呕吐毒素(vomitoxin),又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON),化学名为3α, 7α, 15一三羟基草镰孢菌-9-烯-8-酮,属于单端孢霉烯族化合物,主要由禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌、拟枝孢镰刀菌、粉红镰刀菌、雪腐镰刀菌等镰刀菌产生。另外,头孢菌属、漆班菌属、木霉属等的菌株都可产生该毒素。单端孢霉烯族毒素共有150多种,是一类强有力免疫抑制剂,所引起典型症状是采食量降低,所以这类毒素又叫饲料拒食毒素。呕吐毒素是其中最重要一种毒素,主要来自镰刀菌属,尤其是禾谷镰刀菌和黄色镰刀菌由于它可以引起猪的呕吐,故又名呕吐毒素。
呕吐毒素被列为3类致癌物。它们具有很高的细胞毒素及免疫抑制性质,因此,对人类及动物的健康构成了威胁,特别是对免疫功能具有明显的影响。DON广泛存在于全球,主要污染小麦、大麦、玉米等谷类作物,也污染粮食制品,当人摄入了被DON污染的食物后,会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状,严重时损害造血系统造成死亡。由于中国传统饮食习惯中粮谷比例大大高于西方,使得呕吐毒素的危害更为突出。谷物及饲料中DON的含量有严格的限量标准。我国谷物中DON的限量标准为1.0 mg/kg。
我国用于检测呕吐毒素的液相色谱法,常常会利用呕吐毒素(脱氧雪腐镰刀菌烯醇)免疫亲和柱,免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇,从而对脱氧雪腐镰刀菌烯醇起到非常针对性的纯化作用。
利用抗原抗体反应,抗体连接在柱体内,样品经过提取、过滤后,缓慢的通过脱氧雪腐镰刀菌烯酵免疫亲和层析柱,在免疫亲和柱内毒素与抗体结合,之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质,再用甲醇洗脱,然后用于检测。过净化柱后可直接用于液相脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的检测,可提高检测方法的准确度,达到快速测定的目的。 参考标准《GB 5009.111-2016 食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》 ,月旭呕吐毒素(脱氧雪腐镰刀菌烯醇) DON免疫亲和柱完成符合标准要求。以面粉为样品,采用月旭呕吐毒素(脱氧雪腐镰刀菌烯醇) DON免疫亲和柱净化,然后进行检测。 净化步骤 回温:将免疫亲和柱从低温条件下取出后,恢复至室温,将柱内液体放出; 上样:待净化液全部上样,弃去; 淋洗:5mL磷酸盐缓冲液,5mL水,弃去,抽干柱子; 洗脱:加入2mL甲醇洗脱,抽干柱子; 浓缩:将洗脱液置于 50℃水浴中氮吹至干,用20%甲醇水定容至1mL,用0.22μm滤膜过滤,上机测定。 色谱条件 色谱柱:月旭Ultimate® XB-C18 4.6×150mm,5μm; 流动相:水:甲醇(80:20); 流速:1.0mL/min; 柱温:30℃; 进样量:20μL; 波长:218nm 。 回收率结果如下图: 图一:面粉样品空白图谱
[来源:月旭科技(上海)股份有限公司]
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