ELISA试剂盒各个操作步骤的注意要点

上海信裕

2017/08/14 17:36

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ELISA试剂盒各个操作步骤的注意要点

ELISA试剂盒作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。一些操作者，擅自改变说明书操作，ELISA试剂盒检测结果准确可靠的必要条件。ELISA试剂盒的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。

国外试剂均与特殊仪器配合应用，两者均有详细的使用说明，严格遵照规定操作，必能得出准确的结果。ELISA试剂盒商品必然有使用微量加样器加入样本的步骤。注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。因此一般用于检测较强的光，如荧光检测。而白色的酶标板就用于较弱的光检测，常用于一般的化学发光。另外黑色的酶标板还可以消弱非特异反应带来的问题。有些客户会问，

ELISA试剂盒用一般的酶标板可不可以进行发光检测，回答是不可以的，因为一般从化学发光反应中发射出的光是各向同性的，也就是说各个方向上同等发射出来的。如果用透明的板子，光不仅会从垂直方向发散，还从水平方向发散出来。

ELISA试剂盒需要将微孔板中培养的细胞进行固定和通透化，然后再用抗体原位检测。ELISA试剂盒POT有点像蛋白印迹Western blot，先在带膜的微孔板中培养细胞，然后在膜上检测细胞分泌的抗原形成斑点。此外，我们还需要根据自身需要选择96孔板或是384孔板进行ELISA试剂盒实验。

ELISA试剂盒实验，双抗夹心法中抗原被夹在捕获抗体和检测抗体之间，这种方法既灵敏又有效，受到了许多研究者的青睐。不过有时候双抗夹心法并不是选择，例如有时候抗原特别小让两个大抗体难以附着，又或者抗体只有一个抗体结合位点。