前言
嗜铬细胞瘤及副神经节瘤(PPGL)是一种能够引起内分泌
性高血压的少见神经内分泌肿瘤,在普通高血压门诊中患病率为
0.2% - 0.6%,在儿童高血压患者中为1.7%。PPGL患者的主要临床
表现为儿茶酚胺(catecholamine,CA)类物质分泌增多,进一步
导致高血压及心、脑、肾血管并发症和代谢性改变,在经准确诊
断后,可通过手术治疗,属于一种可治愈的继发性高血压。
CA是一类含有儿茶酚和胺基的神经类物质,是人体内重要的
神经递质和激素,包括肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)和多巴胺
(DA)。CA在儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)的作用下生成变肾
上腺素类物质(metanephrines,MNs),主要包括甲氧基肾上腺
素(MN)、甲氧基去甲肾上腺素(NMN)和3-甲氧酪胺(3-MT)。在《嗜
铬细胞瘤和副神经节瘤诊断治疗的专家共识(2020)》中,推
荐:诊断PPGL的实验室检查首选血浆游离或尿液甲氧基肾上腺素
(MN)、甲氧基去甲肾上腺素(NMN) 浓度测定;建议:可同时检测血
或尿NE、E、DA及其他代谢产物3-MT等浓度以帮助诊断。并且,
鉴于质谱法灵敏度高、专属性强、稳定性好等特点,专家共识中
推荐首选使用LC-MS/MS法测定MNs。
本方法基于SCIEX 液相色谱串联质谱系统,采用同位素内标校
正法,建立了一次处理,同时准确检测血浆中6种儿茶酚胺类物质
的定量方法。各化合物信息如下。
实验部分
样品前处理
本实验采用SPE固相萃取法对血浆中6种儿茶酚胺类进行处理。
色谱条件
色谱柱:Kinetex F5(2.6 µm, 3.0×100 mm);
流动相:A含甲酸的水溶液,B含甲酸的甲醇,梯度洗脱;
流速:0.4 mL/min;
柱温:40 ℃;
质谱条件
电离方式:电喷雾离子源,正离子;
检测方式:多反应监测 (MRM);
离子源温度 (TEM):500℃;
雾化气 (Gas1):60 psi;
辅助气 (Gas2):40 psi;
气帘气 (Gurtain Gas):30 psi;
电喷雾电压:1500V;
对应MRM通道及参数见表1。
表1. 质谱参数
结果与讨论
在本实验条件下,各化合物得到有效分离,典型色谱图如图1。
标准曲线
以水为替代基质,制作标准工作曲线。各待测物典型标准曲
线结果如下表。
加标回收率
取混合人血浆样本,分为4组,向其中三组加入不同浓度的6
种儿茶酚胺混合标准溶液,制备低、中、高三组血浆加标样本,
以随行标曲测定4组血浆样本中各化合物浓度。按下述公式计算加
标回收率。
加标回收率=(实测加标后样本浓度-实测加标前样本浓度)/理论
加标浓度
各化合物在各自加标水平下加标回收率结果如下图所示。各
待测物的加标回收率在92.2%-112.1%之间,符合相关要求。
精密度
取混合人血浆样本,分为 3 组,向其中加入不同浓度的 6 种儿茶酚胺混合标准溶液,
制备低、中、高三组血浆加标样本(QC)。各浓度 4 样本分析,连续测定 3 天。根据当
日的标准曲线,计算 QC 样本浓度。根据 QC 的 RSD%对方法的日内与日间精密度进行考
察。结果下图所示。各化合物的日内和日间精密度分别为 0.7-6.0%和 2.9-9.4%,符合相关
相关要求。
总结
本实验在 SCIEX 液质连用平台上,搭建了一针进样,6 种儿茶酚胺类化合物同时定量
检测方法。实验采用 SPE 法进行样本前处理,同位素内标校准,对血浆中 6 种儿茶酚胺
类化合物定量分析。方法线性良好,加标回收,日内、日间精密度满足相关要求。可用于
临床实际样本的检测。
仅限专业展会等使用、仅向专业人士提供的内部资料
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