一、临床意义
所有水溶性维生素都参与催化功能,B 族维生素是许多种辅酶的组成成分,这些辅酶担负着氢、电子或基团的
转移。它们参与由酶催化的糖、脂肪、蛋白质及核苷酸等的代 谢,维生素 C 参与许多羟化反应。
二、实验目的
建立水溶性维生素的固相萃取技术搭配 LC-MS/MS 的检测方法,满足临床检测的基本需求。
三、前处理过程
固相萃取产品:水溶性维生素专用板
标准品配置过程:标准样品配置方法:预备 1 mg/mL 的各个水溶性维生素标准储备 水溶液 。对于维生素 B2、
B7 和 B9,加入 200μL 1 N NaOH 进行溶解。将维生素 C 溶解在低 pH 的醋酸盐缓冲液中以提高其稳定性。使 用这些单独的储液制成混合储液,具体操作为加入 1.25 mL 维生素C 储液以及其他储液各 0.025 mL,然后用水 稀释至 25 mL。将此混合储液( 50 ppm 维生素C,1 ppm 其他分析物)进一步稀释,得到表 2 所列出的 11 种校准 标准品。(维生素 C 不稳定,需要当天使用当天配置)
样品制备过程:用移液枪准确吸取 100μL 血清样本于 2ml 离心管中,加入 600μL 甲醇、10ul 抗氧化剂涡旋混
合 1min,8000r/min 离心 5min,取上清液待净化。取水溶性维生素专用板,加入待净化上清液,用正压装
置将板中的样品压下,流速控制在 2~3 秒/滴,待液滴流尽后继续保持 1min。
浓缩:在 37℃条件下,氮气吹干,用初始比例的流动 相复溶,待检测。
四、检测条件
4.1 色谱条件
色谱柱: Venusil MP C18(3.0*50 mm, 3μm, 100 Å)
流动相A:10mM 乙酸铵 0.75%甲酸 水 (%)
流动相B:10 mM 乙酸铵 0.75%甲酸甲醇 (%)
流 速:600 μL/min;
柱 温:30 ℃;
进样量:10 μL;
梯度程序见表2:
3.3.2质谱条件
LC-MS/MS:Sciex 4000+
扫描模式:电喷雾电离正模式采集模式:多反应监测(MRM)
Cur Gas:25;Gas 1:45;Gas 2:45;T: 550℃
五、实验结果
六、实验结论
使用水溶性维生素专用板能够实现一步完成样品的制备过程,且回收率良好,该方法灵敏度高、特异性强,可 以满足人血中多种水溶性维生素的检出要求
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