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用于单克隆抗体肽谱分析的一体化工作流程

2018/06/15 11:22

阅读:431

分享:
应用领域:
制药/生物制药
发布时间:
2018/06/15
检测样品:
预防类生物药品
检测项目:
含量测定
浏览次数:
431
下载次数:
参考标准:
暂无

方案摘要:

单克隆抗体 (mAb) 是制药行业中发展最快的一类药物。mAb 作为蛋白质药物,从初始表达到最终商业化经历了一个高度复杂的过程,需要在每个步骤中对其进行仔细表征。在用于 mAb 表征的众多分析方法中,肽谱分析是一项至关重要的技术,它能够实现 mAb 的一级结构确认,还可以对翻译后修饰 (PTM)(如脱酰氨基化、氧化和糖基化)进行鉴定和定量分析。使用 LC/MS/MS 方法进行的 mAb 肽谱分析包括将纯化的 mAb 酶裂解为肽段、串联质谱分析以及数据解析。样品前处理通常涉及多个步骤,包括变性、还原、烷基化和酶解。手动进行肽谱分析样品前处理的过程十分繁琐,且易于受到可扩展性和重现性不佳的影响。此应用简报展示了一个高通量工作流程,能够同步进行样品消解和样品净化,具有很高的重现性。

产品配置单:

前处理设备

Agilent AssayMAP Bravo 蛋白质样品前处理平台

型号: AssayMAP Bravo

产地: 美国

品牌: 安捷伦

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分析仪器

Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统

型号: 1290 Infinity II

产地: 德国

品牌: 安捷伦

面议

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方案详情:

前言

单克隆抗体 (mAb) 是制药行业中发展最快的一类药物。mAb 作为蛋白质药物,从初始表达到最终商业化经历了一个高度复杂的过程,需要在每个步骤中对其进行仔细表征。在用于 mAb 表征的众多分析方法中,肽谱分析是一项至关重要的技术,它能够实现 mAb 的一级结构确认,还可以对翻译后修饰 (PTM)(如脱酰氨基化、氧化和糖基化)进行鉴定和定量分析。使用 LC/MS/MS 方法进行的 mAb 肽谱分析包括将纯化的 mAb 酶裂解为肽段、串联质谱分析以及数据解析。样品前处理通常涉及多个步骤,包括变性、还原、烷基化和酶解。手动进行肽谱分析样品前处理的过程十分繁琐,且易于受到可扩展性和重现性不佳的影响。

此应用简报展示了一个高通量工作流程,能够同步进行样品消解和样品净化,具有很高的重现性。分析过程中使用 Agilent AssayMAP Bravo 液体处理自动化系统、Agilent 1290 Infinity II 液相色谱与 Agilent 6550 Q-TOF 质谱联用系统(用于灵敏而准确的谱图采集),以及 Agilent MassHunter BioConfirm 软件(用于数据自动分析)。


结论

安捷伦肽谱分析工作流程解决方案集先进的液体处理自动化系统、高效色谱技术、精确质量数 Q-TOF LC/MS 系统与强大的软件于一体,自动处理并精简对 mAb 生物制剂开发至关重要的复杂处理过程。此工作流程采用:

• Agilent AssayMAP Bravo 系统,能够自动进行酶解和样品纯化,具有优异的重现性;

• Agilent AdvanceBio 肽谱分析色谱柱,可实现出色的液相色谱分离,快速分离有助于提高分析实验室的效率;

• 高度准确且灵敏的 Agilent 6550 Q-TOF LC/MS/MS 系统,能够生成无偏差的肽谱分析数据,可实现单克隆抗体蛋白质的全面序列覆盖;

• Agilent MassHunter BioConfirm 数据分析软件,可执行自动数据提取、序列匹配、PTM 鉴定和序列覆盖率计算。


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