T4 多聚核苷酸激酶（3'磷酸酶活性缺失）

T4 多聚核苷酸激酶（3'磷酸酶活性缺失）

商品属性：

 产品介绍：

描述：T4 多聚核苷酸激酶(T4 PNK)能够催化 ATP 的 γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链 DNA 或 RNA）的 5’-羟基末端以及 3’-单磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶还具有3’磷酸酶活性，将3’磷酸基团从寡核苷酸的 3’磷酸末端、脱氧 3’-单磷酸核苷和脱氧 3’-二磷酸核苷上水解掉。该酶经后，其 3’磷酸酶活性缺失，但仍保留了所有激酶的活性。
储存：-20℃ 可保存 2 年。
活性定义：
1Unit 指 37℃条件下，30 分钟内催化 1nmol 酸不溶性[32P] 掺入所需要的酶量。

注意事项：

（1）1×T4 PNK Buffer：70 mM Tris-HCl pH 7.6，10 mMMgCl2，5 mM DTT。
（2）热失活：65°C 加热 20 分钟。
（3）一般来说，进行激酶反应之后是连接反应。在这种情况下，T4 多聚核苷酸激酶反应在连接酶反应缓冲液中 37°C温育 30 分钟即可。反应后的产物可直接进行连接，无需改变缓冲液和进行热失活。如果连接时需要保持其它 DNA 片段的去磷酸化状态，则需要在连接反应前热失活 T4 多聚核苷酸激酶。 

pcr相关试剂实验结果分析：

PCR实验结果的分析涉及多个方面，‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等，‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：‌

循环次数过多：‌增加模板量减少循环次数，‌缩短退火时间及延伸时间，‌或改用两种温度的PCR循环，‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低：‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增，‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题：‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题，‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题：‌运输储存不当可能引起试剂盒失效，‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板：‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果：‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果，‌需要注意以下几点：‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染，‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析，‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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