使用 Agilent 6540 Q-TOF LC/MS 系统通过二维中心切割 LC/MS 法进行药物杂质鉴定

摘要

本应用简报介绍了在与质谱不兼容的反相液相色谱法中，采用二维中心切割 LC/MS 方法来鉴定度洛西汀药物中相邻洗脱的杂质。在 Agilent 1260 Infinity 液相色谱系统联用 Agilent 6540 UHD Q-TOF LC/MS 系统上进行本研究的分析。第一维和第二维分离使用 Agilent ZORBAX Eclipse Plus 色谱柱。在第一维液相色谱中，采用了与质谱不兼容的液相色谱 (LC) 方法。柱切换阀将特定的未知杂质转移到第二根液相色谱柱上，然后第二个泵泵送与质谱兼容的流动相将杂质分离。使用 6540 UHD Q-TOF 采集杂质的精确质量数质谱数据和二级质谱数据。使用 Agilent MassHunter 和安捷伦分子结构关联 (MSC) 软件进行数据处理，以快速鉴定未知杂质。该方法能够在用户干预最少的条件下进行高效、准确的杂质分析。

前言

活性药物成分 (API) 中杂质的检测和鉴定对于制药行业来说极为重要。越来越严格的法规环境要求测定 API 杂质的分析方法必须具有高灵敏度且结果准确。国际协调会议 (ICH) 指南规定必须要鉴定药物中含量大于等于 0.1% 的杂质。准确了解杂质及其含量有助于更好地控制化学反应过程并获得更高的 API 纯度。有时，杂质的结构可能与 API 相似，因此，采用复杂而选择性高的分析方法对于杂质分析来说至关重要。常规的杂质分析法通常需要用到多个仪器平台，非常费时费力。

制药业广泛采用 LC/MS/MS 技术进行杂质鉴定，因为这种方法灵敏度高、选择性强、分析速度快。将高压液相色谱 (HPLC) 系统与四极杆飞行时间质谱 (Q-TOF) 联用，能够精确测定母离子和碎片离子的质量数。采用诸如 Agilent Mass Hunter 定性分析软件中的分子特征提取 (MFE) 和分子式生成 (MFG) 等先进算法，配合 MassHunter 分子结构关联软件 (MSC) 进行数据处理，从而进行杂质鉴定和结构解析。安捷伦出版号 5991-1375CHCN 详细介绍了采用该方法鉴定欧洲药典指定的阿替洛尔 API 中的八种杂质。

LC/MS 在使用非挥发性缓冲液作流动相时会存在一些局限。如果原始的液相色谱方法中使用了非挥发性缓冲液，那么色谱工作者必须花额外的时间使用与质谱兼容的流动相开发出等效的液相色谱方法。另外，如果新开发出的、与质谱兼容的液相色谱方法使得杂质的洗脱顺序发生变化，则会带来额外的挑战和不确定性。中心切割法采用两种反相液相色谱条件，能够完全消除这种局限。本应用简报使用了二维液相色谱技术，先使用与质谱不兼容的流动相将目标杂质从第一根色谱柱中洗脱出来，将其转移到第二根色谱柱上，第二根色谱柱使用的是与质谱兼容的液相色谱条件。该方法可以扩展到很多药物成分及相关杂质的分析。

结论

本应用简报阐述了选择性鉴定杂质的工作流程。该工作流程使用了二维中心切割 LC/MS 法来鉴定度洛西汀 API 中的杂质。该方法无需再开发与质谱兼容的液相色谱方法，使用与质谱不兼容的药典方法即能对目标杂质进行准确的质谱分析。使用该方法能够选择特定的相邻洗脱的低含量 API 中未知杂质进行质谱分析。使用 Agilent 6540 Q-TOF 配合先进的软件工具（MSC、MFE 和 MFG）能够对未知化合物实现快速、可靠的鉴定。