HotStart Bst 4.2 Basic Mix(可冻干)

HotStart Bst 4.2 Basic Mix(可冻干)

商品属性：

 产品介绍：

描述：

2.5xBst4.2 Basic Mix 包含了 Helicaser、dNTP、Mg2+、反应缓冲盐、冻干赋形剂和稳定剂。HotStart Bst4.2DNA/RNA 聚合酶为单独的组分。本品不仅可作为常规检测试剂，对于具有冻干经验的研究者，
本品还直接进行后续冻干，无需再加入任何其它辅料。

Bst4.2 具有以下性能：

（1）Bst 4.2 全系包含热启动Aptamer，该配体确保酶在<30℃时，酶活封闭效率>95%,在>60℃时 1min 内完全释放酶活。该特性利于室温建立反应体系，并大幅降低了低温条件下的非特异扩增；
（2）反应温度提升到 70℃，大幅降低引物 Dimer 的形成，提高扩增特异性，并使得粗样品核酸释放更加充分；
（3）全系包含 Helicaser，因此，允许在不使用 F3/B3 引物的情况下进行 LAMP 扩增（easy LAMP），并允许 FIP/BIP 的引物用量降低一倍。这将进一步降低非特异扩增，并使得扩增均一性大幅提升。本品为多用途的试剂，适用于 LAMP 进行 MolecularBeacon 探针、DP-LAMP 探针、试纸条等检测。

注意事项：

储存：长期保存请置于-20℃以下（12 个月有效）；制品反复冻融10 次不影响性能，但应避免反复冻融；制品由于含有高浓度的糖组分，-20℃保存的制品，在融化时可能会有结晶物。此时 2.5xBst4.2Mix 可在 37℃进行彻底融化，而 Bst4.2 酶制品在 30℃的温度下融化，过高的温度可能会导致热启动性能下降。一经融化推荐置于2-8℃保存，在此条件下制品稳定储存 6 个月。
特殊说明：
（1） Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 在用于 LAMP 扩增时的推荐反应温度为 65-70℃，最佳反应温度为 70℃。因此其可完全替代 的 Bst4.0 系列，用于标准 LAMP 的扩增。
（2） 由于 Helicaser 的反应温度为 70℃，因此在进行 eLAMP 扩增时，反应温度为 70℃。
（3） 制品中包含高浓度的盐组分，使用时做好个人防护，防止制品与皮肤、眼、鼻、呼吸道等接触和吸入，一旦接触或吸入，请用大量的清水冲洗。
（4）防止气溶胶污染，尽可能进行分区操作。
1. 标准 LAMP 和 eLAMP 扩增的区别本试剂既可以用于标准 LAMP 扩增，也可以用于 eLAMP扩增。
1.1 10x 标准 LAMP Primer MixFIP/BIP=16 μM each; LF/LB=4 μM each; F3/B3=2 μM each
1.2 10xeLAMP Primer MixFIP/BIP=8 μM each; LF/LB=4 μM each
注意：eLAMP（easy LAMP）为去除 F3/B3 引物的方法，为 Bst4.2系列专用的使用策略，对于大多数引物组，在 Helicaser 的加持下，扩增速度几乎不受影响。如引物扩增效率低，可提高 FIP/BIP 浓度到 12~16uM。
1.3 扩增温度不同标准 LAMP 扩增 eLAMP 扩增65-70°C 均可 70°C 反应
2. 配制 LAMP 反应体系
2.5xBst4.2 Basic Mix 10 μl
10x Primer Mix 2.5 μl
HotStart Bst 4.2（8U/μl） 1 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到总体积 25 μl
反应体系配好后，置于 65-70°C 反应 20~30min。
3. 试剂的冻干反应（仅限专业人员）本试剂可供具有冻干经验的人员直接进行后续冻干，试剂的配方对冻干条件不苛刻。但对于不同的用户来讲，由于冻干形式、冻干体积、上机量、冻干容器、冻干磨具等因素存在差异，以下程序仅供参考。进一步的程序优化均需根据具体情况自行调整。对于非专业人员来讲，请直接采购  的冻干制品，或委托订制。
2.5xBst4.2 Basic Mix 10 μl
25xPrimer Mix 1 μl
HotStart Bst 4.2（8U/μl） 1 μl
Total 12 μl
制品成型后的冻干程序：
-50℃预冻 10min； -50℃ 4-8h（真空段）；-50℃升温到 25℃（每小时升温 5℃）；25℃ 2h； 25℃恒温。

pcr相关试剂实验结果分析：

PCR实验结果的分析涉及多个方面，‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等，‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：‌

循环次数过多：‌增加模板量减少循环次数，‌缩短退火时间及延伸时间，‌或改用两种温度的PCR循环，‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低：‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增，‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题：‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题，‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题：‌运输储存不当可能引起试剂盒失效，‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板：‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果：‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果，‌需要注意以下几点：‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染，‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析，‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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