单细胞测序技术被Nature Methods(2013)评为年度技术,Science(2013)评为年度六大生物类科研热点。单细胞测序技术又在2015年登上Science转化医学封面。Nature Methods 将2019年年度技术又给了单细胞多组学。2013年以来基于单细胞测序技术获得了多方面的研究进展,文献发表也呈现迅猛增长趋势。即使来源相同的单个细胞,由于随机生物过程和环境扰动的原因,彼此在许多
方面也存在差异,即异质性。尤其是肿瘤细胞、免疫细胞、胚胎发育期细胞、干细胞等最为突出。常规的组学技术发现不了这一现象带来的影响,由此研究人员开启了单细胞测序技术的探索之路。
单细胞转录组测序利用GemCode技术的微流控技术进行单个细胞分选,将带有条形码和引物的凝胶珠和单个细胞包裹在油滴中;在每个油滴内,凝胶珠溶解,细胞裂解释放mRNA,通过逆转录把凝胶珠
的特异性barcode引入到cDNA并用于区分细胞;液体油层破坏后,cDNA后续进行文库构建,结合Illumina测序平台对文库进行测序检测,即可一次性获得大量单细胞的基因表达数据,从而达到在单细胞
水平进行表达测序的目的。10x Genomics 的 Chromium Single Cell单细胞测序技术的发展,极大地促进了单细胞组学研究
特点:
真正意义上的单细胞检测(每一个细胞形成单独的GEM,分别进行细胞标记)
l 超低的单个细胞价格
l 多细胞捕获率低(小于万分之八)
l 超高的捕获效率(单个细胞捕获效率65%)
l 全自动真正单细胞分离、实验周期短
l 超高的细胞通量(每个样本最多可测10000个细胞)
l 细胞类型多样化(适宜40微米直径以内,无下限)
通量高(可同时检测8个样本)
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