细胞如何传代及复苏http://www.yajimall.com/article/aboutus.html培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（换液后将瓶盖拧松）1、收到细胞后，请按照以下方法进行操作：取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。2、细胞传代：1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；2）添加0.25%Y蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。3、细胞冻存：1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；2）添加0.25%Y蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。4、细胞复苏：1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养

TMB底物显色试剂盒(ELISA，HRP显色)http://www.yajimall.com/一、产品简介：3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)是非常优越的酶免试验显色剂，能溶解于多种有机溶剂和双蒸水中，为稳定的无色溶液，与适量过氧化脲或双氧水与缓冲液混匀后与过氧化物酶作用产生清晰的蓝色产物，极易观察。由于其灵敏度高，配制后的工作液稳定，加上无致癌特性，被广泛用于酶联免疫(ELISA)试验和尿试纸的检测反应等，TMB主要应用于酶联免疫吸附实验(ELISA)，经典的方法是采用A、B液分开配制，使用前再混合的方法，并且长期存放稳定，本试剂一般情况下为无色，有时略显浅蓝色或浅黄色。雅吉生物的TMB底物显色试剂盒(ELISA,HRP显色)主要由TMB显色液、TMBbuffer、TMB氧化剂组成，其特点是：1、灵敏度高；2、稳定性好，显色终止后读数稳定；3、背景低：底物溶液在450nm检测时OD值一般小于0.05。该试剂仅用于科研领域，不用于临床诊断或其他用途。 二、产品组成：名称规格2×50ml存储试剂（A）：TMB显色液50ml4℃避光试剂（B）：TMB buffer50ml4℃避光试剂（C）：TMB氧化剂100μl4℃使用说明书一份 三、自备材料：1、酶标仪2、酶标板、96孔板3、恒温箱(备选)4、(备选)终止液：盐酸或硫酸等 四、操作步骤(仅供参考)：1、用适当的干净容器(用纯净水反复冲洗)，取试剂(A)、(B)、(C)，按A：B：C=5000：5000：4的比例混合，即为TMB显色工作液，待达到室温后即可使用。2、加液：加完HRP结合物并温育一定时间，洗板3～5次，每孔加TMB显色工作液100μl，在室温(15～25℃)或37℃下温育10～30分钟。3、(选做)终止：加等体积的1M盐酸或硫酸溶液终止反应，孔中反应液由蓝色变为黄色。4、读数：30min内在450nm处读数。  五、注意事项：1、本试剂盒给予的TMB氧化剂多于实际使用量，请按比例使用。2、TMB氧化剂易挥发，请注意密闭保存，以免效率下降，一旦开封请尽快使用。3、TMB氧化剂有腐蚀性，请勿直接接触于人皮肤、毛发等。4、如果出现高的反应背景或沉淀，表明TMB底物反应过于强烈。5、终止反应不是必须步骤，如不加终止液应显色完成后立即检测。6、一般市售的浓盐酸为11.6M，浓硫酸为18.3M，但应注意其挥发性。7、为了避免产生沉淀，可在终止后马上读数，或进一步稀释一抗和/或HRP结合物，再次进行试验。8、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 六、有效期：12个月内有效。 七、运输及保存：4℃运输，4℃保存。

DPPH自由基清除率检测试剂盒(比色法)http://www.yajimall.com/article/aboutus.html一、产品简介：在生命活动的代谢过程中不断产生各种自由基而自由基的积累会使机体产生氧化损伤而引起衰老、肿瘤、中风、心肌炎和糖尿病等慢性疾病，在众多自由基中2，2-二苯基-1-苦基苯肼( DPPH)是一种较稳定的自由基，当有自由基清除剂存在时颜色由紫色向黄色转变，吸光度随之变小。雅吉生物 DPPH自由基清除率检测试剂盒(比色法)又称氮自由基清除能力检测试剂盒或氮自由基清除率检测试剂盒，其检测原理是DPPH自由基是一种较稳定的含氮自由基，含一个单电子，溶于乙醇后溶液呈紫色，在517nm下有强吸收，如果有其他物质提供一个电子与此单电子配对，溶液会褪色，褪色程度与接受电子的量呈正比，通过吸光度下降的程度来反应样品的氮自由基清除能力，主要用于检测血清、植物组织、抗氧化类食品、保健品及药品等样本。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。二、产品组成：名称规格100T存储试剂(A): 氮自由基提取液100mlRT试剂(B): DPPH溶液100ml4℃避光试剂(C): 维生素C10mg4℃使用说明书一份三、自备材料：1、蒸馏水、无水乙醇2、实验材料∶植物组织(芹菜、绿豆、玉米等叶片)、血液、组织样本等3、研钵或匀浆器或粉碎机或超声破碎机4、离心机、离心管5、恒温水浴锅、恒温干燥箱6、电子天平、30~50目筛7、分光光度计、比色皿四、操作步骤(仅供参考)：1、准备样品∶①植物样品∶取新鲜植物样本，清洗干净，研钵研碎(粉碎)，干燥箱烘干后过筛，称取0.05g 样品，加入0.8ml氮自由基提取液，40℃水浴浸提30~60min，10000rpm离心10min，上清液待用，4℃保存备用(亦可参考相关资料提取方法提取)。②血浆、血清和尿液样品︰血浆(用肝素或枸橼酸钠抗凝，不宜使用EDTA 抗凝)4°℃5000rpm离心10min，取上清液待用;血清或尿液样品可直接测定。③细胞样品︰按每5×10°个细胞加入0.8ml氮自由基提取液，超声破碎(功率200W,超声3s，间隔10s，重复30次)，10000rpm 离心10min，取上清液待用。④果汁、葡萄酒等样品︰按样品∶氮自由基提取液=1∶9的比例震荡混匀，10000rpm离心10min，上清液待用，4℃保存备用。⑤高活性样品︰如果样品中有效浓度较高，可用提取液进行恰当的稀释。2、配制维生素C溶液︰将一支10mg维生素C充分溶解于1ml氮自由基提取液中，即成10mg/ml维生素C溶液;可分成0.1ml的小份，-20℃保存。3、配制Vc标准工作液︰如需测线性关系，建议用氮自由基提取液将10mg/ml维生素C溶液稀释至20、15、10、8、6、4、2μg/ml的Vc标准工作液;如需清除率约为100%的阳性对照，建议选用大于 30μg/ml 的Vc标准工作液。4、分光光度计开机预热 30min，调节波长517nm(500~530nm亦可)，无水乙醇调零。5、DPPH加样∶按照下表设置空白管、样本测定管、样本对照管、阳性对照管，溶液应按照顺序依次加入，混匀，室温避光静置30min。加入物(ml) 空白管 样本测定管样本对照管阳性对照管（标准管）氮自由基提取液0.2———上清液—0.20.2—VC标准工作液———0.2无水乙醇0.90.91.8 0.9DPPH溶液0.90.9— 0.96、OD值测定∶将各管溶液依次加入到比色皿中，用分光光度计检测各管吸光度值，依次记为A0、A1、A2、A3。五、计算：阳性对照·DPPH清除率(%)= (A0- A3)/A0×100%待测样本·DPPH清除率(%)=[A0-( A1- A2)]/A0×100%备注:A0=空白管的吸光度值A1=样本测定管的吸光度值A2=样本对照管的吸光度值A3=阳性对照管的吸光度值六、注意事项：1、正式测定之前建议选择2~3个预期差异较大的样本做预实验。2、实验材料应尽量新鲜，当天提取当天测定。3、不同样本清除DPPH自由基的能力差异很大。4、如样本DPPH清除率大于90%，应用提取液稀释；如样本 DPPH清除率小于5%，应提高样本用量以提高有效成分浓度。5、样品中不宜添加Triton、DTT等可能影响氧化还原反应的成分。6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。七、有效期：6 个月有效。4℃运输，4℃保存。附录∶标准曲线制作∶在室温条件下按说明书操作，对系列VC标准工作液(20、15、10、8、6、4、2、1μg/ml ）进行吸光度的测定，其数值及标准曲线如下(仅供参考)︰初始吸光度值调零吸光度值.DPPH清除率无水乙醇0.032空白管0.710.678VC标准20μg/ml 0.0750.04393.65782VC标准15μg/ml 0.0770.04593.36283VC标准10μg/ml 0.1080.07688.79056VC标准8μg/ml 0.1840.15277.58112VC标准6μg/ml 0.350.31853.09735VC标准4μg/ml 0.5120.4829.20354VC标准2μg/ml 0.6690.6376.047198VC标准1μg/ml 0.7620.73-7.66962由上图可知：VC标准工作液在2~8ug/ml时线性关系良好， ·DPPH清除率与Vc浓度呈正相关，当Vc浓度大于10即开始有偏差，Vc浓度大于12时， ·DPPH清除率大于90%。

小鼠巨噬细胞J774培养说明书http://www.yajimall.com/article/aboutus.html一、细胞培养条件细胞名称小鼠巨噬细胞J774生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液（货号：C7001）培养体系1640+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 

人卵巢内膜癌细胞SNU251培养说明书http://www.yajimall.com/article/aboutus.html一、细胞培养条件细胞名称人卵巢内膜癌细胞SNU251生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液（货号：C7001）培养体系1640+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 

高温对细胞的影响http://www.yajimall.com/article/aboutus.html蛋白质变：高温会导致细胞内蛋白质的构象改变，进而引起蛋白质变性。变性后的蛋白质可能失去其功能，影响细胞的正常代谢和生理活动。细胞膜损伤：高温会导致细胞膜的流动性增加，可能引起膜结构的破坏，导致膜通透性改变，影响物质的进出，甚至导致细胞死亡。氧化应激：高温可导致细胞内活性氧（ROS）的生成增加，这些活性氧会损伤细胞内的DNA、蛋白质和脂质，进一步引发细胞凋亡或坏死。代谢紊乱：高温环境下，细胞的代谢速率可能发生变化，影响能量的产生和利用，导致细胞功能受损。细胞生长和分裂抑制：高温能够抑制细胞的增殖和分裂，影响生长和发育。这在一些植物和微生物的生长中表现得尤为明显。细胞信号转导影响：高温可能干扰细胞内的信号转导途径，影响细胞对外界环境的响应能力。细胞死亡：在极端高温下，细胞很可能经历凋亡或坏死，导致组织损伤和功能障碍。

大鼠窖蛋白(Caveolin-1)ELISA试剂盒说明书http://www.yajimall.com/article/aboutus.html本试剂盒仅供研究使用。检测范围：                                                           96T2pg/ml - 95pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中紧密连接蛋白(Caveolin-1)含量。大鼠窖蛋白(Caveolin-1)ELISA试剂盒说明书实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠紧密连接蛋白(Occludin)水平。用纯化的小鼠紧密连接蛋白(Occludin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入紧密连接蛋白(Occludin)，再与HRP标记的紧密连接蛋白(Occludin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的紧密连接蛋白(Occludin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠紧密连接蛋白(Occludin)浓度。试剂盒组成 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。大鼠窖蛋白(Caveolin-1)ELISA试剂盒说明书操作步骤标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。大鼠窖蛋白(Caveolin-1)ELISA试剂盒说明书操作程序总结： 计算  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月大鼠窖蛋白(Caveolin-1)ELISA试剂盒说明书

 THP细胞的培养方法http://www.yajimall.com/article/aboutus.html培养条件：RPMI-1640＋10% FBS＋0.05mM β-巯基乙醇＋1% 双抗到货处理用75%酒精棉球擦拭 T25 细胞培养瓶外部，观察细胞生长情况。1.不要打开培养瓶盖，将细胞放入 37℃培养箱中静置 3-4 小时后再做处理，以稳定细胞状态。2.通过离心的方式收集细胞，然后将细胞沉淀加入5-8ml的完全培养基轻轻吹打均匀后移入新的T25培养瓶中培养。培养时的注意技巧换液前将培养瓶竖在培养箱静置1小时左右，轻轻吸掉3ml左右培养基，然后加入3ml的新鲜完全培养基，混匀后放入培养箱中培养。2.如果细胞密度比较稀，培养基没有明显变化，可以加入500ul的FBS混匀后，竖着培养。3.传代时，先按照换液步骤处理，吸掉3ml左右培养基后，加入10ml的新鲜完全培养基，混匀后分2个T25培养瓶培养。4.培养一周左右可以离心一次，以去除一些死细胞。5.该细胞比较脆弱，培养过程中不要频繁拿出来观察，以免影响细胞的生长。6.该细胞的生长环境比较敏感，需使用较好的血清培养。7.建议使用未TC处理的瓶或者皿培养。订购建议：为避免收到细胞后离心处理，推荐使用15ml离心管发货，到货后直接分装到2个T25培养瓶即可。

小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)Elisa试剂盒http://www.yajimall.com/article/aboutus.html产品名称：小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)Elisa试剂盒产品货期：现货供应我公司提供免费代测服务，如需更多ELISA试剂盒信息请联系我们检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)Elisa试剂盒判断绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)Elisa试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。试剂盒性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：*检测浓度小于1.0 ng/mL。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)Elisa试剂盒严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。Sample collection and storagesSerum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cyclesPlasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at 3000×g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids - Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Note: The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed.Materials required but not supplied1. Standard microplate reader(450nm)2. Precision pipettes and Disposable pipette tips.3. 37 ℃ incubatorPrecautions1. Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate and microplates are matched for optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer.2. Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8°C in their pouch with the desiccant provided.3. Mix all reagents before using.Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature ( 20-25°C)Materials suppliedName96 determinations48 determinationsMicroelisa stripplate12*8strips12*4stripsStandard0.3ml*6tubes0.3ml*6tubesSample Diluent6.0ml3.0mlHRP-Conjugate reagent10.0ml5.0ml20X Wash solution25ml15mlChromogen Solution A6.0ml3.0mlChromogen Solution B6.0ml3.0mlStop Solution6.0ml3.0mlClosure plate membrane22User manual11Sealed bags11Reagent preparation20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.Assay procedure1. Prepare all reagents before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well.3. Add Sample: Add testing sample 10μl then add Sample Diluent 40μl to testing sample well; Blank well doesn’t add anyting.4. Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37°C.5. Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each well with Wash Solution (400μl) using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.6. Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well. Gently mix and incubate for 15 minutes at 37°C. Protect from light.7. Add 50μl Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in the wells is green or the color change does notappear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.8. Read the Optical Density (O.D.) at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes.Calculation of results1. This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis.2. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software.3. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration.4. Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve.5. The sensitivity by this assay is 1.0 ng/ml6. Standard curve如需更多ELISA试剂盒，请联系我们：小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)Elisa试剂盒

单细胞测序原理及特点http://www.yajimall.com/article/aboutus.html单细胞测序技术被Nature Methods（2013）评为年度技术，Science（2013）评为年度六大生物类科研热点。单细胞测序技术又在2015年登上Science转化医学封面。Nature Methods 将2019年年度技术又给了单细胞多组学。2013年以来基于单细胞测序技术获得了多方面的研究进展，文献发表也呈现迅猛增长趋势。即使来源相同的单个细胞，由于随机生物过程和环境扰动的原因，彼此在许多方面也存在差异，即异质性。尤其是肿瘤细胞、免疫细胞、胚胎发育期细胞、干细胞等最为突出。常规的组学技术发现不了这一现象带来的影响，由此研究人员开启了单细胞测序技术的探索之路。单细胞转录组测序利用GemCode技术的微流控技术进行单个细胞分选，将带有条形码和引物的凝胶珠和单个细胞包裹在油滴中；在每个油滴内，凝胶珠溶解，细胞裂解释放mRNA，通过逆转录把凝胶珠的特异性barcode引入到cDNA并用于区分细胞；液体油层破坏后，cDNA后续进行文库构建，结合Illumina测序平台对文库进行测序检测，即可一次性获得大量单细胞的基因表达数据，从而达到在单细胞水平进行表达测序的目的。10x Genomics 的 Chromium Single Cell单细胞测序技术的发展，极大地促进了单细胞组学研究特点：真正意义上的单细胞检测（每一个细胞形成单独的GEM，分别进行细胞标记）l 超低的单个细胞价格l 多细胞捕获率低（小于万分之八）l 超高的捕获效率（单个细胞捕获效率65%）l 全自动真正单细胞分离、实验周期短l 超高的细胞通量（每个样本最多可测10000个细胞）l 细胞类型多样化（适宜40微米直径以内，无下限）通量高（可同时检测8个样本）

细胞扫盲——你知道细胞的结构吗http://www.yajimall.com/article/aboutus.html除了病毒等少数生物之外，所有的生物体都是由细胞构成的。细胞是生物体的结构和功能的基本单位。病毒的化学成分为：DNA和蛋白质或RNA和蛋白质。一、真核细胞的结构和功能（一）细胞壁植物细胞在细胞膜的外面有一层细胞壁，其主要成分为纤维素和果胶，可用纤维素酶和果胶酶来除去。细胞壁作用为支持和保护。（二）细胞膜对细胞膜进行化学分析得知，细胞膜主要由脂质（磷脂）分子和蛋白质分子构成，其中脂质最多，约占50％；此外，还有少量的糖类。在组成细胞膜的脂质中，磷脂丰富。细胞膜的功能是将细胞与外界环境分隔开、控制物质进出细胞、进行细胞间的信息交流（三）细胞质在细胞膜以内，核膜以外的部分叫细胞质。活细胞的细胞质处于不断流动的状态，细胞质主要包括细胞质基质和细胞器。1、细胞质基质细胞质基质含有水、无机盐、脂质、糖类、氨基酸、核苷酸、多种酶，在细胞质中进行着多种化学反应。　2、细胞器（1）线粒体线粒体广泛存在于细胞质基质中，它是有氧呼吸主要场所，被喻为"动力车间"。光镜下线粒体为椭球形，电镜下观察，它是由双层膜构成的。外膜使它与周围的细胞质基质分开，内膜的某些部位向内折叠形成嵴，这种结构使线粒体内的膜面积增加。在线粒体内有许多种与有氧呼吸有关的酶，还含有少量的DNA。（2）叶绿体叶绿体是植物、叶肉、细胞的细胞器。叶绿体是绿色植物的光合作用细胞中，进行的细胞器，被称为"养料制造车间"和"能量转换站"。在电镜下可以看到叶绿体外面有双层膜，内部含有几个到几十个由囊状的结构堆叠成的基粒，其间充满了基质。这些囊状结构被称为类囊体，其上含有叶绿素。（3）内质网内质网是由单层膜连接而成的网状结构，大大增加了细胞内的膜面积，内质网与细胞内蛋白质合成和加工有关，也是脂质合成的"车间"。（4）核糖体细胞中的核糖体是颗粒状小体，它除了一部分附着在内质网上之外，还有一部分游离在细胞质中。核糖体是细胞内合成蛋白质的场所，被称为"生产蛋白质的机器"。（5）高尔基体高尔基体本身不能合成蛋白质，但可以对蛋白质进行加工分类和包装，植物细胞分裂过程中，高尔基体与细胞壁的形成有关。（6）液泡成熟的植物细胞都有液泡。液泡内有细胞液，其中含有糖类、无机盐、色素、蛋白质等物质，它对细胞内的环境起着调节作用，可以使细胞保持一定的形状，保持膨胀状态。(7)中心体动物细胞和低等植物细胞中有中心体，每个中心体由两个互相垂直排列的中心粒，及其周围物质组成。动物细胞的中心体与有丝分裂有关。（8）溶酶体溶酶体是细胞内具有单层膜结构的细胞器，它含有多种水解酶，能分解多种物质。四）细胞核每个真核细胞通常只有一个细胞核，而有的细胞有两个以上的细胞核，如人的肌肉细胞，有的细胞却没有细胞核，如哺乳动物的红细胞细胞。1、结构在电镜下观察经过固定、染色的有丝分裂间期的真核细胞可知其细胞核主要结构有。核膜、核仁、染色质核膜由双层膜构成，膜上有核孔，是细胞核和细胞质之间物质交换和信息交流的孔道。核仁在不同种类的生物中，形态和数量不同，它在细胞分裂过程中周期性地消失和重现。核仁与某种RNA的合成以及核糖体的形成有关。染色质主要由DNA和蛋白质组成，能被碱性染料染成深色。在细胞有丝分裂间期，染色质呈丝状，并交织成网；在分裂期染色质螺旋化化，缩短变粗，变成一条圆柱状或杆状的染色体，因此，染色质和染色体是细胞中同种物质在不同时期的两种形态。2、功能细胞核是遗传物质和的主要场所，是细胞和细胞的控制中心，因此，细胞核是细胞中重要的部分。储存、复制、代谢、遗传（五）细胞的生物膜系统在上述细胞结构和细胞器中，具有双层膜有线粒体、叶绿体，具有单层膜的有内质网、高尔基体、溶酶体、液泡。它们都由生物膜构成，这些细胞器膜和细胞膜、核膜等结构，共同构成细胞的生物膜系统。细胞的生物膜系统在细胞的生命活动中起着极其重要的作用。首先，细胞膜不仅使细胞具有一个相对稳定的内环境，同时在细胞与环境之间进行物质运输、能量转换和信息传递的过程中也起着决定性的作用。第二，细胞的许多重要的化学反应都在生物膜上进行。细胞内的广阔的膜面积为酶提供了大量的附着位点，为各种化学反应的顺利进行创造了有利条件。第三，细胞内的生物膜把细胞分隔成一个个小的区室，这样就使得细胞内能够同时进行多种化学反应，而不会相互干扰，保证了细胞的生命活动高效、有序地进行。

人膀胱癌细胞5637培养说明书一、细胞培养条件细胞名称人急性髓系白血病细胞SKNO1生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液培养体系1640+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 

人恶性多发性畸胎瘤细胞NTERA2培养说明书一、细胞培养条件细胞名称人恶性多发性畸胎瘤细胞NTERA2生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液培养体系1640+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 

人恶性多发性畸胎瘤细胞NTERA2培养说明书http://www.yajimall.com/article/aboutus.html一、细胞培养条件细胞名称人恶性多发性畸胎瘤细胞NTERA2生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液培养体系1640+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 

人急性T淋巴细胞白血病Loucyhttp://www.yajimall.com/article/aboutus.html培养说明书一、细胞培养条件细胞名称人急性T淋巴细胞白血病Loucy生长特性悬浮生长冻存条件无血清冻存液培养体系1640+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 

人肝癌细胞HLE培养说明书http://www.yajimall.com/article/aboutus.html一、细胞培养条件细胞名称人肝癌细胞HLE生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液培养体系DMEM+10%FBS+1%P传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 

小鼠主动脉内皮细胞MAEC培养说明书http://www.yajimall.com/article/aboutus.html一、细胞培养条件细胞名称小鼠主动脉内皮细胞MAEC生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液培养体系DMEM+10%FBS+1%P传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 

悬浮细胞贴壁细胞培养区别与注意事项http://www.yajimall.com/article/aboutus.html悬浮细胞培养和贴壁细胞培养是两种常见的细胞培养方法，它们在细胞生长环境和实施方法上有显著的区别：1. 细胞类型和适用性    悬浮细胞培养：适用于那些本身在体内或体外自由悬浮生长的细胞，如血液细胞（淋巴细胞、血液中的白细胞等）、某些肿瘤细胞、部分免疫细胞等。这些细胞不依赖于固体表面的支持而能够生长和繁殖。 贴壁细胞培养：适用于大多数常见的培养细胞类型，如大多数细胞系（HEK293、HeLa等）、原代细胞（如原代培养的人类皮肤纤维细胞、肝细胞等）。这些细胞需要在培养皿或培养瓶的表面上附着生长，它们依赖于固体表面提供的支持和黏附基质来维持其生长和增殖。2. 培养环境：    悬浮细胞培养：通常在含有适当营养物质的液体培养基中进行，如RPMI-1640、DMEM/F-12等，培养基中的营养物质需要通过定期的混合或搅拌来均匀分布，以维持细胞的生长和代谢需求。   贴壁细胞培养：需要在含有细胞黏附支持的培养皿或培养瓶表面上进行。通常需要预先在表面涂覆胶原蛋白、明胶、聚-L-赖氨酸（PLL）等支持物质，以帮助细胞黏附并提供适当的生长条件。3. 操作方法：   悬浮细胞培养：培养过程中需要注意避免过度搅拌或搅拌力度过大，以免对细胞造成机械性损伤或聚集。通常采用轻柔的混合方式来保持培养基中的细胞均匀分散。   贴壁细胞培养：培养前需要确保培养皿或培养瓶表面干净无菌，并在表面涂覆适当的细胞支持物质。细胞接种后通常需要在恒温箱中保持固定的温度和CO2浓度，以提供稳定的培养条件。

人肾细胞腺癌细胞ACHN培养说明书http://www.yajimall.com/article/aboutus.html一、细胞培养条件细胞名称人肾细胞腺癌细胞ACHN生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液培养体系1640+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 

生命科学的基石：ATCC细胞株的奥秘与应用http://www.yajimall.com/article/aboutus.html在生物医学研究的广阔领域中，细胞是探索生命奥秘的基础。而ATCC（American Type Culture Collection，美国典型培养物保藏中心）细胞株，作为全球细胞资源库，为科学研究提供了宝贵的标准化材料。　　细胞的标准化：该产品的重要性　　ATCC细胞株是经过精心筛选、鉴定和标准化的细胞系，它们在生物医学研究中扮演着至关重要的角色。这些细胞株不仅用于基础生物学研究，还在药物筛选、疫苗开发、疾病模型构建等方面发挥着重要作用。　　应用领域　　基础研究：细胞生物学、遗传学和发育生物学等领域的基础研究。　　药物开发：新药的筛选、毒性测试和作用机制研究。　　疫苗研究：疫苗的安全性和有效性评估。　　疾病模型：构建疾病模型，研究疾病发生机制和治疗方法。　　生物制品生产：用于生产生物技术产品，如单克隆抗体和重组蛋白。　　细胞株的来源与特性　　该产品来源于多种生物体，包括人类、动物、植物和微生物。它们具有以下特性：　　标准化：每株细胞都有详细的生物学特性和遗传背景信息。　　可追溯性：细胞来源清晰，确保研究结果的可靠性。　　多样性：细胞类型多样，满足不同研究需求。　　细胞株的获取与使用　　选择细胞株：根据研究目的，选择合适的细胞株。　　获取细胞：通过ATCC或授权分销商购买所需细胞株。　　培养条件：根据细胞株的特性，设置适宜的培养条件。　　细胞传代：按照标准化的传代方法，保持细胞株的稳定性。　　数据记录：记录细胞培养和实验过程中的所有数据，确保可重复性。　　维护与质量控制　　细胞活性检测：定期检测细胞活性，确保细胞健康。　　遗传稳定性监测：通过STR分析等方法，监测细胞的遗传稳定性。　　无菌操作：在无菌条件下进行细胞培养，避免污染。　　细胞库建立：建立细胞冻存库，保障细胞资源的长期保存。　　未来展望　　随着生物医学研究的不断深入，ATCC细胞株的应用将更加广泛。它们不仅是科学研究的基石，也是推动医学进步和生物技术创新的重要力量。未来，随着个性化医疗和精准医疗的发展，该产品在疾病模型构建和药物个性化研究中的作用将更加凸显。　　ATCC细胞株，作为连接基础研究与临床应用的桥梁，将继续为人类健康事业贡献力量。它们的故事，是关于生命、科学和创新的故事，是人类不断探索生命奥秘、追求健康生活的见证。

细胞消化的小技巧http://www.yajimall.com/article/aboutus.html不一定要一次把所有细胞都要消化下来！晃动培养盘并在显微镜下用肉眼观察，只要70~80%细胞都收缩了或超过适合消化时间，就该终止消化反应，如果细胞量够即可进行后续传代或实验步骤；如果细胞量不够，则可视情况用不含钙、镁离子的平衡盐溶液清洗仍贴壁的细胞，再进行一次消化反应。▲ 消化不下来的细胞（黄）请视情况决定是否再消化一次。不一定要吹打成W全单细胞悬液！一般细胞脱离培养底物、并经过5~10次轻柔吹打后，会在细胞悬液里形成小规模聚集(约5~10颗细胞)，所以不需要过度延长消化时间想让细胞分离成单细胞悬液。消化效果不佳，先提升消化液浓度、再加长作用时间！当你选定了一种消化方式 (物理机械法除外)，发现效果不佳，首先应考虑提高EDTA或胰酶浓度，效果再不佳才加长消化的作用时间，避免细胞长时间浸泡在消化液中造成的细胞膜损伤。（一般消化液使用：0.02%~0.04% EDTA作用5-20分钟；0.2~0.5% 胰蛋白酶作用1~5分钟）结语细胞消化 ，是一个看似很简单，但是有很多技术含量的步骤。消化好坏、是否污染、有无受伤，都在这短短的五六分钟里决定。当我们已经可以顺利操作细胞培养实验，接下来要思考的，就是如何让细胞长得更健康、更均一、做出来的实验才会更好。祝各位的细胞都颗颗透亮、粒粒分明、活力旺盛！雅吉生物细胞ATCC引种，代次靠前，细胞活率高状态好，售后完善，更多细胞系，原代细胞和培养试剂欢迎新老客户咨询订购

人肾癌细胞A498培养说明书http://www.yajimall.com/article/aboutus.html一、细胞培养条件细胞名称人肾癌细胞A498生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液培养体系1640+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 

人恶性黑色素瘤细胞A375E/GFP培养说明书http://www.yajimall.com/article/aboutus.html一、细胞培养条件细胞名称人恶性黑色素瘤细胞A375E/GFP生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液培养体系1640+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 

人T淋巴细胞白血病细胞A3培养说明书http://www.yajimall.com/article/aboutus.html一、细胞培养条件细胞名称人T淋巴细胞白血病细胞A3生长特性悬浮冻存条件无血清冻存液培养体系DMEM+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如果对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（注意密封培养瓶放入培养箱时要将盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min；3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中发生容易细胞脱落，这是正常现象。如脱落很多可按此方法：将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定

人卵巢癌细胞A2780/GFP培养说明书http://www.yajimall.com/article/aboutus.html一、细胞培养条件细胞名称人卵巢癌细胞A2780/GFP生长特性贴壁少量漂浮冻存条件无血清冻存液培养体系DMEM+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如果对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（注意密封培养瓶放入培养箱时要将盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min；3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中发生容易细胞脱落，这是正常现象。如脱落很多可按此方法：将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。

6T-CEM人T细胞白血病细胞培养说明书http://www.yajimall.com/一、细胞培养条件细胞名称6T-CEM人T细胞白血病细胞生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液培养体系1640+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 

 THP-1的培养方法http://www.yajimall.com/培养条件：RPMI-1640＋10% FBS＋0.05mM β-巯基乙醇＋1% 双抗到货处理用75%酒精棉球擦拭 T25 细胞培养瓶外部，观察细胞生长情况。1.不要打开培养瓶盖，将细胞放入 37℃培养箱中静置 3-4 小时后再做处理，以稳定细胞状态。2.通过离心的方式收集细胞，然后将细胞沉淀加入5-8ml的完全培养基轻轻吹打均匀后移入新的T25培养瓶中培养。培养时的注意技巧换液前将培养瓶竖在培养箱静置1小时左右，轻轻吸掉3ml左右培养基，然后加入3ml的新鲜完全培养基，混匀后放入培养箱中培养。2.如果细胞密度比较稀，培养基没有明显变化，可以加入500ul的FBS混匀后，竖着培养。3.传代时，先按照换液步骤处理，吸掉3ml左右培养基后，加入10ml的新鲜完全培养基，混匀后分2个T25培养瓶培养。4.培养一周左右可以离心一次，以去除一些死细胞。5.该细胞比较脆弱，培养过程中不要频繁拿出来观察，以免影响细胞的生长。6.该细胞的生长环境比较敏感，需使用较好的血清培养。7.建议使用未TC处理的瓶或者皿培养。订购建议：为避免收到细胞后离心处理，推荐使用15ml离心管发货，到货后直接分装到2个T25培养瓶即可。

293A人胚肾细胞説明书培养说明书http://www.yajimall.com/一、细胞培养条件细胞名称293A人胚肾细胞生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液培养体系1640+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 

人膀胱癌细胞5637培养说明书http://www.yajimall.com/一、细胞培养条件细胞名称人膀胱癌细胞5637生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液培养体系1640+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 

A-72犬癌细胞培养说明书http://www.yajimall.com/article/aboutus.html一、细胞培养条件细胞名称A-72犬癌细胞生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液培养体系DMEM+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如果对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（注意密封培养瓶放入培养箱时要将盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中发生容易细胞脱落，这是正常现象。如脱落很多可按此方法：将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。