舜宇恒平符合国标的三聚氰胺快速液相色谱检测法

      上海舜宇恒平科学仪器有限公司按照GB/T 22400-2008 《原料乳中三聚氰胺快速检测　液相色谱法》，对鲜牛奶中三聚氰胺进行快速检测，经优化色谱条件，三聚氰胺的出峰时间在7min左右，并能与杂质峰达到基线分离，完整分析一个样品（包括前处理）的整个实验过程在20min以内。
1.仪器与试剂
      LC1620高效液相色谱仪（含UV1620紫外-可见检测器1台，P1620高压恒流泵1台，上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；FA2004电子分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；三聚氰胺标准品(>99%，上海安谱)；磷酸二氢钾(分析纯)；磷酸(分析纯)、乙腈(色谱纯，美国Tedia)、二次蒸馏水。
2.标准品溶液配制
      精密称取三聚氰胺标准品，溶于水，配制成1.0mg/mL的标准储备液，于4℃避光保存。根据实验需要，用流动相逐级稀释成适当浓度的标准工作液。
3.样品前处理
      称取15g样品于50ml具塞离心管中，加入乙腈30ml，剧烈震荡6min，加水至满容刻度，充分混匀后静置3min，取上清液，0.22um滤膜过滤，作为HPLC测定溶液。
4.色谱条件：
色谱柱：Venusil SCX 5μm(ID4.6mm×250mm)
流动相：乙腈/缓冲盐=30/70（缓冲盐：80mM磷酸缓冲液，用磷酸调pH3.0）
流速：1.5ml/min
波长：240nm
进样量：20μl
5.精密度实验
      取浓度为2μg/mL三聚氰胺标准工作液，按上述色谱条件，连续进样6次，以各成分峰面积计算RSD(%)，所得结果如表1所示：保留时间相对标准偏差（RSD）为0.10％，峰面积RSD为0.69％。
                                                                                          表1 精密度实验 

图1 三聚氰胺标准品色谱图

6.标准曲线
1) 配置浓度分别为0.2、0.5、2.0、5.0、20.0、50.0μg/mL的三聚氰胺标准工作液。将以上6种标准工作液在上述色谱条件下按浓度由低至高进样。以对照品浓度(横坐标X轴，μg/mL)对峰面积(纵坐标Y轴)进行线性回归，求算标准曲线，结果如下：
y = 4810.3x + 137.52 r = 0.9999
2) 配置浓度分别为0.005、0.01、0.02、0.5、0.2μg/mL的三聚氰胺标准工作液。将以上5种标准工作液在上述色谱条件下按浓度由低至高进样。以对照品浓度(横坐标X轴，μg/mL)对峰面积(纵坐标Y轴)进行线性回归，求算标准曲线，结果如下：
y = 4116.2x + 17.618 r＝0.9992
7.加样回收率和重现性实验
取已知三聚氰胺含量的牛奶样品，加入一定量的标准储备液，按“样品前处理” 操作，平行制备3份，得到样品溶液后按上述色谱条件进样分析，得到加样回收率及重现性结果，三次测定RSD为1.89％，加样回收率为100.6％。

图2 空白牛奶样品色谱图

图3 加标牛奶样品色谱图

8.检测限及定量限
      依据噪声值，按3倍信噪比，计算三聚氰胺的理论检出限，为0.04 mg/kg。

      具体内容欢迎致电021-64959872进行咨询。

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