实验室技能小课堂——如何得到一张好的免疫荧光图片

什么是免疫荧光技术？

免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。

免疫荧光方法中主要步骤：

1）冰冻切片制备                2）组织切片固定3）血清封闭                4）一抗孵育条件

5）二抗孵育条件                6）复染                  7）封片                       8）切片清洗

荧光显微镜标本制作要求：

1、载玻片：载玻片厚度应在0.8～1.2mm之间，载玻片必须光洁，厚度均匀，无明显自发荧光，有时需用石英玻璃载玻片。

2、盖玻片：盖玻片厚度在0.17mm左右，光洁。

3、标本：组织切片或其他标本不能太厚，如太厚激发光大部分消耗在标本下部。另外，细胞重迭或杂质掩盖，影响判断。

4、封裱剂：封裱剂必须无自发荧光，无色透明，荧光的亮度在pH8.5～9.5时较亮，不易很快褪去。

5、镜油：必须使用无荧光镜油。

荧光玻片如何来检测呢？

荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光365nm或紫蓝光420nm)作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过荧光显微镜来观察。

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