如何检测寨卡病毒

2014年以来美洲多个国家相继发生寨卡病毒（Zika）感染病例，世界卫生组织近日警告，寨卡病毒正呈现“暴发式传播”，预计美洲地区将有至多400万人感染这种病毒。截至目前，中国大陆尚未发现病例，但疾病预防控制中心指出我国仍存在病例输入风险。

　　目前关于这种病毒传播的疑问不少，比如怀孕期间感染与造成婴儿小头畸形之间的关联，但由于目前诊断方法的局限性，还很难给出一个答案来。一组研究人员正在攻关，希望能以最快的速度研发出免疫试剂，检测是否感染Zika病毒。

　　来自德州大学加尔维斯顿医学分校的Nikos Vasilakis表示，“我们正尽全力尽快给临床医师们一些答案。”

　　目前，检测寨卡病毒的标准检测方法是对样本进行PCR，分析样本中的病毒RNA探针是否存在，虽然这种方法能很好的检测到病毒，但是病原体的RNA很快就会被降解掉。“在患者把样品送入临床时，病毒也许已经消失，或者只能抓住它的尾巴了，这超过了检测时间限制，”Vasilakis说。

　　临床医师和流行病学家希望能在出生前几个月里就确定婴儿是否感染了寨卡病毒，为此美国疾病控制与预防中心CDC的科学家们进行了一种称为蚀斑减少中和试验(Plaque Reduction Neutralization Test) 的检测，这种方法是检测血清中和抗体的一种敏感性较高的方法，能检测之前的感染。

　　从原理上说，这一检测方法以使蚀斑数减少50％的血清稀释度作为其中的效价。试验使用定量的病毒(100PFU)与不同稀释度的等量血清混合后感作, 接种预先准备好的单层细胞，再覆盖上营养琼脂置37度二氧化碳培养箱培养，数天后分别统计蚀斑数，用Karber法计算该血清的蚀斑中和效价。

　　患者的血清中混有病毒，几天时间里研究人员观察病毒是否会感染培养基，如果没有，那么病毒就已经被血清中的抗体中和了，这表明患者曾经接触过寨卡病毒。

　　CDC甲类病毒实验室主任Ann Powers表示，使用这种方法的问题在于“你必须有活体病毒，和合适安全的环境，”这意味着只有少数几个实验室能进行这种试验。

　　其它更加方便的血清学测试也能检测特定病原体中的抗体，但是对于寨卡病毒来说，很难判断患者携带的黄病毒是登革热病毒，寨卡病毒还是其它病毒。“而且寨卡病毒出去的区域也正是登革热出现的地区，”来自华盛顿大学圣路易斯分校的免疫学家Mike Diamond说。

　　Vasilakis 正在尝试ELISA方法，也就是检测体液中微量物质的固相免疫测定的方法，这种方法利用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定，可以在感染后几个星期内检测到Zika病毒。虽然这也有可能会与其它感染发生一定程度的交叉反应，但如果Zika病毒特异性抗体浓度高就能指示出近期发生的Zika病毒感染，Vasilakis说。

　　Vasilakis预计在未来几周内，Diamond研究组就会有结果，研发出一种针对Zika病毒的单克隆抗体检测方法，这能与ELISA方法结合，检测发生过的感染，“我们很早就开展了这项研究，这个月就能得到结果，”Diamond说，“初步结果表明我们的一些抗体能特异性识别Zika病毒。”

　　不过即使Diamond研究组的抗体能特异性检测Zika病毒，他们也需要一些时间来建立诊断方法，“这可能还需要几个月的时间。”

　　与此同时，一些生物公司也开始销售Zika血清学检测，比如MyBioSource 公司已经有售一种针对Zika的IgM ELISA检测，来自加拿大的Biocan 公司也在出售一种检测IgM和IgG抗体（后者比前者在感染后提升水平更高）的扎手指检测方法，能在5到10分钟得到结果。

　　Diamond表示他们还未接触任何商业产品，Biocan目前还未给出有效数据，但是其销售部总经理Bhavjit Jauhar表示他们已经将实验室和现场检测结果呈递给巴西监管当局，“我们过去几年间一直致力于Zika病毒的研究，因为我们认为这种疫情会暴发。”