（2） 血清学分型 利用O抗原进行分型，目前可分20个血清型。（3） 质粒指纹图分析：此项技术是对同种细菌的不同株进行同源性分析的一种方法。根据细菌携带质粒的情况进行分析。三、细菌的防治及时隔离治疗患者，同时提高医院内的消毒水平以及症疗操作的规范和安全，能够切实降低铜绿假单胞菌的院内感染水平。在治疗方面，若感染位于外表而且局限,可用1%醋酸冲洗或局部应用多粘菌素B或多粘菌素E,即可奏效。坏死组织必须扩清,而脓肿则必须引流。若需肠外给药治疗,用妥布霉素或庆大霉素5mg/（kg.d）分剂给予,可治愈大多数铜绿假单胞菌性尿路感染。根据临床反应,可将剂量减少到3mg/（kg.d）以尽量减少副作用。肾功能不全者的剂量必须减少。对酶介导耐妥布霉素和庆大霉素的铜绿假单胞菌应该用丁胺卡那霉素.很多专家主张治疗严重铜绿假单胞菌感染可用氨基糖苷类再加一种抗假单胞菌的β-内酰胺.几种青霉素,包括替卡西林,哌拉西林,美洛西林和阿洛西林对铜绿假单胞菌也有效。其他有良效的药还有头孢他定,头孢平,氨曲南,亚胺培南,美罗匹宁和环丙沙星。替卡西林最为常用,其剂量为16~20g/d,静脉注射。哌拉西林,阿洛西林,头孢平,头孢他定,美罗匹宁和亚胺培南体外试验对某些耐替卡西林菌株有效。　　对全身性感染或粒细胞缺乏的病人,应该用一种对铜绿假单胞菌有效的氨基糖苷与一种抗假单胞菌青霉素合用。对嗜中性白细胞减少并且肾功能处于边缘状态的病人,可用非氨基糖苷类联合疗法,例如双重β-内酰胺或β-内酰胺加一种氟喹诺酮,也是安全的。尿路感染常可用羧茚苄青霉素或环丙沙星或其他氟喹诺酮类药物治疗。但氟喹诺酮类不应该用于儿童,因为该药对软骨有不良作用。两种抗假单胞菌药物合用时,在治疗过程中出现耐药菌株的机会明显减少。四、细菌的生物安全防护根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定，人间传播的微生物名录（待颁布）铜绿假单胞菌属于三类，BSL-2。相关的防护事宜包括：（1）操作要求1、实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。2、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。3、所有的操作过程应尽量细心，避免产生和溅出气溶胶。4、对于污染的锐器，必须时刻保持高度的警惕，包括针、注射器、玻片、加样器等。5、注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器（即注射器和针头是一体的）。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。6、打碎的器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在倒掉前，应按照相关的规定进行消毒。7、所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。离开该系统进行消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关的法规。8、溅出或偶然事件中，明显暴露于传染源时，要立即向实验室主任报告。进行适当的医学评估、观察、治疗，保留书面记录。9、按日常程序、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。污染的设备在送去修理、维护前，要按照相关的规定消毒；在离开设施转移前，要按照相关的规定打包运输。（2）安全设备1、正确使用和保养生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其他合适的人员防护设施、或物理遏制装置。2、确定可能形成传染性气溶胶或溅出物的实验过程，包括离心、研磨、匀浆、剧烈震荡或混匀、超声波破裂、开启装有传染源的容器、采集感染标本等。3、涉及高浓度或大体积的传染源时，若选用密封转头或带安全罩的离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放实验室内离心。4、当必须在生物安全柜外处理标本时，需采取面部保护措施（跟镜、口罩、面罩、或其他防溅装置），以免传染源或其他有害物溅或洒到面上。5、在实验室内，必须使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非实验室区域时，防护服必须留在实验室内。防护服可以在实验室内处理，也可以在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。6、可能接触潜在传染源、被污染的表面或设备时，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重复使用，不能用于接触“洁净”的表面（键盘、电话等），也不应当戴着到实验室外。要备有带滑石粉的乳胶手套。脱掉手套后，要洗手。 

溶菌酶的应用1 医学上应用　　可作为一种具有杀菌作用的天然抗感染物质。有抗菌、抗病毒、止血、消肿止痛及加快组织恢复功能等作用。临床用于慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔溃疡、水痘、带状疱疹和扁平疣等。也可与抗菌药物合用治疗各种细菌和病毒感染。口服和肌注均有效。副作用 偶有较轻的过敏反应。氯化溶菌酶医疗效果更广，有浓痰分散、出血抑制、组织修复、消炎镇痛、抗过滤性病毒等作用，因而用氯化溶菌酶的制药有消炎消痔、治感冒、皮肤病及眼、鼻、喉等用药.2食品保藏应用　　可作为防腐剂,它的主要功用是水解细菌细胞壁，在细胞内，则对吞噬后的病原菌起破坏作用.该酶对革兰氏阳性菌中的枯草杆菌、耐辐射微球菌有分解作用。对大肠杆菌、普通变形菌和副溶血性弧菌等革兰氏阴性菌也有一定程度溶解作用，其最有效浓度为0.05%。与植酸、聚合磷酸盐、甘氨酸等配合使用，可提高其防腐效果。应用领域　　1、 溶菌酶是一种无毒、无副作用的蛋白质，又具有一定的溶菌作用，因此可用作天然的食品防腐剂。现已广泛应用于水产品、肉食品、蛋糕、及饮料中的防腐；还可以添入乳粉中，使牛乳人乳化，以抑制肠道中腐败微生物的生存，同时直接或间接地促进肠道中双歧杆菌的增殖。　　2、 溶菌酶作为一种存在于人体正常体液及组织中的非特异性免疫因素，具有多种药理作用，它具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤的功效，目前医用溶菌酶其适应症为出血、血尿、血痰和鼻炎等。　　3、 溶菌酶具有破坏细菌细胞壁结构的功能，以此酶处理G+细菌得到原生质体，因此，溶菌酶是基因工程、细胞工程中细胞融合操作必不可少的工具酶。

真菌的培养方法1、钢环法（1）材料：白假丝酵母菌、沙保弱培养基、无菌玻片、盖玻片、钢环（带有缺 口）、石蜡。（2）方法①用无菌镊子取无菌小培养钢环，环的两面分别蘸取熔化的固体石蜡，平置于无菌载玻片上，另取一无菌盖玻片，在酒精灯火焰上加热后覆盖于钢环上，待冷后，小培养钢圈即被固定于载玻片与盖玻片之间。②用毛细滴管吸取融化的培养基，从钢环上端孔注入，注入量占容积的1/2即可。③培养基冷却凝固后，用接种针挑取材料，由上端孔接种于环内培养基上。④置湿盒内，室温或37℃下培养2—3d后，逐日观察，镜下可连续看到真菌生长过程及菌丝、孢子等特征，一般7d左右即可长好。⑤也可不用小培养钢环，直接将融化的培养基滴于无菌玻片上，待冷凝后从周边接种材料，用盖玻片覆盖后培养，在显微镜下连续观察生长情况。（3）结果：镜下观察可见到有胞壁增厚的厚膜孢子及假菌丝。2、小块琼脂玻片培养法 用无菌操作法将制好的待用琼脂平板用无菌接种针或接种环切成大约1cm2的方块，将其放置于灭菌的载玻片上。将标本或待检菌接种于琼脂块四周边缘靠上方部位，然后用无菌镊子取一无菌的盖玻片盖在琼脂上。在无菌平皿内放入少量无菌水和一个无菌U形（或V形）玻璃棒。将此载玻片置于玻璃棒上，盖上平皿盖培养。每日用肉眼和显微镜观察孢子和菌丝的特点。 

酶免ELISA试剂盒的优势ELISA试剂盒可节约试验经费：1、水溶性、低黏度、无腐蚀、不易燃、不污染环境。2、所选用的办法特异性好，灵敏度、准确度、精密度。3、所用标准品或标准参看物符合引荐标准和请求。4、贮存期起码为1年。酶免ELISA试剂盒具有超高灵敏度：1、可查看浓度≤1.0 pg/mL的细胞因子，效果牢靠；    2、样本用量少，只需50ul,样本量有限时的不贰之选；    3、操作简略，试验流程简略,试剂盒供应全部必需组分；    4、查看设备简略，运用常规比色法酶标仪（450nm）读数即可。 

ELISA试剂盒斑斓的操作程序ELISA办法的首要操作程序为：(1)载体膜的预处理及抗原包被 取硝酸纤维素膜用蒸馏水浸泡后，稍加单调进行压圈。将阴性、阳性抗原及被查看抗原适度稀释后参与圈中，置37℃使硝酸纤维素膜彻底单调。每张7cm×2.3cm的膜一般可点加40－53个样品，每个压圈可加抗原液1－20μl。(2) 加酶标抗体，37℃反应一定时间后，用洗刷液洗三次。(3)显色参与新鲜制造的底物液，37℃反应一定时间后，去掉底物液，加蒸馏水洗刷中止反应。(4) 关闭 将硝酸纤维素膜置于关闭液中，37℃感作15－30分钟。关闭液多选用富含正常动物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。(5) 加被检血清 可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再参与一定量适度稀释的待检血清，37℃反应一定时间，用洗刷液洗三次，每次1－3分钟。洗刷液一般为一定浓度的PBS-Tween溶液。(6) 效果判定 以阳性、阴恶血清作为对照，膜片基地出现深棕赤色斑斓者为阳性反应，否则为阴性反应。

ELISA试剂盒常见问题解析与实验前的小常识ELISA试剂盒常见问题解析：A、样品数量多少不一，加样时间有长有短？解决方法：重复某一样品时，加样时间尽可能与第一次接近。B、加样量不一致？解决方法：样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴。C、保温时间不一致，洗涤条件不一致，操作人员不一致？解决方法：重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性。ELISA试剂盒实验前的小常识：（1）按说明书确定所有试剂盒齐全(数量、体积)。（2）确定试剂盒在有效期内。（3）仔细阅读说明书。（4）标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存)，尽量分装做备份，短期内无法实验者，注意低温保存。（5）根据检测标本数量确定所需试剂的量。（6）准备好所有实验额外所需物品，如试管、吸头、移液器、离心机等。（7）按说明书将所用试剂盒平衡至室温，配制所需试剂。 

ELISA试剂盒SCI文章的条件解析1)未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20℃。2)使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。ELISA试剂盒SCI文章属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有最贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA检测试剂盒反应总是需要一定时间的温育。温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃（冰箱温度）等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELISA方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时，产物的生成可达顶峰。为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻底，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中，以形成最多的沉淀。但因所需时间太长，在ELISA试剂盒SCI文章中一般不予采用。

ELISA试剂盒各个操作步骤的注意要点ELISA试剂盒作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。一些操作者，擅自改变说明书操作，ELISA试剂盒检测结果准确可靠的必要条件。ELISA试剂盒的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。   国外试剂均与特殊仪器配合应用，两者均有详细的使用说明，严格遵照规定操作，必能得出准确的结果。ELISA试剂盒商品必然有使用微量加样器加入样本的步骤。注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。因此一般用于检测较强的光，如荧光检测。而白色的酶标板就用于较弱的光检测，常用于一般的化学发光。另外黑色的酶标板还可以消弱非特异反应带来的问题。有些客户会问，  ELISA试剂盒用一般的酶标板可不可以进行发光检测，回答是不可以的，因为一般从化学发光反应中发射出的光是各向同性的，也就是说各个方向上同等发射出来的。如果用透明的板子，光不仅会从垂直方向发散，还从水平方向发散出来。  ELISA试剂盒需要将微孔板中培养的细胞进行固定和通透化，然后再用抗体原位检测。ELISA试剂盒POT有点像蛋白印迹Western blot，先在带膜的微孔板中培养细胞，然后在膜上检测细胞分泌的抗原形成斑点。此外，我们还需要根据自身需要选择96孔板或是384孔板进行ELISA试剂盒实验。  ELISA试剂盒实验，双抗夹心法中抗原被夹在捕获抗体和检测抗体之间，这种方法既灵敏又有效，受到了许多研究者的青睐。不过有时候双抗夹心法并不是选择，例如有时候抗原特别小让两个大抗体难以附着，又或者抗体只有一个抗体结合位点。

ELISA试剂盒的规范曲线时应予因此在ELISA试剂盒测定的反响过程中应尽量防止非特异性吸附，在ELISA试剂盒中通常有二次抗原抗体反响，即加标本后和加联系物后，此刻反响的温度和时刻应按规则的请求，保温容器最好是水浴箱，可使温度敏捷平衡。各ELISA试剂盒板不该叠在一同。为防止蒸腾，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿纱布的湿盒中。湿盒应该是金属的，传热简单。如用保温箱，空湿盒应预先放在其间，以平衡温度，这在室温较低时更为重要。参加底物后，反响的时刻和温度通常不做严格请求。   ELISA试剂盒而在洗刷时又应把这种非特异性吸附的搅扰物质洗刷下来。在标本和联系物的稀释液和洗刷液中参加聚山梨酯(吐温，Tween)一类物质即右达到此意图。聚山梨酯是聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯，为非离子型的表面张力物质，常作为助溶剂。依据脂肪酸的品种而对聚山梨酯编号，联系月桂酸的为聚山梨酯20，在ELISA试剂盒中最为常用。它的洗刷效果好，并具有削减非特异性吸附和增强抗原抗体联系的效果。   ELISA试剂盒酶标仪的可测规模视各酶标仪的功能而不一样。一般的酶标仪在0.000~2.000，新类型的酶标仪上限拓宽达2.900，乃至更高。超出可测上限的A值以"*"或"over"或其它符号表明。应注意可测规模与线性规模的不一样，线性规模常小于可测规模，比方某一酶标仪的可测规模为0.000~2.900，而其线性规模仅0.000~2.000，这在定量ELISA试剂盒中制作。 酶标仪不该安顿在阳光或强光照射下，操作时室温宜在15~30℃，运用前先预热仪器15-30分钟，测读成果更安稳。测读A值时，要选用产品的灵敏吸收峰，如OPD用492nm波长。有的酶标仪可用双波长式测读，即每孔先后测读两次，首次在最适波长(W1)，第2次在不灵敏波长(W2)，两次测定间不移动ELISA试剂盒板的方位。

试剂盒实用性主要体现在哪些方面？用户选用试剂盒，主要是为了及时得到可靠的数据。因此，试剂盒实用性是用户选购试剂盒的第一考虑。从实用的角度来看，Elisa试剂盒必须满足下述要求。 （1）质量可靠。在研发过程中选择权威测定方法，反复优化测定体系、测定条件和操作步骤，并且进行多种生物样品的实际测定验证，以确保测定的专一性、灵敏度、重复性和回收率；在生产过程中实行严格的质量控制，主要试剂选择国外知名生产商，并且从固定供应商处购买，生产人员经过系统长期培训，并且建立了严格的质量追溯体系。劲马生物实行先用后付方法，即用户满意后才付款。万一出现质量问题，劲马生物及时免费提供新试剂盒。 （2）操作简便快捷。首先，测定方法以分光光度法为主，并且可以用酶标仪测定，保证绝大多数用户都有相应的仪器和操作经验。其次，保证测定结果可靠的基础上科学简化操作步骤，例如，根据反应步骤配制工作液，显著减少了用户加液次数，尽量统一加试剂的体积，显著减少用户调移液器的次数等等。最后，操作说明简洁明确，用户一看就懂。 （3）规格合理。试剂盒中通常由必须现用现配的试剂。如果保证过大，用户一天内不能用完，会造成试剂浪费。因此，Elisa法劲马牌试剂盒以96T/48t规格为主，绝大多数用户能够一天内用完。酶联免疫规格包装可以节省用户经费。因此，我司也有大包装试剂盒，其中需要现用现配的试剂，采用分装成几个试剂瓶的方法，方便用户分次使用。 （4）系列成套，便于用户选择。劲马生物紧跟研究热点，针对某个研究主题，优选测定指标，全面满足用户进行该主题研究的需要。同等价格比质量，优质产品看价格，我们绝对是您的选择，原版说明书提供，您可放心购买生化试剂等其他相关产品。多年专业酶免服务，可免费提供代测服务。保证质量专售科研试剂，价格更优惠！

技术团队为您解答试剂盒标准曲线问题？标准曲线做的好与坏会直接影响到实验的结果，甚至是关系到实验的成败，那么究竟如何绘制或制作标准曲线呢？一、做标准曲线样品检测时有几个问题需要注意1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度最陡段，即曲线几乎成直线的范围内。3、最好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。4、检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。5、标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要保证有5个点。6、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99甚至是0.999.

如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要与朋友交流，不少人都感慨抗体不好选，诸如：本来课题经费就有限，找进口的总觉得囊中羞涩，找国产的又有些担心质量不行，有时候找到抗体名称差不多，偏偏应用类型又不符。虽说国内外抗体公司一大把，但是真要找到自己需要的抗体，还真不太容易。随着生命科学的发展，围绕蛋白进行的研究越来越多，抗体试剂在实验中的重要性越来越举足轻重。面临着纷呈复杂的抗体试剂市场，如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要。本章将为您具体讲讲抗体选择的那些事！欢迎参考学习！一、关于特异性的选择：特异性的选择主要需要考虑四个方面：蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。 1、蛋白特异性：针对需要检测的蛋白查找抗体，几个细节要区分，重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测，对抗体的要求是不一样的，注意查看抗体说明书的检测说明。如果重组蛋白不是全长表达，则需要注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。内源性蛋白最好能清楚其剪切与修饰的方式，特殊表型的蛋白需要进行序列比对，并结合抗体免疫原序列，查看交叉反应的情况。磷酸化蛋白检测需要确定具体位点，不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在，不宜一概而论。 2、种属特异性：同种蛋白不同物种，有着或大或小的差异。目前大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板重组蛋白或设计多肽抗原的，根据蛋白的同源性情况与其他种属发生交叉反应。需要参照说明书注明的可反应种属信息。一些稀有种属很难找到抗体，可以通过蛋白的序列比对，选择同源序列免疫的抗体，不过一般这种情况生产商不会受理其关于质量的申诉，如果可以申请到免费的抗体样品，则利于抗体选择。 3、实验方法特异性：目前使用抗体的实验方法有很多，不同的使用方法过程中，因为对蛋白样品的处理方式不一样，蛋白的含量有差异，对抗体的识别表位和效价要求都是不一样的。具体的根据说明书注明的产品应用方法进行选择。但是生产商一般不会将每个抗体都进行各种实验的检测，目前检测比较多的只是WB、IHC、IF等，如果针对具体的实验方法没有找到合适的抗体的，可以结合蛋白序列分析和抗体的抗原信息，选择尽可能有效果的抗体。同样，申请到免费的抗体样品是个很好的途径。 4、标记物的特异性一般基于实验操作的实验方法不会使用带有标记的一抗，比如WB、IHC等，都是通过二抗类的试剂标记达到结果呈现的目的。但是基于仪器分析的一些实验，可能就会使用到直接标记的一抗，比如流式实验。那么需要了解到自己将要使用的仪器能检测到的荧光范围，针对不通的参数要求选择对应的标记物。在免疫荧光双标实验中，需要选配不同的荧光标记物。 二、抗体种属来源的选择：有人认为单抗比多抗好，其实这并不是一个严谨的观点，只能说在可能性上单抗的特异性更好一些，而多抗的亲和力会优于单抗，并且特异性并不一定就逊于单抗，主要看抗原的设计水平。目前商品化抗体里单抗主要是鼠单抗、兔单抗，多抗主要是兔多抗、山羊多抗等，其他种属来源抗体较少。不建议纠结于单抗好还是多抗好，能做出实验的抗体就是好抗体。在选择上一般建议实验种属和抗体种属亲缘性越远越好，不宜同源。抗体不同种属会要影响接下来二抗的选配。特别是在免疫荧光双标实验中，需要在区别于实验种属的基础上，区分开两个指标的抗体种属来源，以便于二抗区别识别。 三、关于性价比的选择：抗体的品质高低最终还是需要通过实验结果来呈现的，但是在选择抗体之前我们并无法准确判断抗体的效果如何。无论什么品牌的，无论进口还是国产的，都会有用得不错的产品，也都会有做不出来的产品。抗体属于异质化产品，不同品牌之间，甚至同一品牌的不同产品之间，抗体品质差异都较为明显，而且没有统一的衡量标准。这是抗体选择中最难的一个问题。很多人习惯于根据实验室传统意识或参考文献上使用的产品进行选择，但是因为不同批次间的抗体效果也是有差异的，所以并不能完全确保正确选择。在这种情况下，抗体的售后就尤为重要，遇到抗体品质障碍时，能够确保有效地解决问题，不至于影响实验的进展。现在有部分品牌可以提供免费的抗体小样的，无疑对这个问题是一个很好的解决方案。先确定抗体是否适合自己的实验，可以避免因为抗体质量投诉耽误实验安排。 在价格方面，需要谨记，最贵的不一定就是最好的，最适合你的实验的才是最好的。花很多钱买到很贵的抗体，再花上很长的时间去投诉的情况并不少见。只买对的，不买贵的。在选择价格的时候还要注意规格大小、抗体浓度、效价范围等，要综合考虑。在规格方面，根据最终可以稀释成的工作液的量的来衡量更为准确。很多老品牌提供的抗体产品基本都是以大包装为主，就单个课题的实验而言，过大的包装有时会造成很大的浪费。目前Proteintech、Bioworld、Cell Signal等品牌都相继推出小包装的抗体，这在一定程度上给选择者更大的选择自由度，可以根据使用产品的效价，计算出自己实际需要的抗体量，做到精确定量采购。 四、关于品牌的选择：因为抗体品质的异质化，关于抗体的品牌选择就被大家所重视，但是不管是什么品牌都难免会遇到不适合自己实验的抗体。所以一般建议考虑那些业内普遍认可、购买方便、技术支持专业、售后处理便捷的品牌。一些甚至都没有正式代理的，只能备选。同时购买时一定要找能够提供产品指导、实验分析、售后处理的正规代理商购买，避免因为买到假货水货影响实验。 五、关于其他一些小细节：抗体选择与使用过程中，多少还会遇到一些意想不到的事情。有些细节，还是需要多注意一些。如在选择做阻断或中和实验时，有时需要将抗体加到细胞培养液中，这是需要注意抗体是否含有叠氮钠。如果是大包装的抗体，进行分装是比较节约的方式，如果是高效价的，可以配成母液再分装。抗体的短时间运输，用普通冰块保持温度是可以满足要求的。 另外不要纠结于WB过程中分子量的问题。很多时候，我们看到同样的抗体，不同的品牌，甚至同一品牌不同的货号，标注的分子量都不一样。其实可能只是生产商只检测时使用了不同的种属不同的样品类型，或是参照了不同的文献，对使用者来说，同样的样品，不管使用哪个品牌的，只要抗体是对的，目的条带只会出现在相同的位置。关于分子量的问题，一般不建议看产品说明，WB中条带的位置由样品决定，并不会因为抗体不同而不同。所以在检测蛋白之前，我们可以通过数据库或参考文献，对将要检测的蛋白做个比较全面的了解，包括其可能剪切与修饰的情况、表型的情况等。在第一次使用一个新的抗体时，不要根据分子量横向剪膜，可以保留几个全泳道，看看条带位置或分布的情况。

熟练的掌握好ELISA试剂盒的这些技术关键有助于实验ELISA试剂盒为了得到非常好的实验效果，一些实验者们还需多加了解技术内容，公司每周都会为您精心收拾出关键技术办法，可以熟练的掌握好这些往后再应用到实验里边就会简略的多。今日的主要内容ELISA试剂盒的一些技术关键：样本加样办法1、细胞上清：前处理有必要把细胞离心去掉，每孔直接加100μl即可。假定浓度太高需稀释时，用标准品稀释液直接稀释。2、脑脊液：前处理有必要把细胞离心去掉，每孔直接加100μl即可。假定浓度太高需稀释时，用标准品稀释液直接稀释。3、血清血浆：请参与50ul样本分析缓冲液后加50ul标本,如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量参与，缺少部分用标准品稀释液赔偿至100ul。4、组织匀浆液的样本，要制备过程中需要在缓冲液中参与蛋白酶抑制剂，防止蛋白成份被内源性蛋白酶降解，构成查看效果的值偏低。ELISA试剂盒因组织匀浆液的样本蛋白品种多，含量丰厚，实验参照血清血浆标本的处理办法进行，否则就会影响实验效果。具体是参与50ul样本分析缓冲液后加50ul标本，需稀释时，请将样本与样本分析缓冲液等量参与，缺少部分用标准品稀释液赔偿至100ul。A.血清标本应是天然凝聚后，取上清，防止在冰箱中凝聚血液；B.血浆标本，推荐用EDTA的办法收集若待测样本不能及时查看，标本收集后请分装，冻存于－20℃，防止重复冻融。C.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；D.标本应明澈通明，查看前样本中如有悬浮物应通过离心去掉。E.请勿运用溶血，高血脂或污染的标本查看，否则效果将不精确。ELISA试剂盒因为政策蛋白不一样，或许构成降解的蛋白类型或许不一样，假定实验前通过文献断定用哪种蛋白酶抑制剂，有针对性参与，可节省抑制剂。假定查不到有关文献，可采用组合抑制的办法确保蛋白不易被降解。

ELISA试剂盒操作员的素质直接影响实验的成败实验室职员收到标本后应当认真查对，对不符合要求的标本和申请单要拘收，合格标本要及时分离血清，避免溶血，提取血清时不应混有大量纤维蛋白或细胞成分。ELISA试剂盒再就是建立完善的质量保证体系，以书面的形式发给每位成员以及临床科室，做到人人认识人人正视影响实验结果的因素。 一项实验的成功不光是要有优质的试剂产品，还要具备应当有的素质。今天的新资讯内容里，给您介绍进口ELISA试剂盒操作员应有的素质包括。1. 思惟素质；2. 文化素质；3. 技术素质；4. 心理素质；5. 身体素质。 在操纵过程中时刻留意，将质控贯串到整个实验过程，包括待检者的预备、标本的采集与处理、操纵过程、检修结果的审核、结果的登记与保留、讲演单的发放等一系列的轨制，用轨制管人，明确责任，错误的结果仍是能够避免发生的。 当我们真正的做到以上的素质内容之后，再操作进口ELISA试剂盒实验能够避免很多不必要的麻烦和出错率。

sci 文献解析揭示如何进行蛋白质转运研究什么是蛋白质转运？除了少量的蛋白质由线粒体和叶绿体 dna 编码外，其余蛋白质都是由细胞核 dna 编码，在细胞质游离/吸附的核糖体上合成。细胞要发挥正常功能，必须使每一个蛋白质都要在膜（细胞膜，细胞器膜）或水相腔室（细胞质，细胞器基质或内膜腔）中正确定位。如受体蛋白、离子通道蛋白和转运蛋白需要嵌在质膜内。dna、rna 聚合酶需要运送到核里。蛋白酶和过氧化氢酶应分别转运至溶酶体和过氧化物酶体。其他如细胞外间质和激素则需要分泌到细胞外。也就是说蛋白质转运是* 细胞内将新合成的蛋白分类，修饰并运输到正确目的地的过程。* 可以将蛋白质转运形象化类比为街道上移动的交通工具：多方向运动，遵守交通规则，高度动态，每个都具有一个最终目的地。* 蛋白质转运/蛋白质定位/蛋白质分发，这三个术语在文献中是可以互换的。 蛋白质转运主要有两条路径：内吞和外泌。2为什么要研究蛋白质的转运？* 帮助我们了解细胞稳态的关键机制，蛋白质-蛋白质相互作用，翻译后修饰和细胞间的相互作用。* 解释人类疾病发病机理，如亚细胞蛋白质转运发生错误，将会发生「转运异常疾病」，目前为止，已经发现超过 30 种转运异常疾病，囊性纤维病是最具代表性之一。这些疾病包括但不仅限于代谢、神经病变和癌症疾病。3如何研究蛋白质转运？研究方法主要有以下几类* 放射自显影（脉冲追踪 + 电子显微镜）* 绿色荧光蛋白（gfp）+ 显微镜检查* 突变体 + 绿色荧光蛋白（gfp）* 生化分析和无细胞系统* 亚细胞结构分离 + western，ip，交联质谱技术（xl-ms）其中亚细胞结构分离 + western，ip，交联质谱技术（xl-ms）是目前最常用的方法。4亚细胞结构分离方法研究蛋白转运应用举例example a. ulbp2 trafficking blockageleung wh., et al （2015）。 j. of immunol., spin column-based fractionation.leung 等人[1]研究 prl-3 对 ulbp2 蛋白转运的影响。人结肠癌细胞系 hct116 使用 40um prl-3 处理，然后使用离心管柱法进行亚细胞结构分离。结果显示，细胞质膜，细胞器和细胞浆组分被彻底分离，经过化学处理后的细胞导致 ulbp2 从细胞膜迁移到细胞器组分，而各组分中其他蛋白质在 prl-3 处理前后无明显变化。example b. hiv gag protein traffickingbutluay et al cell. （2014）， spin column-based fractionation.kutluay 等人[2]研究 hiv-1 病毒颗粒组装过程中 gag-rna 复合体的分布及变化情况。实验中关键步骤之一是证明在不同亚细胞结构中 gag-rna 复合体表现出不同形式。用 hiv-1 病毒质粒转染 4su-fed 293t 细胞后，通过离心管柱法进行亚细胞结构分离，分离后的细胞浆和细胞膜组分进行 western 印迹和免疫沉淀实验。结果表明，胞浆中的 gag 蛋白主要是单体形式，而细胞质膜上的 gag 蛋白是多聚体形式（图 b）。这一结论很大程度上取决于细胞浆和细胞质膜组分的彻底分离（图 a）。example c. isolated plasma membrane shows clearer signalskashiwagi y. et al. plos one （2015） , spin column-based fractionation.大部分质膜蛋白为低丰度表达，没有经过分离和富集时很难检测和定量。上图数据[3]显示质膜蛋白富集后对灌注后小鼠心脏样品中 sglt1 检测效果的影响。与总膜部分相比，sglt1 和质膜蛋白内参 na+/k+ atpase 信号在质膜蛋白组分中都有显着的增强。example d. distribution of target proteinsgeorgiou d. k. et al. jbc （2015）， spin-column-based fractionation.georgiou 等人[4]研究钙离子通道复合物 cav1.1 调控脂肪酸转运蛋白 cd36 分布和脂肪酸代谢。cav1.1 e1014k 基因敲除小鼠（ek）和野生小鼠（wt）的肌肉组织样品，通过离心管柱法进行亚细胞结构分离，分离后的细胞浆，细胞核，细胞膜以及纯化的线粒体组分进行 western 印迹检测 cd36 的表达及分布情况。lamin a，gapdh 及 vdac 分别为细胞核，细胞浆及线粒体组分的内参。结果表明，与 wt 相比，ek 小鼠的 cd36 在细胞浆组分中增加，在质膜组分中减少。其它膜蛋白（enos,cav1.1,ryr1）则无明显变化。example e. cell fractionation and ipdevarakonda et al. bmc cancer （2015） 15:614, spin-column-based fractionation.devarakonda 等人[5]研究乳腺癌患者细胞 hsp90 蛋白与重链抗体（hcab1 及 hcab2）靶向结合。乳腺癌样品通过离心管柱法进行亚细胞结构分离，分离后用细胞浆和细胞膜蛋白进行 ip 实验。结果表明只有 hcab2 可在细胞浆中沉淀内源 hsp90 及重组蛋白（hsp90beta），hcab2 也可在细胞质膜中沉淀内源 hsp90。5亚细胞结构分离的常用方法有哪些？1. 蔗糖密度超高速离心分离法传统方法进行亚细胞结构分离是通过蔗糖密度超高速离心分离[6,7]，操作方法十分繁琐和耗时并且需要较大样品量。 通常需要几个小时甚至几天才能完成。步骤复杂，需要特殊设备仪器，自配溶液，以及需要优良的操作技术。2. 表面活性剂提取法大部分商业试剂盒属于这类方法。可将细胞分为两大组分：胞浆蛋白和总膜蛋白，但无法单独提取质膜蛋白组分，下游无法进行蛋白互作类研究。3. 离心管柱法亚细胞结构分离法你可能不知道，离心管柱法是新一代的亚细胞结构分离技术。离心管柱法亚细胞结构分离无需匀浆仪和超高速离心机，简单而快速。细胞/组织样品首先通过一个特制的离心管柱，在这个过程中细胞膜会被破裂，完整的细胞核，细胞器，质膜和胞浆蛋白被释放到溶液中，之后进一步分离成五个组分：细胞核，细胞浆，总膜，细胞器，质膜。使用离心管柱和独特的缓冲系统配合，可以获得高回收率，低交叉污染的天然亚细胞结构蛋白，整个操作不到一小时即可完成。分离出的天然亚细胞结构蛋白可以用于任何下游实验，离心管柱法也可用于植物样品亚细胞结构的分离。点击「阅读原文」即可了解更多相关内容。