【飞诺美色谱】维生素K1的分析方法

概述

本实验以50mM乙酸水和甲醇为流动相，使用Kinetex Biphenyl（2.1×100mm 1.7μm）色谱柱对维生素K1进行 测试，顺反式异构体可达到初步分离，出峰时间满足要求。

关键词

Kinetex Biphenyl；维生素K1

化合物信息

实验部分

3.1仪器、试剂与材料

3.1.1主要仪器设备

液相色谱串联质谱仪(AB SCIEX API 5500+)，配 有电喷雾离子源(ESI)；

超高效液相色谱仪(Thermo Ultimate 3000)

3.1.2试剂材料

实验用水为屈臣氏水；甲醇、乙酸均为色谱纯 试剂。

3.1.3样品

1. 维生素K1：客户提供（3.914mg）；

2. 维生素K1上机液1：用4mL甲醇溶解样品，精 密吸取1μL于棕色进样小瓶中，用甲醇配制成 1mL（≈1μg/mL）；

3.2仪器检测条件

3.2.1超高效液相色谱条件

色谱柱：Kinetex Biphenyl 2.1×100mm 1.7μm； P/N：00D-4628-AN

流动相：

A：50mM乙酸水；

B：甲醇

流 速： 0.2mL/min；

柱 温： 20℃；

进样量：5 μL；

检测波长：254nm

等度洗脱： A： B=5:95

3.2.2液相串联质谱液相部分条件

色谱柱：Kinetex Biphenyl 2.1×100mm 1.7μm；

P/N：00D-4628-AN

流动相：

A：50mM乙酸水；

B：甲醇

流 速： 0.5mL/min；

柱 温： 25℃；

进样量：5 μL；

等度洗脱： A： B=10:90

3.2.3质谱条件

离子源类型：电喷雾离子源（ESI）

扫描方式：多反应监测正离子模式（MRM+）

喷雾针电压：5500 V

离子源温度：550 ℃

加热器（GS1）：55 psi

辅助加热气（GS2）：55 psi

气帘气（CUR）：20 psi

碰撞气（CAD）：10 psi

为获得较好的稳定和灵敏度，各化合物监测离 子对的去簇电压（DP）和碰撞电压（CE），目 标化合物定量离子对参数经过系统优化，优化 信息参见表3。

3.3结果

3.4实验谱图

讨论

C18 类色谱柱上维生素 K1 出峰在百分百纯有机 相时，无法通过调整流动相来分开顺反异构体。在 HILIC 模式下，Luna NH2 可以对维生素 K1 有很好的 保留，但由于色谱柱柱效原因舍弃。实验又筛选了 Kinetex F5、Kinetex Biphenyl 及苯基-乙基柱，在 50mM 乙酸水和甲醇的条件下，质谱上可看到 Kinetex Biphenyl 对顺反异构体达到了初步分离。在 液相上通过优化柱温及流速，在 20℃ 0.2mL/min， 50mM 乙酸水：甲醇=5：95 条件下，分离度可达到 1.48，出峰在 10 分钟之内。

结论

本实验以50mM乙酸水和甲醇为流动相，使用 Kinetex Biphenyl（2.1×100mm 1.7μm）色谱柱对维生素 K1进行测试，顺反式异构体分离度1.48，可达到初步分 离，出峰时间满足要求。