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利用 Agilent 1290 Infinity UHPLC 和 Agilent 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统对单克隆抗体进行高分离度快速肽谱分析
2018/10/17 09:51
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方案摘要：
产品配置单：
Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统
型号： 1290 Infinity II
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II Multisampler
型号： 1290 Infinity II Multisampler
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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方案详情：
前言
肽谱分析是表征生物治疗性蛋白质的一种常用分析技术。首先用一种或两种蛋白酶将蛋白质酶解成小分子肽。肽混合物通常采用反相色谱法分离，然后通过紫外或质谱检测器进行检测。质谱可以提供肽的质量数据，从而大大扩充肽谱分析的信息含量。由于增加了质量分离模式，可以轻松鉴定出共流出的多肽，同时也可以大幅缩短梯度时长。此外，串联质谱可以将肽碎裂为更小的片段，并为肽的氨基酸序列以及糖基化、磷酸化、氧化和脱酰氨基化等翻译后修饰(PTM) 提供证据。
本应用简报介绍了如何使用新型表面多孔肽谱分析色谱柱配合 Agilent 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统对一种 IgG (1) 治疗性单克隆抗体 (mAb) 进行肽谱分析。结合 MS/MS 分析，肽谱分析色谱柱独特的分离能力可以最大限度提高分离度和效率，可确保实现可靠灵敏的肽鉴定，而且只需 15 分钟的运行即可实现高序列覆盖。6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统可为肽鉴定提供出色的质量准确度和灵敏度，而 MS/MS 功能则有助于更可靠地确定被修饰肽的鉴定结果。此外，本文还探讨了通过 IgG (1) 肽谱分析梯度和 LC/MS/MS 参数的优化，实现稳定、快速、可靠的 mAb 肽谱分析。
结论
本文介绍了 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统和 Agilent 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统联用对单克隆抗体所实施的肽谱分析。LC/MS/MS 可确保实现可靠灵敏的肽鉴定。
• 使用 Agilent AdvanceBio 肽谱分析色谱柱可对单克隆抗体 (IgG1) 进行快速有效的 HPLC 肽谱分析。分离速度和效率与亚 2 μm UHPLC 色谱柱性能相当，而系统背压仅为亚 2 μm 色谱柱的一小部分
• 1290 Infinity 液相色谱系统具有快速和卓越的分离能力，6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统则可为肽鉴定提供出色的质量准确度和灵敏度。MS/MS 功能有助于确认肽鉴定结果，特别适用于修饰的肽。只需 15 分钟运行即可达到 92% 的序列覆盖率
• Agilent MassHunter BioConfirm 软件可实现自动化的数据提取、序列匹配、PTM 鉴定和序列覆盖率计算
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