elisa试剂盒检测步骤对科研界的影响

elisa试剂盒检测步骤是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。elisa试剂盒检测步骤不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本 ,因此也适合于血清流行病学调查。elisa试剂盒检测步骤不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。因此elisa试剂盒检测步骤在生物医学各领域的应用范围日益扩大。

elisa试剂盒检测步骤：

1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；elisa试剂盒检测步骤混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为60μmol/L，40μmol/L ，20μmol/L，10μmol/L， 5μmol/L）。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。elisa试剂盒检测步骤在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。 

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，elisa试剂盒检测步骤每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。