关于2018年国庆节放假安排的通知尊敬的客户及同事们：您好! 正值国庆佳节举国欢庆之际，首先对贵单位对我司的支持与合作表示衷心的感谢。在您的支持和信赖下，我们才得以在激烈的市场环境下不断进步。为了欢度国庆，根据国务院放假规定和我司的具体情况，我司国庆放假时间已定为10月1日至10月8日放假，共7天。其中，10月1日至7日为国庆节法定节假日， 10月8日（星期一）正常上班。9月26日-30日仍可正常发货，为确保不耽误贵司的正常运作，请贵司提前做好所需库存计划安排，因放假给您带来的不便，敬请谅解！在此，上海信裕生物科技有限公司全体员工恭祝您国庆愉快，身体健康，财源广进。希望您能继续支持我们的工作，愿我们的合作更加紧密，愿我们的事业更加辉煌！顺祝 上海信裕生物科技有限公司2018年9月28日

结核杆菌抗体检测在结核病诊断中的应用价值  探讨结核杆菌抗体检测在结核病诊断中的应用价值。方法选择50例结核病患者作为结核病组,选择50例健康受试者作为对照组。两组患者均行结核杆菌抗体检测,在此基础上,结核病组患者进行PPD实验及痰涂片检测。结果结核病组结核杆菌抗体的阳性率为88.00%,显著高于PPD实验检测的64.00%及痰涂片检测的52.00%(P0.05)。结核杆菌抗体检测对结核病组检出的阳性率显著高于对照组(P

姜黄素对砷中毒小鼠急性肝脏毒性与氧化损伤的拮抗作用观察 探讨姜黄素对砷中毒小鼠急性肝脏毒性与氧化损伤的拮抗作用。方法选取60只健康的昆明种雌性小鼠,将60只小鼠分为对照组、单纯染毒组、干预组1和干预组2。对照组6只,单纯染毒组、干预组1和干预组2各18只。各实验组小鼠以自由饮水方式饮用浓度为10mg/L、50mg/L、100mg/L的含砷水,时间6周。干预组1、2分别给予姜黄素以200mg/kg、600mg/kg剂量进行灌胃干预,每周2次。对各实验组小鼠肝脏丙二醛含量、血清谷草转氨酶及谷丙转氨酶水平、肝脏和全血谷胱甘肽含量进行测定。结果单纯染毒组血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶水平高于对照组,差异具有统计学意义(P

COX-2-PGE2途径在幽门螺杆菌诱导人胃癌细胞VEGF表达中作用的机制 研究幽门螺杆菌是否通过COX-2-PGE2途径诱导人胃癌细胞中VEGF的表达。方法:培养胃癌细胞株MKN45,分为NC组(不予药物处理)、Hp组(幽门螺杆菌处理)、Hp+NS组(幽门螺杆菌联合NS398处理),采用CCK8试剂盒测定细胞增殖情况,采用PCR试剂盒、Western-blot试剂盒、Elisa试剂盒测定VEGF、COX-2、PGE2的表达量。结果:处理后6、12、24h时,Hp组细胞的OD值高于NC组;处理后24h后,Hp组细胞的VEGFA、VEGFB、VEGFC、Cox-2、PGE2的表达量高于NC组,Hp+NS组细胞VEGFA、VEGFB、VEGFC、Cox-2、PGE2的表达量低于Hp组。结论:幽门螺杆菌感染能够通过COX-2-PGE2途径增加胃癌细胞中VEGFA、VEGFB、VEGFC的表达。

葡萄籽原花青素对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用葡萄籽原花青素对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法建立C57BL/6小鼠肝脏缺血再灌注模型。腹腔注射原花青素,给药量为每天20 mg/kg,注射3周。检测肝脏氧化应激水平以及炎性细胞因子释放水平。结果原花青素可降低缺血再灌注导致的谷丙转氨酶及谷草转氨酶活性升高,减少肿瘤坏死因子α与白介素的释放,并提高组织的总抗氧化能力,降低丙二醛水平,从而改善缺血再灌注损伤状况。结论原花青素可以减少肝脏缺血再灌注的损害,可以作为一种预处理药物应用于临床。

富氢水对体外培养甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞氧化应激的影响探讨富氢水对甲状腺相关眼病（TAO）的抗氧化应激作用。方法取TAO患者眼眶脂肪结缔组织的眼眶成纤维细胞进行体外培养,用不同浓度的过氧化氢（H2O2）处理细胞18 h后,用CCK-8法检测细胞增殖能力以确定合适的H2O2浓度。将细胞为4组:空白组（正常培养）、H2O2组（H2O2处理18 h）、富氢水+H2O2组（富氢水处理72 h的同时用H2O2处理18 h）、地塞米松+H2O2组（1μmol/L地塞米松处理72 h的同时用H2O2处理18 h）。用流式细胞术检测各组细胞活性氧（ROS）荧光强度,用ELISA检测细胞培养液中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的含量。结果 TAO患者眼眶成纤维细胞体外培养成功。H2O2浓度越高对TAO患者眼眶成纤维细胞增殖能力的抑制效果越明显,本实验最终选取的H2O2浓度为100μmol/L。培养TAO患者眼眶成纤维细胞72 h后,空白组、H2O2组、富氢水+H2O2组、地塞米松+H2O2组细胞培养液中MDA、SOD、GSH-Px的含量和细胞ROS荧光强度分别为（1.63±0.29）、（5.06±0.24）、（3.94±0.29）、（2.34±0.24）nmol/m L,（10.51±0.32）、（2.41±0.23）、（5.58±0.29）、（7.98±0.15）U/m L,（107.79±1.06）、（21.07±0.92）、（49.19±6.75）、（76.33±4.70）U/m L和18 275.82±521.05、92 524.81±2 097.01、54 460.87±572.64、35 961.37±540.61,统计分析发现富氢水和地塞米松均可抑制H2O2处理后眼眶成纤维细胞的氧化应激（P均

益肾化湿颗粒联合坎地沙坦酯治疗糖尿病肾病的临床研究探讨益肾化湿颗粒联合坎地沙坦酯治疗糖尿病肾病的有效性与安全性。方法选取2016年1月—2017年1月在山东中医药大学第二附属医院治疗的糖尿病肾病患者145例,根据用药方案的不同分成对照组(72例)和治疗组(73例)。对照组患者口服坎地沙坦酯片,2片/次,1次/d;治疗组在对照组的基础上口服益肾化湿颗粒,1袋/次,3次/d。所有患者均治疗1个月。观察两组患者临床疗效,比较治疗前后两组患者炎症因子水平、糖化血红蛋白(Hb A1c)、内脂素水平、24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮和不良反应情况。结果治疗后,对照组和治疗组临床总有效率分别为84.72%和97.26%,两组比较差异具有统计学意义(P

外源性脂联素对大鼠非酒精性脂肪肝病影响的研究探讨外源性脂联素对大鼠非酒精性脂肪肝病（NAFLD）的影响。方法成年SD（Sprague Dawley）远交群大鼠82只,分别予普通饮食（普通饮食组,n=12）、高脂饮食（高脂饮食组,n=70）。所有大鼠喂养4w,并处死2只大鼠做肝脏病理HE染色,以确定造模成功。将造模成功大鼠随机分为高脂饮食对照组（n=10）、脂联素给药组(10、20、30μg·kg-1·d-1)腹腔注射,每组10只,持续4w,分组处理期间,大鼠仍继续给予高脂饮食。4w后以3%戊巴比妥腹腔注射麻醉（2mL/kg）,腹主动脉采血。每只大鼠取50g肝脏备用,肝组织石蜡切片苏木素-伊红（HE）常规染色。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平、检测各组大叔血清总胆固醇游离脂肪酸（TC）、甘油三脂（TG）、血丙氨酸转氨酶（ALT）水平。RT-PCR法检测AdipoR2mRNA表达。结果高脂饮食组大鼠肝细胞肿胀,体积较正常明显增大,出现脂肪变性,胞质内可见大小不等的脂滴空泡,以大泡性脂肪滴为主,汇管区有以单核、淋巴细胞为主的炎症细胞浸润,部分出现点状坏死和灶状坏死,已进展为NAFLD阶段,大鼠NAFLD的模型制备成功。高脂饮食对照组、脂联素10μg·kg-1·d-1组、脂联素20μg·kg-1·d-1组、脂联素30μg·kg-1·d-1组体质量、TG、TC、ALT高于普通饮食组（P-1·d-1组、脂联素30μg·kg-1·d-1组体质量、TG、TC、ALT低于高脂饮食对照组（P0.05）。与高脂饮食对照组比较,脂联素10μg·kg-1·d-1组、20μg·kg-1·d-1组、30μg·kg-1·d-1组AdipoR2基因表达均增加,差异有统计学意义（P-1·d-1组AdipoR2mRNA表达量明显高于其他脂联素给药组（P

苦碟子注射液联合依达拉奉对急性脑梗死患者血清hs-CRP及内皮素影响研究探讨苦碟子注射液联合依达拉奉对急性脑梗死患者血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)及内皮素的影响。方法选取初次发病的急性脑梗死患者74例,经CT或MRI证实,患者随机分成2组,每组37例。2组均接受常规基础综合治疗方案,对照组给予依达拉奉,静脉滴注;研究组在上述基础上给予苦碟子注射液,静脉滴注。监测治疗前后血清炎症因子及血管内皮功能指标的变化,并比较其临床疗效。结果与治疗前比较,2组血清IL-6、TNF-α以及hs-CRP降低(P

消炎利胆胶囊联合头孢唑林钠治疗慢性胆囊炎的临床研究探讨采取消炎利胆胶囊联合头孢唑林钠治疗慢性胆囊炎患者的临床效果。方法选取子长县人民医院2016年3月—2017年3月收治的慢性胆囊炎患者125例,随机分成对照组(62例)和治疗组(63例)。对照组患者静脉滴注注射用头孢唑林钠,1.0 g加入250 m L生理盐水,2次/d,连续治疗14 d。治疗组患者在对照组的基础上口服消炎利胆胶囊,3粒/次,3次/d,连续服用30 d。观察两组患者临床疗效,比较治疗前后两组患者主要临床症状积分、肝胆功能生化指标、炎性指标和不良反应情况。结果治疗后,对照组临床总有效率为79.03%,显著低于治疗组的95.24%,两组比较差异具有统计学意义(P

利拉鲁肽对2型糖尿病患者糖化血红蛋白、缺铁修饰白蛋白表达及预后的影响分析目的观察分析利拉鲁肽对2型糖尿病患者糖化血红蛋白、缺铁修饰白蛋白表达及预后的影响。方法随机抽取我院2型糖尿病患者88例,根据随机数表法分组,对照组与观察组各44例,对照组患者采用二甲双胍(晚饭后口服,初始剂量500mg/d,1次/日,根据血糖控制水平以500mg为单位逐周加量),观察组患者在使用二甲双胍治疗的基础上联合利拉鲁肽(皮下注射,初始剂量0.6mg/d,1次/日,根据血糖控制水平以0.6mg为单位逐周加量,最多1.8mg/次)治疗,两组患者均连续治疗12周,观察两组患者的血糖、体质量指数、糖化血红蛋白、缺铁修饰白蛋白表达情况,并统计不良反应及预后情况。结果治疗前,两组患者的HBA1c、缺铁修饰白蛋白(IMA)、FPG、2hPG水平及BMI比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者治疗后4周、8周、12周,HBA1c、IMA、FPG、2hPG水平及BMI均呈现出下降趋势,差异有统计学意义(P0.05),无严重低血糖发生,对症处理后均好转,安全性高。结论拉利鲁肽可控制2型糖尿病患者缺铁修饰白蛋白表达,降低HBA1c水平、FPG水平、2hPG水平、BMI,有利于维持患者血糖平稳,提高治疗效果,安全性高。

桃红四物汤对老年骨质疏松性股骨粗隆间骨折患者PFNA术后血清RANKL、骨保护素水平及转化生长因子-β1表达水平的影响目的探讨桃红四物汤对老年骨质疏松性股骨粗隆间骨折患者应用股骨近端防旋髓内钉(PFNA)术后临床疗效及血清核因子(NF)-κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)、转化生长因子(TGF)-β1表达水平的影响。方法采取前瞻性研究法,将238例老年骨质疏松性股骨粗隆间骨折患者,按照随机数字表法分为对照组(常规治疗)或观察组(桃红四物汤+常规治疗),每组119例。比较两组术后Harris评分、骨折愈合时间及手术前后血清骨钙素(OC)、血清骨型碱性磷酸酶(BLAP)、全甲状腺旁腺素(i PTH)、Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列(β-CTX)、总Ⅰ型胶原氨基酸延长肽(t PⅠNP)、骨形态发生蛋白(BMP)-2、血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子(IGF)-1、白细胞介素(IL)-1、IL-6、IL-10、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α、RANKL、OPG、TGF-β1水平差异。结果观察组Harris评分优良率[86.6%(103/119)]明显高于对照组[76.5%(91/119),χ~2=2.117,P=0.034]。观察组骨折愈合时间(13.2±1.3)w明显少于对照组[(14.5±1.5)w,t=7.144,P=0.000]。术后3个月,观察组OC、BLAP、t PⅠNP、VEGF、IGF-1、TGF-β1水平明显高于对照组,而i PTH、β-CTX、BMP-2、IL-1、IL-6、IL-10、IL-18、TNF-α、RANKL、OPG水平明显低于对照组(均P

洋葱中黄酮类化合物对结核分枝杆菌的抑菌作用研究目的:探讨洋葱中黄酮类化合物对结核分枝杆菌的抑菌作用。方法:选用56株结核分枝杆菌临床分离株作为研究对象,结核分枝杆菌标准菌株（H37RV）为对照用菌株,通过分格平板琼脂比例法抑菌试验,观察不同浓度洋葱中黄酮类化合物、黄酮与一线抗结核药物联合使用对结核分枝杆菌的抑菌作用;小鼠腹腔巨噬细胞与结核分枝杆菌共同孵育后,将细胞分为对照组、560μg/m L黄酮组、280μg/m L黄酮组、140μg/m L黄酮组、28μg/m L黄酮组、异烟肼（INH）组,给予相应药物干预,通过实时荧光定量PCR法检测巨噬细胞吞噬的结核分枝杆菌DNA水平,通过酶联免疫吸附法检测细胞培养液中细胞因子水平。结果:（1）与2.0μg/m L INH、1.0μg/m L利福平（REP）、5.0μg/m L乙胺丁醇（EMB）、2.0μg/m L链霉素（SM）比较,28μg/m L黄酮敏感率较低,560、280μg/m L黄酮敏感率较高,差异有统计学意义（P0.05）。（2）与2.0μg/m L INH、1.0μg/m L REP、5.0μg/m L EMB、2.0μg/m L SM比较,各药物联合使用280μg/m L黄酮后敏感率均较高,差异有统计学意义（P

中药有效组分配伍调控p38MAPK通路改善糖尿病心肌病的机理研究（信裕生物文献）相田园中国中医科学院导出/参考文献关注分享收藏打印摘要：糖尿病心肌病(Diabetic Cardiomyopathy, DCM)是一种独立的心肌疾病,每年约有2%-3%的糖尿病患者并发心血管病变。调查研究显示：65-74岁老年组的糖尿病患者,每年因并发心肌病而致死的男性、女性分别为4.9%、3.2%,而非糖尿病患者分别为1.9%、0.9%,两组存在显著的差异。随着DCM病程的进展,患者发生心衰和再梗死的风险增高,预后也很差,高患病率、致残率、病死率等也导致患者身心健康受到严重的损害,为个人和社会带来沉重的负担。据WHO报道,2010年全世界防治糖尿病的医疗卫生费用高达11.6%,2005-2015年中国用于糖尿病及相关血管疾病防治的费用达到5577亿美元。DCM发病机制复杂,涉及晚期糖基化终末产物途径、氧化应激损伤、脂质代谢紊乱、炎症反应、心肌细胞代谢障碍、心肌微血.管病变、自主神经病变等多个方面。目前缺乏明确的诊断标准,医师需要结合患者的临床症状、实验室检测、影像学检查、心肌活检等方法,在排除冠状动脉粥样硬化性心脏病、心脏瓣膜病、高血压及其它心肌病的基础上做出综合判断。其临床特征,早期主要以心脏舒张功能不全为主、易发生充血性心力衰竭；后期出现心脏收缩功能不全、心律失常、心肌广泛性坏死灶,最终进展为心源性休克、心力衰竭,重症患者甚至猝死。病理切片显示：内皮及内皮下纤维增生、基膜增厚、弥漫性心肌壁内微血管病变、毛细血管密度降低、心肌肥厚等。鉴于DCM对于患者和社会造成的巨大危害,探索其发病机制,找到有效的治疗方法成为科研工作者亟待解决的问题。西医治疗主要是对症治疗为主,辅以纠正代谢紊乱,延缓心律失常、心肌梗死、心衰及其他心血管并发症的发生。治疗方面,一是强化控制血糖的治疗；二是调脂治疗,改善脂质代谢紊乱。三是RASS拮抗剂的应用,如ACEI、ARB及利尿剂在不同的位点阻断RASS系统,不但起到了抑制心肌重构的作用,而且在改善心肌纤维化方面也有重要的意义。四是应用蛋白非酶糖基化的阻滞剂；五是改善心功能不全、心律失常、心衰等症状的药物和非药物治疗。中医理论认为本病气阴不足为本,瘀血阻络为标,各医家临床辨证论治依此为基础,思路见仁见智,或辨证结合辨病；或辨病论治,以一方为主,随证加减；或以其中一种治法为主,随证加减用药。近年逐渐进行深入的临床和基础研究,如中药验方、复方制剂、单味中药及其提取物、天然药物研发等,逐步改善患者的症状并提高生存质量,综合治疗仍然是基本原则。中药有效组分配伍(简称中药组分)具有多靶效应、便于定量分析、整体治疗的优势,为有效治疗DCM提供了新的思路。目的 本研究在既往研究中药组分(40%麦冬多糖、30%黄连生物碱、30%三七总皂苷)能够干预蛋白非酶糖基化的基础上,进一步观察其对DCM兔血糖相关指标：GIU、FBG、GHB、GSP、INS、IRI、FRA、AR;血脂相关指标TC、TG、HDL-C、 LDL-C;肝肾功能指标：ALT、AST、Sci、BUN;氧化应激相关指标：AGEs、NO、 MDA、SOD、GSH-Px;炎症反应相关指标：hs-CRP、IL-6、TNF-α、TGF-β1、bFGF、 PDGF、ICAM-1、VCAM-1、PAI-1、ET;凋亡相关指标：Caspase-3、bcl-2、AI;以及TGF-β1-p38MAPK-CREB信号转导通路的蛋白表达的影响；从而探讨中药组分对p38MAPK信号转导通路调控下心肌组织细胞增殖、分化、凋亡的影响,为其治疗糖尿病心肌病的可能作用机制及新靶点提供依据。方法实验用兔70只,按随机数字表选取10只作为空白对照组,喂养普通饲料,第4周末,耳缘静脉推注0.9%氯化钠注射液5ml,再普通饲料喂养8周。其余60只大兔喂养含2%胆固醇、0.5%胆酸和5%猪油的高脂饲料30g/(kg·d),第4周末禁食8小时,造模前称取体重,按照100mg/kgBW剂量,耳缘静脉推注0.9%氯化钠注射液配制的5%四氧嘧啶。第8周测空腹血糖(FBG),选取三次均在16.7mmol/L-23.5mmol/L大兔,不符合上述FBG标准者剔除,继续高脂饲料喂养4周。第12周末,随机选取空白对照组大兔1只,造模组大兔2只麻醉后取材,观察心肌病理组织显示：与空白组比较,造模组大兔心肌细胞肿胀变性,水肿明显,细胞质内形成大量的空泡,心肌间质纤维结构紊乱,细胞间界限不清,间隙增宽,血管周围基质增多,间质出现炎性细胞浸润、核裂解、固缩以及核丢失现象,表明糖尿病心肌病模型已经建立。造模成功50只大兔,按照空腹血糖水平、体重均衡原则分组为：①模型对照组10只②中药组分高剂量组10只③中药组分中剂量组10只④中药组分低剂量组10只⑤辛伐他汀对照组10只。第13周实验各组开始灌胃,用开口器撑开兔口,插入小儿胃管,检测进入胃部。具体剂量为：中药组分高剂量组450mg/(kg·d)、中药组分中剂量组150mg/(kg·d)、中药组分低剂量组50mg/(kg·d);辛伐他汀组0.8mg/(kg·d);空白对照组及模型对照组以10ml/(kg·d)生理盐水灌胃；2/日,连续上述药物灌胃8周。第20周末,取材前禁食不禁水12小时,5%戊巴比妥钠3ml/kg麻醉后取材。抽取腹主动脉血3-5ml,以Fresco离心机离心标本,3000r/m,15min,分离血清；摘取心脏,取部分左心室组织,用10%中性甲醛溶液固定,乙醇脱水,石蜡包埋,常规的切片操作,厚度为4um；剩余左心室组织,生理盐水冲洗,锡纸包裹,放入液氮速冻3min,放入-70℃冰箱备用。应用比色法测定血清中GLU、FBG、GHB、GSP、NO、NOS、MDA、SOD、 GSH-Px、TC、TG、HDL-C、LDL-C、FRA含量；放射免疫法测定INS含量；使用上海信裕生物科技有限公司ELISA法测定血清中AGEs、ET、hs-CRP、IL-6、TNF-α、TGF-β1、bFGF、PDGF、PAI-1、 AR、ICAM-1、VCAM-1及心肌组织中Caspase-3、bcl-2含量。Western blotting法测心肌组织中TGF-β1-p38MAPK-CREB信号转导通路中相关蛋白的表达。HE染色后光镜下观察心肌细胞组织形态学、病理学改变。TUNEL法检测心肌组织细胞凋亡并进行凝胶图像。结果(1)四氧嘧啶静脉注射配合高脂饲料喂养诱导的大兔,第4周造模,第8周时空腹血糖平均为18.0mmol/L,显著高于空白对照组,差异有统计学意义(P0.05)。第20周进行糖负荷实验,以25%的葡萄糖(5g/kg)灌胃,分别检测0min、30mim、60min、120min、180min的血糖值,高、中剂量组对于灌胃糖负荷后30mim、60min、120min、180min血糖值均有降低作用,与模型组比较有显著的统计学差异(P0.05)。低剂量组对p-p38MAPK、p-CREB蛋白表达有抑制作用,与模型组比较,有显著统计学差异(P0.05)。(7)中药组分对心肌组织病理的影响：模型组LVW、HW、H/W、LVWI均高于空白对照组,差异有统计学意义(P0.05),表明分组均衡；而与空白对照组比较体重下降,有显著差异(P还原关键词：中药有效组分配伍; p38MAPK信号转导通路; 糖尿病心肌病; 机理研究;导师：高普;分类号：R285

低氧诱导成骨细胞增殖分化两种机制的研究（信裕生物文献）李强南方医科大学摘要：研究背景随着我国经济和人民生活水平提高,交通意外伤及建筑工人意外导致的骨折发病率逐年递增,各种类型的骨折其治疗方式不尽相同,但最终治疗的目的为恢复骨折断端的连续性和骨的稳定性。影响骨折愈合的因素很多,例如特殊部位的骨折或严重的开放性骨折,通常会伴随骨折断端血管及神经的副损伤,在骨折修复过程中,骨折断端周围的缺血、缺氧和周围组织的炎症反应,均会影响骨折愈合的时间和程度,临床也经常出现骨折断端周围环境缺氧和炎症反应而未及时处理导致骨折愈合不良,延迟愈合或者是骨折不愈合,不但会给患者带来不必要的痛苦,也会给社会和家庭带来巨大的经济负担,因此,研究骨折不愈合的因素,如何人为地从外界通过药物或手术干扰促进骨折愈合成为临床急需解决的问题。通常状态下,骨折断端周围血管的损伤或者是新生骨痂周围血管再生被抑制,均会导致断端缺血缺氧,从而抑制骨折愈合；而在缺氧环境下骨折断端周围释放的缺氧诱导因子、血管内皮生长因子、骨形态发生蛋白等可以促进骨折愈合。有研究通过骨折固定术后周围组织注射血管内皮生长因子来提高骨折愈合的比率,但由于血管内皮细胞生长因子价格昂贵,或者还需要其他疗法的参与,因此难以在临床中实施。另外有研究发现,严重创伤会导致局部或全身的炎症反应。而在创伤愈合与骨折愈合过程中各种免疫细胞激活,细胞因子被释放,激活的细胞和释放的因子均参与到骨折愈合的各个阶段,在骨折愈合的早期,免疫细胞就已经开始渗入到骨折断端血肿内。在骨折早期,缺氧就可以导致白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、使用上海信裕生物科技有限公司转化生长因子β (transforming growth factor-β,TGF-β)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)上调,从而调节骨折断端周围的微环境。但是对于骨折愈合过程中的炎症反应机制目前尚不清楚。研究表明,在全身败血症动物模型中,高迁移组蛋白B1 (high mobility group box-1 protein, HMGB1)是最早被确认的缺氧类因子。至今学术界认为,高迁移率族蛋白B1是多种损伤模型例如肺损伤、肝脏局部缺血再灌注、失血性休克等关键的炎症因子,高迁移率族蛋白B1与Toll样受体(toll-like family of receptors, TLRs)结合启动损伤最初的炎症反应,然而对于高迁移率族蛋白B1在骨折愈合中对于炎症反应的应答作用机制尚不清楚。另外骨形态发生蛋白尤其是骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2, BMP-2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)和骨钙蛋白可以在一定程度上缓解低氧对于骨间充质干细胞修复骨折的影响,但是长期的缺氧将会导致成骨细胞和骨间充质干细胞的凋亡甚至坏死。此外许多研究表明,N-甲基吡咯烷酮(N-methyl-2-pyrrolidone, NMP)是在医疗器械上使用的安全的具有生物活性药物,尤其是近年来有报道,在体内,N-甲基吡咯烷酮对于兔颅骨损伤具有一定的促进骨化和修复的作用,因此N-甲基吡咯烷酮可能对骨质疏松、骨折愈合或者其他骨量丢失的疾病具有一定的疗效。也有研究表明,N-甲基吡咯烷酮具有一定的抗炎作用,其能与脂多糖结合抑制炎症过程。N-甲基吡咯烷酮能够抑制炎症中脂多糖导致的TNF-α, IL-1β, IL-6, iNOS和COX-2等炎症因子的生成,其主要是通过降低NF-κ B信号途径发挥抑制炎症因子生成的作用。因此本文分别通过两个方面研究缺氧状态下可能影响骨折愈合的信号通路,首先我们通过在缺氧状态下骨折断端血肿细胞中和巨噬细胞检测高迁移率族蛋白B1水平,并研究高迁移率族蛋白B1在常氧和缺氧环境中如何激发Toll样受体的信号过程促进成骨细胞中的增殖规律。同时我们对在常氧和缺氧环境下检测了成骨细胞细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinsaes. ERK)和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的磷酸化,并将xx-特异性的siRNA转染到缺氧环境中的成骨细胞,并用高迁移率族蛋白B1干扰,检测了细胞增殖特性和ERK/JNK的磷酸化。研究的第一部分主要探讨低氧下,通过TLR-4信号通路高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)影响ERK/JNK磷酸化和成骨细胞分化增殖的机制。第二部分我们要研究N-甲基吡咯烷酮在低氧环境下对成骨细胞凋亡和分化的作用,并且从分子水平分析N-甲基吡咯烷酮对成骨细胞作用的相关机制,本文的成果可能解释N-甲基吡咯烷酮可能促进低氧环境中成骨细胞增殖分化修复骨折的能力,也为探索骨折不愈合的机制,研制治疗骨不连的药物提供分子生物学基础。研究目的1、探讨低氧下,通过TLR-4信号通路高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)影响ERK/JNK磷酸化和成骨细胞分化增殖的机制,为临床骨不连的治疗提供分子生物学基础理论。2、探讨低氧下,通过NF-κB信号通路N-甲基吡咯烷酮(NMP)影响成骨细胞分化的机制,为N-甲基吡咯烷酮的临床应用提供分子生物学基础。研究方法第一部分：1.样本的制备及分组选自2014年3月至2015年3月来自于内蒙古医科大学附属医院骨科31例股骨干骨折病例,在手术前经患者签署知情同意书,经内蒙古医科大学附属医院医学伦理委员会伦理审核后,在手术中获取骨折周围血肿样本和新鲜血液样本。在RPMI-1640培养基中培养组织细胞淋巴瘤细胞U937细胞,并在培养中加入10%或2%的小牛血清,50μg/ml的青霉素和50μg/ml的链霉素,先对细胞进行离心分离按照1-2×105活细胞/mL再悬浮,每三到四天更换新的培养液(依据细胞生长的密度)。在RPMI-1640培养基中培养MG-63细胞,并在培养中加入10%的小牛血清,50μg/ml的青霉素和50μg/ml的链霉素,将两类细胞在5%CO2,在37℃的环境下放置于细胞培养皿上。低氧环境造模方法,将细胞在5%CO2和氮气及2%的氧气混合气体中培养。在高迁移率族蛋白B1检测试验中,将组织细胞淋巴瘤细胞U937细胞放置于常氧和低氧环境中培养8,12和24小时,然后将悬浮组织细胞淋巴瘤细胞U937细胞收集,并进行高迁移率族蛋白B1的检测。在RPMI-1640 (2% FBS)上培养85-95%细胞融合度的MG-63细胞,在常氧和低氧环境下混合0,0.2或者1μg/mL高迁移率族蛋白B1培养24,48和72小时；将siRNA-TLR-4和control siRNA混有30和60 nM脂质体2000(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)转染MG-63细胞造模敲除MG-63细胞的TLR-4。2.高迁移率族蛋白B1的酶联免疫吸附试验为了检测骨折断端血肿样本和新鲜血液样本中以及巨噬细胞U937的高迁移率族蛋白B1的水平,按照酶联免疫吸附试验说明书的步骤进行操作检测,实验板孔中连续滴加100μL标准液和样本,并在37℃环境下孵育2小时,然后吹吸样本,然后用100μ混有PBST的磷酸盐溶液冲洗四次,然后将100μL高迁移率族蛋白B1抗体加入孔中,37摄氏度下孵育一小时,冲洗四次,每孔再加入100μL螯合有辣根过氧化物酶的二抗37摄氏度下孵育30分钟,在黑暗环境下每孔加入100μL的终止液并放置15分钟,封板后在450nm酶标仪中测量数据。3.mRNA的提取和定量分析MG-63的nRNA用TRizol reagent试剂盒进行提取,mRNA的含量用实时定量PCR仪进行测量,MG-63细胞中的ERK,JNK, TLR-Tubulin的mRNA含量用SYBR Green PCR Kits试剂盒进行定量检测,定量聚合酶链反应(quantitativepolymerase chain reaction, qPCR)过程在ABI PRISM 7300检测系统中进行,引物链是由上海生工公司合成,所有的检测都是利用AACt方法,检测结果都是待检物和内参比较的倍数。4.免疫印迹实验利用NE-PER细胞核和细胞质抽提检测试剂盒抽提细胞溶质和细胞核蛋白,利用蛋白酶抑制剂鸡尾酒试剂盒进行蛋白增补,10%或12%SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白样本,再将分离的蛋白转移到硝酸纤维素膜,然后将膜用2%BSA封闭,4摄氏度下过夜,然后转移到非特异性结合膜,用兔多克隆IgG结合高迁移率族蛋白B1、ERK磷酸化或非磷酸化Thr202/Thr204, JNK磷酸化或非磷酸化Thr183,TLR-4和微管蛋白,用电化学发光法检测特异性结合,高迁移率族蛋白B1或TLR-4的含量水平用相对于微管蛋白的灰度值表示,p-ERK或p-JNK的结果用相对于ERK、JNK的灰度值表示。5.CCK-8的细胞增殖实验MG-63在常氧和缺氧环境下的增殖测量,以及MG-63细胞在高迁移率族蛋白B1处理或未处理,或者MG-63细胞转染siRNA-TLR-4和siRNA-Con的增殖测量都用CCK-8实验的方法测量。其测量方法简言之,就是每组MG-63细胞与CCK-8共培养,在490nm,检测各类样本的吸光度。第二部分：1.细胞培养人类成骨细胞hFOB 1.19在1：1混合Ham’s F12的基质和Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM)培养液中培养,培养液中添加2.5 mM左旋谷酰胺和0.3mg/ml G418 (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA),并且添加10%小牛血清hFOB 1.19细胞在5% CO2,37℃环境下温箱中培养。低氧环境造模方法,将细胞在5% CO2和氮气2%的氧气混合气体中培养。持续监测氧的浓度,N-甲基吡咯烷酮分别配成0,3,10和30 mM浓度的溶液与成骨细胞混合。2.酶联免疫吸附试验检测BMP-2, PINP, ALP和RUNX-2检测人类成骨细胞hFOB 1.19 cells中细胞内的骨形态发生蛋白-2,骨胶原前肽I(propeptide of type I procollagen I, PINP)、碱性磷酸酶和成骨细胞转录因子-2(Runt-related transcription factor-2, RUNX-2)表达水平采用酶联免疫吸附试验检测,全部检测步骤参照相应的试剂说明书。培养板上对照孔连续滴加100μL标准液和hFOB 1.19细胞,4℃下过夜培养。然后将培养盘中滴加100μL抗体溶液(抗BMP2, PINP, ALP和RUNX2),37℃下培养1小时,然后加入100μL辣根过氧化物酶二抗37℃下培养半小时,在每次孵育前,用添加PBST的磷酸盐缓冲剂清洗培养板四次,最后在培养板上滴加100 μL终止液,暗室中放置15分,在450 nm下用分光光度计检测其浓度。3.利用RT-qPCR法检测p65 mRNA,用荧光素酶报告实验检测NF-κB依据产品说明书,用Total Nucleic Acid Isolation Kit试剂盒提取hFOB 1.19的mRNA,最后添加1μl RNasin(?) Plus RNase的终止液,用Takara One Step RT-PCT kit检测p65 mRNA的含量,通过p65-特异性引物(正：5’-tgatcactaagcaggaagatgtg-3’,反：5’-gaaggctcaggtcggccccag-31).利用AACt法定量测量p65比β-actin的相对量ohFOB 1.19细胞移植到96孔培养板,培养至85%细胞融合度,hFOB 1.19细胞用NF-κB荧光素酶转染,依据Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)检测系统的说明书检测转染后的NF-κB的浓度。4.蛋白分离和免疫印迹实验利用Nuclear/Cytosol Fractionation Kit试剂盒,参照其说明书对5×105 hFOB1.19细胞进行蛋白提取,分别对细胞核和细胞质中的溶解物进行提取,并加入蛋白酶抑制剂(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA),用 BCA Protein Assay Reagent Kit (Pierce, Rockford, IL, USA)试剂盒定量检测细胞核和细胞质中溶解物。利用12% SDS-PAGE梯度凝胶分离待检蛋白p65和IκB,然后转膜到硝酸纤维膜上,为了阻断特异性结合部位,用兔多克隆抗体与p65, IκB和内参β-actin结合,2%BSA孵育硝酸纤维素膜(4℃过夜),然后辣根过氧化物酶偶联二抗羊抗兔抗体室温下进行孵育1小时,每次孵育前都要用l×磷酸Phosphate Buffered Saline Tween-20 (PBST)冲洗三次,p65, IκB和β-actin蛋白含量用增强化学免疫荧光法进行检测。5.MTT法检测细胞活力用MTT法检测hFOB 1.19细胞活力,以下简单描述MTT法,hFOB 1.19细胞在常氧,低氧及合并N-甲基吡咯烷酮的作用下与MTT试剂37℃下孵育3小时,在450 nm下用分光光度计测量其浓度,结果用OD450值表示。统计分析全部数据以均数±标准差表示,采用SPSS18.0统计学软件进行统计学分析,两组间比较采用t检验,检验水准设置为0.05,当P还原关键词：缺氧; 高迁移率族蛋白B1; 成骨细胞; 细胞分化; TLR信号通路; N-甲基吡咯烷酮; NF-κB信号通路;导师：余斌;分类号：R683

cct3、iqgap3在肝癌中的表达及其在肝癌侵袭转移中的作用机制研究（信裕文献）                                                      钱婀娜郑州大学摘要：肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤,是与癌症相关的第三大死亡原因,每年约导致696,000人死亡。虽然晚期肝癌的预后在过去20年中有了较大提高,但5年生存率仍很低,最有效的治疗方法是外科切除,但是在肿瘤晚期就丧失了手术机会。超声、ct和mri这些传统的检查方法有助于监测肿瘤的发生部位和是否转移,但对早期肝癌的检查是有限的,单独应用这些检查有可能会误诊。迄今为止,甲胎蛋白(afp)是发现肝癌最重要的血清学肿瘤标志物,然而,将近40%的肝癌是小肝癌和afp水平正常的肝癌。因此,发现一种能早期诊断肝癌并指导临床治疗和评价预后的因子就非常重要。分子伴侣蛋白tcp1复合物(cct),也称作tri c和c-cpn,在细胞中介导蛋白折叠,伴侣蛋白是atp依赖性折叠蛋白,表达在所有生物体中。他们由两个背靠背的低聚环堆积而成,使蛋白底物结合并折叠。cct3(60k da)是cct/tri c复合物主要的亚基,在蛋白折叠和再折叠过程中特异性地发挥作用。一些研究已经通过rt-pcr和western blot法监测到肝癌患者中cct3过表达,cct3通过使转录因子磷酸化,并且激活进入肝癌细胞核的转录因子(stat)3/stat3而影响肝癌的进程。cct3可能在调节微管结构和功能(捕捉着丝粒)中发挥作用,影响细胞对这些微管靶点的敏感性。含有gtp酶异亮氨酸-谷氨酰胺序列激活蛋白3(iqgap)家族包含三个成员:iqgap1,iqgap2 and iqgap3,iqgap3是家族中新近发现的。目前研究中发现,它参与上皮细胞的增生,然而,在肿瘤发生中的作用仍不明确。iqgap3可能通过ras/erk1/2途径调节细胞增殖。已经发现增生的肝细胞中细胞间的连接处iqgap3表达上调。iqgap3相关的信号途径可能作为复杂信号通道中的一部分参与肝细胞再生。使用上海信裕生物科技有限公司ras-,rac-,和cdc42结合iqgap3后对肝细胞再生的作用,表明iqgap3可能在细胞增殖和组织重建中有效地介导这些信号进程。本研究拟应用基因转染和rna干扰技术进一步探讨cct3和iqgap3在肝癌的发生发展及侵袭过程中的作用。采用不同转移潜能的肝癌细胞株和非瘤肝细胞株,应用载体转染方法设计并合成cct3、iqgap3基因的小干扰rna(small interfering rna,si rna),将si rna转染人肝癌细胞株干扰cct3、iqgap3基因的表达,观察cct3、iqgap3基因表达沉默后对肝癌细胞株侵袭能力的影响,同时采用western-blot法检测细胞转染前后一些信号通路的表达,目的是探讨cct3、iqgap3对肝癌的诊断价值,为提高肝癌治疗手段及改善预后提供理论依据。本研究的创新点:1.本研究中我们首次在肝癌、肝硬化和健康人群中的血清中检测cct3和iqgap3的表达,并评估其用来诊断小肝癌和afp阴性肝癌的价值,我们的研究证明了cct3和iqgap3对肝癌的诊断有显著作用,并且其表达独立于afp,尤其当afp阴性或是早期肝癌时,诊断价值非常高,因此,cct3、iqgap3联合afp能提高肝癌诊断的敏感性和特异性,2.初步探索了cct3促进肝癌发生、发展、侵袭的作用机制,提示cct3的促肿瘤生长作用和jak/stats信号通路存在密切的联系,cct3促进肝癌侵袭作用的部分机制可能与jak/stats活化通路有关。3.进一步了解iqgap3促进肝癌细胞增殖和侵袭的作用机制,提示iqgap3的促进肿瘤细胞增殖和侵袭的作用和ras/erk信号通路之间关系密切,ras家族蛋白rac/cdc42在肝癌的发生、发展中起重要作用,为开展肝癌基因靶向治疗奠定了理论基础。第一部分cct3、iqgap3在肝癌血清中的表达及其与肝癌临床指标之间的关系目的:评价伴侣蛋白复合物tcp1亚基3(cct3)和含有gtp酶异亮氨酸-谷氨酰胺序列激活蛋白3(iqgap3)在肝癌患者血清中的诊断价值。方法:收集126例肝癌患者,88例肝硬化和50例健康人群的血清,通过elisa方法检测甲胎蛋白、cct3和iqgap3的水平。结果:在肝癌患者的血清中,cct3和iqgap3的表达与肝硬化和健康对照组相比较明显升高,cct3和iqgap3蛋白水平均与肝癌患者的病因、肿瘤大小,tnm分期和child pugh分级有关,在肝癌诊断上cct3的敏感度优于afp(0.846 vs0.667),cct3和iqgap3蛋白可以用来诊断甲胎蛋白阴性的肝癌,其灵敏性和特异性分别为92.1%,70.5%和81.6%,71.6%。在小肝癌组,cct3和iqgap3蛋白的敏感性分别是76.1%和75.3%,把afp、cct3和iqgap3结合起来曲线下面积为0.954,其诊断能力较单独应用afp的曲线下面积0.815明显增加(p还原关键词：肝癌; 伴侣蛋白携带t复合多肽1-亚基3; 含有gtp酶异亮氨酸-谷氨酰胺序列激活蛋白3; 甲胎蛋白; 小干扰rna; western blot; 实时定量pcr; jak/stats信号通路; ras/erk1/2信号通路;导师：韩双印;分类号：r735.7文内图片： iqgap3表达沉默抑制mhcc97h细胞增殖(*prafkinasesignalingpathwayiqgap3、ras和erk在肝癌细胞中均高表达并表达一致，可能反映了除了先前肝癌中发现的信号通路外[79]jak/stats信号通路ras-raf-mek-erk-mapk信号通路整本下载分页下载分章下载在线阅读

如何设定抗体实验中各种样品选择的条件如何设定抗体实验中各种样品选择的条件：一、如何选择合适的一抗请先确定您要检测的种属和使用的实验方法，然后查找相关产品，根据说明书上描述的“适用种属和实验方法”来确定合适的抗体。如果说明书中有明确您要检测的种属和实验方法均经过检测，则您可以放心地购买该产品。二、如何选择合适的二抗二抗的选择原则：针对一抗Ig亚型的(比如一抗是IgM，二抗就要是抗IgM的抗体)针对一抗来源的二抗(比如一抗是小鼠来源的，二抗就要是抗小鼠的)为了增加特异性、降低背景：可以选择Fab段的抗体(去除Fc段的)、经过标本来源种属血清吸附的的二抗查看二抗的说明书，选择经过验证可以用于相应实验方法的二抗三、如何确定一抗的稀释比例如果说明书中有推荐的稀释比例，请按照该稀释比例进行实验。但是由于标本类型、实验条件、操作环境等各种因素的影响，推荐浓度仅作为参考。实验者需要在推荐浓度周围进行多个浓度梯度的实验，从中发现最佳的稀释比例。如果说明书没有推荐稀释比例，仅注明“Useatanassaydependentdilution”，就需要做大量的预实验来摸索最佳的比例了。 下表列出的纯化抗体抗体用于不同实验方法时常用的工作浓度，可以作为预实验的参考。未纯化的抗体一般在说明书中不会标明抗体的浓度，因为大部分全抗血清、 培养上清或腹水形式的产品浓度都是没有经过测定的。如果未纯化抗体产品的说明书中没有标明其中特异性抗体的浓度，实验者可以参考下表中“估计浓度”确定各 种实验稀释比例。四、如何选择同型对照同型对照的主要目的是确定一抗的结合是特异性的，而不是非特异性的Fc受体或与其他蛋白的相互作用。同型对照要与一抗的来源、Ig分型和标记完全一 致。例如：一抗是FITC标记，其抗体分型是小鼠的IgG1，则同型对照要选择是FITC标记的小鼠的IgG1。这里如同使用流式抗体一样，同样的不可离 开说明书！多抗的同型对照：绝大部分的同型对照产品都是单克隆抗体，因此不适用于作为多克隆抗体的对照(因为多抗含有多种IgG的亚型)。五、如何选择阳性对照阳性对照的使用是一个实验中确定抗体及检测系统是否正常工作的依据，也是确定待测标本中是否存在待测蛋白的一个依据！尤其是检测的标本是不确定是否有待测蛋白表达时。因此当实验没有阳性结果出现时，最好的选择是实验合适的阳性对照。说明书上都有推荐的阳性对照。但是如果说明书上没有推荐时，请参考以下条款：看看说明书中是否有Abreviews。任何被其他客户成功检测的组织、细胞或者裂解物均可以作为合适的阳性对照！根据说明书上的Swiss-Prot或Omnigene数据库来查找。这些数据库经常会列出该蛋白表达的组织，这也可以作为合适的阳性对照！

酶联免疫吸附实验（elisa）技术服务酶联免疫吸附测定法(elisa) 是将已知抗原或抗体吸附在固相载体微孔聚苯乙烯塑料板上，通过抗原抗体特异性结合吸附待测样品中的抗体或抗原后，加酶标抗体 （酶与抗体或抗原结合后，既不改变抗体或抗原免疫反应的特异性，又不影响酶本身的活性）和底物后，在相应酶底物的作用下生成有色物质，其颜色深浅与标记物中相应的抗体或抗原的含量呈正比，由此可测定抗原或抗体的含量。一般为双抗体夹心和竞争法。 服务内容：凡购买本公司任何一种酶免或放免检测试剂盒，您只需将您的样本、种属以及所要检测的指标及标本数量（48t、96t）通知我公司业务人员即可。我们就会为您提供详细的实验报告以及数据。我们保证对所售的任何产品一概负责到底，每一份实验结果都真实可靠  服务须知： 1.样本要求：液态类标本（细胞培养上清、组织匀浆、血清、血浆、尿液、胸水、腹水、脑积液等）2.样本量：每个样本收集体积=120μl*检测指标数 。3.  样本保存：请尽早检测，2-8℃保存一天；需更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存。如需周期收集样本，请将样本及时分装标号后，置-20℃或-70℃保存。4.服务时限和内容：收到样本之日起10个工作日之内提交实验结果，具体包括实验方法、步骤、所用试剂、仪器、相关数据等，实验结果将以电子或书面形式提交给您。样本制备及注意事项：1.细胞培养上清：2000-3000转/分离心20分钟后取上清；2.组织匀浆：切割标本后，称重，按1：9生理盐水匀浆，5000转/分离心3-5分钟后取上清；3.血清：样本室温放置2小时或4℃过夜后取上清；4.血浆：可用edta、枸橼酸钠或肝素作为抗凝剂（根据试剂盒要求选择），样本加入10%抗凝剂混合10-20分钟，2000-3000转/分离心20分钟后取上清；5.尿液、胸水、腹水、脑积液等：2000-3000转/分离心20分钟后取上清。特别提醒：1.取样和存样所用的冻存管、离心管、吸头等需高温灭菌处理；2.所有存样管口需以封口膜封好；3.所有样品管壁需要用防水记号笔清晰标明编号（便于区分即可）；4.所有样品避免反复冻融5.如有特别要求，请与服务该区域的销售经理讲明。好消息：我们可以为您的实验量身定做市场上没有的elisa kit，您只需要提供或让我们代买:包被抗体、检测抗体和蛋白标准品即可。

细胞增殖（mtt）服务活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性mtt还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（dmso）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，mtt结晶形成的量与细胞数成正比。 　　该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高。 实验步骤：　　1. 收集对数期细胞　　2. 酶消化　　3. 血球计数板计　　4. 换液　　5. 加mtt固定，孵育　　6. 加dmso，振荡　　7. 测od值 我们提供：　　1. 实验报告，包括实验材料、方法、步骤和实验结果　　2. 原始数据，包括od值和折线图 结果示意图：  服务周期：  服务内容说明价格∕元实验周期mtt贴壁细胞1500元/株3个工作日mtt悬浮细胞2000元/株3个工作日温馨提醒：　　1. 需对数期细胞　　2. 提供实验分组，试剂刺激细胞时间和使用浓度

ELISA试剂盒移液器细节被您忽略了吗在ELISA试剂盒试验中，移液器是不行缺失的一项东西。为了愈加完善咱们对ELISA试剂盒试验认知与学习，我公司带您来看看试验东西的运用方法。事实上，许多的试验操作人员对移液器的正确运用方法并不是非常了解，许多时分用户发现以下疑问：1.操作移液器进行取液或排液时，感受按钮上下移动不顺畅；2.按钮按下后，移开手指取液时，发现按钮无法敏捷或显着向上回来的速度要比新的移液器慢许多；3.移液器取液时，发现获得的液体没显着没有到达设定的容量；4.移液器的移液成果稳定性差，但连续运用几回后，其稳定性渐渐的又变的好了；ELISA试剂盒一般当呈现以上现象时，用户第一想到的就是移液器呈现毛病，然后联络厂家进行修理，这么不只需求支付一笔修理费用，并且还费时吃力。而事实上，假如咱们能够在运用移液器前做一下预光滑预备，则能够最大极限的防止上述疑问。那么啥是预光滑呢？预光滑是指每次在开始运用移液器之前，应将移液器容量调理至最大容量（即最大标称容量处），然后将移液器按钮匀速按到最低方位，再让其回来至初始方位，重复此过程3-6次，然后再开始装置管嘴进行移液操作。那么这些ELISA试剂盒移液器细节被您忽略了吗？对移液器的运用了解以后，也会防止在试验中的一些不必要麻烦。

ELISA试剂盒关于样本储存必知事宜ELISA试剂盒也许平常一些小习惯就能够让您的实验在操作中变得与众不同，实验中的每个环节都很重要，忽略任何一个都可能导致实验的失败，每个人在实验中都有自己的一些好的细小的习惯，而有些好习惯能够让您的ELISA试剂盒实验一次就成功！ELISA试剂盒关于样本储存必知事宜：（1）收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。（2）对收集后当天进行检测的标本，储存在4℃备用。（3）如有特殊原因需要周期收集标本，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。（4）避免反复冻融，标本2-8℃可保存48小时，-20℃可保存1个月。（5）-70℃可保存6个月，部分激素类标本需添加抑肽酶。

elisa试剂盒检测步骤对科研界的影响elisa试剂盒检测步骤是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。elisa试剂盒检测步骤不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本 ,因此也适合于血清流行病学调查。elisa试剂盒检测步骤不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。因此elisa试剂盒检测步骤在生物医学各领域的应用范围日益扩大。elisa试剂盒检测步骤：1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；elisa试剂盒检测步骤混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为60μmol/L，40μmol/L ，20μmol/L，10μmol/L， 5μmol/L）。2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。elisa试剂盒检测步骤在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，elisa试剂盒检测步骤每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

为什么ELISA试剂盒用血清做检测ELISA试剂盒其实是能够测一些组织、细胞等样本的,但是因为组织、细胞是固体样本,要对其进行破碎,提取被检物质;而在提取被检物质时破碎办法(如机械破碎、超声破碎、裂解液裂解等)、提取液的成份等存在差异,毕竟导致提取程度有所差异,从而难以建立正常参考值;而血清或血浆样本就不存在因提取进程导致的差错并且收集时又非常便当,因而一般临床常选用血清、血浆做为检测方针。ELISA试剂盒运用注意事项：1、Elisa试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可运用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2、各步加样均应运用加样器，并常常校正其准确性，以防止试验差错。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，举荐运用排枪加样。3、请每次测定的一起做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔OD值的)，请先用样品稀释液稀释必定倍数(n倍)后再测定，核算时请最终乘以总稀释倍数(×n×5)。4、浓洗刷液可能会有结晶分出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗刷时不影响效果。5、严峻按说明书的操作进行，试验效果断定有必要以酶标仪读数为准.6、本试剂不同批号组分不得混用。7、封板膜只限一次性运用，以防止穿插污染。8、全部样品，洗刷液和各种废弃物都应按感染物处理。9、ELISA试剂盒底物请避光保存。

ELISA试剂盒的常用结果判定的方法1．ELISA试剂盒定性测定（1）ELISA试剂盒阳性判定值法（cut-offvalue，CO值）：一般为阴性对照的平均A值加一个常数，试剂制备严格标准化，要先计算出阳性对照A值平均数和阴性对照A值平均数。标本A值≥CO值即为阳性。（2）抑制率法：在竞争抑制法中结果可用抑制率表示。 抑制率（％）＝（A阴性对照A-A待测）／阴性对照X100％,一般以抑制率≥50％为阳性试剂盒2.半定量测定 结果一般以滴度表示。将标本连续稀释后，进行ELISA检测，在阳性临界值以上的最高稀释度即为该标本的“滴度”。3.定量测定 即用己知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA试剂盒测定，与待测标本同时进行测定，绘制标准曲线，结果以绝对量或活性单位表示之。

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Martínez-Esparza Alvargonzález Murcia IT-special-Award 2015 pdf-Maria Anja Ziegler Bern IT-special-Award 2015 pdf-Anja Susana Novoa-Herrán Bogotá IT-special-Award 2015 pdf-Susana Marcos López Hoyos Santander IT-special-Award 2015 pdf-Marcos Karin Braun Prado Curitiba, BR IT-special-Award 2015 pdf-Karin Till Mathan Nijmegen, NL IT-special-Award 2015 pdf-Till Maria Sabater Arcis Bellaterra IT-special-Award 2015 pdf-Maria Stephanie Annett Belfast IT-special-Award 2015 pdf-Stephanie Ana Paula Duarte de Souza Porto Alegre, BR IT-special-Award 2015 pdf-Ana Andréa Teixeira Carvalho Belo Horizonte, BRGESINAS-Award 2015 pdf-Andrea Julia Gross G?ttingen IT-special-Award 2015 pdf-Julia Anne Kresinsky Jena IT-special-Award 2015 pdf-Anne Pauline Lehebel Brussels IT-special-Award 2015 pdf-Pauline Pedro Paulo Xavier-Elsas Rio de Janeiro IT-special-Award 2015 pdf-Pedro Dimitris Tampakis Loughborough, UK IT-special-Award 2015 pdf-Dimitri Thaisa Lucas Sandri Curitiba, BR GESINAS-Award 2015 pdf-Thaisa Gerardo A. I. Mirkin Buenos Aires IT-special-Award 2015 pdf-Gerardo Stine Indrelid Aas, NO IT-special-Award 2015 pdf-Stine Yanina Lamberti La Plata, AR IT-special-Award 2015 pdf-Yanina Federico Nicolás Penas Buenos Aires IT-special-Award 2015 pdf-Federico Yannick Willemen Antwerpen IT-special-Award 2015 pdf-Yannick Luciana Cavalheiro Marti S?o Paulo, BR IT-special-Award 2015 pdf-Luciana Martin Hernan Bonamino Rio de Janeiro IT-special-Award 2015 pdf-Martin Florence Kauffmann Brussels IT-special-Award 2015 pdf-Florence Veronica Garcia Buenos Aires IT-special-Award 2015 pdf-Veronica Leonardo Fainboim Buenos Aires IT-special-Award 2015 pdf-Leonardo Diana Campillo Antwerpen IT-special-Award 2015 pdf-Diana Katalin T?r?k Budapest IT-special-Award 2015 pdf-Katalin Alexis Chenouard Nantes IT-special-Award 2015 pdf-Alexis Guilherme Ferreira Silveira Curitiba, BR GESINAS-Award 2015 pdf-Guilherme Luis Isamu Barros Kanzaki Brasília IT-special-Award 2015 pdf-Luis Morten Juhl K?benhavn IT-special-Award 2015 pdf-Morten Alison Yeomans Southampton IT-special-Award 2015 pdf-Alison Koollawat Chupradit www.immunotools.de

Quidel现货促销   Quidel公司（纳斯达克股票代码：QDEL）是加利福尼亚一家领先的诊断医疗厂商服务通过诊断解决方案，可以提高患者的治疗效果和卫生保健系统提供的经济利益的发展提高健康和世界人民的福祉。Quidel开始运营，在1979和1984推出了第一个产品。自那时以来，已经通过内部发展和Quidel增加研发力度，加快新产品的推出速度的关注和收购扩大其产品基地。我们的核心能力和能力包括免疫检测的发展、自动化制造、单克隆抗体表征和开发以及分子检测技术的发展。我们现有的产品一般分为以下几类：（1）横向流动，我们是市场的领导者在传染病和生殖健康；（2）直接荧光抗体（DFA），在传染病和病毒学专业知识；（3）微滴度的生产，对骨和补体途径市场的焦点；（4）荧光免疫分析产品（Sofia）；和（5）的分子诊断产品，包括世界上第一个FDA批准的手持分子器件、AmpliVue。额外的分子和索菲亚测试目前正在开发或作为一个强大的产品管道的临床试验的一部分。无论是在我国的圣地亚哥、加利福尼亚的总部，在俄亥俄、马萨诸塞州研究和制造业务，或在德国，或通过我们在世界各地的商业组织，Quidel是从先进的横向流动和直接荧光抗体分子诊断测试，进一步提高医疗质量提供一个连续的诊断解决方案。美国Quidel Corporation www.quidel.com美国Quidel公司(Quidel Corporation),成立于1979年，总部位于美国,连同其附属公司，从事传染病点保健和生殖与妇女健康的诊断解决方案的开发，制造及销售。公司现拥有员工共322人。是一家在美国纳斯达克上市的综合性临床诊断产品生产商和健康服务研发型企业,股票代码:(Nasdaq: QDEL)，其部分快速诊断产品占据美国主流市场。主要产品包括传染性疾病的诊断、生殖健康及孕期诊断、癌症辅助诊断、骨质疏松症辅助诊断等，生命科学类产品有蛋白，以及抗体。www.quidel.com

2018年春节放假通知尊敬的新老客户及协力厂商：    感谢大家在过去一年里对上海信裕生物科技有限公司的支持与信任，同时也希望在新的一年里信裕生物能继续得到大家的关注与支持，并且信裕生物也一如既往地为大家提供更优质的服务与产品。    正值中国传统节日“春节”来临，在此向各位新老客户和广大朋友们拜个早年！预祝大家新春愉快、财源广进、生意兴隆、宏图大展！为了让公司员工过一个欢乐祥和的春节，现将我司放假时间通知如下：2018年2月10日（农历腊月二十五）至2018年2月25日（农历正月初十）放假，共15天。2018年2月26日（农历正月十一 ）正式上班。   由于年关将至技术部及生产人员都比较紧张与来年人员分配需要一点时间，请贵司提前做好备货计划。   由于放假给大家带来的不便，敬请谅解！如有业务事宜请与相关业务人员联系，再次感谢大家一直以来对信裕生物的关注与支持！衷心祝福大家度过一个欢乐、祥合的春节！

细菌中蛋白质的提取与纯化技术实验试剂采用T7? Tag Affinity Purification KitT7?Tag抗体琼脂。B/W缓冲液：4.29mM Na2HPO4，1.47 mM KH2PO4，2.7 mM KCl， 0.137mM NaCl，1%吐温-20，pH7.3 洗脱缓冲液: 0.1M柠檬酸，pH2.2. 中和缓冲液：2M Tris，pH10.4。 PEG 20000。实验步骤1.100ml 含重组表达质粒的菌体诱导后，离心5000g×5min，弃上清，收获菌体，用10ml预冷的B/W缓冲液重悬。2. 重悬液于冰上超声处理，直至样品不再粘稠，4℃离心 14000g×30min，取上清液，0.45μm膜抽滤后作为样品液。3. 将结合T7?Tag抗体的琼脂充分悬起，平衡至室温，装入层析柱中。4. B/W缓冲液平衡后样品液过柱。5. 10ml B/W缓冲液过柱，洗去未结合蛋白。6. 用5ml洗脱缓冲液过柱，每次1ml，洗脱液用含150μl中和缓冲液的离心管收集，混匀后置于冰上，直接SDS-PAGE分析。7. 将洗脱下来的蛋白放入透析袋中，双蒸水透析24hr，中间换液数次。8. 用PEG 20000浓缩蛋白。注意事项蛋白在过层析柱前，要0.45μm膜抽滤，否则几次纯化后，柱子中会有不溶物。

从琼脂糖凝胶(Agaros gel)中回收DNA片段实验原理限制性内切酶切割后的DNA片断经过电泳后，按分子量大小被分开，排列在琼脂糖凝胶中，可以将特定的某条DNA带所在的凝胶切下来，加热或用特殊的试剂熔解凝胶，使DNA溶回到溶液中，再经过乙醇沉淀或过柱即可获得目的 DNA酶切片段。实验试剂1. 电泳缓冲液2. 荧光染料3. 电泳级琼脂糖粉4. 10′加样缓冲液5. DNA分子量标准(DL2000)6. DNA凝胶回收试剂盒实验设备1. 旋涡混合器2. 微量移液取样器3. 移液器吸头4. 1.5ml 微量离心管5. 双面微量离心管架6. 台式离心机7. 琼脂糖凝胶电泳系统8. 微波炉9. 恒温水浴实验步骤1. 配制TAE电泳缓冲液(10′储存液)，10′加样缓冲液，1.5ml离心管装入铝制饭盒(灭菌)、移液器吸头装入相应的吸头盒(灭菌)。2. 操作步骤   1) 用1′TAE配制1%琼脂糖凝胶。DNA用合适的酶切。   2) 在胶上选定两个加样孔，分别加入少量(10μl)和大量(50μl )DNA酶切产物，电泳。   3) 电泳结束后用刀片切下含有少量DNA酶切产物的泳道(一般选择位于凝胶的边缘)，在紫外灯下找到目的DNA 带，用刀片切在带的下上下边缘各切一个小口作为标记。注意：含有大量DNA酶切产物的凝胶既不用加荧光染料，也不用紫外灯照射！   4) 将做好标记的凝胶条与未染色的凝胶原位对齐，根据小胶条上的标记估计未染色的大胶上DNA酶切产物的位置，用刀片切下大胶中DNA产物所在的凝胶(尽量不要多余的凝胶)，转移至一个称量过的干净的1.5ml微量离心管中。再称量后计算出胶的重量。   5) 按照DNA快速纯化/回收试剂盒操作说明，纯化回收目的片段。纯化/回收试剂盒组成：溶液A：6M NaClO4，0.03M NaAc，pH5.2，少量酚红；溶液B：3M NaAc；溶液C：用时加入35ml无水乙醇；溶液D：TE缓冲液。胶回收步骤如下：      a. 将切下的胶带放入1.5ml离心管中，按照1：3 (胶带重量：溶液A的体积)的比例加入溶液A；      b. 50℃水溶10min，胶带完全要求完全溶化，其间可振荡助溶2～3次，待溶化后置室温加入15μl溶液B，充分混匀；      c. 将溶液置于离心柱中，静置2min，10000rpm离心20s；      d. 倒掉液体，加入500μl溶液C于离心柱中10000rpm离心20s，弃液体，重复该步骤一次；      e. 12000rpm离心1min，甩干剩余液体以除去残余乙醇；      f. 将离心柱置于新的离心管中，室温敞开离心管盖放置5～10min，使乙醇挥发殆尽；      g. 加入20～30μl溶液D(使用前50℃水浴)，静置2min；      h. 12000rpm离心1min，管底溶液即为所需DNA，将DNA贮存于-20℃可长期保存。

姊妹染色单体色差方法实验原理在DNA复制过程中，核苷的类似物5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-Bromodeoxyuridine简称BrdUrd）或5-碘尿嘧啶核苷（5-Iodo-2′-deoxyuridine简称IdUrd）可以代替核苷酸掺入新合成的DNA链，并占有胸腺嘧啶（Thymidine，T）的位置。哺乳类细胞在含有适当浓度的BrdUrd的培养液中经历二个分裂周期之后，其中期染色体的两个单体的DNA双链在化学组成上就有了差别：即一条染色单体的两股DNA的T位完全由BrdUrd代替，而另一条染色单体的两股DNA中的一股含BrdUrd，另一股则不含 BrdUrd。这样的细胞经过制片和苯并咪唑荧光染料（Hoechst-33258）染色后，在荧光显微镜下可观察到两条姐妹染色单体显示强弱不同的荧光。两股DNA链都含有BrdUrd的单体荧光较强，其中只有一股有BrdUrd的单体荧光较弱。但由于荧光染料发出的荧光消失较快，只能立刻在荧光显微镜下照相而不能长期保存。1974年Korenberg和Freedlender改进了这一技术，单独用Giemsa染色即获得姐妹染色单体差别染色（sister-chromatiddifferentialstaining简称SCD）。来自一个染色体的两条单体之间同源片断的互换称为姐妹染色单体互换（sister-chromalidexchange，简称SCE）。这种互换是完全的，对称的。由于姐妹染色单体染色上的明显差异，如果姐妹染色单体间在某些部位发生互换，则在互换处可见有一界限明显、颜色深浅对称的互换片段，故SCE易于计数，即使在一定距离内发生多次互换，也可被检测出来。目前认为SCE反映了DNA的损伤，可以使用SCE作为哺乳类动物突变形成的指标。由于SCE分析方法比观察染色体畸变更简便、迅速、敏感，并表现出很好的剂量效应关系，因此，目前已将此法列为检测诱变剂或致癌物的常规指标之一。实验试剂1. RPMI1640，肝素，植物凝血素（PHA），秋水仙素，青、链霉素，姬姆萨染液等。2. 小牛血清：最好经过透析处理。将小牛血清装入透析袋中，用线扎紧封口，小心检查，切勿有漏孔。然后将透析袋放在盛有双重蒸馏水的玻璃器皿中，每隔1—2小时换一次水，搁置在4℃冰箱中，24小时后赛氏滤器灭菌过滤。3. 3.5％NaHCO3溶液：称3.5克NaHCO3，用100毫升双蒸水溶解，10磅15分钟高压灭菌，调节pH用。4. BrdUrd 溶液：用无菌青霉素瓶，在普通条件下用分析天平称取BrdUrd2毫克，然后在无菌室内加入灭菌生理盐水4毫升，母液的浓度为0.5毫克/毫升。用黑布避光，置冰箱中保存。最好现配现用。5. 1mol/LNaH2PO4，pH8.0的溶液；称取120克NaH2PO4，加入1000毫升双蒸水，用NaOH粉末调pH至8.0即可。6. 2×SSC溶液（0.3mol/L氯化钠，0.03mol/L枸橼酸钠，称取NaCl17.54克，枸橼酸钠8.82克，各用蒸馏水1000毫升溶解，使用时两溶液等量混合。7. pH为6.8 的mol/L/15磷酸缓冲液：甲液：取KH2PO49.08克，溶于1000毫升蒸馏水中。乙液：取Na2HPO2·2H2O11.88克或Na2HPO4·12H2O23.87克，溶于1000毫升蒸馏水中，将50.8毫升的甲液与49.2毫升乙液混合，即得pH为6.8的mol/L/15磷酸缓冲液。实验设备1. 2毫升和1毫升灭菌注射器2. 吸管，移液管，离心管3. 量筒，烧杯4. 无菌青霉素瓶，试剂瓶，培养瓶5. 酒精灯6. 载玻片7. 天平8. 紫外灯（15W）9. 离心机10. 恒温培养箱11. 显微镜实验材料人的外周血实验步骤1. 在无菌条件下，用20毫升的青霉素瓶分装5毫升培养液，其中RPMI1640占80％；小牛血清占15—20％；PHA0.2毫升；青霉素 100单位/毫升；链霉素100微克/毫升。最后用3.5％NaHCO3调节pH至7.2—7.4。2. 每5毫升的培养液中加入BrdUrd0.1毫升，最终浓度为10微克/毫升。3. 每瓶培养液中加入0.3毫升静脉血，轻轻摇匀，用黑布避光，立即置37℃温箱中培养。4. 培养72小时左右，加入秋水仙素0.4—0.8微克/毫升，继续培养4小时。5. 按常规收集细胞，用0.075mol/LKCl或蒸馏水低渗20分钟，用甲醇：冰醋酸3：1配制的固定液固定两次，每次15分钟，用气干法制片，一天以后将染色体制片放入70—80℃烤箱中烘烤1—2小时，或放在37℃温箱中存放备用。6. 染色体标本的差别染色方法有两种：   1) 碱的热溶液处理：将染色体标本浸在88℃的 1mol/LNaH2PO4（pH为8.0）的溶液中，处理20分钟，取出后立即用蒸馏水冲洗，用常规Giemsa染色5分钟，再用蒸馏水冲洗，干燥，观察。   2) 紫外灯照射诱发：染色体标本在37℃条件下搁置24小时后取出，放在45—48℃的水浴锅上，覆盖一层2×SSC溶液（0.3mol/LNaCl，0.03mol/L枸橼酸钠），15W紫外灯照射20—30分钟，灯管与载玻片之间距离为6厘米（照光期间防止2×SSC溶液干涸）。照射完毕，用蒸馏水冲去2×SSC，用3％Giemsa（pH6.8磷酸缓冲液稀释）染色5—10分钟，水洗，气干后镜检。7. 在普通光学显微镜下观察，可见姊妹染色单体呈现鲜明的深浅不同的颜色。注意事项1. 在本方法的基础上，如将培养基组成、培养液的酸碱度、培养温度或培养时间等因素略加变动，可适用于其他一些哺乳动物、鸟类或两栖类动物淋巴细胞的培养，用以观察它们的姊妹染色单体色差。例如中华大蟾蜍淋巴细胞培养时，所用的培养基组成除RPMI1640外，还补充一定量的水解乳蛋白，培养基的pH为7.0—7.2，培养温度为26℃。2. BrdUrd溶液最好现配现用，一次使用不完，必须有黑布避光，4℃冰箱保存。3. BrdUrd在培养开始时加入，或在培养后的24小时加入均可。4. 用紫外灯照射诱发姊妹染色单体互换时，如紫外灯功率大，W数高，照射的时间就相应地减少。