采用 Agilent 1200 系列 RRLC 系统和 Agilent 6460 三重串联四极杆液/质联用系统分析 PAMPA 样品

实验部分

化学药品

 本研究采用购自西格玛奥德里奇公司（印 度班加罗尔）的阿替洛尔、拉贝洛尔、美 托洛尔、普萘洛尔、丁螺环酮、奈法唑酮、 去甲替林、丙咪嗪、曲米帕明和地昔帕明； 购自 Lab-Scan 公司的 HPLC 级乙腈和甲 醇；以及购自 Fluka 公司的甲酸。 目标分析物的储备液和合适的稀释液采用 甲醇配制，以进行方法开发。

样品制备与 PAMPA 方案

采用正己烷为溶剂配制体积比为 5% 的十 六烷溶液，在过滤（供体）板（Millipore 的渗透实验用多层筛过滤板）每个微孔的 滤膜上加入等份试样。将供体板干燥，确 保正己烷蒸发。 将测试化合物溶于 DMSO，得到 10 mM 的终浓度，然后用 10 mM 磷酸盐缓冲液 （pH 7）稀释到 10 µM，使得 DMSO 终 浓度为 5%。 将 300 µL 含 5% DMSO 的 10 mM 磷酸盐 缓冲液（PH=7）加入受体板每个微孔中。 将另外的 300 µL 含有测试化合物和 5% DMSO 的 10 mM 磷酸盐缓冲液（PH=7） 加入供体板微孔中。将荧光指示剂萤黄加入 测试化合物溶液，用来追踪膜的完整性。 将供体板嵌入受体板，然后在潮湿环境下 室温孵育 5 小时。分析标准品采用测试化 合物溶液配制。地昔帕明是一种渗透性已 知的化合物，将其加到每个微孔板上作为 对照。采用甲醇作为终止液。 孵育期结束时，将供体板从受体板取出，并 将样品合并，使其含有四种分析物。采用液 相色谱/串联质谱对测试化合物在供体孔、 受体孔以及平衡孔中的浓度进行定量。

仪器设备

实验采用 Agilent 1200 系列快速分离液相色 谱系统和 Agilent 6460 三重串联四极杆质 谱仪；该液相色谱系统包括真空脱气机、 二元泵、具有温度控制功能的高效自动进 样器以及柱温箱。质谱仪在应用安捷伦喷 射流技术的电喷雾模式下运行。安捷伦 MassHunter Optimizer （B.02.00）软件用 于确认丰度最高的 MRM 离子对以及相关 碎裂电压和碰撞能量。安捷伦 MassHunter 工作站（B.02.00 版本）用于数据采集， MassHunter 定量分析软件（B.01.04 版 本）用于数据分析。