蛋白分析不做Western可还行？这份“In gel荧光”方案请查收！

Azure Biosystems

2023/11/02 11:30

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常规的蛋白质分析实验中，在电泳分离结束后，还需进行蛋白染色、转膜、western blot 等一系列鉴定步骤。In-gel荧光检测技术，突破常规，在电泳分离后即可进行蛋白检测，无需染色和western blot等后续操作。由于免去了凝胶电泳后的一系列操作，不仅大幅缩减了实验时间，有效提升效率并降低试剂耗材等实验成本，同时还能消除转膜、封闭过程中众多因素的影响。

In-gel荧光检测的技术原理在于：在凝胶中，蛋白结合复合物的迁移率与未结合的蛋白不同，可被分离开来。使用荧光基团标记其中一种蛋白，样品中该蛋白及其结合复合物的条带均可被检测出来。电泳结束后，使用成像设备（如Azure多功能分子成像系统、Sapphire FL激光扫描成像系统）进行成像检测。目前，In-gel荧光检测在融合蛋白表达、蛋白互作分析、凝胶阻滞实验等方面已具有广泛的应用。

— 实验案例：泛素化蛋白互作 —

基于In-gel荧光检测方法，对泛素化相关过程进行实验分析。将荧光标记的泛素（Fluorescently labeled ubiquitin，以下简称为FL-Ub）与E1 泛素激活酶（以下简称为E1）和E2 泛素连接酶（以下简称为E2）孵育后进行凝胶电泳分离，并使用Azure 600 多功能分子成像系统进行成像检测。

方法

荧光标记的FL-Ub与E1、E2 蛋白孵育结合，通过加入非变性SDS缓冲液，分别在0.5、1、2、4、8、16、30、和60min后淬火结合反应。在非变性条件下进行电泳，每个泳道FL-Ub上样量约200ng。

电泳结束后，进行In-gel荧光检测：使用Azure 600多功能分子成像系统的 EPI 蓝光光源（472nm激发，513nm采集）进行成像，即可检测FL-Ub及其复合物。

结果

In-gel荧光检测图像中，可见游离的FL-Ub条带，同时显示，FL-Ub+E1、FL-Ub+E2复合物的量均随反应时间的增加而增加（图 1）。

结论

In-gel荧光检测，通过荧光标记蛋白，无需染色和Western Blot，即可实现蛋白互作的可视化分析，显著提升了实验效率、有效降低试剂耗材等方面成本。

Azure多功能分子成像系统、Sapphire FL激光扫描成像系统为代表的尖端荧光分子成科技，除In-gel荧光检测功能外，其在各类Blots、凝胶、磷屏、微阵列（芯片）、培养皿、活体成像、组织切片等多领域，均具有广泛灵活的应用，将持续为卓越分子成像呈献更多可能！

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Azure Biosystems成立于2013年，总部位于美国加州湾区，是一家致力于生命科学领域先进生物成像系统研发、制造、推广及服务一体的创新型公司。拥有分子成像领域近30年经验的卓越团队，Azure公司革新推出的Azure系列新一代多功能分子成像系统和Sapphire激光扫描成像系统已成为技术领先的特色产品。目前，公司已形成分子凝胶成像、Western Blot、RT-PCR及配套试剂耗材等产品线。

公司成像设备全球装机＞5000台，用户数量＞30000，包括美国最高科研机构NIH、梅约诊所、哈佛大学、中国科学院、清华大学、诺华制药等知名科研院所、医院及生物医药企业等。截至目前，发表文章＞3000篇，发表刊物包括Cell、Science、Nature三大期刊及子刊、JBC、JMC等国际著名期刊杂志。