TMB底物显色试剂盒实验操作説明

TMB底物显色试剂盒(ELISA，HRP显色)http://www.yajimall.com/

一、产品简介：

3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)是非常优越的酶免试验显色剂，能溶解于多种有机溶剂和双蒸水中，为稳定的无色溶液，与适量过氧化脲或双氧水与缓冲液混匀后与过氧化物酶作用产生清晰的蓝色产物，极易观察。由于其灵敏度高，配制后的工作液稳定，加上无致癌特性，被广泛用于酶联免疫(ELISA)试验和尿试纸的检测反应等，TMB主要应用于酶联免疫吸附实验(ELISA)，经典的方法是采用A、B液分开配制，使用前再混合的方法，并且长期存放稳定，本试剂一般情况下为无色，有时略显浅蓝色或浅黄色。

雅吉生物的TMB底物显色试剂盒(ELISA,HRP显色)主要由TMB显色液、TMBbuffer、TMB氧化剂组成，其特点是：

1、灵敏度高；

2、稳定性好，显色终止后读数稳定；

3、背景低：底物溶液在450nm检测时OD值一般小于0.05。

该试剂仅用于科研领域，不用于临床诊断或其他用途。

二、产品组成：

三、自备材料：

1、酶标仪

2、酶标板、96孔板

3、恒温箱(备选)

4、(备选)终止液：盐酸或硫酸等

四、操作步骤(仅供参考)：

1、用适当的干净容器(用纯净水反复冲洗)，取试剂(A)、(B)、(C)，按A：B：C=5000：5000：4的比例混合，即为TMB显色工作液，待达到室温后即可使用。

2、加液：加完HRP结合物并温育一定时间，洗板3～5次，每孔加TMB显色工作液100μl，在室温(15～25℃)或37℃下温育10～30分钟。

3、(选做)终止：加等体积的1M盐酸或硫酸溶液终止反应，孔中反应液由蓝色变为黄色。

4、读数：30min内在450nm处读数。

五、注意事项：

1、本试剂盒给予的TMB氧化剂多于实际使用量，请按比例使用。

2、TMB氧化剂易挥发，请注意密闭保存，以免效率下降，一旦开封请尽快使用。

3、TMB氧化剂有腐蚀性，请勿直接接触于人皮肤、毛发等。

4、如果出现高的反应背景或沉淀，表明TMB底物反应过于强烈。

5、终止反应不是必须步骤，如不加终止液应显色完成后立即检测。

6、一般市售的浓盐酸为11.6M，浓硫酸为18.3M，但应注意其挥发性。

7、为了避免产生沉淀，可在终止后马上读数，或进一步稀释一抗和/或HRP结合物，再次进行试验。

8、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

六、有效期：12个月内有效。

七、运输及保存：4℃运输，4℃保存。