采用不同的样品制备方法对小麦中的单端孢霉烯毒素和玉米赤霉烯酮进行 LC/MS/MS 分析

    摘要

    采用改良型QuEChERS 和Agilent Bond Elut Mycotoxin SPE 样品处理方法并通过LC/MS/MS 检测单端孢霉烯毒素和玉米赤霉烯酮，获得了极佳的检测灵敏度。Bond Elutmycotoxin SPE 小柱的吸附容量高，所得的萃取物更纯净，同时检测限（LOD）和定量限（LOQ）也略有改善。当然，QuEChERS 方法经过改进后，处理速度相比以往有很大提高，所需溶剂和吸附剂量也更少。对于所有测定的真菌毒素而言，两种样品制备方法均展示了良好的线性（R2 ≥ 0.995）。与免疫吸附这种被广泛认同的高效真菌毒素样品净化技术相比，本法测定加标小麦样品（50 μg/kg，n = 9）的回收率范围为72-105%（CV ≤ 11%）。

    本文采用了两种样品制备方法，并结合高性能的Agilent 6460 三重四极杆液质联用系统，不仅降低了分析成本，而且所得数据的灵敏性也符合监管方法的要求。

    前言

    真菌毒素是一类由某些霉菌产生的有毒次级代谢产物。其中镰刀菌属尤为重要，因为它们主要广泛存在于温带地区生长的小麦、玉米、大麦和燕麦等谷粮中。一旦感染，往往会使农作物减产。根据感染品种的不同，可能会产生一系列被称作单端孢霉烯的真菌毒素。现在我们已知的单端孢霉烯毒素有150 多种。调查显示最常见的单端孢霉烯毒素为脱氧雪腐镰刀菌烯醇，但诸如雪腐镰刀菌烯醇、镰刀菌烯酮-X、新茄镰孢菌醇、3- 和15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、二乙酸蔗草镰刀菌烯醇（DAS）、T-2 毒素和HT-2 毒素等其它单端孢霉烯毒素也有发现。它们均属于A 型或B 型单端孢霉烯毒素，且具有相同的基本化学结构。玉米赤霉烯酮不属于单端孢霉烯毒素，但是它也可由多种镰刀菌产生。

    一旦摄食了单端孢霉烯毒素，动物和人类的健康就会受到威胁。他们会表现出厌食、皮肤肿痛、呕吐和腹泻等中毒症状。这类化合物也是潜在的蛋白质和DNA 合成抑制剂，具有免疫抑制活性。欧盟委员会条例No 1881/2006 规定了未加工和已加工的谷类粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的最大限量。后者的限量比原料规定的限量低。我们通过化学残留分析来执行这些限量规定。过去已成功利用配有电子捕获检测器或质谱检测器的气相色谱法，检测和定量了经衍生处理的样品提取物中的A 型和B 型单端孢霉烯毒素。最近我们又开发了采用LC/MS/MS 同时测定A 型和B 型单端孢霉烯毒素和玉米赤霉烯酮的方法。

    本文对小麦中9 种单端孢霉烯毒素及玉米赤霉烯酮进行 LC/MS/MS 测定时采用的两种样品制备方法的性能进行了比较。

    结论

    加标9 单端孢霉烯毒素和玉米赤霉烯酮的小麦样品，浓度均为50 μg/kg。通过与基质匹配的标准品比较计算来消除样品提取物中的离子抑制作用。改进的QuEChERS 和Bond Elut MycotoxinSPE 两种方法均实现了分析物极佳的检测灵敏度。具有更高吸附容量的Bond Elut mycotoxin SPE 操作可以更彻底地净化提取物，而检测限（LOD）和定量限（LOQ）也略有改善。两种样品制备技术的回收率范围为72-105%。

    然而，改进的QuEChERS 方法仍有若干优势。该方法速度快、通量高、溶剂和吸附剂使用量少，从而显著降低了分析成本。