关注
已关注
已认证
粉丝量 0
采购咨询：400-629-8889
售后咨询：400-820-3278
快速高效的单克隆抗体 (mAb) 肽图分析：UHPLC 性能与表面多孔颗粒相结合
2018/10/17 09:56
阅读：544
分享：
方案摘要：
产品配置单：
Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统
型号： 1290 Infinity II
产地： 德国
品牌： 安捷伦
面议
参考报价
联系电话
Agilent 1290 Infinity II Multisampler
型号： 1290 Infinity II Multisampler
产地： 德国
品牌： 安捷伦
面议
参考报价
联系电话
方案详情：
前言
反相色谱(RP) 肽图分析是生物治疗药物分析中最主要的技术，可为生物制药产品提供全面的表征。当与质谱仪(MS) 联用时，能实现对蛋白质及其变异体的鉴定，确定翻译后修饰(PTM) 及其位点，并确认蛋白质序列。然而，由于蛋白质裂解物固有的复杂性，使得利用色谱进行肽图分析非常具有挑战性。因此，许多组织都致力于开发稳定、可靠的肽图分析方法。通常而言，肽图分析受到灵敏度低、峰形差及需要较长分离时间来达到所需分离度的影响。
近年来，人们应用超高效液相色谱(UHPLC) 以克服这些挑战，与常规HPLC 相比，UHPLC 经证实具有超高分离度、更高的灵敏度，且可大大缩短分析时间。UHPLC 技术可更详尽地表征蛋白生物治疗药物，其通过加快流速、缩小粒径及缩短柱长，可在更短的分析时间内实现更高的分离性能。但是，这种类型的分离对压力要求越来越高，不能在常规的400 和600 bar 高效液相色谱仪上进行操作，严重地限制了其应用范围。
为了解除这种限制，安捷伦引入一种2.7 μm AdvanceBio 肽图分析色谱柱以弥补生物治疗药物表征中的关键缺陷，可在常规液相色谱系统压力下，实现快速而高效的肽图分析。采用表面多孔色谱填料，AdvanceBio 肽图分析色谱柱可在很短的分析时间和低系统压力下大大改善肽图分析，同时保持很高的峰性能和分析效率。本研究采用AdvanceBio 肽图分析色谱柱，在较短的分析时间内对一种单克隆抗体(mAb) 胰蛋白酶消化物进行LC/MS 肽图分析。此外还将AdvanceBio 色谱柱及方法与一种亚2 μm 非安捷伦UHPLC 肽图分析色谱柱进行性能比较。
结论
AdvanceBio 肽图分析色谱柱可大大缩短RP LC/MS 肽图分析的时间，同时可实现高分离度分离。结合优化的梯度条件，本应用举例说明了如何在14 min 内以较低的液相色谱操作压力(< 450 bar) 完成单克隆抗体胰蛋白酶消化物的高效肽图分析。与非安捷伦UHPLC 肽图分析色谱柱及快速分析条件对比后，AdvanceBio 肽图分析色谱柱用于分析mAb 时，可在整个梯度范围内快速产生分离度良好的肽段峰，且序列覆盖率高。最重要的是，AdvanceBio 肽图分析分离是在低系统压力下完成，因此更突显其灵活性，可在HPLC 或UHPLC 仪器条件下进行这些分离。
下载本篇解决方案：
更多
应用 QuEChERS 方法结合 Agilent 7000 系列三重四极杆气质联用仪测定甜菜中 的多农药残留
本文介绍了一种用于分析甜菜中 267 种农药的简便、高通量方法。该方法将 QuEChERS 样品前处理方法与 Agilent 7000 系列三重四极杆气质联用系统相结合，并通过基质匹配标样校准进行定量，以降低基质干扰引起的定量偏差。结果表明，该方法在 2–200 μg/kg 的基质加标浓度范围内具有良好的线性关系。绝大部分目标农药化合物的定量限 (LOQ) 低至2 μg/kg，灵敏度高。加标回收率测试表明，在 2、5、10、100 和 200 μg/kg 的加标浓度下，大部分农药化合物的回收率在 80%–120% 的范围内 (n = 5) ，且相对标准偏差 (RSD)低于 10%。该方法适用于对甜菜中的多种农药残留进行常规分析。
食品/农产品
2024/05/13
使用 Agilent BioTek Synergy Neo2 Hybrid 多功能微孔板检测仪测定脂质纳米颗粒表观 pKa
脂质纳米颗粒 (LNPs) 已被用作各种有效载荷的递送系统。本应用简报展示了 Agilent BioTek Synergy Neo2 Hybrid 多功能微孔板检测仪用于测定 mRNA LNPs 表观 pKa 的实用性。
制药/生物制药
2024/05/13
使用 ICP-OES 结合自动稀释测定锂盐中的多种元素
使用 Agilent 5800 VDV ICP-OES 和 Agilent ADS 2 自动稀释器自动分析锂离子电池前驱体化学品
能源/新能源
2024/05/13
使用配备高级稀释系统的 ICP-MS 对 高基质样品进行高效分析
在用 Agilent 7850 ICP-MS 分析前，使用 Agilent ADS 2 对沉积物和土壤进行自动稀释
环保
2024/05/13
