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单克隆抗体的 QA QC：采用 Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱和 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统进行高分离度肽图分析 (PDF)
2022/11/23 10:00
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方案摘要：
产品配置单：
二手翻新安捷伦1260液相色谱仪
型号： 1260
产地： 美国
品牌： 安捷伦
¥20万
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方案详情：
肽图分析是研究蛋白质一级结构的一项基 本技术。对于重组蛋白质药物，肽图分 析用于最初的“结构证明”表征，即确 认预期氨基酸序列的表达并表征任何翻译 后修饰。此外，肽图分析还被用于随后 产品的批间一致性测试（即“指纹图分 析”），以支持其生物工艺开发和临床 试验。肽图分析也可用作当前监测重组细 胞系“遗传稳定性”的方法。最近，新 的技术平台使肽图分析方法变的更加快速 和便捷，从而拓展到过程监控及其它更高 样品量的应用中1 。 为了进行蛋白质表征，需要对复杂的蛋白 质裂解产物进行色谱分离，这是一项严峻 的挑战。这里，我们展示了使用 Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统， 以及 Agilent Poroshell 120 SB C18，4.6 × 150 mm，2.7 µm 色谱柱分离 IgG1 单克 隆抗体胰蛋白酶裂解多肽的优势。本文介 绍了使用 1260 Infinity 生物惰性四元液相 色谱系统，验证胰蛋白酶裂解 IgG1 肽图 的优化 RP-HPLC 方法及其稳定性。为进 一步提高方法性能，我们将方法转移到配 备了 Agilent ZORBAX RRHD SB C18， 2.1 × 150 mm，1.8 µm 色谱柱的 1290 Infinity 液相色谱系统上。使用亚 2 µm 颗 粒填料的超高效液相色谱 (UHPLC) 分离， 改善了单位时间内的分离度和检测灵敏 度，缩短了运行时间，并使肽图分析变得 更加简便。最后，将两根 RRHD 色谱柱 串联使用，以评估更长亚 2 µm 颗粒色谱 柱的肽图分析性能。
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