大肠杆菌蛋白提取液

大肠杆菌蛋白提取液

商品属性：

 产品介绍：

描述：生产的大肠杆菌蛋白提取液采用独特的中性裂解 配方，从而最大限度的提高了后续提取蛋白的活性。使用该 溶液从大肠杆菌中提取蛋白不需要超声波破碎等复杂的操 作步骤，溶液置于 4°C 可长期保存，使用方便。该溶液室温 30min 可破碎 95％以上的细胞，裂解后的溶液可直接通过 Ni-NTA 等纯化填料进行蛋白纯化。该溶液既可适用于小量 蛋白表达检测，也适用于大量蛋白的表达纯化试验；既适用 于纯化可溶型蛋白，也适用于纯化包涵体蛋白。

操作方法：

♦ 可溶型蛋白操作方法（1 ml 菌液为例）
1. 8,000rpm 室温离心 3min 后，弃上层培养基，留取管底部菌体（尽量弃除掉培养基）。
2. 加入 200 μl（重悬体积不得少于 50 μl）大肠杆菌蛋白提取液重悬菌体，用吸头吹打至无可见细胞团块。
注：为降低溶液粘度，可加入 Benzonase 核酸内切酶至 0.25U/μL；加入终浓度为 1 mg/ml 的溶菌酶效果更佳。
3. 置于室温孵育 30-60min，期间轻弹离心管数次以加速裂解。
4. 裂解完成后 13,000rpm 于 4℃离心 15-20min，将上清转移至新的容器中，溶液可直接进行下一步纯化或检测试验。
♦ 包涵体蛋白操作方法
5. 上述步骤 4 中，弃上清，保留沉淀组分，用 200 μl 的大肠杆菌蛋白提取液重悬沉淀。
6. 加入溶菌酶至终浓度 1 KU/ml，混合均匀，室温孵育 10min。
7. 加入 800 μl 的灭菌水混合均匀。
8. 13,000 rpm 室温离心 15-20min，弃上清后用 900 μl 灭菌水重悬沉淀，然后加入 200 μl 大肠杆菌蛋白提取液，混合均匀。
9. 13,000rpm 室温离心 15-20min，重复步骤 8 三至五次。
10. 将沉淀溶解于变性溶液中，进行下一步纯化或复性试验。

主要特征：

♦ 单组分溶液，使用方便
♦ 裂解迅速，蛋白不会变性
♦ 适用于小量或大规模蛋白表达
♦ 适用于可溶性蛋白和包涵体纯化
应用：大肠杆菌的裂解和包涵体纯化。
储存：置于 4°C 可保存 2 年。

pcr相关试剂实验结果分析：

PCR实验结果的分析涉及多个方面，‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等，‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：‌

循环次数过多：‌增加模板量减少循环次数，‌缩短退火时间及延伸时间，‌或改用两种温度的PCR循环，‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低：‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增，‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题：‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题，‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题：‌运输储存不当可能引起试剂盒失效，‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板：‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果：‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果，‌需要注意以下几点：‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染，‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析，‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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