法规探讨2 | 《局部起效化学仿制药体外释放（IVRT）与体外透皮（IVPT）研究技术指导原则（征

体外透皮试验（In Vitro Permeation Test，简称IVPT），是使用人或动物的离体皮肤模拟经皮给药制剂在生理条件下的经皮渗透过程，通过动态监测给药后特定时间内制剂有效成分的累计药物量和渗透速率，从而考察药物及其制剂的体外经皮渗透行为，为评价制剂的安全性和有效性提供保证。

皮肤模型对IVPT实验结果是否可靠起到了关键作用，离体皮肤的来源、部位、处理方式、储存方式、完整性等都可能会对实验结果造成影响，正因如此，USP＜1724＞、FDA、EMA等法规中对皮肤的要求进行了比较详细的阐述。《局部起效化学仿制药体外释放（IVRT）与体外透皮（IVPT）研究技术指导原则（征求意见稿）》中也对皮肤模型给出了指导意见：

EMA在2018年发布的《Draft guideline on quality and equivalence of topical products》中仅推荐使用离体人类皮肤进行IVPT研究；FDA 阿昔洛韦指南和IVPT指南均推荐采用离体人类皮肤；USP <1724>中规定，除采用离体人类皮肤外，因猪的皮肤与人类皮肤具有相对相似的形态，可作为研究的次要选择，然而由于啮齿类动物（如鼠、豪猪）的皮肤在形态学和角质层结构和厚度方面与人类皮肤显著不同，不鼓励使用；合成膜（包括模拟生物膜开发的合成膜）也不适用于IVPT方法，因为采用合成膜得到的结果不能反应透过皮肤的药物量和渗透速率，故用作临床预测的意义不大。

在大多数情况下，由于人类的皮肤比较难获得，或者伦理的要求，限制了人体皮肤的使用，征求意见稿中将猪的皮肤作为首要选择，这与我国的国情相符。目前，用于经皮研究的猪品种有Gottingen小型猪、Yucatan小型猪(墨西哥无毛猪)、Yorkshire猪、Landrace猪及巴马香猪等，这些也是目前IVPT研究中，最为常用的皮肤模型。

除了皮肤的种属，皮肤的不同组织部位、年龄和种族，甚至是同一供体的相同组织部位，其渗透性均存在差异。因此，实验所用的皮肤应有一致的来源，且为相同的解剖区域（如背部躯干；也可以使用其他生物膜，如直肠、阴道或角膜上皮组织，这取决于所评估药品的预期给药途径）。皮肤厚度的显著变化可能会增加IVPT结果的变异性，需采用相同的皮肤厚度，FDA建议皮肤（人类）的厚度在500±250μm；但USP要求，皮肤（人类）厚度通常在250～500 µm。猪皮肤的厚度与人类皮肤接近且稍厚于人类皮肤，通常IVPT实验中使用的猪皮肤厚度为1mm左右；对于难渗药物，可以选用厚度稍薄的猪皮肤，但是建议最低厚度不低于0.4mm。

皮肤的制备可以采用电动取皮机设置一定的厚度进行取皮，去毛去油过程中注意保护皮肤完整性，处理好的皮肤低温保存（OCDE建议储存温度为-20℃）。

征求意见稿截图（点击可放大查看）

征求意见稿指出在每次试验前后应检测皮肤屏障完整性。FDA、EMA 与 PMDA 的法规中均要求在试验前需进行皮肤屏障完整性测试；FDA 及 USP 均未明确说明试验后是否需要进行皮肤屏障完整性测试；但 EMA 要求，如果试验时间大于 24h，试验后需评估皮肤屏障完整性。

虽然有法规要求，但是在通常情况下试验结束后测定皮肤屏障完整性不太容易实现，因为在皮肤上已经有药品存在，可能会干扰测定结果。我们可以在试验前对所有皮肤进行完整性检测，试验后对空白皮肤进行完整性检测。