2018/06/15 11:27
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产品配置单:
Agilent 6545XT Q-TOF 液质联用系统
型号: 6545XT
产地: 新加坡
品牌: 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统
型号: 1290 Infinity II
产地: 德国
品牌: 安捷伦
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方案详情:
前言
肽谱分析是表征生物治疗蛋白质不可或缺的工具,该方法广泛运用于生物药物蛋白质的生产过程,以确保产品在各生产阶段的完整性和稳定性。利用 LC/MS 进行肽谱分析是表征肽段修饰的首选技术。稳定且重现性高的 LC/MS 方法,是成功实现肽谱分析分离的关键。因此,需要对 LC/MS 分离参数进行全面的研究。
分析复杂蛋白质酶解物的过程中,如何实现肽段的高效、高分离度分离是一项巨大的挑战。甲酸是一种兼容质谱的离子对试剂,常用于 LC/MS 方法中,可实现灵敏检测。然而,甲酸也会导致峰形展宽,从而使肽段发生共洗脱1。除此之外,流动相含甲酸的现有 LC/MS 方法具有峰容量小、峰展宽以及对相似肽段分离度差的限制。选择正确的反相色谱柱和 LC/MS 方法,对肽谱分离的成功十分重要。
Agilent AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱专为高效的肽段分离而设计。HPH Poroshell 填料包覆了一层带正电荷的改性表面基团。采用 C18 配基的表面多孔颗粒填料表面带电,可改善峰形并提高峰容量。最佳孔径 (120 Å) 和粒径 (2.7 μm)能够以低色谱柱反压提供类似 UHPLC 的性能。AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱还可以与含甲酸的流动相兼容,在与质谱联用时可提供出色的峰形。
本应用简报展示了 AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱在用含甲酸的流动相对单克隆抗体 (mAb) 进行肽谱分离时显示出的卓越性能。本文通过研究流速、梯度时间和温度等不同的填料影响因素,开发出了实现最佳肽段分离的 LC/MS 方法。并对峰容量、峰宽、峰面积、峰高、重现性和序列覆盖率等肽谱分析的关键要素进行了评价。
结论
• Agilent AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱使用兼容质谱的甲酸改性流动相条件,可获得高峰容量和尖锐窄峰;
• 质谱兼容的 AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱可实现高序列覆盖率的出色肽谱分离;
• AdvanceBio Peptide Plus 表面多孔色谱柱在低背压下运行,从而使 HPLC 和 UHPLC 系统都可进行肽谱分离;
• 采用 AdvanceBio Peptide Plus色谱柱的 LC/MS 肽谱分析方法具有出色的重现性,这一性质对于肽谱分析至关重要。
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