Ribonuclease R(Rnase R) 核酸外切酶

Ribonuclease R(Rnase R) 核酸外切酶

商品属性：

 产品介绍：

描述：

RNase R 来源于 E.coli，通过基因工程重组表达，该酶为 Mg2+依赖的 3’-5’核糖核酸外切酶。其可消化所有线性 RNAs 底物，但不能消化环状 RNA(circular RNA)、套索 RNA(lariat RNA)、双链 RNA、3’突出端<7nt 的双链RNA。本酶可高效的去除不含二级结构的线性 RNA，从而纯化获得环 RNA 分子，用于后续 RNA-sequencing 等实验。
活性定义：在 20 mM Tris-HCl(pH7.5)，100 mM KCl，0.5mM Mg2+条件下, 37°C 下水解 1 μg 的 poly-r(A)产物，所需酶量为 1 个活性单位。10xRNase R Buffer：200 mM Tris-HCl, 1 M KCl，5 mM
MgCl2，pH7.5
酶储存液：20 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 1 mM DTT ,50% Glycerol, 0.1% (w/v) Tween-20, pH 7.5。
储存：置于-20°C 可保存 3 年，避免反复冻融。

操作方法：

1. 配制反应体系
RNA 1-10 μg
10xRNase R Buffer 2.5 μl
Rnase Inhibitor (40 U/μl) 0.5 μl
RNase R (20 U/μl) 1-2 μl
DEPC-treated Water up to 25 μl
2. 37℃孵育 30-60min，反应完毕后可加入 5 mM EDTA终止反应。

注意事项：

(1) 在 total RNA 的消化中，由于含有二级结构较多的RNA，如 tRNA、rRNA、dsRNA 等，RNase R 对该类底物消化活性大幅下降，此时需要延长消化时间至 2h，并在 1h 时补加 RNase R 进行消化。必要时将反应温度提高至 45℃，以打开含有二级结构的 RNA 分子。
(2) 对于含有 highly structured 的 RNAs，RNase R 仍然无法完全消化， 稍后将推出 5’-3’的核糖核酸外切酶以解决此类问题。
(3) 据其它文献报道，在含有 highly structured 的 RNAs，可放大反应体积至 50 μl，可降低二级结构的影响，从而促进 RNA 的降解。
(4) 高温和长时间的孵育，可能导致 RNA 的非酶性断裂（水分子的 H+对二酯键的攻击）。因此，消化时间、反应温度均需要根据特定的实验进行优化和调整。  

pcr相关试剂实验结果分析：

PCR实验结果的分析涉及多个方面，‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等，‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：‌

循环次数过多：‌增加模板量减少循环次数，‌缩短退火时间及延伸时间，‌或改用两种温度的PCR循环，‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低：‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增，‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题：‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题，‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题：‌运输储存不当可能引起试剂盒失效，‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板：‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果：‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果，‌需要注意以下几点：‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染，‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析，‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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