体外渗透试验（IVPT）中生物膜的控制 一、皮肤的纳入标准

体外渗透试验（IVPT）中生物膜的控制

一、皮肤的纳入标准

所用的皮肤应有一致的来源，且为相同的解剖区域（如背部躯干；也可以使用其他生物膜，如直肠、阴道或角膜上皮组织，这取决于所评估药品的预期给药途径）；同时，需规定每组供体皮肤的储存温度和时间，以及冻融循环次数。此外，FDA建议皮肤的厚度在(500±250)μm；但USP要求，厚度通常在250～500 µm。在研究中，需采用相同的皮肤厚度，因为厚度的显著变化可能会增加IVPT结果的变异性。

朱慧勇等[1]研究表明将皮肤的新鲜度（将裸鼠皮肤于-20℃放置6个月，其皮肤屏障性能无明显差异）、厚度（RSD≤15%）、质量（RSD≤15%）、经皮水分散失（TEWL）达到稳态等因素作为皮肤模型的质量控制手段，可进一步增加研究结果的可靠性和准确度。

但是，MORIN M等[2]研究表明将猪耳皮肤在不同的温度条件下放置不同的时间，新鲜皮肤相对其它条件具有较高的电阻且对亲水性化合物阿昔洛韦和疏水性水杨酸甲酯的渗透性均较低；在不同温度条件下放置不同时间的皮肤对阿昔洛韦在皮肤中的组织分布有显著影响；但根据水杨酸甲酯的研究结果可知，在不同的放置条件下，皮肤中均保存一定的酯酶活性。

目前，关于皮肤的储存条件尚未有统一的要求，但通常情况下，新鲜的皮肤渗透性较低，因此，在厚度、质量及解剖区域一致的情况下，不同时间测得的结果亦会有不同的差异，这也侧面说明，对受试制剂和参比制剂平行测定的重要性。

二、皮肤的处理和保存

可以采用电动取皮机设置一定的厚度进行取皮，然后使用纯水或生理盐水冲洗皮肤外表面，并用镊子和刀片等小心刮去残留的皮下脂肪和血管等其他组织，然后反复冲洗干净，低温保存（建议储存于-20℃或-80℃冰箱中）。

虽然可以采用温和的清洗或冲洗方式处理皮肤表面，但是，如果将皮肤浸泡在水溶液中几分钟，就有可能破坏皮肤屏障，应避免该处理方式。此外，也不建议采用刀片剃须、研磨抛光、胶带剥离，或采用乙醇或其它强极性溶剂处理皮肤，因为这些处理方式可能破坏皮肤屏障。    

因此，在上样前皮肤的解冻过程中，应尽可能的避免采用接收介质浸泡的方式，以免破坏皮肤的屏障完整性；实际操作中，通常可将皮肤在室温条件下放置约30 min即可。

三、采用人体皮肤存在的挑战

除来源、理论因素外，人体皮肤的存放也存在一定的挑战。将皮肤存放在-22℃，或模拟表皮与真皮的剥离程序，将其放置在60℃进行加热处理，均会对皮肤的组织活力造成损伤[3]。经济合作与发展组织（OECD）指南规定，在试验中，必须对皮肤的屏障特性进行评估，但并没有给出有关最佳储存条件的具体要求。该指南指出，新鲜的离体皮肤应在24小时内使用，但可接受的储存期限可能因储存温度和酶系统的新陈代谢而异（OECD，2004年）。Nielsen等人[4]采用在80℃条件下储存三周的人体皮肤进行体外经皮渗透研究，结果发现，由于皮肤的上层及其深层的结构变化，药物的渗透速率和总渗透量明显增加。目前，对经皮吸收的评估而言，欧洲替代方法验证中心（ECVAM）建议将皮肤储存在20℃。在世界卫生组织发布的《环境健康标准：皮肤吸收》中指出，基于Bronaugh等人[5]的研究成果，人体皮肤可以在20℃下储存长达一年（1986）。无论储存条件如何，都必须证明皮肤屏障功能的完整性。这可以通过进行初步的渗透研究，并将测定结果与预定的可接受标准进行比较来实现，如采用氚化水渗透和TEWL。

参考文献：