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采用 Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 的迭代 MS/MS 采集方法进行深入的肽谱分析
2018/06/15 11:34
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方案摘要：
产品配置单：
Agilent AssayMAP Bravo 蛋白质样品前处理平台
型号： AssayMAP Bravo
产地： 美国
品牌： 安捷伦
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Agilent 6545XT Q-TOF 液质联用系统
型号： 6545XT
产地： 新加坡
品牌： 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统
型号： 1290 Infinity II
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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方案详情：
前言
治疗性单克隆抗体 (mAb) 是生物制药行业中发展最快的蛋白质类药物。由于蛋白质药物的异质性，必须对此类生物分子进行全面的分析表征。使用液相色谱和电喷雾质谱 (LC/MS) 进行的肽谱分析是基本的蛋白质药物表征技术。蛋白质药物的深入表征不仅能确认一级结构序列，还可以对脱酰氨基化、氧化和糖基化等翻译后修饰(PTM) 进行鉴定和定量分析。
本应用简报介绍了 mAb 肽谱分析的一体化工作流程，涵盖了从自动化样品前处理到数据分析等过程，流程中涉及到 Agilent AssayMAP Bravo 液体处理自动化系统、Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统、Agilent 6545XT AdvanceBio Q-TOF 和 Agilent MassHunter BioConfirm B.09 软件。Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 提供的全新数据采集方法（迭代 MS/MS）可用于深入的肽谱分析，以提高序列覆盖率并改进 PTM 分析。
结论
这一完整的工作流程使用 Agilent AssayMAP Bravo 酶解系统进行自动样品前处理，将 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱与 Agilent 6545XT AdvanceBio Q-TOF 联用进行LC/MS/MS 分析，并使用 Agilent MassHunter BioConfirm B.09 软件进行数据分析，证明该工作流程可实现高序列覆盖率的肽谱分析和低丰度 PTM 检测。采用 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 系统提供的迭代 MS/MS 采集方法，可大幅提高复杂蛋白质消解样品中低丰度肽段的鉴定效率。MassHunter BioConfirm B.09 软件能够自动进行数据批处理，使用统计得分和 FDR 通过肽段谱图匹配来过滤 MS/MS 谱图质量，叠加多个数据文件的序列覆盖率，并将结果表通过链接导航链接到选定肽段的质谱图和色谱图。将 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 系统和 MassHunter
BioConfirm B.09 软件的功能相结合，可提升蛋白质生物治疗药物开发和生产过程中深入肽谱分析的工作流程效率。
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